细胞凋亡过程中核糖体蛋白质S3a水平变化的研究(二)——制备和纯化抗GST/S3a多克隆抗体

目的:制备和纯化抗GST/S3a多克隆抗体。方法:盐析法粗提抗体,用蛋白A-琼脂糖柱纯化IgG,ELISA法检测多克隆抗体水平。结果:ELISA法测定制备和纯化抗GST/S3a多克隆抗体的活性正常,产生了抗原-抗体反应复合物。结论:制备和纯化的抗体血清可以与GST/S3a融合蛋白相结合,产生抗原-抗体反应复合物,说明具有抗GST/S3a融合蛋白的活性。为下一步实验奠定基础。

细胞凋亡过程中核糖体蛋白质S3a水平变化的研究(三)──检测细胞凋亡过程中RPS3a水平的变化

目的：检测细胞凋亡过程中ＲＰＳ３ａ水平的变化，探讨ＲＰＳ３ａ在细胞凋亡中的作用。方法：用放射菌素Ｄ（Ａｃｔ Ｄ）诱导ＨＬ－６０细胞发生凋亡，应用Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ法检测细胞凋亡过程中ＲＰＳ３ａ水平的变化。结果：ＨＬ－６０细胞在诱发凋亡１小时后，ＲＰＳ３ａ的水平与对照组比较显著升高，之后迅速降低，在诱导２ｈ时其水平已低于正常对照组的水平，并随时间推移逐渐降低，在细胞凋亡的晚期，即诱导６ｈ时，ＲＰＳ３ａ已降至不可检测的水平。结论：ＲＰＳ３ａ水平出现的一过性增高随后迅速降低，这可能是发挥其核糖体外的功能，作为信号诱导细胞凋亡；在细胞凋亡的早期ＲＰＳ３ａ的不可逆性降解致使核糖体的完整性丧失，从而抑制蛋白质的合成，最终导致细胞凋亡。

细胞凋亡过程中核糖体蛋白质S3a水平变化的研究(一)──应用GST基因融合蛋白系统制备核糖体蛋白质S3a(RPS3a)

目的：应用GST基因融合蛋白系统制备核糖体蛋白质S3a(RPS3a)。方法：将S3a cDNA序列插入到pGEX-4T-2质粒中，制备GST/S3a融合蛋白及其抗体。结果：S3a cDNA序列在Xho I位点上插入到pGEX-4T-2质粒中，形成重组的pGEX-4T-2/S3a质粒。结论：pGEX-4T-2质粒编码GST蛋白基因，在IPTG的诱导下可以表达GST/S3a融合蛋白。为下一步实验奠定了基础。

大花蕙兰授粉后子房cDNA差异表达片段序列分析

应用mRNA差异显示(DDRT-PCR)方法比较分析了大花蕙兰(Cymbidiumhybridium)授粉后2d与未授粉子房的基因表达差异。结果分离到了7个在授粉后子房中特异表达的cDNA片段,分别命名为CDD-313,CDD-272,CDD-265,CDD-243,CDD-193,CDD-218,CDD-470。在GenBank中进行同源性比较发现前4个没有同源序列与之匹配;后3个片段推导的氨基酸序列分别与ABC型transporter,GTPase和40S核糖体蛋白质S3(RPS3)有高度同源性。反向Northern杂交进一步证实它们存在,并在授粉子房中高度表达。其中,最为有意义的是CDD-470,其推定的氨基酸与参与细胞生长分化的植物源多功能蛋白RPS3高度同源性,进而推测其与RPS3有相似的功能,可能与兰花子房发育有关,这为解释花发育分子机制提供了新资料。