病理性瘢痕中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/核糖体40S小亚基S6蛋白激酶的表达

背景:近年研究表明哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/核糖体40S小亚基S6蛋白激酶(mammalian target of rapamycin/P70S6K,mTOR/P70S6K)信号通路在某些肿瘤形成过程中具有一定作用。病理性瘢痕特别是瘢痕疙瘩具有某些肿瘤的性质,因此该信号通路在病理性瘢痕形成中可能具有重要作用。目的:观察mTOR/P70S6K信号通路在病理性瘢痕中的的作用。方法:采用免疫组织化学SP法检测磷酸化mTOR/P70S6K(p-mTOR和p-P70S6K)在瘢痕疙瘩、增生性瘢痕、非病理性瘢痕及正常皮肤组织中的表达水平。实验所取瘢痕组织来自临床上诊断明确的瘢痕患者。结果:瘢痕疙瘩和增生性瘢痕组织中p-mTOR和p-P70S6K阳性表达率高于非病理性瘢痕及正常皮肤组(P<0.05)。p-mTOR和p-P70S6K表达呈正相关(r=0.482,P<0.05)。结果提示mTOR/P70S6K信号通路的激活参与了病理性瘢痕的形成过程,且mTOR和P70S6K之间具有协同作用。

二甲双胍通过抑制核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(P70S6)调节体外人颗粒细胞胰岛素受体底物-1(IRS-1)的表达

目的:探讨二甲双胍对核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(P70S6k)及胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白及其ser307位点磷酸化表达的影响。方法:利用0.1 mmol/L二甲双胍体外连续作用多囊卵巢综合症(PCOS)患者黄素化颗粒细胞24 h为实验组,设未加二甲双胍培养的颗粒细胞为对照组。通过RT-PCR和Real-time PCR检测P70S6k和IRS-1的表达,细胞免疫荧光化学和Western blotting的方法检测P70S6k、p-thr389-P70S6k、IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白的表达。结果:Real-time PCR结果显示实验组P70S6k和IRS-1m RNA水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞免疫荧光化学检测IRS-1和p-ser307-IRS-1蛋白在颗粒细胞胞质表达,P70S6k和p-thr389-P70S6k蛋白在细胞核表达。Western blotting法结果显示二甲双胍作用24 h前、后卵巢颗粒细胞P70S6k、p-thr389-P70S6k、IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达有统计学差异(P<0.05),灰度值分析显示添加二甲双胍组P70S6k、p-thr389-P70S6k蛋白表达显著升高,IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论:二甲双胍可抑制人颗粒细胞P70S6k的表达,并通过Akt/P70S6k/IRS途径调节IRS-1的表达,从而增加颗粒细胞胰岛素的敏感性。

层黏连蛋白受体/40S核糖体蛋白SA在肿瘤和神经系统疾病及感染性疾病中的研究进展

相对分子质量为37000层黏连蛋白受体前体/67000层黏连蛋白受体(LRP/LR)是层黏连蛋白的一种高度亲和性受体,具有多种亚细胞定位,当其定位于核糖体,又被称作40S核糖体蛋白SA(RPSA)。LRP/LR在多种生物学过程中发挥重要作用,如细胞的分化和迁移、蛋白质的翻译以及细胞内信号转导等。更为人所关注的是,LRP/LR还与肿瘤、神经系统疾病和感染性疾病等的发展密切相关。文章主要就LRP/LR的属性、生物学功能及其在肿瘤、朊病毒病阿尔兹海默症、癫痫和感染性疾病中的作用进行综述。

吴茱萸碱对宫颈癌小鼠移植瘤的抑制机制

目的 探究吴茱萸碱(evodiamine,Evo)对宫颈癌小鼠移植瘤的抑制作用及对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(p70 ribosomal protein S6 kinase, p70S6K)通路的影响。方法 取40只BALB/c裸鼠,随机选取10只设为健康组,剩余30只裸鼠成功建立宫颈癌移植瘤模型,随机分为荷瘤组、Evo组和Evo联合溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)组,各10只。Evo联合LPA组裸鼠灌胃Evo(18 mg·kg^(-1)),尾静脉注射LPA(0.8μmol·kg^(-1));Evo组裸鼠灌胃Evo(18 mg·kg^(-1)),尾静脉注射等体积生理盐水;健康组、荷瘤组裸鼠灌胃等体积二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO),尾静脉注射等体积生理盐水。每日1次,连续30 d。测定肿瘤体积;流式细胞仪检测外周血CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞占比;Tunel染色检测移植瘤细胞凋亡率;免疫印记法(Western blotting)检测移植瘤组织mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K蛋白的表达水平。结果 与荷瘤组比较,Evo组干预后第10、20、30天肿瘤体积均减小,CD4^(+)T淋巴细胞占比、CD4^(+)/CD8^(+)值升高,CD8^(+)T淋巴细胞占比、p-mTOR/mTOR值和p-p70S6K/p70S6K值降低(P<0.05);与Evo组比较,Evo联合LPA组干预后第10、20、30天肿瘤体积均增大,CD4^(+)T淋巴细胞占比、CD4^(+)/CD8^(+)值降低,CD8^(+)T淋巴细胞占比、p-mTOR/mTOR值和p-p70S6K/p70S6K值升高(P<0.05)。结论 Evo可抑制宫颈癌移植瘤生长、促进宫颈癌细胞凋亡、增强机体免疫功能,其作用机制可能与抑制mTOR/p70S6K信号通路有关。

非小细胞肺癌组织中p-mTOR、p70s6k的表达变化及其临床意义

目的观察非小细胞肺癌组织中磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-m TOR)及核糖体40s小亚基S6蛋白激酶(p70s6k)蛋白的表达变化,并探讨其意义。方法非小细胞肺癌患者82例,手术切除肿瘤组织作为肺癌组,取患者肺癌同侧远端的肺泡正常组织46例份作为对照组1,正常支气管黏膜组织50例份为对照组2。免疫组化方法检测3组组织中的p-m TOR及p70s6k蛋白,并分析其与非小细胞肺癌临床病理参数的关系。结果肺癌组、对照组1、对照组2 p-m TOR蛋白表达阳性率分别为68.29%、17.39%、32.0%,p70s6k蛋白表达阳性率分别为85.37%、21.74%、32.00%,肺癌组与对照组1、对照组2相比,P均<0.01。非小细胞肺癌低分化p-m TOR蛋白表达阳性率高于中高分化(P<0.01)。肺癌组织中p-m TOR和p70s6k蛋白的表达呈正相关(r=0.21,P=0.003 2)。结论p-m TOR、p70s6k蛋白在非小细胞肺癌组织中高表达,可作为早期诊断肺癌的指标或抗癌药物作用的新靶点。

非小细胞肺癌组织p-mTOR、p70s6k、PTEN蛋白的表达变化及其意义

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)组织中磷酸化的哺乳动物雷帕霉素蛋白(p-m TOR)、核糖体40 S小亚基S6蛋白激酶(p70s6k)及第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)蛋白的表达变化,并探讨其临床意义。方法选取NSCLC组织标本82例份为肺癌组,肺癌同侧远端肺泡组织标本46例份为肺泡组,正常支气管黏膜标本50例份为支气管组。采用SP免疫组织化学法检测各组p-m TOR、p70s6k及PTEN。分析PTEN、p70s6k及p-m TOR表达与NSCLC临床病理参数的关系。结果肺癌组p-m TOR、p70s6k阳性表达率均高于肺泡组及支气管组(P均<0.05)。肺癌组PTEN阳性表达率均低于肺泡组及支气管组(P均<0.05)。p-m TOR表达与NSCLC肿瘤分化程度、临床分期有关(P均<0.05),PTEN表达与NSCLC肿瘤分化程度、淋巴结转移、临床分期有关(P均<0.05)。NSCLC组织PTEN与p-m TOR、p70s6k阳性表达呈负相关(r=-0.38,-0.478;P均<0.01);pm TOR、p70s6k阳性表达呈正相关(r=0.311,P<0.01)。结论 NSCLC存在p-m TOR、p70s6k高表达及PTEN低表达,p-m TOR、p70s6k可能协同促进NSCLC的发生发展,PTEN可能在NSCLC的发生发展中起抑制作用。

链脲佐菌素致阿尔茨海默病模型大鼠脑内mTOR/P70S6K/IRS-1信号通路的变化

目的:观察侧脑室(intracerebroventricular,ICV)注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)对大鼠脑内m TOR/P70S6K/IRS-1信号通路的影响。方法:将30只雄性SD大鼠随机分为对照组和模型组,每组各15只,对照组于第1天和第3天ICV注射生理盐水,模型组于第1天和第3天侧脑室注射STZ(ICV-STZ,3 mg/kg)建立AD模型。第1次注射后36 d采用Morris水迷宫检测2组大鼠空间学习和记忆能力的变化;Western blot检测2组大鼠大脑皮质和海马组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin,p-m TORSer2448)、核糖体40S小亚基S6蛋白激酶(P70 ribosomal S6 protein kinase,P70S6K)、磷酸化核糖体40S小亚基S6蛋白激酶(phosphorylated P70 ribosomal S6 protein kinase,p-P70S6KThr389)、胰岛素受体底物-1(insulin receptor substract-1,IRS-1)和磷酸化胰岛素受体底物-1(phosphorylated insulin receptor substract-1,p-IRS-1Ser636)蛋白的表达;HE染色观察2组大鼠大脑皮质和海马组织形态学的改变;甲硫素S染色观察2组大鼠脑内Aβ的沉积。结果:Morris水迷宫结果显示ICV-STZ能明显降低大鼠目标象限停留时间[对照组:(55.945±9.447)s,模型组:(31.961±5.346)s,t=8.558,P=0.000]和穿越平台次数[对照组:(7.533±2.560)次,模型组:(2.867±1.506)次,t=6.086,P=0.000];HE染色可见:ICV-STZ大鼠大脑皮质和海马的部分细胞出现了明显的固缩和肿胀;甲硫素S染色发现:在ICV-STZ处理后,大鼠脑内出现Aβ的大量沉积。Western blot结果表明:ICV-STZ能同时增加大鼠大脑皮质p-P70S6KThr389[对照组:(0.268±0.066),模型组:(0.654±0.079),t=-8.409,P=0.000]、p-IRS-1Ser636[对照组:(0.710±0.092),模型组:(1.033±0.135),t=-4.417,P=0.002]和海马p-P70S6KThr389[对照组:(0.405±0.064),模型组:(0.732±0.077),t=-7.339,P=0.000]、p-IRS-1Ser636[对照组:(0.498±0.093),模型组:(0.836±0.102),t=-5.496,P=0.001]蛋白的表达,但不影响大鼠大脑皮质和海马P70S6K、m TOR、p-m TORSer2448、IRS-1蛋白的表达。结论:ICV-STZ能增加大鼠脑内m TOR/P70S6K/IRS-1信号通路的激活,提示异常活化的m TOR/P70S6K/IRS-1信号通路可能参与了AD的发生发展。

非小细胞肺癌组织中p70S6K、ProGRP、CXCR2的表达情况及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌组织中核糖体40S小亚基S6蛋白激酶(p70S6K)、胃泌素释放肽前体(ProGRP)、CXC趋化因子受体2(CXCR2)的表达情况及临床意义。方法收集180例非小细胞肺癌患者的非小细胞肺癌组织标本和癌旁正常组织(距离肿瘤组织﹥5 cm)标本,采用免疫组织化学法检测组织标本中p70S6K、ProGRP、CXCR2的表达情况。分析非小细胞肺癌组织中p70S6K、ProGRP、CXCR2阳性表达情况与非小细胞肺癌患者临床特征的关系,以及非小细胞肺癌组织中p70S6K、ProGRP、CXCR2表达的相关性。结果非小细胞肺癌组织中p70S6K、ProGRP、CXCR2的阳性表达率分别为66.67%、72.22%和70.00%,均明显高于癌旁正常组织的21.11%、16.67%和18.89%,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。肿瘤直径﹥3 cm、低分化、有淋巴结转移的非小细胞肺癌患者非小细胞肺癌组织中p70S6K、ProGRP、CXCR2的阳性表达率均明显高于肿瘤直径≤3 cm、中高分化和无淋巴结转移的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。非小细胞肺癌组织中p70S6K、ProGRP、CXCR2的表达与非小细胞肺癌患者的肿瘤直径、分化程度、淋巴结转移情况均呈显著正相关(P﹤0.01)。非小细胞肺癌组织中p70S6K与ProGRP、CXCR2的表达均呈显著正相关(P﹤0.01),ProGRP与CXCR2的表达呈显著正相关(P﹤0.01)。结论非小细胞肺癌组织中p70S6K、ProGRP、CXCR2的阳性表达率均较高,三者可能共同参与非小细胞肺癌的发生和发展。

shRNA对EC9706细胞p70S6K表达的影响

目的:观察核糖体40s小亚基S6蛋白激酶(p70S6K)特异性短发夹RNA(shRNA)对EC9706细胞p70S6K表达的影响。方法:根据GenBank p70S6K的mRNA序列,设计并合成p70S6K特异性的shRNA序列,退火形成双链后插入pSIREN-RetroQ-DsRed-Express载体,构建表达载体pshRNA-p70S6K,转染EC9706细胞。采用RT-PCR和Western blot方法分别检测转染24、48、72、96及120h后细胞中p70S6K mRNA和磷酸化p70S6K的表达,设未转染的EC9706细胞为对照。结果:各组细胞p70S6K mRNA和磷酸化p70S6K蛋白的表达差异有统计学意义(F=106.343,721.632,P均<0.001)。转染细胞p70S6K mRNA的表达在转染24、48和72h后均较对照组下降(P<0.05),在第48h表达最低;磷酸化p70S6K蛋白的表达在转染24、48、72和96h后均较对照组下降(P<0.05),第48h表达最低。结论:p70S6K特异性shRNA能够下调EC9706细胞中p70S6K mRNA和蛋白的表达。

p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1在乳腺癌组织中的表达及临床意义

研究p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1在乳腺癌组织中的表达及临床意义。选择2015年3月至2017年8月在包头市肿瘤医院进行手术切除的60例乳腺癌组织为观察组,对照组为癌旁组织40例。采用免疫组化方法检测60例乳腺癌组织及40例癌旁组织中p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1的表达情况。p-mTOR在观察组和对照组阳性率分别为71.7%和42.5%;p-4EBP1在观察组和对照组阳性率分别为26.7%和10.0%;p-S6K1在观察组和对照组阳性率分别为45.0%和12.5%;p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1在乳腺癌组织中的表达水平均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。试验结果表明,p-mTOR、p-4EBP1及p-S6K1在乳腺癌组织中过度表达可能是乳腺癌发生发展的重要机制之一。

大花蕙兰授粉后子房cDNA差异表达片段序列分析

应用mRNA差异显示(DDRT-PCR)方法比较分析了大花蕙兰(Cymbidiumhybridium)授粉后2d与未授粉子房的基因表达差异。结果分离到了7个在授粉后子房中特异表达的cDNA片段,分别命名为CDD-313,CDD-272,CDD-265,CDD-243,CDD-193,CDD-218,CDD-470。在GenBank中进行同源性比较发现前4个没有同源序列与之匹配;后3个片段推导的氨基酸序列分别与ABC型transporter,GTPase和40S核糖体蛋白质S3(RPS3)有高度同源性。反向Northern杂交进一步证实它们存在,并在授粉子房中高度表达。其中,最为有意义的是CDD-470,其推定的氨基酸与参与细胞生长分化的植物源多功能蛋白RPS3高度同源性,进而推测其与RPS3有相似的功能,可能与兰花子房发育有关,这为解释花发育分子机制提供了新资料。

良恶性子宫内膜病变组织中p-mTOR及p-P70 S6K的表达及意义

目的探讨磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)及磷酸化40S核糖体蛋白6S激酶(p-P70 S6K)在良恶性子宫内膜病变组织中的表达情况。方法选取49例子宫内膜腺癌组织(A组)、11例子宫内膜不典型增生组织(B组)、11例子宫内膜单纯性增生组织(C组)、10例子宫内膜增生期组织(D组)。用免疫组化SP法染色及显微图像分析系统检测四组中的p-mTOR、p-P70 S6K。结果A组p-mTOR、p-P70 S6K的表达强度均明显高于B、C、D组(P均<0.05)。子宫内膜腺癌病理分期不同,其p-mTOR、p-P70 S6K表达亦不同(P<0.05)。结论p-mTOR、p-P70S6K可能参与了子宫内膜腺癌发生发展过程。

mTOR、PI3K和P70S6K在子宫颈鳞癌中的表达及临床意义

目的探讨mTOR、PI3K和P70S6K在子宫颈鳞癌发生、发展中的作用。方法用免疫组化SP法分别检测子宫颈鳞癌(宫颈癌组,55例)与正常宫颈组织(对照组,30例)中mTOR、PI3K和P70S6K的表达,分析其与各临床因素之间的关系。结果宫颈癌组mTOR、PI3K和P70S6K的阳性表达率均高于对照组(72.73%vs.10.00%、65.55%vs.0和52.73%vs.0)(P<0.01)。宫颈癌组mTOR阳性表达与间质浸润深度和淋巴结转移相关(P<0.05),PI3K阳性表达与肿瘤组织学分级相关(P<0.01),P70S6K阳性表达与肿瘤淋巴结转移相关(P<0.05)。宫颈癌组中mTOR与PI3K的表达呈正相关(r=0.50,P<0.01),mTOR与P70S6K的阳性表达呈正相关(r=0.32,P<0.05)。结论子宫颈鳞癌组织mTOR、PI3K和P70S6K蛋白表达与其发生、发展相关。

mTOR信号通路及其与肿瘤的联系

mToR是一种在细胞生长调控中处于核心地位的丝/苏氨酸蛋白酶。其相关信号通路复杂,且涉及面广泛,mToR可在多种因素的活化下参与基因转录、蛋白质翻译起始、核糖体生物合成、细胞凋亡等多项细胞功能。大量研究显示:mTOR信号通路调控异常与肿瘤发生密切相关,是肿瘤治疗的一个重要靶点。