核糖体蛋白S6激酶1基因沉默对高糖刺激下肝细胞固醇调节元件结合蛋白1c表达的影响

目的探讨核糖体蛋白S6激酶1（S6K1）基因沉默后对高糖刺激下小鼠肝细胞固醇调节元件结合蛋白1c（SREBP1c）表达的影响。方法将构建的S6K1sERNA重组基因腺病毒（S6K1Ax）注射进db／db小鼠尾静脉，以注射含pU6启动子的腺病毒（pU6Ax）空载体的db／db小鼠作对照组，HE染色观察肝脏病理改变并检测肝脏甘油三酯含量变化。S6K1Ax转染小鼠肝细胞AML12细胞，转染pU6Ax的作为对照组，分别用高糖、高胰岛素、高糖高胰岛素刺激，逆转录聚合酶链式反应分析肝细胞在各种条件刺激后mSREBP1c等的表达，Western blot检测db／db小鼠肝脏及AML12细胞S6K1的蛋白表达。结果db／db糖尿病小鼠注射S6K1Ax后1周，肝脏S6K1蛋白表达被抑制，对照组与实验组肝脏甘油三酯含量分别为（0．65±0．02）mmol／L和（0．56±0．01）mmol／L，t=4．312，P〈0．01，差异有统计学意义。HE染色显示实验组肝细胞胞质含脂肪滴减少，空泡细胞数量减少，脂肪肝得到改善。AML12肝细胞mSREBP1c表达实验组为0．03±0．01，对照组为0．06±0．01，t=5．624，P〈0．01，差异有统计学意义。与基础状态相比，给以胰岛素刺激后实验组和对照组mSREBP1c表达均增加，实验组上升至0．06±0．02，t=8．452，P〈0．01，对照组上升至0．08±0．02，t=3．591，P〈0．05。高糖刺激对实验组和对照组mSREBP1c表达均无明显影响。与高胰岛素刺激组相比，高糖高胰岛素刺激后实验组和对照组mSREBP1C表达均无明显差异。结论S6K1通过影响脂代谢的关键调控基因mSREBP1c表达参与了脂肪的合成，推测S6K1在脂肪肝的形成中发挥了重要作用。

灵芝酸C2调控S6K/SREBPs信号通路对肝细胞脂代谢的影响及机制研究

目的:研究灵芝酸C2(GAC2)的体外降脂作用,并基于核糖体S6蛋白激酶(S6K)/固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)信号通路探讨其可能机制。方法:以人肝细胞HL-7702为对象,采用MTT法考察低、中、高剂量(5、10、20μmol/L,下同)GAC2作用后细胞的相对活力;以洛伐他汀为阳性对照,采用酶联免疫吸附测定法检测低、中、高剂量GAC2作用后细胞中胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)的含量,并采用尼罗红染色法观察细胞内的脂质堆积情况;转染SREBPs报告基因质粒后,以25-羟基胆固醇(25-HC)为阳性对照,采用荧光素酶报告基因法检测低、中、高剂量GAC2作用后细胞中SREBPs荧光素酶的相对活性;以25-HC为阳性对照,采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测中、高剂量GAC2作用后细胞中SREBPs及其下游基因mRNA的表达情况;以SREBPs抑制剂(25-HC)、S6K抑制剂(雷帕霉素)为参照,采用Western blotting法检测细胞中SREBP-1、SREBP-2的表达情况[以成熟SREBPs(n-SREBPs)表示]以及磷酸化S6K与S6K的相对表达量比值(p-S6K/S6K比值);利用AutoDock 4.0等软件对S6K与GAC2进行分子对接。结果:低、中、高剂量GAC2对细胞相对活力无显著影响(P>0.05)。与空白对照组比较,洛伐他汀组和GAC2高剂量组细胞中TC含量以及洛伐他汀组和GAC2中、高剂量组细胞中TG含量均显著降低(P<0.05或P<0.01),各给药组细胞中的脂滴均有所减少。与空白对照组比较,25-HC组和GAC2低、中、高剂量组细胞中的SREBPs荧光素酶相对活性均显著降低;25-HC组和GAC2中、高剂量组细胞中HMGCS1、MVK、SCD、HMGCR基因mRNA,25-HC组细胞中DHCR7基因mRNA,GAC2高剂量组细胞中SREBP-2基因mRNA,25-HC组和GAC2高剂量组细胞中DHCR24、MSMO2基因mRNA的相对表达量均显著降低;25-HC组和GAC2低、中、高剂量组细胞中SREBP-1蛋白的相对表达量,25-HC组和GAC2高剂量组n-SREBP-2蛋白的相对表达量以及霉帕霉素组和GAC2各剂量组p-S6K/S6K比值均显著降低(P<0.05或P<0.01)。分子对接结果显示,GAC2可通过氢键与S6K的氨基酸残基Arg335、Arg330、Ala332结合。结论:GAC2可降低HL-7702细胞的脂质水平,其调控作用可能与抑制S6K/SREBPs信号通路的表达有关。

有氧运动对非酒精性脂肪肝大鼠肝组织雷帕霉素靶蛋白、核糖体蛋白S6激酶1和固醇调节元件结合蛋白1c表达的影响

目的观察有氧运动对非酒精性脂肪肝大鼠肝组织雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)、固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)表达的影响。方法选取健康雄性SD大鼠30只,按随机数字表法分为正常组、模型组和运动组。正常组喂食基础饲料,模型组和运动组均喂食高脂饲料,运动组大鼠进行12周跑台训练。3组大鼠均于实验12周后取材,肝脏称重,并进行肝组织苏木精-伊红(HE)染色观察和肝组织炎症活动度评分,同时测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)、谷草转氨酶(AST)和谷丙转苷酶(ALT)含量的变化,采用免疫印迹方法检测肝组织mTOR、S6K1、SREBP-1c蛋白的表达。结果正常组大鼠肝脏组织形态学基本正常,肝索排列整齐,肝小叶结构完整清晰,未见脂肪变性及炎症细胞浸润;模型组大鼠可见弥漫性肝细胞脂肪变性,肝索紊乱,炎性细胞浸润;运动组大鼠肝索排列较模型组整齐,肝细胞脂滴明显减少,炎症细胞浸润减轻。运动组大鼠肝组织炎症活动度评分显著低于模型组(P<0.01);模型组大鼠血清TC、TG、FFA、ALT、AST水平均显著高于正常组(P<0.01);运动组大鼠血清TC、TG、FFA、ALT、AST水平均显著低于模型组(P<0.01)。模型组大鼠肝组织mTOR、S6K1、SREBP-1c的蛋白表达分别(1.12±0.24)、(1.34±0.35)、(0.84±0.12),均显著高于正常组(P<0.01);运动组大鼠肝组织mTOR、S6K1、SREBP-1c的蛋白表达分别为(0.54±0.18)、(0.61±0.21)、(0.41±0.15),均显著低于模型组(P<0.01)。结论有氧运动可以发挥防治非酒精性脂肪肝的作用,其机制可能与mTOR/S6K1/SREBP-1c信号通路的抑制相关。

靶向单磷酸腺苷活化蛋白激酶-固醇调节元件结合蛋白营养感应信号通路对胰岛素抵抗和代谢综合征治疗的意义

单磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）是一种能量和营养感应分子，可与转录因子固醇调节元件结合蛋白（SREBP）特异性结合并产生磷酸化反应。AMPK依赖性磷酸化和抑制SREBP活性，可能成为AMPK激动剂的分子药理机制，为开发治疗2型糖尿病相关脂肪肝和动脉粥样硬化性疾病的药物提供了新思路。本文对整合的AMPK和SREBP营养感应信号通路在肝细胞脂肪代谢调节中的作用及其在2型糖尿病治疗中的意义进行论述。

萆薢总皂苷调控AMPK/SREBP-1c/ACC信号通路改善小鼠非酒精性脂肪性肝炎

目的:研究萆薢总皂苷(TSD)改善小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的作用及机制。方法:将48只C57BL/6J小鼠随机分为正常组和造模组,采用高脂高胆固醇饲料+20%果糖水喂养16周,将造模组小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组(4 mg·kg^(-1)·d^(-1))、TSD高、中、低剂量组(200、60、20 mg·kg^(-1)·d^(-1)),灌胃给药,连续8周。测定小鼠活动度、肝脏系数、肝脏总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)及血清TC、TG、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;苏木素-伊红(HE)染色、Masson染色、油红O染色和透射电子显微镜观察肝组织和肝细胞病理变化、脂质蓄积情况和肝脏超微结构形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏组织AMP活化蛋白激酶(AMPK)、固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)及其磷酸化形式的蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠活动度明显降低(P<0.05,P<0.01),小鼠肝脏TC、TG、FFA和血清TC、TG、ALT、AST、GGT、IL-1β、TNF-α水平、肝脏系数、肝脏病理评分均明显升高,肝脏组织p-AMPK/AMPK、p-ACC蛋白表达明显降低,SREBP-1c、ACC蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,阿托伐他汀组小鼠活动度明显增加(P<0.05),TSD各剂量组小鼠活动度无明显改变;TSD及阿托伐他汀组小鼠肝脏TC、TG、FFA和血清TC、TG、ALT、AST、GGT、IL-1β、TNF-α水平、肝脏系数、肝脏病理评分均明显降低,肝脏组织p-AMPK/AMPK、p-ACC蛋白表达明显升高,SREBP-1c、ACC蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:TSD可能通过调控AMPK/SREBP-1c/ACC信号通路减少脂质合成,从而改善小鼠NASH。

p90核糖体S6激酶在耐药中的研究进展

p90核糖体S6激酶(RSK)是一种高度保守的丝氨酸/苏氨酸激酶,其包括RSK1、RSK2、RSK3及RSK4 4种亚型。RSK是丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节酶(MAPK/ERK)信号通路下游重要的效应分子,其通过磷酸化底物介导细胞增殖、侵袭、转移、衰老等一系列生物学活动。日前,RSK在化疗耐药方面的作用逐渐清晰,而其介导耐药的机制是学界关注的重点。本文将从RSK家族结构与功能,RSK所在的MAPK/ERK信号通路及RSK在不同癌症耐药中的作用方面,总结与归纳RSK与耐药的相关性及所涉及的研究机制,并探索RSK抑制剂用于逆转化疗耐药的发展潜力。

益气化痰活血方对SCH大鼠海马记忆能力及ERK1/2-CREB信号通路的影响

目的:研究益气化痰活血方对亚临床甲状腺功能减退症(SCH)大鼠记忆影响并探讨可能机制。方法:Wistar大鼠采用'甲状腺全切+左旋甲状腺素(L-T4)皮注'建模,随机分假手术组、模型组、中药组(益气化痰活血方13.7g/kg)、西药组(L-T4 4.5μg/kg)、中西药组。给药6周后行水迷宫测试,后处死取标本检测,放射免疫(RIA)测血清总甲状腺素(TT4),免疫化学发光(ICMA)测血清促甲状腺激素(TSH),RT-PCR测海马ERK1/2、RSK、CREB mRNA表达。结果:模型组巡航时间及探索次数、海马ERK1/2、RSK、CREB mRNA积分光密度值,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.01);各治疗组巡航时间减少、探索次数增加、ERK1/2、RSK、CREBmRNA积分光密度值显著增加(P<0.01,P<0.05),中西药组优于中药组及西药组(P<0.01,P<0.05)。结论:益气化痰活血方能改善SCH大鼠学习记忆能力,可能与上调海马ERK1/2-CREB通路有关。

柚皮苷对小鼠高脂血症的作用研究

目的探讨柚皮苷对小鼠高脂血症的影响,并阐明其作用机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为对照组、高血脂组和柚皮苷组。高血脂组和柚皮苷组小鼠饲喂高脂饲料,持续喂养4周,建立小鼠高脂血症模型。对照组小鼠饲喂正常饲料。造模成功后,柚皮苷组小鼠每日灌胃200 mg·kg-1柚皮苷,对照组和高血脂组小鼠均灌胃等量0.9%NaCl,连续灌胃5周。收集小鼠血液进行血脂检测。收集小鼠肝组织,用生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量,用蛋白质印迹法检测目的蛋白的表达水平。结果对照组、高血脂组和柚皮苷组小鼠肝组织中SOD活性分别为(58.43±6.27)、(37.16±4.10)和(51.23±4.81)U·mg prot^(-1),CAT活性分别为(176.11±13.59)、(112.65±10.02)和(158.46±14.37)U·mg prot^(-1),MDA含量分别为(3.15±0.74)、(12.62±2.07)和(5.76±1.83)U·mg prot^(-1),GSH含量分别为(91.52±11.47)、(34.16±4.62)和(71.64±8.79)U·mg prot^(-1),诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白相对表达水平分别为0.28±0.05、4.26±1.13和0.94±0.19,腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)蛋白相对表达水平分别为1.32±0.18、0.84±0.11和1.49±0.16,胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP)蛋白相对表达水平分别为1.76±0.24、5.78±1.21和2.93±0.42,3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)蛋白相对表达水平分别为1.69±0.18、6.13±1.38和3.26±0.43。对照组和柚皮苷组的上述指标与高血脂组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论柚皮苷能够有效调节高脂血症小鼠的血脂水平,抑制氧化应激反应和细胞凋亡水平,其作用机制可能与调控AMPK/HMGCR/SREBP信号通路有关。