有氧运动对线粒体质子跨膜转运及核糖核苷二磷酸还原酶的影响

本实验通过对有氧运动训练 (无负重游泳 6 0分钟 /天 ,7天 )大鼠游泳运动后的骨骼肌、心肌线粒体质子跨膜转运能力及核糖核苷二磷酸还原酶活性的测定 ,发现有氧运动训练的大鼠在定量运动负荷后 (6 0分钟无负重游泳 ) ,骨骼肌线粒体的质子跨膜转运能力显著提高 (P <0 0 5 ) ,以及线粒体的核糖核苷二磷酸还原酶活性明显高于对照组 (未经训练之大鼠 ,P <0 0 0 1)。而心肌线粒体的以上两项指标变化不甚明显。结果显示 ,骨骼肌线粒体对有氧运动训练的适应过程与其质子跨膜转运能力的提高及核糖核苷二磷酸还原酶活性增加有关。提示骨骼肌线粒体在慢性高氧化磷酸化状态刺激下 ,可能同时导致DNA生物合成的增加 ,即线粒体基因组对其功能变化产生应答反应。心肌线粒体的运动适应过程与骨骼肌线粒体不尽相同。

核糖核苷酸还原酶M2在小脑髓母细胞瘤中的功能及机制

目的:探讨核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)在小脑髓母细胞瘤中的功能和机制。方法:分析GEO数据库中髓母细胞瘤患者的生存和RRM2表达水平的关系。通过免疫组化并结合数据库分析RRM2在小脑髓母细胞瘤和正常小脑组织中的表达。分别通过CCK-8细胞增殖实验、Transwell实验、流式细胞术检测RRM2对小脑髓母细胞瘤细胞系Daoy和D283的增殖、迁移、细胞周期和凋亡的调控作用。通过转录组测序(RNA-seq)探索下游分子机制。采用配对t检验和独立样本t检验进行统计学分析。结果:通过GEO数据库分析发现高表达RRM2的髓母细胞瘤患者相较于低表达组的总生存期更短、预后更差(P<0.05)。免疫组化及数据库分析结果显示RRM2在小脑髓母细胞瘤中的表达明显高于正常小脑组织(P<0.05)。与对照组比较,CCK-8细胞增殖实验、Transwell实验提示过表达RRM2促进肿瘤细胞增殖和迁移(P<0.05),敲低RRM2减少肿瘤细胞增殖和迁移(P<0.05);过表达RRM2能够明显增加S期的细胞比例(P<0.05),且明显减少细胞凋亡(P<0.05)。RNA-seq结果显示敲低RRM2后有3 454个基因表达上调,3 332个基因表达下调。KEGG分析显示RRM2敲低后多个信号通路受到影响,包括FOXO、细胞周期、核糖体生物合成等。结论:RRM2在小脑髓母细胞瘤中高表达且与预后不良有关,其具有促进小脑髓母细胞瘤细胞增殖、迁移,减少细胞凋亡的能力。

核糖核苷酸还原酶研究

核糖核苷酸还原酶广泛存在于各种生物中,是生物体内唯一的催化4种核糖核苷酸还原、生成相应的脱氧核糖核苷酸的酶。该酶是DNA合成和修复的关键酶和限速酶,对细胞的增殖和分化起着调控作用。不同生物中的RR根据其结合的金属辅助因子不同而分类。虽然不同类型RR之间的氨基酸序列相似性很低,但它们有十分相似的三级结构的活性中心和相同的催化功能。RR分子中包含2个变构位点,即酶活性中心和底物特异结合位点。活性中心通过生物有机自由基的作用催化核糖核苷酸还原;底物特异结合位点通过变构作用调控4种dNTPs在细胞内的平衡。因此,该酶不仅是研究DNA合成与修复、细胞增殖与分化及癌症的治疗与抗癌药物开发的重要靶点,同时也是研究酶的结构与功能以及酶的催化机理等的重要工具。本文总结了该酶的种类与分布、结构特征、催化机理及作为抗癌药物开发靶点等方面的研究进展。

切除修复交叉互补基因1、核糖核苷酸还原酶M1亚基和3型β微管蛋白分子检测指导晚期非小细胞肺癌个体化治疗的临床效果

目的探讨切除修复交叉互补基因1（ERCC1）、核糖核苷酸还原酶M1亚基（RRMl）和3型β微管蛋白（TUBB3）分子检测在指导晚期非小细胞肺癌（NSCLC）个体化治疗的临床效果。方法将2013年1～11月秦皇岛市第二医院胸外科住院治疗的48例经病理确诊的晚期NSCLC患者分为实验组（20例）和对照组（28例）。实验组采用SYBR荧光实时定量PCR检测方法检测患者胸水或静脉血中ERCC1、RRM1和TUBB3的表达量，根据表达情况选择化疗方案：对照组则均采用顺铂与吉西他滨联合治疗。经过2个周期治疗后比较两组的疗效、不良反应及疾病进展、生存获益情况。结果实验组的总有效率和总控制率均显著高于对照组（P〈0．05）；实验组和对照组治疗后的PS评分均显著高于治疗前（P〈0．05），但两组治疗后的PS评分、PS评分改善率差异均无统计学意义（P〉0．05）；两组间不良反应发生率差异无统计学意义（P〉0．05），且两组间不同系统的不良反应严重程度差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论实时定量PCR技术检测病理组织的ERCC1、RRM1和TUBB3表达水平用于指导晚期NSCLC患者个体化治疗，可提高治疗有效率和疾病控制率，但在改善生活质量和减少不良反应发生效果不显著．建议进一步探索标志物指导下更为有效的化疗方案。

肺癌组织中切除修复交叉互补基因1和核糖核苷酸还原酶亚单位1表达水平与非小细胞肺癌患者的疗效和生存期的关系

目的探讨切除修复交叉互补基因1(ERCC1)和核糖核苷酸还原酶亚单位1(RRM1)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达及其与临床特征和预后的关系。方法回顾性收集河南科技大学第一附属医院肿瘤外科确诊为NSCLC的患者131例,患者均接受过吉西他滨联合顺铂(GP)方案化学治疗。应用聚合酶链式反应(PCR)检测患者肿瘤组织中ERCC1和RRM1表达水平,分析其表达水平与患者临床病理特征、化学治疗有效率和生存期的相关性。结果NSCLC患者肿瘤组织中ERCC1和RRM1表达水平与患者的性别、年龄、病理类型、吸烟史、TNM分期等因素无关(P>0.05)。ERCC1低表达的患者化学治疗有效率显著高于ERCC1高表达的患者(χ2=6.382,P<0.05);RRM1低表达的患者化学治疗有效率显著高于RRM1高表达的患者(χ2=4.592,P<0.05)。ERCC1和RRM1低表达患者中位生存期分别为27.8、26.8个月,显著高于ERCC1和RRM1高表达患者中位生存期22.8、24.1个月(P<0.05)。结论 ERCC1和RRM1表达水平可预测NSCLC患者的治疗效果及生存期,为NSCLC患者的治疗及预后提供新的依据。

核糖核苷酸还原酶小亚基M2在肿瘤中表达及意义的研究进展

核糖核苷酸还原酶（RibonucleotideReductase．RR）在DNA合成、修复及细胞增殖中起关键作用，近来被认为是癌症治疗的重要靶点。RR包含3个亚单位，分别是大亚基RRM1、小亚基RRM2和小亚基p53R2。RRM2亚基不仅和DNA的合成密切相关，对恶性肿瘤生物学行为、转移潜能和肿瘤耐药的产生都具有影响．在绒癌、胰腺癌、膀胱癌、胃癌、直肠癌、乳腺癌等多种人体癌组织中发现RRM2的表达水平有异常升高的情况，抑制RRM2的高表达，可以降低RR酶的活性，抑制癌细胞的生长，增加肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤转移和逆转耐药。

非小细胞肺癌中核糖核苷酸还原酶亚单位M1表达及其与吉西他滨化学治疗敏感性相关研究

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)石蜡包埋组织中核糖核苷酸还原酶(RR)亚单位M1(RRM1)表达与吉西他滨化学治疗敏感性的关系,并观察这项指标与患者生存的关系。方法收集术后化学治疗应用吉西他滨的NSCLC患者的病理标本制成组织芯片,采用免疫组织化学法检测RRM1的表达,并分析患者的化学治疗疗效和生存资料与上述指标表达的关系。结果在50例病理组织中RRM1过表达22例(44%)。RRM1过表达组的1 a生存率小于非过表达组的1 a生存率(P<0.05)。不同年龄、性别、病理类型及肿瘤部位的2组患者RRM1表达差别无统计学意义(P>0.05),不同分化程度、不同肿瘤大小、淋巴结转移情况及分期的2组患者RRM1表达差别有统计学意义(P<0.05)。RRM1非过表达组织化学治疗有效率82.1%(23/28)高于RRM1过表达组有效率22.7%(5/22),差别有统计学意义(P<0.05)。RRM1过表达组的1 a生存率为53.6%(15/28),非过表达组1 a生存率为77.3%(17/22),RRM1过表达组的1 a生存率低于RRM1非过表达组(P<0.05)。结论 NSCLC患者中RRM1低表达的患者生存率高于高表达的患者,RRM1可以作为NSCLC采用吉西他滨方案化学治疗敏感性和生存预测的分子指标。

核糖核苷酸还原酶M2在肿瘤中的表达及意义

核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)是DNA合成和修复的限速酶,在妊娠滋养细胞疾病、乳腺癌、胰腺癌等肿瘤中高表达。研究表明,其高表达增加肿瘤治疗中的化疗抵抗,产生耐药问题,由此激发了核苷酸还原酶抑制剂的研制和开发,其中最具代表性的是3-AP和吉西他滨。目前在其结构和功能的基础上,研究核糖核苷酸还原酶M2在其相关肿瘤中的意义和治疗已逐渐成为热点与重点,随着分子生物学技术的发展,有望通过阻断核糖核苷酸还原酶M2的表达抑制肿瘤发展,提高肿瘤的治疗效果。

晚期非鳞非小细胞肺癌胸苷酸合成酶和核糖核苷酸还原酶M1的表达及其与化疗疗效的关系

目的探讨胸苷酸合成酶(TS)和核糖核苷酸还原酶M1(RRM1)的表达与培美曲塞或吉西他滨联合卡铂治疗晚期非鳞非小细胞肺癌疗效的关系。方法晚期非鳞非小细胞肺癌患者70例,分为培美曲塞+卡铂化疗组35例及吉西他滨+卡铂治疗组35例,检测培美曲塞+卡铂化疗组患者肺癌组织TS的水平和吉西他滨+卡铂化疗组患者肺癌组织RRM1的水平,分析客观缓解率(ORR)、无进展生存时间(PFS)与TS、RRM1水平的关系。结果培美曲塞+卡铂化疗组中TS高表达患者ORR为15.8%(3/19),低于TS低表达患者的75.0%(12/16)(P<0.05);TS高表达患者PFS为(2.1±0.6)个月,短于TS低表达患者的(6.6±2.1)个月(P<0.05)。吉西他滨+卡铂化疗组RRM1高表达患者ORR为17.6%(3/17),低于RRM1低表达患者ORR的72.2%(13/18)(P<0.05);RRM1高表达患者PFS为(2.2±0.6)个月,短于RRM1低表达患者的PFS(7.1±3.4)个月(P<0.05)。结论晚期非鳞非小细胞肺癌患者采用培美曲塞联合卡铂化疗时,TS低表达者的临床疗效较好,而采用吉西他滨联合卡铂化疗时,RRM1低表达者的临床疗效较好。

切除修复交叉互补基因1、核糖核苷酸还原酶1与非小细胞肺癌预后及耐药的关系

肺癌是各种恶性肿瘤中引起死亡的主要原因之一。非小细胞肺癌占所有肺癌的80％。尽管治疗措施不断发展．但预后仍然很不理想。随着肿瘤分子生物学的发展．利用分子标志物判断肿瘤的生物学行为．预测非小细胞肺癌的复发．并对患者制定个体化的治疗方案成为研究热点。

RNA干扰核糖核苷酸还原酶M2对耐药卵巢癌细胞凋亡及侵袭性的影响

目的探讨RNA干扰核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)对耐药卵巢癌细胞凋亡及侵袭性的影响。方法将RRM2基因的特异性小干扰(siRNA)转染SKOV3/DDP设为干扰组,SKOV3/DDP细胞、SKOV3/DDP-RRM2非特异性阴性细胞设为空白组、阴性组。检测细胞增殖抑制率,计算RI、耐药转染率,荧光PCR技术检测RRM2基因mRNA表达,并分析siRNA转染对SKOV3/DDP耐药指数、RRM2蛋白的影响,采用Transwell观察SKOV3/DDP细胞侵袭能力。结果空白组、阴性组及干扰组转染率均>90%。DDP对SKOV3/DDP细胞属低度耐药,吉西他滨对SKOV3/DDP细胞仍较为敏感。DDP、吉西他滨对干扰组、阴性组、空白组的DDP对细胞的半数抑制浓度(IC50)值比较,差异有统计学意义(P<0.05),DDP、吉西他滨对干扰组细胞的IC50值显著低于阴性组、空白组(P<0.05)。SKOV3/DDP细胞、SKOV3细胞RRM2蛋白的相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05),且转染Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组相对表达量均显著低于阴性组、空白组,其中以转染Ⅰ组细胞的RRM2蛋白相对表达量下降最显著(P<0.05)。干扰组细胞凋亡率显著高于空白组、阴性组,穿膜细胞数显著低于空白组、阴性组(P<0.05)。结论 siRNA可有效抑制RRM2基因在卵巢癌中的增殖与侵袭性,增加耐药细胞的药物敏感性,尤其是促进DDP诱导的耐药细胞凋亡。

对虾白斑病毒核糖核苷酸还原酶基因原核表达载体的构建及蛋白表达、纯化

采用PCR方法扩增对虾白斑病毒核糖核苷酸还原酶基因,插入到pGEX-4T-2表达载体上构建出带有目的基因的重组质粒pGEX-4T-2RR,然后将重组质粒转化大肠杆菌.转化菌经IPTG诱导后大量表达重组蛋白,通过降低诱导温度获得可溶性表达的重组蛋白,采用Glutathione Sepharose 4B亲和层析对重组蛋白进行纯化,获得了高纯度的目的蛋白.

编码人疱疹病毒－6型核糖核苷酸还原酶和P41蛋白基因的克隆和序列测定

本文报道人疱疹病豢－６型（ＨＨＶ－６）ｐＳＴＹ２８ＤＮＡ片段的序列测定。应用分子克隆、缺损突变体（Ｄｃｌｅｔｉｏｎｍｕｔａｎｔ）制备和序列测定等技术，完成了３．９ｋｂＨＨＶ－６ｐＳＴＹ２８ＤＮＡ片段的全序列测定。经ＤＮＡＳＩＳ核酸蛋白软件分析，该片段含有两个开读框架（ＯＲＦ）核糖核苷酸还原酶（ＲＩＲ）ＯＲＦ有２４１４个核苷酸，可编码８０５个氨基酸；Ｐ４１蛋白由１１００个核苷酸组成。与其他疱疹病毒作氨基酸同源性比较，ＨＨＶ－６ＲｉＲ与人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）有高度同源性，最适记分（Ｏｐｔｉｍｉｚｅｄｓｃｏｒｅ）达４５９。实验结果支持Ｅｓｆｔａｔｈｉｏｕ提出的论点，ＨＨＶ－６属于β－疱疹病毒。

核糖核苷酸还原酶抑制剂治疗肿瘤的研究进展

核糖核苷酸还原酶(RR)是生物细胞中唯一催化二磷酸核糖核苷酸还原为二磷酸脱氧核糖核苷酸(dNTPs)的酶,调节dNTPs含量,在DNA合成及细胞增殖中至关重要,其过表达与肿瘤的发生发展有着明确的联系。目前RR抑制剂已应用于临床治疗肿瘤,以RR及其亚单位为潜在靶点开发新型抗癌药物,可望为临床治疗肿瘤提供新的选择。本综述从RR的结构和功能、RR在癌症发展中的作用、RR抑制剂的应用及研究前景几方面进行探讨。

核糖核苷酸还原酶M1在预测吉西他滨治疗胰腺癌患者疗效的Meta分析

目的:探讨核糖核苷酸还原酶M1(ribonucleotide reductase M1,RRM1)在预测吉西他滨治疗胰腺癌患者的疗效的价值.方法:计算机检索在2004-01-01/2014-12-31在Cochrane Library、Medline、Science Direct、Springer link、中国期刊全文数据库、中国知网、万方以及维普数据库公开发表的关于核糖核苷酸还原酶M1在吉西他滨治疗胰腺癌患者疗效的全文为英文的文献,严格按纳入排除标准由2位研究者独立进行文献筛选(PRISMA标准)、资料提取和方法学质量评价后,采用Stata12.0软件进行Meta分析.结果:共纳入8篇文献,共包含胰腺癌患者556例,其中高表达的RRM1患者373例,低表达RRM1的患者293例.Meta分析结果显示:高表达的RRM1患者的总体生存率(overall survival,OS)(HR=1.56,95%CI:1.17-2.07P<0.05)和无病生存期(disease free-survival DFS)(HR=1.47,95%CI:0.83-2.62,P<0.05)均较高.结论:在吉西他滨治疗的胰腺癌患者中,高表达的RRM1较低表达的RRM1能显著性的提高患者的总体生存率和无病生存期,他们可以作为临床上评估吉西他滨治疗胰腺癌患者预后的指标.

核糖核苷酸还原酶M2与恶性肿瘤的研究进展

核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)是脱氧核糖核酸(DNA)合成及修复过程中不可缺少的一种关键酶,是核糖核苷酸还原酶(RR)活性的主要调控元件。研究发现RRM2在多种恶性肿瘤中均过表达,本文就RRM2在恶性肿瘤中的表达及RRM2过表达与恶性肿瘤生存预后、增殖、转移、化疗耐药性之间关系的研究进展进行综述,旨在为临床恶性肿瘤的诊断、治疗、预后提供新的理论依据。

核糖核苷酸还原酶M2下调抑制人宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭

核糖核苷酸还原酶M2(ribonucleotide reductase, RRM2)在多种癌症组织中高表达,这与肿瘤细胞的侵袭、转移及肿瘤血管形成等生物学行为密切相关。目前,关于以RRM2为靶点治疗宫颈癌的研究并不多,其对宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响及机制也尚未明确。本研究采用RNA干扰技术下调RRM2,以人宫颈癌细胞株CaSki和HeLa细胞为研究对象,实验分为Ctrl-siRNA组和RRM2-siRNA组。通过RT-PCR和Western印迹检测RRM2-siRNA的干扰作用,采用CCK-8和EDU实验评价细胞的增殖和DNA合成的情况,通过划痕实验和Transwell小室侵袭实验观察细胞的迁移和侵袭能力,并用Western印迹检测NF-κB和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)蛋白质表达水平。结果显示,在CaSki和HeLa细胞中,RRM2-siRNA组RRM2的mRNA和蛋白质表达较Ctrl-siRNA组均下降(P<0.05),表明RRM2-siRNA能有效抑制RRM2的表达。与Ctrl-siRNA组相比,RRM2-siRNA组在转染24、48、72 h后,细胞增殖率下降(P<0.05)。且DNA合成率与细胞划痕愈合程度,宫颈癌细胞侵袭数量也显著下降(P<0.05)。结果表明,RRM2下调后,抑制DNA合成与细胞增殖、迁移和侵袭过程。此外,RRM2-siRNA组NF-κB和MMP-9蛋白质水平较Ctrl-siRNA组降低。本研究提示,下调RRM2抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭,该作用可能通过NF-κB和MMP-9介导,这为宫颈癌中以RRM2作为靶点的治疗提供实验依据。

多腺苷二磷酸核糖聚合酶1基因单核苷酸多态性与转移性结直肠癌化疗敏感性及预后的关系

目的探讨多腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1)基因单核苷酸多态性(SNP)与转移性结直肠癌患者化疗敏感性及生存预后的关系。方法选择195例初治转移性结直肠癌患者,均给予奥沙利铂联合卡培他滨方案化疗。首次化疗前抽取静脉血检测PARP1基因rs1136410位点T/C、 rs1805414位点T/C和rs8679位点T/C的基因型。2个化疗周期后评估疗效并统计化疗敏感率,随访记录生存情况。比较携带上述3个位点不同基因型的患者的化疗敏感率,并采用Logistic回归模型分析PARP1基因SNP与患者化疗敏感性的关系。比较携带上述3个位点不同基因型的患者的中位生存期,并采用Cox回归模型分析患者生存情况的影响因素。结果 (1) 195例转移性结直肠癌患者中完全缓解2例、部分缓解75例、疾病稳定58例、疾病进展60例,化疗敏感率为39.5%(77/195),不同临床特征的患者之间的化疗敏感率差异均无统计学意义(均P>0.05)。(2)PARP1基因rs1136410位点基因型与转移性结直肠癌患者的化疗敏感性有关,携带TC基因型或CC基因型的患者化疗敏感性高于携带TT基因型的患者(均P<0.05)。PARP1基因rs1805414、rs8679位点的SNP与转移性结直肠癌患者的化疗敏感性均无关(均P>0.05)。(3)携带PARP1基因rs1136410、 rs1805414位点不同基因型的患者的中位生存期差异均无统计学意义(均P>0.05)。携带PARP1基因rs8679位点变异基因型(TC+CC)的转移性结直肠癌患者中位生存期长于携带野生纯合基因型(TT)的患者(P<0.05)。Cox回归分析结果显示,PARP1基因rs8679位点SNP是转移性结直肠癌患者生存情况的独立影响因素(P<0.05)。结论 PARP1基因rs1136410位点SNP与转移性结直肠癌患者的化疗敏感性相关,相较于携带TT基因型的患者,携带TC或CC基因型的患者对奥沙利铂+卡培他滨的敏感性更高;而PARP1基因rs8679位点SNP可能影响转移性结直肠癌患者的生存预后,携带rs8679位点TC或CC基因型的患者的生存获益更佳。

核糖核苷酸还原酶和非小细胞肺癌

肺癌在全世界是癌症相关造成死亡的最常见原因，全球每年死于肺癌人数占所有死亡人数的3．1％，占所有癌症死亡人数的17．6％，排第一位[1]。在台湾，恶性肿瘤自1982年迄今，一直居十大死亡之首位。而其中15％－20％是因肺癌而死亡，据统计2010年死于肺癌的人数占所有癌症死亡人数的20．0％（8,209／41，046），位居十大癌症死亡原因第一位，且有逐年增加的趋势[2]。