超声靶向微泡破裂技术联合shRNA质粒沉默Toll样受体4基因

目的 Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)4表达水平与脑缺血合并高血糖后的痫性发作及脑梗死预后相关,本文探讨超声靶向微泡破裂(ultrasound-targeted microbubble destruction,UTMD)联合短发夹核糖核酸(short hairpin ribonucleic acid,sh RNA)干扰技术沉默TLR4的可行性和应用价值。方法将32只实验用Wistar大鼠分为4组:空白对照组(NS)、裸质粒组(P)、质粒联合超声辐照组(P+UTMD)、质粒与Sono Vue联合超声辐照组(P+S+UTMD),每组各8只。裸质粒组注入质粒,质粒联合超声辐照组注入质粒行超声辐照,质粒与Sono Vue联合超声辐照组侧脑室注入质粒和Sono Vue微泡并行超声辐照,处理4 d后每组取5只大鼠行Western Blot检测大脑TLR4蛋白表达,取3只大鼠行免疫组织化学染色。结果质粒联合超声辐照组和质粒与Sono Vue联合超声辐照组抑制效果明显(P+S+UTMD:0.223±0.009,P+UTMD:0.277±0.013,t1,3=4.900,P<0.01;t1,4=8.779,P<0.01),裸质粒组与空白对照组差异无显著性(NS:0.351±0.030,P:0.339±0.034,t1,2=0.590,P>0.05),而质粒与Sono Vue联合超声辐照组与质粒联合超声辐照组相比抑制效果更好(P+S+UTMD:0.223±0.009,P+UTMD:0.277±0.013,t3,4=7.006,P<0.05)。免疫组织化学的平均光度值分析显示,质粒联合超声辐照组和质粒与Sono Vue联合超声辐照组抑制效果明显(P+S+UTMD:0.026±0.0013,P+UTMD:0.058±0.0014,t1,3=8.334,P<0.01;t1,4=21.027,P<0.01),裸质粒组与空白对照组差异无显著性(NS:0.079±0.0048,P:0.077±0.0012,t1,2=0.797,P>0.05),而质粒与Sono Vue联合超声辐照组与质粒联合超声辐照组相比抑制效果更好(P+S+UTMD:0.026±0.0013,P+UTMD:0.058±0.0014,t3,4=33.254,P<0.05)。结论超声微泡造影剂联合sh RNA质粒可高效稳定沉默TLR4基因。