肺癌组织中切除修复交叉互补基因1和核糖核苷酸还原酶亚单位1表达水平与非小细胞肺癌患者的疗效和生存期的关系

目的探讨切除修复交叉互补基因1(ERCC1)和核糖核苷酸还原酶亚单位1(RRM1)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达及其与临床特征和预后的关系。方法回顾性收集河南科技大学第一附属医院肿瘤外科确诊为NSCLC的患者131例,患者均接受过吉西他滨联合顺铂(GP)方案化学治疗。应用聚合酶链式反应(PCR)检测患者肿瘤组织中ERCC1和RRM1表达水平,分析其表达水平与患者临床病理特征、化学治疗有效率和生存期的相关性。结果NSCLC患者肿瘤组织中ERCC1和RRM1表达水平与患者的性别、年龄、病理类型、吸烟史、TNM分期等因素无关(P>0.05)。ERCC1低表达的患者化学治疗有效率显著高于ERCC1高表达的患者(χ2=6.382,P<0.05);RRM1低表达的患者化学治疗有效率显著高于RRM1高表达的患者(χ2=4.592,P<0.05)。ERCC1和RRM1低表达患者中位生存期分别为27.8、26.8个月,显著高于ERCC1和RRM1高表达患者中位生存期22.8、24.1个月(P<0.05)。结论 ERCC1和RRM1表达水平可预测NSCLC患者的治疗效果及生存期,为NSCLC患者的治疗及预后提供新的依据。

非小细胞肺癌中核糖核苷酸还原酶亚单位M1表达及其与吉西他滨化学治疗敏感性相关研究

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)石蜡包埋组织中核糖核苷酸还原酶(RR)亚单位M1(RRM1)表达与吉西他滨化学治疗敏感性的关系,并观察这项指标与患者生存的关系。方法收集术后化学治疗应用吉西他滨的NSCLC患者的病理标本制成组织芯片,采用免疫组织化学法检测RRM1的表达,并分析患者的化学治疗疗效和生存资料与上述指标表达的关系。结果在50例病理组织中RRM1过表达22例(44%)。RRM1过表达组的1 a生存率小于非过表达组的1 a生存率(P<0.05)。不同年龄、性别、病理类型及肿瘤部位的2组患者RRM1表达差别无统计学意义(P>0.05),不同分化程度、不同肿瘤大小、淋巴结转移情况及分期的2组患者RRM1表达差别有统计学意义(P<0.05)。RRM1非过表达组织化学治疗有效率82.1%(23/28)高于RRM1过表达组有效率22.7%(5/22),差别有统计学意义(P<0.05)。RRM1过表达组的1 a生存率为53.6%(15/28),非过表达组1 a生存率为77.3%(17/22),RRM1过表达组的1 a生存率低于RRM1非过表达组(P<0.05)。结论 NSCLC患者中RRM1低表达的患者生存率高于高表达的患者,RRM1可以作为NSCLC采用吉西他滨方案化学治疗敏感性和生存预测的分子指标。

切除修复交叉互补组1、核糖核苷酸还原酶亚单位表达对非小细胞肺癌含铂新辅助化疗方案的影响

目的通过对Ⅲ期非小细胞肺癌（NSCLC）新辅助化疗疗效分析，探讨切除修复交叉互补组1（ERCC1）、核糖核苷酸还原酶亚单位（RRM1）表达在含铂方案化疗中所起的指导作用。方法80例病理证实为NSCLC患者接受2周期新辅助化疗，化疗前均用分支DNA一液相芯片法检测ERCC1、RRM1表达，并均采用吉西他滨＋顺铂（GP）方案；疗效根据WHO标准确定，CT增强扫描显示达完全缓解或部分缓解者为有效或稳定，而扫描显示进展者为无效。结果80例NSCLC患者：ERCC1、RRM1均低表达（A组）25例中20例有效，有效率为80．O％，ERCC1低表达、RRM1高表达（B组）23例中14例有效，有效率为60．9％，ERCC1高表达、RRM1低表达（C组）20例中10例有效，有效率50．0％，ERCC1、RRM1均高表达（D组）12例中4例有效，有效率33．3％，4组比较差异有统计学意义（x2=7．81，P〈0．05），且A组疗效明显高于其他3组，B、C组亦高于D组，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论ERCC1、RRM1检测对NSCLC新辅助化疗方案选择有指导意义，值得被广泛推广应用于NSCLC外科个体化治疗。

晚期非小细胞肺癌组织中切除修复交叉互补基因1和核糖核苷酸还原酶亚单位1表达与吉西他滨联合顺铂治疗的相关性研究

目的探讨核苷酸切除修复交叉互补基因1(ERCC1)和核糖核苷酸还原酶(RR)亚单位M1(RRM1)在Ⅳ期非小细胞肺癌(NSCLC))组织中的表达水平,分析其与吉西他滨联合顺铂(GP)方案化疗疗效的关系。方法采用液相芯片技术检测148例经过4个周期以上GP方案化疗的Ⅳ期NSCLC组织中RRM1和ERCC1的表达情况。结果Ⅳ期NSCLC组织中ERCC1的阳性率为47.3%,RRM1的阳性率为35.1%,与患者的性别、年龄及是否吸烟无关。ERCC1和RRM1低表达者接受GP方案化疗的效果均优于高表达者,两者差异有统计学意义(P<0.05)。此外,RRM1低表达的患者生存时间明显长于高表达者(P=0.004)。结论晚期NSCLC患者组织中ERCC1和RRM1mRNA的表达与GP方案化疗疗效及预后密切相关。

切除修复交叉互补基因1、核糖核苷酸还原酶M1亚基和3型β微管蛋白分子检测指导晚期非小细胞肺癌个体化治疗的临床效果

目的探讨切除修复交叉互补基因1（ERCC1）、核糖核苷酸还原酶M1亚基（RRMl）和3型β微管蛋白（TUBB3）分子检测在指导晚期非小细胞肺癌（NSCLC）个体化治疗的临床效果。方法将2013年1～11月秦皇岛市第二医院胸外科住院治疗的48例经病理确诊的晚期NSCLC患者分为实验组（20例）和对照组（28例）。实验组采用SYBR荧光实时定量PCR检测方法检测患者胸水或静脉血中ERCC1、RRM1和TUBB3的表达量，根据表达情况选择化疗方案：对照组则均采用顺铂与吉西他滨联合治疗。经过2个周期治疗后比较两组的疗效、不良反应及疾病进展、生存获益情况。结果实验组的总有效率和总控制率均显著高于对照组（P〈0．05）；实验组和对照组治疗后的PS评分均显著高于治疗前（P〈0．05），但两组治疗后的PS评分、PS评分改善率差异均无统计学意义（P〉0．05）；两组间不良反应发生率差异无统计学意义（P〉0．05），且两组间不同系统的不良反应严重程度差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论实时定量PCR技术检测病理组织的ERCC1、RRM1和TUBB3表达水平用于指导晚期NSCLC患者个体化治疗，可提高治疗有效率和疾病控制率，但在改善生活质量和减少不良反应发生效果不显著．建议进一步探索标志物指导下更为有效的化疗方案。

核糖核苷酸还原酶M2在小脑髓母细胞瘤中的功能及机制

目的:探讨核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)在小脑髓母细胞瘤中的功能和机制。方法:分析GEO数据库中髓母细胞瘤患者的生存和RRM2表达水平的关系。通过免疫组化并结合数据库分析RRM2在小脑髓母细胞瘤和正常小脑组织中的表达。分别通过CCK-8细胞增殖实验、Transwell实验、流式细胞术检测RRM2对小脑髓母细胞瘤细胞系Daoy和D283的增殖、迁移、细胞周期和凋亡的调控作用。通过转录组测序(RNA-seq)探索下游分子机制。采用配对t检验和独立样本t检验进行统计学分析。结果:通过GEO数据库分析发现高表达RRM2的髓母细胞瘤患者相较于低表达组的总生存期更短、预后更差(P<0.05)。免疫组化及数据库分析结果显示RRM2在小脑髓母细胞瘤中的表达明显高于正常小脑组织(P<0.05)。与对照组比较,CCK-8细胞增殖实验、Transwell实验提示过表达RRM2促进肿瘤细胞增殖和迁移(P<0.05),敲低RRM2减少肿瘤细胞增殖和迁移(P<0.05);过表达RRM2能够明显增加S期的细胞比例(P<0.05),且明显减少细胞凋亡(P<0.05)。RNA-seq结果显示敲低RRM2后有3 454个基因表达上调,3 332个基因表达下调。KEGG分析显示RRM2敲低后多个信号通路受到影响,包括FOXO、细胞周期、核糖体生物合成等。结论:RRM2在小脑髓母细胞瘤中高表达且与预后不良有关,其具有促进小脑髓母细胞瘤细胞增殖、迁移,减少细胞凋亡的能力。

核糖核苷酸还原酶小亚基M2在肿瘤中表达及意义的研究进展

核糖核苷酸还原酶（RibonucleotideReductase．RR）在DNA合成、修复及细胞增殖中起关键作用，近来被认为是癌症治疗的重要靶点。RR包含3个亚单位，分别是大亚基RRM1、小亚基RRM2和小亚基p53R2。RRM2亚基不仅和DNA的合成密切相关，对恶性肿瘤生物学行为、转移潜能和肿瘤耐药的产生都具有影响．在绒癌、胰腺癌、膀胱癌、胃癌、直肠癌、乳腺癌等多种人体癌组织中发现RRM2的表达水平有异常升高的情况，抑制RRM2的高表达，可以降低RR酶的活性，抑制癌细胞的生长，增加肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤转移和逆转耐药。

核苷酸还原酶亚单位M1和内切修复交叉补体1在非小细胞肺癌中的研究进展

核苷酸还原酶亚单位M1(RRMl)属抑癌基因,RRM1可以激发G2期检测点功能,使受损的DNA得以修复或者发生凋亡,并具有抑制细胞侵袭和转移的作用,另外RRM1还可以调节核苷酸还原酶的活性,是抗代谢药吉西他滨作用的靶分子,RRM1高表达的细胞对吉西他滨耐药。内切修复交叉补体1(ERCC1)是细胞内负责修复受损DNA的核苷酸内切修复通路中的限速酶,可以识别和去除铂-DNA附加物而导致细胞对铂类耐药。本文综述RRM1和ERCC1在非小细胞肺癌患者预后和化疗个体化方面的研究进展。

微小RNA-98-5p靶向调控核糖核苷酸还原酶小亚基M2调控宫颈癌细胞顺铂的耐药性

目的探讨微小RNA(miR)-98-5p对顺铂(DDP)耐药宫颈癌细胞顺铂敏感性的调控及其机制。方法用脂质体法将DDP+miR-NC组(转染miR-NC)、DDP+miR-98-5p组(转染miR-98-5p mimics)、DDP+si-NC组(转染si-NC)、DDP+si-核糖核苷酸还原酶小亚基M2(RRM2)组(转染si-RRM2)、DDP+miR-98-5p+pc DNA组(共转染miR-98-5p mimics和pc DNA)、DDP+miR-98-5p+pc DNA-RRM2组(共转染miR-98-5p mimics和pc DNA-RRM2)转染至He La/DDP组细胞;Real-time PCR、Western blotting、CCK-8、迁移实验(Transwell)和双荧光素酶报告基因检测细胞中miR-98-5p、RRM2、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、P21、基因金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的表达、细胞的抑制率、半数抑制浓度(IC50)、迁移和侵袭及荧光活性。结果与He La组细胞相比,He La/DDP组细胞中miR-98-5p表达显著降低,RRM2表达显著升高,IC50值显著升高(P<0.05);过表达miR-98-5p或抑制RRM2可明显抑制He La/DDP细胞的增殖、迁移和侵袭,下调cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白,上调P21蛋白;miR-98-5p明显抑制野生型RRM2细胞的荧光活性,并且过表达RRM2反转了miR-98-5p对He La/DDP细胞增殖、迁移侵袭的抑制作用。结论MiR-98-5p可抑制顺铂耐药宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭,增强对顺铂的敏感性,其机制与靶向RRM2相关,将可为顺铂耐药宫颈癌细胞的治疗提供方向。

核糖核苷酸还原酶小亚基M2在宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨核糖核苷酸还原酶小亚基M2（RRM2）在宫颈鳞癌中的表达。方法采用免疫组化法检测20例宫颈上皮内瘤变2-3级组织、68例宫颈鳞癌组织和18例正常宫颈组织中RRM2蛋白表达，并分析与临床病理参数及肿瘤标志物之间的关系。结果RRM2在宫颈鳞癌组织中蛋白阳性表达率为82．35％。明显高于宫颈上皮内瘤变组织（55．00％）和正常宫颈组织（11．11％）。3组问差异有统计学意义（P〈0．05）。不同组织分化程度、血清鳞状细胞癌抗原（SCC）阳性与否的宫颈鳞癌患者RRM2蛋白阳性表达率差异均有统计学意义（均P〈0．01），即高分化组低于中、低分化组，SCC阳性组高于SCC阴性组。结论RRM2在宫颈鳞癌组织中高表达，且组织分化低、血清SCC阳性者的RRM2蛋白阳性表达率偏高。

核糖核苷酸还原酶小亚基M2在多发性骨髓瘤患者中的表达及抑制肿瘤细胞增殖的相关机制

目的:探讨核糖核苷酸还原酶小亚基M2(ribonucleotide reductase M2,RRM2)在多发性骨髓瘤细胞中的表达及抑制肿瘤细胞增殖的相关机制。方法:选取2016年7月至2018年9月在本院初诊的多发性骨髓瘤患者36例为MM组,选取同期纯缺铁性贫血的患者16例作为对照组。应用RT-qPCR、Western blot检测所收集病例中骨髓单个核细胞内RRM2的表达。用siRNAs转染多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226建立RRM2表达缺失的细胞模型,并用CCK8检测细胞的增殖,流式细胞术分析敲低RRM2表达对细胞周期的影响,并应用Western blot分析周期相关调控蛋白的变化。结果:RT-qPCR及Western blot结果显示,多发性骨髓瘤患者样品中的RRM2相对表达水平比对照组明显升高(P<0.05)。进一步分析证明,多发性骨髓瘤患者单个核细胞中RRM2的表达量与临床肿瘤分期、骨质破坏及髓外浸润等关系密切(P<0.05)。在多发性骨髓瘤细胞株内,利用siRNA干扰下调RPMI8226细胞内RRM2蛋白表达,可以明显抑制RPMI8226细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞周期的结果发现,RRM2干扰组细胞周期阻滞于S期(P<0.05);进一步的研究证明,RRM2干扰可以影响细胞周期调控相关蛋白的表达。结论:RRM2在多发性骨髓瘤单个核细胞内呈高表达,且与患者肿瘤恶性程度密切相关。干扰细胞内RRM2表达可通过阻滞细胞周期抑制细胞增殖。RRM2可能成为评估多发性骨髓瘤进展的新指标及药物开发的新靶点。

核糖核苷酸还原酶调节亚基M2对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨核糖核苷酸还原酶调节亚基M2(ribonucleotide reductase regulatory subunit M2,RRM2)在膀胱癌细胞中的生物学功能及其机制。方法采用TCGA及Oncomine数据库分析膀胱癌患者RRM2的表达,生存分析采用K-M Plot在线分析网站。收集2019年6月至2020年12月在本院泌尿外科手术患者的膀胱癌组织和癌旁组织,通过qRT-PCR检测其RRM2的表达情况。采用膀胱癌细胞系(5637、T24、Ej、BIU-87)进行细胞实验;选取高表达RRM2的细胞进行沉默实验,采用CCK-8、Transwell检测RRM2对膀胱癌细胞增殖、侵袭的影响,Western blot检测wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。结果 RRM2在膀胱癌患者中表达升高(差异表达倍数Log2FC=4.546,P<0.01),高表达的RRM2与患者不良预后及较差的总体生存率相关。体外细胞实验显示,与5637和T24细胞相比,siRNA转染沉默RRM2后72、96 h显著抑制膀胱癌细胞的增殖(P<0.01);并显著减弱膀胱癌细胞的侵袭能力(P<0.01)。沉默RRM2后,总β-catenin表达水平显著降低,Wnt/β-catenin信号通路的下游蛋白,包括在肿瘤进展中起重要作用的细胞周期蛋白D1和c-Myc也显著降低。结论 RRM2可促进膀胱癌细胞的增殖和侵袭,可能靶向wnt/β-catenin通路发挥促癌作用。

核糖核苷酸还原酶研究

核糖核苷酸还原酶广泛存在于各种生物中,是生物体内唯一的催化4种核糖核苷酸还原、生成相应的脱氧核糖核苷酸的酶。该酶是DNA合成和修复的关键酶和限速酶,对细胞的增殖和分化起着调控作用。不同生物中的RR根据其结合的金属辅助因子不同而分类。虽然不同类型RR之间的氨基酸序列相似性很低,但它们有十分相似的三级结构的活性中心和相同的催化功能。RR分子中包含2个变构位点,即酶活性中心和底物特异结合位点。活性中心通过生物有机自由基的作用催化核糖核苷酸还原;底物特异结合位点通过变构作用调控4种dNTPs在细胞内的平衡。因此,该酶不仅是研究DNA合成与修复、细胞增殖与分化及癌症的治疗与抗癌药物开发的重要靶点,同时也是研究酶的结构与功能以及酶的催化机理等的重要工具。本文总结了该酶的种类与分布、结构特征、催化机理及作为抗癌药物开发靶点等方面的研究进展。

核糖核苷酸还原酶M2在肿瘤中的表达及意义

核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)是DNA合成和修复的限速酶,在妊娠滋养细胞疾病、乳腺癌、胰腺癌等肿瘤中高表达。研究表明,其高表达增加肿瘤治疗中的化疗抵抗,产生耐药问题,由此激发了核苷酸还原酶抑制剂的研制和开发,其中最具代表性的是3-AP和吉西他滨。目前在其结构和功能的基础上,研究核糖核苷酸还原酶M2在其相关肿瘤中的意义和治疗已逐渐成为热点与重点,随着分子生物学技术的发展,有望通过阻断核糖核苷酸还原酶M2的表达抑制肿瘤发展,提高肿瘤的治疗效果。

晚期非鳞非小细胞肺癌胸苷酸合成酶和核糖核苷酸还原酶M1的表达及其与化疗疗效的关系

目的探讨胸苷酸合成酶(TS)和核糖核苷酸还原酶M1(RRM1)的表达与培美曲塞或吉西他滨联合卡铂治疗晚期非鳞非小细胞肺癌疗效的关系。方法晚期非鳞非小细胞肺癌患者70例,分为培美曲塞+卡铂化疗组35例及吉西他滨+卡铂治疗组35例,检测培美曲塞+卡铂化疗组患者肺癌组织TS的水平和吉西他滨+卡铂化疗组患者肺癌组织RRM1的水平,分析客观缓解率(ORR)、无进展生存时间(PFS)与TS、RRM1水平的关系。结果培美曲塞+卡铂化疗组中TS高表达患者ORR为15.8%(3/19),低于TS低表达患者的75.0%(12/16)(P<0.05);TS高表达患者PFS为(2.1±0.6)个月,短于TS低表达患者的(6.6±2.1)个月(P<0.05)。吉西他滨+卡铂化疗组RRM1高表达患者ORR为17.6%(3/17),低于RRM1低表达患者ORR的72.2%(13/18)(P<0.05);RRM1高表达患者PFS为(2.2±0.6)个月,短于RRM1低表达患者的PFS(7.1±3.4)个月(P<0.05)。结论晚期非鳞非小细胞肺癌患者采用培美曲塞联合卡铂化疗时,TS低表达者的临床疗效较好,而采用吉西他滨联合卡铂化疗时,RRM1低表达者的临床疗效较好。

切除修复交叉互补基因1、核糖核苷酸还原酶1与非小细胞肺癌预后及耐药的关系

肺癌是各种恶性肿瘤中引起死亡的主要原因之一。非小细胞肺癌占所有肺癌的80％。尽管治疗措施不断发展．但预后仍然很不理想。随着肿瘤分子生物学的发展．利用分子标志物判断肿瘤的生物学行为．预测非小细胞肺癌的复发．并对患者制定个体化的治疗方案成为研究热点。

高浓度氧对早产大鼠肺组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位1表达的影响

目的探讨高浓度氧暴露对早产大鼠肺组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位1(ND1)表达的影响。方法早产SD新生大鼠生后1 d随机分为高氧组和空气组,高氧组持续暴露于≥85%氧气中,空气组置于同一室内常压空气中。分别取两组大鼠高氧或空气暴露后1、4、7、10和14 d肺组织标本,采用免疫组织化学和Western blot方法检测ND1蛋白的表达,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测ND1 mRNA的表达。结果①高氧组和空气组各时间点均有ND1蛋白表达;与空气组相比,高氧组在1、4和7 d ND1蛋白表达增高,随后其表达下降。②与同时间点空气组相比,高氧暴露后1、4和7 d ND1 mRNA表达显著增高(P<0.05),其后ND1 mRNA表达逐渐下降,10 d和14d时低于空气组,但两者相比差异无显著性意义(P>0.05)。③ND1蛋白的表达变化趋势与ND1 mRNA的表达变化趋势一致。结论高氧导致早产大鼠肺组织ND1表达改变,提示ND1可能参与了高氧肺损伤的病理生理过程。

RNA干扰核糖核苷酸还原酶M2对耐药卵巢癌细胞凋亡及侵袭性的影响

目的探讨RNA干扰核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)对耐药卵巢癌细胞凋亡及侵袭性的影响。方法将RRM2基因的特异性小干扰(siRNA)转染SKOV3/DDP设为干扰组,SKOV3/DDP细胞、SKOV3/DDP-RRM2非特异性阴性细胞设为空白组、阴性组。检测细胞增殖抑制率,计算RI、耐药转染率,荧光PCR技术检测RRM2基因mRNA表达,并分析siRNA转染对SKOV3/DDP耐药指数、RRM2蛋白的影响,采用Transwell观察SKOV3/DDP细胞侵袭能力。结果空白组、阴性组及干扰组转染率均>90%。DDP对SKOV3/DDP细胞属低度耐药,吉西他滨对SKOV3/DDP细胞仍较为敏感。DDP、吉西他滨对干扰组、阴性组、空白组的DDP对细胞的半数抑制浓度(IC50)值比较,差异有统计学意义(P<0.05),DDP、吉西他滨对干扰组细胞的IC50值显著低于阴性组、空白组(P<0.05)。SKOV3/DDP细胞、SKOV3细胞RRM2蛋白的相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05),且转染Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组相对表达量均显著低于阴性组、空白组,其中以转染Ⅰ组细胞的RRM2蛋白相对表达量下降最显著(P<0.05)。干扰组细胞凋亡率显著高于空白组、阴性组,穿膜细胞数显著低于空白组、阴性组(P<0.05)。结论 siRNA可有效抑制RRM2基因在卵巢癌中的增殖与侵袭性,增加耐药细胞的药物敏感性,尤其是促进DDP诱导的耐药细胞凋亡。

对虾白斑病毒核糖核苷酸还原酶基因原核表达载体的构建及蛋白表达、纯化

采用PCR方法扩增对虾白斑病毒核糖核苷酸还原酶基因,插入到pGEX-4T-2表达载体上构建出带有目的基因的重组质粒pGEX-4T-2RR,然后将重组质粒转化大肠杆菌.转化菌经IPTG诱导后大量表达重组蛋白,通过降低诱导温度获得可溶性表达的重组蛋白,采用Glutathione Sepharose 4B亲和层析对重组蛋白进行纯化,获得了高纯度的目的蛋白.