核糖核苷酸还原酶调节亚基M2对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨核糖核苷酸还原酶调节亚基M2(ribonucleotide reductase regulatory subunit M2,RRM2)在膀胱癌细胞中的生物学功能及其机制。方法采用TCGA及Oncomine数据库分析膀胱癌患者RRM2的表达,生存分析采用K-M Plot在线分析网站。收集2019年6月至2020年12月在本院泌尿外科手术患者的膀胱癌组织和癌旁组织,通过qRT-PCR检测其RRM2的表达情况。采用膀胱癌细胞系(5637、T24、Ej、BIU-87)进行细胞实验;选取高表达RRM2的细胞进行沉默实验,采用CCK-8、Transwell检测RRM2对膀胱癌细胞增殖、侵袭的影响,Western blot检测wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。结果 RRM2在膀胱癌患者中表达升高(差异表达倍数Log2FC=4.546,P<0.01),高表达的RRM2与患者不良预后及较差的总体生存率相关。体外细胞实验显示,与5637和T24细胞相比,siRNA转染沉默RRM2后72、96 h显著抑制膀胱癌细胞的增殖(P<0.01);并显著减弱膀胱癌细胞的侵袭能力(P<0.01)。沉默RRM2后,总β-catenin表达水平显著降低,Wnt/β-catenin信号通路的下游蛋白,包括在肿瘤进展中起重要作用的细胞周期蛋白D1和c-Myc也显著降低。结论 RRM2可促进膀胱癌细胞的增殖和侵袭,可能靶向wnt/β-catenin通路发挥促癌作用。

核糖核苷酸还原酶M2在小脑髓母细胞瘤中的功能及机制

目的:探讨核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)在小脑髓母细胞瘤中的功能和机制。方法:分析GEO数据库中髓母细胞瘤患者的生存和RRM2表达水平的关系。通过免疫组化并结合数据库分析RRM2在小脑髓母细胞瘤和正常小脑组织中的表达。分别通过CCK-8细胞增殖实验、Transwell实验、流式细胞术检测RRM2对小脑髓母细胞瘤细胞系Daoy和D283的增殖、迁移、细胞周期和凋亡的调控作用。通过转录组测序(RNA-seq)探索下游分子机制。采用配对t检验和独立样本t检验进行统计学分析。结果:通过GEO数据库分析发现高表达RRM2的髓母细胞瘤患者相较于低表达组的总生存期更短、预后更差(P<0.05)。免疫组化及数据库分析结果显示RRM2在小脑髓母细胞瘤中的表达明显高于正常小脑组织(P<0.05)。与对照组比较,CCK-8细胞增殖实验、Transwell实验提示过表达RRM2促进肿瘤细胞增殖和迁移(P<0.05),敲低RRM2减少肿瘤细胞增殖和迁移(P<0.05);过表达RRM2能够明显增加S期的细胞比例(P<0.05),且明显减少细胞凋亡(P<0.05)。RNA-seq结果显示敲低RRM2后有3 454个基因表达上调,3 332个基因表达下调。KEGG分析显示RRM2敲低后多个信号通路受到影响,包括FOXO、细胞周期、核糖体生物合成等。结论:RRM2在小脑髓母细胞瘤中高表达且与预后不良有关,其具有促进小脑髓母细胞瘤细胞增殖、迁移,减少细胞凋亡的能力。

切除修复交叉互补基因1、核糖核苷酸还原酶M1亚基和3型β微管蛋白分子检测指导晚期非小细胞肺癌个体化治疗的临床效果

目的探讨切除修复交叉互补基因1（ERCC1）、核糖核苷酸还原酶M1亚基（RRMl）和3型β微管蛋白（TUBB3）分子检测在指导晚期非小细胞肺癌（NSCLC）个体化治疗的临床效果。方法将2013年1～11月秦皇岛市第二医院胸外科住院治疗的48例经病理确诊的晚期NSCLC患者分为实验组（20例）和对照组（28例）。实验组采用SYBR荧光实时定量PCR检测方法检测患者胸水或静脉血中ERCC1、RRM1和TUBB3的表达量，根据表达情况选择化疗方案：对照组则均采用顺铂与吉西他滨联合治疗。经过2个周期治疗后比较两组的疗效、不良反应及疾病进展、生存获益情况。结果实验组的总有效率和总控制率均显著高于对照组（P〈0．05）；实验组和对照组治疗后的PS评分均显著高于治疗前（P〈0．05），但两组治疗后的PS评分、PS评分改善率差异均无统计学意义（P〉0．05）；两组间不良反应发生率差异无统计学意义（P〉0．05），且两组间不同系统的不良反应严重程度差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论实时定量PCR技术检测病理组织的ERCC1、RRM1和TUBB3表达水平用于指导晚期NSCLC患者个体化治疗，可提高治疗有效率和疾病控制率，但在改善生活质量和减少不良反应发生效果不显著．建议进一步探索标志物指导下更为有效的化疗方案。

微小RNA-98-5p靶向调控核糖核苷酸还原酶小亚基M2调控宫颈癌细胞顺铂的耐药性

目的探讨微小RNA(miR)-98-5p对顺铂(DDP)耐药宫颈癌细胞顺铂敏感性的调控及其机制。方法用脂质体法将DDP+miR-NC组(转染miR-NC)、DDP+miR-98-5p组(转染miR-98-5p mimics)、DDP+si-NC组(转染si-NC)、DDP+si-核糖核苷酸还原酶小亚基M2(RRM2)组(转染si-RRM2)、DDP+miR-98-5p+pc DNA组(共转染miR-98-5p mimics和pc DNA)、DDP+miR-98-5p+pc DNA-RRM2组(共转染miR-98-5p mimics和pc DNA-RRM2)转染至He La/DDP组细胞;Real-time PCR、Western blotting、CCK-8、迁移实验(Transwell)和双荧光素酶报告基因检测细胞中miR-98-5p、RRM2、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、P21、基因金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的表达、细胞的抑制率、半数抑制浓度(IC50)、迁移和侵袭及荧光活性。结果与He La组细胞相比,He La/DDP组细胞中miR-98-5p表达显著降低,RRM2表达显著升高,IC50值显著升高(P<0.05);过表达miR-98-5p或抑制RRM2可明显抑制He La/DDP细胞的增殖、迁移和侵袭,下调cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白,上调P21蛋白;miR-98-5p明显抑制野生型RRM2细胞的荧光活性,并且过表达RRM2反转了miR-98-5p对He La/DDP细胞增殖、迁移侵袭的抑制作用。结论MiR-98-5p可抑制顺铂耐药宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭,增强对顺铂的敏感性,其机制与靶向RRM2相关,将可为顺铂耐药宫颈癌细胞的治疗提供方向。

核糖核苷酸还原酶小亚基M2在宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨核糖核苷酸还原酶小亚基M2（RRM2）在宫颈鳞癌中的表达。方法采用免疫组化法检测20例宫颈上皮内瘤变2-3级组织、68例宫颈鳞癌组织和18例正常宫颈组织中RRM2蛋白表达，并分析与临床病理参数及肿瘤标志物之间的关系。结果RRM2在宫颈鳞癌组织中蛋白阳性表达率为82．35％。明显高于宫颈上皮内瘤变组织（55．00％）和正常宫颈组织（11．11％）。3组问差异有统计学意义（P〈0．05）。不同组织分化程度、血清鳞状细胞癌抗原（SCC）阳性与否的宫颈鳞癌患者RRM2蛋白阳性表达率差异均有统计学意义（均P〈0．01），即高分化组低于中、低分化组，SCC阳性组高于SCC阴性组。结论RRM2在宫颈鳞癌组织中高表达，且组织分化低、血清SCC阳性者的RRM2蛋白阳性表达率偏高。

核糖核苷酸还原酶M2在肿瘤中的表达及意义

核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)是DNA合成和修复的限速酶,在妊娠滋养细胞疾病、乳腺癌、胰腺癌等肿瘤中高表达。研究表明,其高表达增加肿瘤治疗中的化疗抵抗,产生耐药问题,由此激发了核苷酸还原酶抑制剂的研制和开发,其中最具代表性的是3-AP和吉西他滨。目前在其结构和功能的基础上,研究核糖核苷酸还原酶M2在其相关肿瘤中的意义和治疗已逐渐成为热点与重点,随着分子生物学技术的发展,有望通过阻断核糖核苷酸还原酶M2的表达抑制肿瘤发展,提高肿瘤的治疗效果。

RNA干扰核糖核苷酸还原酶M2对耐药卵巢癌细胞凋亡及侵袭性的影响

目的探讨RNA干扰核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)对耐药卵巢癌细胞凋亡及侵袭性的影响。方法将RRM2基因的特异性小干扰(siRNA)转染SKOV3/DDP设为干扰组,SKOV3/DDP细胞、SKOV3/DDP-RRM2非特异性阴性细胞设为空白组、阴性组。检测细胞增殖抑制率,计算RI、耐药转染率,荧光PCR技术检测RRM2基因mRNA表达,并分析siRNA转染对SKOV3/DDP耐药指数、RRM2蛋白的影响,采用Transwell观察SKOV3/DDP细胞侵袭能力。结果空白组、阴性组及干扰组转染率均>90%。DDP对SKOV3/DDP细胞属低度耐药,吉西他滨对SKOV3/DDP细胞仍较为敏感。DDP、吉西他滨对干扰组、阴性组、空白组的DDP对细胞的半数抑制浓度(IC50)值比较,差异有统计学意义(P<0.05),DDP、吉西他滨对干扰组细胞的IC50值显著低于阴性组、空白组(P<0.05)。SKOV3/DDP细胞、SKOV3细胞RRM2蛋白的相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05),且转染Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组相对表达量均显著低于阴性组、空白组,其中以转染Ⅰ组细胞的RRM2蛋白相对表达量下降最显著(P<0.05)。干扰组细胞凋亡率显著高于空白组、阴性组,穿膜细胞数显著低于空白组、阴性组(P<0.05)。结论 siRNA可有效抑制RRM2基因在卵巢癌中的增殖与侵袭性,增加耐药细胞的药物敏感性,尤其是促进DDP诱导的耐药细胞凋亡。

核糖核苷酸还原酶M2与恶性肿瘤的研究进展

核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)是脱氧核糖核酸(DNA)合成及修复过程中不可缺少的一种关键酶,是核糖核苷酸还原酶(RR)活性的主要调控元件。研究发现RRM2在多种恶性肿瘤中均过表达,本文就RRM2在恶性肿瘤中的表达及RRM2过表达与恶性肿瘤生存预后、增殖、转移、化疗耐药性之间关系的研究进展进行综述,旨在为临床恶性肿瘤的诊断、治疗、预后提供新的理论依据。

核糖核苷酸还原酶M2下调抑制人宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭

核糖核苷酸还原酶M2(ribonucleotide reductase, RRM2)在多种癌症组织中高表达,这与肿瘤细胞的侵袭、转移及肿瘤血管形成等生物学行为密切相关。目前,关于以RRM2为靶点治疗宫颈癌的研究并不多,其对宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响及机制也尚未明确。本研究采用RNA干扰技术下调RRM2,以人宫颈癌细胞株CaSki和HeLa细胞为研究对象,实验分为Ctrl-siRNA组和RRM2-siRNA组。通过RT-PCR和Western印迹检测RRM2-siRNA的干扰作用,采用CCK-8和EDU实验评价细胞的增殖和DNA合成的情况,通过划痕实验和Transwell小室侵袭实验观察细胞的迁移和侵袭能力,并用Western印迹检测NF-κB和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)蛋白质表达水平。结果显示,在CaSki和HeLa细胞中,RRM2-siRNA组RRM2的mRNA和蛋白质表达较Ctrl-siRNA组均下降(P<0.05),表明RRM2-siRNA能有效抑制RRM2的表达。与Ctrl-siRNA组相比,RRM2-siRNA组在转染24、48、72 h后,细胞增殖率下降(P<0.05)。且DNA合成率与细胞划痕愈合程度,宫颈癌细胞侵袭数量也显著下降(P<0.05)。结果表明,RRM2下调后,抑制DNA合成与细胞增殖、迁移和侵袭过程。此外,RRM2-siRNA组NF-κB和MMP-9蛋白质水平较Ctrl-siRNA组降低。本研究提示,下调RRM2抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭,该作用可能通过NF-κB和MMP-9介导,这为宫颈癌中以RRM2作为靶点的治疗提供实验依据。

通过核糖核苷酸还原酶M2逆转肝癌细胞对5-氟尿嘧啶耐药

目的:探讨核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)在肝癌细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药中的作用,并开发潜在的策略来提高肝癌细胞对5-FU的敏感性。方法:利用Western blot检测5-FU耐药肝癌细胞(BEL/5-FU)与非耐药肝癌细胞(BEL7402)中RRM2蛋白的表达差异;通过用RNA干扰技术下调BEL/5-FU细胞中RRM2的表达或RRM2抑制剂3-AP(Triapine)抑制RRM2活性;CCK-8和集落形成实验用于检测细胞的增殖能力;使用高内涵细胞成像系统仪检测与分析细胞凋亡。结果:BEL/5-FU细胞中RRM2的表达量是BEL7402细胞的2.5倍。RNA干扰技术能够下调BEL/5-FU细胞中RRM2的表达,并使5-FU对BEL/5-FU细胞的半数抑制浓度(IC_(50))下降约50%,同时细胞集落形成能力也显著减弱。3-AP与5-FU联合处理BEL/5-FU细胞,使5-FU对BEL/5-FU细胞的IC_(50)下降约40%,细胞集落形成能力减弱,并促进5-FU导致的细胞凋亡。结论:RRM2与肝癌细胞对5-FU的耐药相关,本研究通过抑制RRM2的活性来逆转肝癌细胞对5-FU的耐药,为提高肝癌的5-FU化疗疗效提供新靶点和新思路。

miR-125a-5p靶向RRM2调控A549/DDP细胞的顺铂耐药性

目的:探究微小RNA-125a-5p(microRNA-125a-5p, miR-125a-5p)对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂敏感性的影响及其机制。方法:使用ENCORI在线数据库分析miR-125a-5p在非小细胞肺癌癌组织与癌旁组织中的表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)的方法检测人肺上皮正常细胞(BEAS-2B)与非小细胞肺癌细胞系(A549、A549/DDP、SK-MES-1)中miR-125a-5p的表达水平;使用RT-qPCR与蛋白免疫印迹法(Western blot)检测A549、A549/DDP细胞中核糖核苷酸还原酶M2(ribonucleotide reductase regulatory subunit M2,RRM2)的表达情况;生物信息学方法分析miR-125a-5p与RRM2的靶向调控序列;双荧光素酶基因报告实验与Western blot测定miR-125a-5p与RRM2在A549/DDP细胞中的调控关系;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞的存活率与半数抑制浓度(half inhibitory concentration, IC_(50));流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:在非小细胞肺癌组织与细胞系中miR-125a-5p的表达水平显著降低(P<0.05);与A549细胞相比,A549/DDP细胞中RRM2的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-125a-5p部分恢复了顺铂对A549/DDP细胞的抑制作用,使细胞存活率显著降低(P<0.05),凋亡率显著增加(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-125a-5p能够靶向结合RRM2(P<0.05);过表达RRM2逆转了miR-125a-5p对A549/DDP的作用,降低了A549/DDP对顺铂的敏感性(P<0.05)。结论:miR-125a-5p可通过靶向下调RRM2基因的表达,从而部分恢复A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。

siRNA下调RRM2抑制人乳腺癌细胞增殖与迁移及其裸鼠皮下移植瘤的生长

目的:探讨siRNA下调核糖核苷酸还原酶M2(ribonucleotide reductase M2,RRM2)基因对人乳腺癌细胞MCF-7体外增殖、迁移和体内成瘤的影响。方法:实时定量荧光PCR(real-time PCR)及Western blotting技术检测人乳腺癌细胞MCF-7和人正常乳腺上皮细胞MCF-10A中RRM2 mRNA及蛋白的表达;用合成的siR-NA-RRM2不同时点和不同剂量转染MCF-7细胞,用real-time PCR检测对RRM2基因的沉默效率;用CCK-8方法检测细胞增殖;用Transwell细胞迁移系统检测siRNA-RRM2对MCF-7细胞迁移能力的影响;裸鼠移植瘤实验检测siRNA-RRM2沉默MCF-7细胞的RRM2基因后对肿瘤生长的影响。结果:MCF-7细胞RRM2 mRNA和蛋白比MCF-10A细胞高表达;用siRNA-RRM2转染MCF-7乳腺癌细胞能时间及剂量依赖性下调RRM2基因表达;CCK-8方法结果显示下调RRM2基因会时间及剂量依赖性抑制MCF-7细胞增殖,而人正常乳腺上皮细胞增殖没有显著变化;Transwell细胞迁移系统检测显示下调RRM2基因显著抑制了MCF-7细胞的迁移能力;转染siRNA-RRM2下调RRM2基因能显著抑制裸鼠移植瘤的生长。结论:RRM2的过表达与人乳腺癌细胞的高增殖和迁移能力有关,抑制RRM2的功能是治疗乳腺癌的一个潜在的治疗策略。

RRM2在人胆管癌组织及胆管癌细胞系中的表达和意义

目的:探讨核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)在人胆管癌组织及胆管癌细胞系中的表达、分布以及生物学意义。方法:采用免疫组织化学技术(SP法)检测RRM2基因和蛋白在40例胆管癌标本、40例癌旁胆管组织以及10例正常胆管组织标本中的表达;同时采用RT-PCR法及Western blot法分别检测了RRM2基因mRNA及其蛋白在人胆管癌细胞系QBC939以及人正常胆管上皮细胞系HIBEC中的表达。结果:RRM2基因蛋白在胆管癌组织中表达阳性率为72.5%,而在癌旁胆管组织和正常胆管组织中未能检测到RRM2表达。在人胆管癌细胞系QBC939中,RRM2的mRNA及蛋白均特异性表达,而在正常人胆管上皮细胞系HIBEC中未见RRM2的表达。结论:RRM2在人类胆管癌组织和胆管癌细胞系中选择性高表达,可能与胆管癌的发生、发展密切相关。

miR-99a通过下调RRM2抑制人子宫颈癌HeLa细胞系增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-99a与核糖核苷酸还原酶小亚基M2(RRM2)的靶向关系,并分析二者对人子宫颈癌(CC)HeLa细胞系增殖、侵袭及迁移的影响。方法将HeLa细胞,分为对照组(control)、阴性对照组(inhibitor-NC)、抑制miR-99a表达组(miR-99a-inhibitor)、共转染组(RRM2-siRNA+miR-99a-inhibitor)。MTT法、平板集落实验检测细胞增殖;划痕实验、Transwell小室法检测细胞迁移、侵袭;Western blot检测RRM2、细胞增殖核抗原(PCNA)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、N-钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)蛋白表达;免疫荧光法检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin定位及表达;生物信息学及双荧光素酶报告基因实验验证miR-99a与RRM2靶向关系;RT-qPCR检测细胞中miR-99a、RRM2 mRNA水平。结果下调miR-99a表达,可增高HeLa细胞增殖率(100.00比128.86±4.25,P<0.05);上调集落形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数;增加RRM2、PCNA、N-cadherin与vimentin蛋白表达,降低E-cadherin蛋白表达(P<0.05)。抑制RRM2表达能减轻下调miR-99a对HeLa细胞生物学行为的影响(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验及RT-qPCR证实miR-99a与RRM2存在靶向关系(P<0.05)。结论抑制miR-99a可能靶向上调RRM2表达并促进HeLa细胞增殖,有望成为CC新的潜在治疗靶点。

LncRNA ERVMER61-1和RRM2表达对评价肝癌患者预后的价值

目的:探讨人类内源性逆转录病毒组MER61成员1(LncRNA ERVMER61-1)和核糖核苷酸还原酶调节亚基M2(RRM2)的表达模式及其对肝癌的预后价值。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中下载肝癌患者的基因表达谱数据。使用Wilcoxon秩和检验评估LncRNA ERVMER61-1和RRM2在肝癌组织和匹配的正常组织中的差异表达。利用MicroRNA Target Prediction、miRTarBase、miRcode、TargetScanHuman数据库对LncRNA ERVMER61-1进行功能分析,使用Pearson相关性进行LncRNA ERVMER61-1和RRM2的表达相关性分析。采用单因素和多因素Cox比例风险回归评估LncRNA ERVMER61-1和RRM2的预后价值。结果:LncRNA ERVMER61-1在肝癌组织中高表达,且其表达水平在不同性别之间差异有统计学意义(P<0.05)。在GO分析中,LncRNA ERVMER61-1功能主要富集在与近端启动子序列特异性DNA结合、染色质结合、RNA聚合酶II近端启动子序列特异性DNA结合、GTP酶结合等方面。RRM2在肝癌组织中高表达,其表达水平在不同种族及肿瘤阶段之间差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA ERVMER61-1和RRM2的表达呈正相关(r=0.316,P<0.001),单因素Cox回归发现LncRNA ERVMER61-1和RRM2的高表达组患者死亡风险分别是低表达患者的2.324倍(95%CI:1.500~3.603)和1.597倍(95%CI:1.138~2.243)。且多因素Cox回归显示LncRNA ERVMER61-1高表达影响肝癌预后效果。结论:LncRNA ERVMER61-1与RRM2在肝癌中高表达且其高表达与肿瘤分级、预后相关。LncRNA ERVMER61-1高表达是肝癌患者预后的独立危险因素,且可能作为ceRNA调控RRM2的表达,为探索抗肿瘤治疗提供一个新的预后标志物及潜在靶点,具有重要的临床意义。

华蟾素对子宫内膜癌Ishikawa细胞株裸鼠皮下移植瘤生长及RRM2基因表达的影响

目的研究华蟾素对子宫内膜癌Ishikawa细胞株裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及对肿瘤组织中核糖核苷酸还原酶亚单位M2(ribonucleotide reductase subunit M2,RRM2)基因表达的影响。方法应用人子宫内膜癌Ishikawa细胞株建立子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机将11只裸鼠分为2组,分别应用华蟾素和生理盐水瘤体内注射治疗1周。观察治疗前后移植瘤体积的变化;计算肿瘤增殖抑制率;RT-PCR方法检测肿瘤组织中RRM2 mRNA表达;Western blot方法检测RRM2蛋白表达。结果华蟾素治疗组移植瘤体积为(0.1314±0.0304)cm3,对照组为(0.3600±0.1145)cm3,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗组肿瘤增殖抑制率为43.46%。治疗组肿瘤组织中RRM2 mRNA及蛋白质光密度比值与对照组比较差异均有统计学意义(P=0.019,P=0.001)。结论华蟾素具有抑制子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用,这可能与其抑制肿瘤组织中RRM2表达有关。

血清AFP阳性胃癌中HER2和RRM1的表达及其意义

目的:研究人表皮生长因子2(HER2)和核糖核苷酸还原酶M1(RRM1)在血清AFP阳性胃癌(AFPGC)和普通胃癌之间表达的差异,预测曲妥珠单抗及铂类对AFPGC的疗效。方法:收集AFPGC石蜡标本61例作为实验组,匹配普通胃癌122例作为对照组,以免疫组化法测定HER2和RRM1的表达,比较两组之间表达的差异,并分析其表达与临床病理特征的相关性以及对生存期的影响。结果:HER2在实验组和对照组的阳性表达率分别为45.9%、30.33%,两组的差异有统计学意义(P=0.038);RRM1的阳性表达率分别为44.26%、62.30%,两组的差异有统计学意义(P=0.02)。在实验组中,HER2在Ⅲ期的阳性表达率明显低于Ⅰ~Ⅱ期(P=0.033),RRM1在分化程度<Ⅲ级的阳性率明显高于Ⅲ级(P=0.008)。在总样本中,HER2阳性胃癌患者的生存期明显比阴性者短,差异有统计学意义(P<0.001)。血清AFP水平(P=0.016,RR=1.001)是AFPGC的独立预后因素。结论:AFPGC的HER2阳性表达率明显高于普通胃癌,RRM1阳性表达率明显低于普通胃癌,提示AFPGC可能对曲妥珠单抗及铂类的治疗有更多的获益。

RRM2对人胃癌细胞MKN-45增殖、侵袭及顺铂耐药作用的研究

目的研究核糖核苷酸还原酶亚单位M2(RRM2)基因在人胃癌MKN-45细胞增殖、侵袭、耐药中的作用,并初步探讨其可能的机制。方法设计两组靶向RRM2基因的小干扰RNA,分别转染胃癌细胞MKN-45以抑制RRM2基因的表达,并同时设立阴性对照组(NC组)及未转染组。转染后琼脂糖电泳检测各组细胞RRM2基因表达,Western-blot检测各组细胞RRM2蛋白表达。CCK-8法对各组细胞增殖能力进行检测。不同浓度顺铂处理各组细胞进行耐药能力检测。采用Transwell小室对各组细胞侵袭能力进行检测。结果琼脂糖电泳及Western-blot检测显示转染RRM2-siRNA后,RRM2在基因水平及蛋白水平表达均明显下调。转染RRM2-siRNA的人胃癌MKN-45细胞的增殖能力、侵袭能力均显著低于未转染组及NC组(P<0.05),转染组顺铂IC50分别为0.081μg/m L及0.079μg/m L,明显低于未转染组(0.14μg/m L)及NC组(0.136μg/m L)(P<0.01)。结论 RRM2基因具有促进胃癌细胞增殖、侵袭的作用,并与顺铂耐药相关。

RRM2表达与宫颈鳞癌相关病理因素及预后关系的研究

目的探讨核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)在宫颈鳞癌中的表达及其与临床病理因素的关系及对预后的影响。方法采用免疫组化法检测68例宫颈鳞癌组织中的RRM2的表达,分析RRM2与宫颈鳞癌患者其他临床病理因素间的关系,并采用Kaplan-Meier法计算生存率。单因素Log-rank分析和多因素COX回归模型评估RRM2与宫颈鳞癌的预后关系。结果 RRM2阳性表达率在年龄大、组织分化程度低、FIGO分期晚的患者中明显增高(χ^2分别=7.35、8.29、6.10,P均<0.05)。Log-rank分析结果显示RRM2阳性表达的患者5年生存率低于RRM2阴性患者(χ^2=5.14,P<0.05)。COX回归分析显示RRM2并非影响宫颈鳞癌预后的危险因素(HR=7.44,P>0.05),肿瘤直径≥4 cm、病理分级为低分化、脉管浸润阳性、淋巴结转移阳性、FIGO分期晚是影响宫颈鳞癌术后预后的危险因素(HR分别=3.72、13.08、19.69、4.17、5.06,P均<0.05)。结论 RRM2对宫颈鳞癌的预后评价有一定的参考价值,但尚未有足够证据证明RRM2是影响宫颈鳞癌预后的危险因素。

miR-3148通过影响RRM2表达抑制胃癌NCI-N87 细胞的增殖与迁移

目的探讨胃癌组织中微小RNA(microRNA)-3148的表达及其影响胃癌NCI-N87细胞增殖、迁移的作用机制。方法收集2018年2月至2021年9月在空军第986医院普通外科行肿瘤切除的42例胃癌患者的癌组织和癌旁组织标本。用qRT-PCR检测胃癌组织及胃癌细胞株(BGC823、HS-746T、NCI-N87、SGC7901)中miR-3148的表达水平。分别用miR-3148模拟物(miR-3148组)和阴性对照模拟物(miR-NC组)转染NCI-N87细胞,qRT-PCR分别检测两组NCI-N87细胞中miR-3148的表达水平,CCK8法和细胞划痕愈合实验分别检测miR-3148对NCI-N87细胞增殖和迁移能力的调控作用。生物信息学工具miRGator预测miR-3148的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miR-3148与靶基因的结合作用。qRT-PCR和Western blot分别检测两组NCI-N87细胞中miR-3148靶基因及Akt/mTOR信号通路蛋白p-Akt、p-mTOR、p-4EBP1的表达。结果胃癌组织中miR-3148表达水平显著低于癌旁组织(P<0.01),胃癌细胞株(BGC823、HS-746T、NCI-N87、SGC7901)中miR-3148表达水平显著低于正常胃黏膜上皮细胞(均P<0.05)。miR-NC组和miR-3148组中miR-3148相对表达分别为0.18±0.04和1.02±0.16,miR-3148组NCI-N87细胞中miR-3148表达明显增加(P<0.01)。与miR-NC组相比,miR-3148组NCI-N87细胞增殖能力显著降低(P<0.05)。miR-NC组和miR-3148组迁移指数分别为(75.59±5.98)%和(29.96±8.62)%,与miR-NC组相比,miR-3148组NCI-N87细胞迁移指数显著降低(P<0.01)。miRGator工具预测并经双荧光素酶报告基因实验验证核糖核苷酸还原酶M2(ribonucleotide reductase M2,RRM2)是miR-3148的靶基因。miR-NC组和miR-3148组细胞中RRM2 mRNA的表达分别为5.83±0.90和1.05±0.40,与miR-NC组相比,miR-3148组RRM2基因表达显著降低(P<0.01)。与miR-NC组相比,miR-3148组Akt/mTOR信号通路蛋白p-Akt、p-mTOR、p-4EBP1表达降低。结论miR-3148在胃癌组织和细胞株中呈现低表达,miR-3148通过下调RRM2基因表达影响Akt/mTOR信号通路活性,抑制胃癌NCI-N87细胞的增殖与迁移。