高敏丙型肝炎病毒核糖核酸在丙型肝炎中的诊断价值

目的比较高敏丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV-RNA)与普通HCV-RNA、丙型肝炎病毒(HCV)核心抗原检测在丙型肝炎临床诊断中的优势,探讨高敏HCV-RNA在临床诊断和病情监测中的应用价值。方法选择48例HCV抗体阳性的门诊及住院患者作为观察组,另选择同期40例HCV抗体阴性的健康体检者作为对照组。采集所有研究对象5 mL空腹静脉血标本,留取血清。高敏HCV-RNA采用赛沛全自动医用聚合酶链反应(PCR)分析系统检测,普通HCV-RNA采用厦门安普利生物技术有限公司Anadas9850全自动核酸提纯系统及荧光定量PCR分析系统及配套试剂检测,HCV抗体及HCV核心抗原检测采用酶联免疫吸附试验。试验前,先对赛沛高敏HCV-RNA检测进行性能验证。结果高敏HCV-RNA检测性能验证准确度、重复性、线性范围和最低检出限符合要求。高敏HCV-RNA诊断丙型肝炎灵敏度明显高于普通HCV-RNA及HCV核心抗原检测。结论高敏HCV-RNA是丙型肝炎诊断的重要指标,并可用于丙型肝炎治疗终点判断和病情监测。

血清乙型肝炎病毒表面抗原水平与血清乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸载量在不同阶段乙型肝炎病毒感染肝衰竭患者中的表达

目的分析血清乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)水平与血清乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)载量在不同阶段乙型肝炎病毒(HBV)感染肝衰竭患者中的表达意义。方法回顾性选取龙岩市第二医院于2020年9月至2021年9月收治的64例HBV感染肝衰竭患者作为研究对象,按照病情阶段分为慢性肝衰竭(CLF)组35例和慢加急性肝衰竭(ACLF)组29例,两组均通过电化学发光法和荧光定量法(Q-PCR)检测血清中HBsAg和HBV-DNA水平,并比较两组的因子表达情况。结果ACLF组中的HBsAg与HBV-DNA水平以及CD4+、CD8+均高于CLF组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论临床可通过分析患者血清中的HBsAg与HBV-DNA水平的表达情况,掌握不同病程阶段HBV感染患者的病情进展情况,为病症的预防和干预治疗提供参考依据。

术前血清V-set和免疫球蛋白结构域4以及长链非编码核糖核酸SBF2反义RNA1与肾结石患者经皮肾镜取石术后急性肾损伤的关系

目的探讨术前血清V-set和免疫球蛋白结构域4(VSIG4)以及长链非编码核糖核酸(LncRNA)SBF2反义RNA1(SBF2-AS1)与肾结石患者经皮肾镜取石术后急性肾损伤(AKI)的关系。方法选择2020年1月—2022年12月本院收治的109例肾结石患者为研究对象。术前检测患者血清VSIG4水平以及LncRNA SBF2-AS1表达,术后记录AKI发生情况。采用多因素Logistic回归模型分析肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析VSIG4、LncRNA SBF2-AS1预测肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的价值。结果本研究中,术后发生AKI者16例。AKI组血清VSIG4水平低于非AKI组,LncRNA SBF2-AS1表达高于非AKI组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,术前高尿酸水平、术前高LncRNA SBF2-AS1表达、较长的手术时间、术中低血压是肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的危险因素(P<0.05),术前高VSIG4水平是保护因素(P<0.05)。术前血清VSIG4、LncRNA SBF2-AS1水平预测肾结石患者经皮肾镜术后发生AKI的曲线下面积分别为0.854、0.705,二者联合预测的曲线下面积为0.948,大于各指标单独预测(Z=1.995、2.958,P<0.05)。结论肾结石患者术前血清VSIG4水平降低、LncRNA SBF2-AS1表达增高与经皮肾镜取石术后AKI的发生有关,联合检测术前VSIG4、LncRNA SBF2-AS1可预测术后AKI的发生风险。

植物抗病毒新机制:细胞自噬与核糖核酸降解的“平衡术”

近日,中国农业科学院植物保护研究所发现植物细胞自噬能够抑制一种名为无义介导的核糖核酸降解的抗病毒机制发生,从而协调植物对病毒的防御反应。相关研究成果发表在《尖端科学(Advanced Science)》。

植物RNA作为载体RNA在病毒核酸提取过程中的保护效果研究

目的探究植物RNA作为载体RNA在病毒核酸提取过程中对目标核酸的保护效果。方法分别提取绿萝、水稻、竹子3种常见植物中的RNA作为载体RNA,同时以商业试剂Takara载体RNA为对照,提取甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)、呼吸道合胞病毒A型(RSV A)核酸,并利用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)定量分析提取得到的病毒核酸浓度,以评估植物RNA在核酸提取中对病毒核酸的保护效果。结果经琼脂糖凝胶电泳检测,所提取植物RNA的28S rRNA、18S rRNA条带清晰明亮,无弥散现象,所得RNA具有良好的完整性。且经验证,植物RNA对病毒核酸扩增无干扰。裂解液中分别加入0、1000、3000、5000、7000、9000 ng绿萝RNA进行Flu A RNA提取时,提取物经RT-qPCR扩增后的Ct值分别为35.06±0.14、33.01±0.42、32.45±0.33、31.95±0.34、31.74±0.28、31.92±0.24,使用Takara载体RNA提取核酸的Ct值为31.96±0.34。Ct值随着绿萝RNA添加量增加而降低,当添加量≥5000 ng时,Ct值接近使用Takara载体RNA的提取组,继续提高绿萝RNA用量,Ct值趋于稳定,且与使用TaKaRa载体RNA的Ct值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。添加5000 ng绿萝RNA与添加0 ng绿萝RNA相比,Ct值相差3.11,根据浓度差等于2ΔCt计算可知添加5000 ng绿萝RNA提取得到的Flu A核酸浓度比不添加载体RNA高了8.63倍。进一步研究发现,添加绿萝RNA、水稻RNA、竹子RNA及Takara载体RNA,提取得到的Flu A、Flu B和RSV A核酸经RT-qPCR扩增后得到的Ct值与不添加载体RNA比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。绿萝RNA作为载体RNA在提取Flu A、Flu B、RSV A混合病毒核酸时,对比无载体RNA的对照组,分别降低了2.61、2.90、1.45个Ct值,即添加了绿萝RNA后提取Flu A、FluB、RSV A所得的核酸浓度分别提高了6.11、7.46、2.73倍。且添加了水稻RNA和竹子RNA提取混合病毒核酸所得的核酸浓度也分别至少提高了2.63倍和2.60倍。结论在病毒核酸提取过程中植物RNA具有保护病毒核酸的作用,可以提高提取得到的目的病毒RNA浓度,可用作病毒核酸提取时的载体RNA,为核酸提取中的载体RNA选择提供更多来源。

组织保护剂对病毒核酸与豚鼠皮肤组织样本RNA的保存效果探究

病毒核酸和生物组织样本RNA容易受到外部环境的影响,极易发生降解,造成实验结果产生严重偏差。以病毒核酸与豚鼠皮肤组织样本RNA为研究对象,探究组织保护剂保存它们在不同温度放置不同时间后,对病毒载量以及豚鼠皮肤组织样本中RNA的保护效果。结果发现,在4℃保存30 d,25℃保存7 d或37℃保存24 h后,与初始病毒核酸量相比较,组织保护剂中保存的病毒载量未发生明显变化(P>0.05)。在4℃保存30 d,25℃保存7 d或37℃保存24 h后,与液氮储存组相比较,组织保护剂组与市售RNA later组均可以保持豚鼠皮肤组织中样本RNA的提取量和纯度,差异无统计学意义(P>0.05)。结果表明,组织保护剂可作为科研或临床组织样本的储存保存液,在4℃、25℃以及37℃条件下放置一定时间,不影响病毒核酸的病毒载量以及豚鼠皮肤组织样本RNA的提取量和纯度,使样本保存更简便高效。

肝癌患者血清乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸载量同肝动脉化疗栓塞术后肿瘤复发的关系

目的:探讨肝癌患者血清乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)载量同肝动脉化疗栓塞术后肿瘤复发的关系。方法:选取72例2019年1月~2021年5月行肝动脉化疗栓塞术患者,行回顾性分析,依据术后肿瘤复发情况分为复发组(n=28)、未复发组(n=44),分析患者肝动脉化疗栓塞术后肝功能指标,术后肿瘤复发的危险因素,比较两组血清HBV DNA载量,探讨血清HBV DNA载量同肝动脉化疗栓塞术后肿瘤复发的关系。结果:两组患者在性别、年龄、体重指数(BMI)、Child-Pugh分级、内科治疗上比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组患者在肿瘤数目、最大肿瘤直径、血清HBV DNA载量上比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与治疗前相比,治疗后患者血清总胆红素(TBIL)、丙谷转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)指标显著改善,差异有统计学意义(P<0.05)。对上述差异有统计学意义的因素进行赋值,肿瘤数目(单个为1,多个为2)、最大肿瘤直径(≤3为1,>3为2)、血清HBV DNA载量(<100考贝数/ml为1,≥100考贝数/ml为2);经多因素Logistic回归分析,肿瘤数目为多个、最大肿瘤直径>3 cm、血清HBV DNA载量≥100考贝数/ml均为肝动脉化疗栓塞术后肿瘤复发的危险因素(P<0.050)。经Spearman相关性分析,肿瘤数目、最大肿瘤直径、血清HBV DNA载量与肝动脉化疗栓塞术后肿瘤复发均呈正相关关系,差异有统计学意义(r=0.854、0.896、0.912,P<0.001)。结论:肝动脉化疗栓塞术可显著改善肝癌患者的肝功能,而肝动脉化疗栓塞术后肿瘤复发与肿瘤数目、最大肿瘤直径、血清HBV DNA载量具有直接关系,应制定针对性干预措施,降低肿瘤复发率。

乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸载量前S2蛋白阳性率与慢性乙型肝炎患者肝纤四项指标的相关性分析

目的分析慢性乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)载量、前S2蛋白(Pre S2)阳性率与乙型肝炎患者肝纤4项指标的相关性。方法选取上饶市第二人民医院2019年1月—2021年12月收治的68例乙肝患者为研究对象,测定其血清HBV-DNA载量、Pre S2阳性率及血清肝纤指标[层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(ⅣC)、Ⅲ型前胶原肽(PⅢ)]水平,按照HBV-DNA载量与Pre S2检测结果,将患者分为低载量组、中载量组、高载量组及Pre S2阳性组与Pre S2阴性组,比较各组肝纤指标水平,并进行相关性分析。结果高载量组血清LN、HA、PⅢ水平明显低于中载量组与低载量组,且中载量组明显低于低载量组(P<0.05),3组ⅣC水平比较差异无统计学意义(P>0.05);高载量组Pre S2阳性率明显高于其余2组(P<0.05),中载量组明显高于低载量组(P<0.05)。Pre S2阳性组患者血清LN、HA及PⅢ水平明显低于Pre S2阴性组(P<0.05),2组ⅣC水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。相关性分析显示,HBV-DNA载量、Pre S2阳性率与LN、HA、PⅢ水平呈负相关(P<0.05)。结论慢性乙型肝炎患者HBV-DNA载量、Pre S2阳性率与LN、HA、PⅢ密切相关。

人核糖核酸酶抑制因子siRNA慢病毒载体的构建及鉴定

本实验旨在构建人核糖核酸酶抑制因子稳定干涉载体pLKO.1-ds RI,为后续观测人核糖核酸酶抑制因子干涉载体的表达对肿瘤细胞的影响奠定基础。用亚克隆法,将针对人核糖核酸酶抑制因子的干涉片段从Simple T-ds RI质粒克隆到pLK-0.1-TRC质粒,用酶切法筛选得到阳性重组质粒pLKO.1-ds RI,用测序法鉴定克隆序列正确。转染时设干扰组、空载体组和空白组三组,每组三次重复。用脂质体Cellfectin^R将pLKO.1-ds RI(干扰组)、pLKO.1-TRC(空载体组)转染进人肝癌细胞HepG2细胞中,未处理的细胞作空白组。转染后72hr用Western blotting检测细胞中核糖核酸酶抑制因子表达的变化。双酶切鉴定及测序鉴定结果均正确;Western blotting结果表明,对比空白组(1.1578±0.015)和空载体组(1.1216±0.027),干扰组RI表达(0.6119±0.048)明显下调(P<0.05)。结果表明人核糖核酸酶抑制因子干涉载体pLKO.1-ds RNH1构建成功。

乙型肝炎病毒DNA聚合酶中核糖核酸酶RNase H反式调节基因DNAPTP4的克隆化研究

目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术筛选乙型肝炎病毒(HBV)核糖核酸酶RNaseH蛋白反式激活基因差异表达的cDNA,克隆RNaseH反式激活相关靶基因。方法以RNaseH表达质粒pcDNA31(-)RNaseH转染HepG2细胞,以空载体pcDNA31(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析,其未知基因片段通过Kozak规则和多聚腺苷酸信号序列,初步确定。以逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序加以证实。结果该新基因被命名为DNAPTP4,在GenBank中注册,注册号为AY450392。DNAPTP4基因的编码序列全长为828个核苷酸(nt),编码产物由276个氨基酸残基(aa)组成。结论应用SSH技术成功筛选与克隆RNaseH反式激活新型靶基因DNAPTP4,为进一步阐明RNaseH反式调节作用及其在HBV感染中的分子生物学机制提供理论依据和研究方法。

慢性乙型肝炎患者血清HBsAg与单个核细胞乙型肝炎病毒RNA水平对聚乙二醇干扰素治疗效果的预测价值

目的探讨慢性乙型肝炎患者外周血清HBsAg、乙型肝炎病毒(HBV)DNA与血清HBV RNA及单个核细胞(PBMC)HBV RNA的关系。方法50例慢性乙型肝炎患者,给予Peg-IFNα-2b 180μg皮下注射,每周一次,分别在初始治疗、24周和48周,检测患者血清HBV五项、肝功能、HBV DNA、HBV RNA及PBMC中HBV RNA的变化。结果患者三个时间段的生化指标ALT、AST、TBIL、AKP及GGT比较差异无统计学意义(P>0.05);免疫学标志物HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb差异有统计学意义(P<0.05);血清HBV DNA及HBV RNA与PBMC HBV RNA差异有显著统计学意义(P<0.001)。结论Peg-IFNα-2b抗病毒治疗各时间段,肝功能转氨酶无显著变化;治疗24周,血HBsAg、HBV DNA与HBV RNA及PBMC HBV RNA快速下降,有显著相关性;治疗48周,血清HBsAg、HBV DNA与HBV RNA及PBMC HBV RNA相关性减弱。因此,24周HBV RNA下降幅度优于48周,更能预测临床治愈。

乙型肝炎病毒核糖核酸酶H(HBV-RNaseH)蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

目的建立能稳定分泌抗乙型肝炎病毒核糖核酸酶H1及H2(HBVRNaseH1及H2)重组蛋白单克隆抗体(McAb),并对其生物学活性进行实验室鉴定。方法用重组HBVRNaseH1及H2蛋白为抗原免疫BALB/c/小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经有限稀释克隆3次后制备分泌McAb的杂交瘤细胞株,并用酶免疫(EIA)法对其分泌抗体进行初步鉴定。结果融合后的阳性克隆中筛选出4株能稳定分泌McAb的杂交瘤细胞株,命名为H1C6、D3;H2E2、F4。这4株McAb与HBVRNaseH1及H2重组抗原均有良好的反应性,杂交瘤培养上清的EIA抗体滴度为1∶100～1∶200,其中2株诱生的同系小鼠腹水滴度为1∶800,1∶1000。这4株McAb均为IgG1亚型。结论该McAb的制备,可为HBV感染者血清和肝组织中抗原检测方法的建立和生物工程药物的研制创造条件。

RNA结合蛋白ELAVL1的功能及其调控病毒复制的研究进展

胚胎致死异常视觉蛋白1(embryonic lethal abnormal vision like 1, ELAVL1),又被称为人类抗原R(human antigen R, HuR),是一种典型的RNA结合蛋白(RNA binding protein, RBP),通过与3′非翻译区(3′untranslated element, 3′UTR)的AU富含元件(AU-rich element, ARE)结合,在mRNA转录和翻译过程中发挥重要作用。ELAVL1的作用十分广泛,可调控肿瘤的发生发展、凋亡、迁移与侵袭,是许多癌症治疗的关键靶点,还能参与调节编码器官发育和组织稳态的蛋白质和mRNA的水平,也有许多研究表明,ELAVL1通过转录后调控和翻译后修饰来调节病毒复制。本文主要综述了ELAVL1的生物学特点、功能、调控机制及其在病毒复制过程中的调控作用,旨在为进一步研究ELAVL1与畜禽病毒复制之间互作的机制提供理论参考。

水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)侵染对寄主植物核糖核酸酶基因mRNA表达量的影响

植物核糖核酸酶能抵抗病原菌侵染。为分析核糖核酸酶在水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)侵染过程中的作用,通过灰飞虱人工接种病毒的方法,在寄主植物水稻、小麦和玉米上接种RBSDV,经RT-PCR鉴定病毒成功侵染后,分别以水稻的OsUBQ5、小麦的TaeEF1-α和玉米的ZmaActin作为内参基因,实时荧光定量PCR分析RBSDV侵染后水稻的OsRNS4、小麦的TaeRNS4和玉米的ZmaRNS1基因mRNA表达量的变化。结果显示,感染RBSDV后,寄主植物OsRNS4、TaeRNS4和ZmaRNS1基因的表达量分别是未接种对照植株的3.08倍、1.87倍和3.49倍,表明寄主植物核糖核酸酶基因在RBSDV侵染后被诱导,核糖核酸酶可能在植物抗病毒过程中起作用。

基于小RNA深度测序和RT-PCR鉴定鹅绒藤花叶病的病毒病原

鹅绒藤(Cynanchum chinense)是一种传统中药,为明确造成鹅绒藤叶片花叶症状的原因,本研究采用小RNA深度测序技术结合RT-PCR的方法鉴定引起山西太谷鹅绒藤病毒花叶症状的病原,并通过生物信息学的手段对病毒序列进行分析。结果表明,发病鹅绒藤样品经小RNA深度测序技术共获得15039334个原始序列,将拼接contigs与NCBI中的病毒数据库进行比对注释,结果显示病原为苜蓿花叶病毒(AMV)和黄瓜花叶病毒(CMV)。利用特异引物克隆了AMV和CMV的外壳蛋白(CP)和移动蛋白(MP)基因全序列,分别命名为AMV-BR和CMV-BR。通过序列比对分析,发现AMV-BR CP氨基酸序列和核苷酸序列与AMV分离物AMV-Gyn(MH332899)、Dich-rep(MW835989)和VIC-320(MF075254)的相似性均达到100%;MP氨基酸序列和核苷酸序列与AMV分离物AMV-Gyn(MH332899)的相似性最高,均为99.3%。CMV-BR CP氨基酸序列和核苷酸序列与CMV亚组ⅠA中CMV分离物YA17(MH119159)的相似性最高,分别为100%和99.1%;MP氨基酸序列和核苷酸序列与CMV亚组Ⅰ分离物PV-0185(ON013887)的相似性最高,分别为98.2%和96.4%。MP和CP氨基酸序列系统进化分析表明,CMV-BR属于CMV亚组Ⅰ中的成员。这是首次在山西鹅绒藤上检测到AMV和CMV,该研究有助于深入了解AMV、CMV的分子进化,也为鹅绒藤病毒病的防治提供一定的理论依据。

沉默HepG2细胞核糖核酸酶抑制因子的shRNA逆转录病毒载体的构建及鉴定

目的构建针对人核糖核酸酶抑制因子(hRI)的shRNA逆转录病毒载体,为探讨hRI抗肿瘤作用机制打下基础。方法用亚克隆法将目的片段pkd-dsRI和pkd从表达载体pKD-dsRI克隆到pLNCX上,用双酶切筛选得到阳性克隆后,用脂质体法将其转染到人肝癌细胞HepG2细胞中,用800 mg/L G418筛选2周,产生稳定的细胞克隆后,用RT-PCR检测细胞中核糖核酸酶抑制因子mRNA表达的变化。结果双酶切鉴定为阳性克隆。RTPCR表明,对比空白组(0.790±0.014)和空载体组(0.904±0.027),干扰组hri基因表达(0.361±0.048)明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了针对hRI的shRNA逆转录病毒载体。

环状RNA hsa_circ_0085576调控微小RNA-498/B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1轴对口腔鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探究环状RNA hsa_circ_0085576对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法检测OSCC细胞中hsa_circ_0085576、微小RNA-498(miR-498)以及B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1(BMI-1)的表达水平。使用CCK-8、划痕实验、Transwell实验以及qRT-PCR、蛋白印迹法分别检测SCC-15细胞增殖活力、迁移及侵袭能力以及相关基因和蛋白的相对表达量。结果OSCC细胞中hsa_circ_0085576与BMI-1表达上调,miR-498表达下调(P<0.05)。下调hsa_circ_0085576表达或过表达miR-498后SCC-15细胞的增殖活性、划痕愈合率、侵袭细胞数目以及细胞周期蛋白D1、波形蛋白表达水平下调,miR-498和E-钙黏蛋白表达水平上调(P<0.05);抑制miR-498表达可减弱下调hsa_circ_0085576表达对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用;上调BMI-1表达可减弱过表达miR-498对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论下调hsa_circ_0085576表达可通过激活miR-498/BMI-1轴抑制OSCC细胞增殖、迁移及侵袭。

RNF20影响RNA病毒感染后的巨噬细胞极化

目的 探究环指蛋白20(RNF20)在抗RNA病毒先天免疫中的作用。方法 在293T人胚肾上皮细胞中过表达RNF20,运用双荧光素酶报告基因实验,检测仙台病毒(SeV)感染诱导的干扰素a4(Ifna4)基因启动子活化。构建Rnf20基因髓系条件性敲除小鼠模型(Rnf20F/F;Lyz2-Cre),运用流式细胞术检测Rnf20F/F;Lyz2-Cre和对照Rnf20F/F小鼠骨髓、脾脏和外周血髓系细胞亚群的比例;利用建立的小鼠模型培养骨髓源巨噬细胞(BMDMs),在SeV和水疱性口炎病毒(VSV)感染后,运用免疫印迹检测转录因子干扰素调节因子3(IRF3)和核因子-κB (NF-κB)p65亚基的磷酸化,通过ELISA检测细胞因子IFN-β、TNF-α、IL-6的表达,通过高通量转录组测序分析转录组的改变,并通过LPS和IL-4分别诱导巨噬细胞M1和M2极化,证实RNF20对于转录组的影响。结果 293T细胞中RNF20过表达不影响SeV感染诱导的Ifna4基因启动子活化。Rnf20F/F;Lyz2-Cre和Rnf20F/F小鼠髓系细胞发育无明显差异,在RNA病毒感染2组小鼠的BMDMs后,IRF3、NF-κB p65的磷酸化和IFN-β、TNF-α、IL-6的表达相似,但是一些与巨噬细胞极化相关的基因表达有显著差异。RNF20的缺失有抑制巨噬细胞M1型极化、促进巨噬细胞M2型极化的趋势。结论RNF20不影响RNA病毒感染诱导的IRF3和NF-κB通路活化,但可通过影响巨噬细胞极化而参与感染后炎症的消退。

人核糖核酸酶抑制因子的shRNA逆转录病毒载体的鉴定

目的：鉴定构建的针对人核糖核酸酶抑制因子（ RI）的shRNA逆转录病毒载体。方法用脂质体法将针对人RI的shRNA逆转录病毒载体转染到人肝癌细胞SMMC7721中，用800 mg/L G418培养3～4周筛选产生稳定的细胞克隆，用RT-PCR和Western blot检测细胞中RI mRNA和蛋白的表达。结果 RT-PCR 和Western blot 表明，RI表达明显下调（ P＜0．05）。结论成功构建了针对人RI的shRNA逆转录病毒载体。

核糖核酸酶A专栏导读

长久以来,我们“顾名思义”,“理所当然”地认为核糖核酸酶A的功能就是降解核糖核酸(RNA)。事实上,随着研究的深入,发现该家族不少成员不仅能降解RNA,而且能精准地在特定位点切割RNA产生功能性非编码RNA,甚至具有“非酶”功能!例如,我们课题组研究的核糖核酸酶A超家族成员5(ribonuclease 5,也称angiogenin,中文译为“血管生成素”)不仅以酶的形式参与RNA代谢(主要是rRNA、tRNA和miRNA)。