三个类核糖核酸酶基因在磷饥饿条件下的表达(英文)

核糖核酸酶(RNases)可以将衰老的植物组织中的核糖核酸降解释放出磷元素,使它能够运送到幼嫩部位被重新利用。许多核糖核酸酶基因的表达受磷饥饿的正调控。利用已有的EST序列,从普通小麦“小偃54”中分离了3个核糖核酸酶基因的cDNA序列。这3个基因预测的氨基酸序列与S-核糖核酸酶和S-like核糖核酸酶(类核糖核酸酶)的氨基酸序列有较高的同源性。WRN1的表达受磷饥饿和衰老的负调控,而WRN2和WRN3受磷饥饿的正调控。

小麦类核糖核酸酶基因(WRN1)cDNA在自然衰老和黑暗诱导衰老条件下的表达(英文)

从普通小麦(Triticum aestivum L.)中分离了一个类核糖核酸酶(WRN1)基因的cDNA。WRN1的转录受自然衰老和黑暗诱导衰老的负调控。在幼嫩组织中WRN1也有表达。由于在两个保守的位置上组氨酸被替换,WRN1很可能已经失去了核糖核酸酶的活性。 Southern分析表明,在普通小麦基因组中,WRN1以一个小基因家族的形式存在。

一种赤子爱胜蚓脱氧核糖核酸酶作用机制的研究

目的研究赤子爱胜蚓组织中脱氧核糖核酸酶1(EWD1)作用于底物的机制。方法采用ZORBAX-Oligo柱-高效液相色谱法(HPLC)、琼脂糖电泳、紫外分光光度法等分析技术,进行了蚯蚓EWD1对环状、线状DNA、单链DNA的降解中间产物和终产物的观察和分析。结果EWD1对所有形式的DNA底物均有降解作用,对单链DNA的降解产物为较均一的、<18bp的寡核苷酸,并显示EWD1无降解RNA的作用。结论蚯蚓组织中发现的EWD1能够分解多种来源的遗传物质,属于脱氧核糖核酸内切酶。

蚯蚓脱氧核糖核酸酶纯化及酶学性质(英文)

目的:从蚯蚓组织中纯化得到一种脱氧核糖核酸酶(取名为蚯蚓脱氧核糖核酸酶,简称EDNase)并研究其酶学性质。方法:采用丙酮沉淀、离子交换层析、高效液相层析、SDS-PAGE电泳,毛细管等点聚焦电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等方法。结果:经证实这种纯化方案的纯化倍数是137,酶得率为45.6%。EDNase的相对分子质量约为63000。Mg2+,Mn2+和Ca2+对酶活性有较强的抑制作用,而Na+则轻微的提高酶的活性。在pH4.4～5.2的范围内EDNase酶活性稳定,其最适pH值为4.8。该酶的最适温度为37℃,在40℃范围内酶具有较高的稳定性。EDNase的等电点为6.20。在以小牛胸腺DNA为底物的条件下,酶的Km为1.52g/L,Vmax为4.89mg/(mL·min)。该酶可有效降解超螺旋质粒DNA,线状λ-噬菌体DNA和细菌染色体DNA,对RNA未见任何降解作用。结论:这种酶具有独特的酶学性质,不同于以往所知的脱氧核糖核酸酶。

抗肿瘤核糖核酸酶研究进展

核糖核酸酶(RNase)是一类广泛存在于动植物体内的核酸水解酶,近年来一系列研究表明核糖核酸酶及其结构类似物具有抗肿瘤活性,通过破坏RNA发挥抗肿瘤作用。有一些因素决定RNase的细胞毒性,了解这些因素有助于改造Rnase,以增强其细胞毒性,更好地发挥抗肿瘤治疗作用。RNase的研究为临床治疗肿瘤提供了新的前景,有望成为一类新型的抗肿瘤药物。

蚯蚓新型脱氧核糖核酸酶的相对分子质量测定

目的测定蚯蚓组织中一种新型脱氧核糖核酸酶(EWD3)的相对分子质量。方法采用凝胶过滤层析法、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳法(SDS-PAGE)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)3种方法测定一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶(EWD3)的相对分子质量。结果凝胶过滤层析法、SDS-PAGE法和质谱法测定其相对分子质量分别为55080、58270和63460。结论凝胶过滤层析法和SDS-PAGE法可以常规粗略测定蛋白的相对分子质量,质谱法可以比较准确测定蛋白的相对分子质量,EWD3为单亚基蛋白,其相对分子质量约在55000￣65000之间。

一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶相对分子质量的测定

目的测定从蚯蚓组织中提取纯化的一种新型脱氧核糖核酸酶的相对分子质量。方法采用凝胶过滤层析法、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法和基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法三种方法测定一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶(EWD1)的相对分子质量。结果凝胶过滤层析法、SDS-PAGE法和质谱法测定其相对分子质量分别为126440、136320和157190。结论EWD1由两个亚基组成,其相对分子质量最终确定为157190。

赤子爱胜蚓脱氧核糖核酸酶酶动力学研究

目的对赤子爱胜蚓中一组新型脱氧核糖核酸酶(EWDs)进行酶动力学研究。方法运用单相酶扩散法(SRED)、紫外分光光度法和林-贝氏(Lineweaver-Burk)作图法。结果EWDs的最适温度均为37℃。EWD1的最适pH为5.2,Km为1.58mg/ml,Vmax为5.36mg·ml-1·min-1;EWD2的最适pH为4.4,Km值是3.95mg/ml,Vmax值为2.87mg·ml-1·min-1;EWD3的最适pH为4.8,Km值是1.52mg/ml,Vmax值为4.89mg·ml-1·min-1。Mn2+和Ca2+是EWDs的抑制剂,Mg2+仅抑制EWD3的活性。结论蚯蚓组织中发现的此组脱氧核糖核酸酶具有特殊的酶学性质,区别于已知的脱氧核糖核酸酶类。

一种蚯蚓脱氧核糖核酸酶分离纯化和性质研究

蚯蚓组织的NaAc抽提液经过热变性、酸变性和丙酮分段沉淀,再经过DEAE-Sepharose和CM-Sepharose层析纯化,从中分离纯化得到一种脱氧核糖核酸酶(EWD2),经SDS-PAGE电泳、基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF)、毛细管等点聚焦电泳法测定,此DNase的相对分子质量测定为69 100,明显大于已发现的DNaseⅠ和DNaseⅡ。该酶的等电点为6.05,温度稳定性、pH稳定性、激动剂和抑制剂等各项参数,与已发现的各种DNase相比较有明显差别。结果提示,蚯蚓组织中发现的这种脱氧核糖核酸酶具有特殊的酶学性质,可能是一种新型脱氧核糖核酸酶,其作用机理和分类还有待于进一步的研究。

核糖核酸酶的抗肿瘤研究进展

核糖核酸酶〔ribonuclease ,RNase〕是一类能够特异性切割RNA的酶 ,既有催化活性 ,又有细胞毒性。它们的生物学活性由激动剂和抑制剂所控制。迄今为止 ,已分离纯化出多种不同种类的RNase ,并对其结构和功能进行了深入的研究。研究表明 ,其中BS RNase、Onconase和RC RNase等具有抗肿瘤作用 ,可作为细胞毒素进入肿瘤细胞 ,抑制肿瘤细胞的生长 ,因此RNase的研究为临床治疗肿瘤提供了新的前景 。

核糖核酸内切酶-Ⅲ的研究进展及应用

核糖核酸内切酶-Ⅲ是与基因调节有关的一种重要的酶,是一个大的家族体系的总称,这一家族体系包括很多不同的成员,它们广泛存在于从原核到真核的各种生物体内。该酶的酶切产物小干扰RNA(siRNA)是启动RNA干扰(RNAi)的效应分子;而该酶的另一种酶切产物微小RNA(miRNA)既可以发挥类似siRNA的RNAi效应,又可以引起翻译抑制。根据该酶蛋白质结构域的不同,核糖核酸内切酶-Ⅲ家族可以分为3个不同的种类。随着核糖核酸内切酶-Ⅲ结构和功能的进一步阐明,与核糖核酸内切酶-Ⅲ相关的技术在后基因组时代的基因功能研究、疾病治疗和药物开发中将具有广阔的应用前景。

微小核糖核酸调控去乙酰化酶对心肌代谢重构影响的研究进展

心脏需要糖脂代谢产生大量能量维持其高效运转,三磷酸腺苷(ATP)生成障碍可导致心脏功能受损,反之,心脏疾病时糖脂代谢发生重排,因而调控能量平衡极其重要。微小核糖核酸(miRNA)是调控转录后基因表达水平的一类小的非编码RNA,参与多种心血管疾病发生、发展过程,其调控代谢途径的关键环节,参与能量平衡的维持。去乙酰化酶(sirtuin,简称SIRT)利用NAD^+作为底物,能够使细胞感受到亚细胞区域的不同能量变化。而且,SIRT表达也由miRNA调控,涉及miRNA功能、乙酰化/去乙酰化重排和代谢改变等一个复杂的调节轴。本文重点介绍miRNA如何调控心肌代谢及miRNA调控SIRT对心肌代谢重构的意义,探讨miRNA作为心肌代谢生物标志物的潜在价值及利用miRNA治疗心血管疾病的相关研究。

壳聚糖纳米载体材料性能对抗乙肝免疫核糖核酸免疫活性的影响(英文)

背景:近年来抗乙肝免疫核糖核酸作为一种免疫治疗剂,对慢性肝炎的治疗作用备受重视,但临床应用效果不稳定,因此构建一个能有效保护免疫核糖核酸并能被组织更好吸收的免疫核糖核酸运载体系具有重要意义。壳聚糖作为一种新辅料取得了良好的效果。目的:制备抗乙肝免疫核糖核酸的壳聚糖纳米载体,观察其免疫活性。方法:实验于2003-12/04-12在华中科技大学同济医学院环境医学研究所完成。①制备壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒采用复凝聚方法。②壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒形态、粒径和表面电位测定采用扫描电镜、原子力显微镜、Zeta电位/粒度分析仪观察。③壳聚糖对包裹的免疫核糖核酸的保护作用观察采用核糖核酸酶保护试验。④壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒免疫活性采用白细胞黏附抑制试验测定。体内白细胞黏附抑制指数测定:取小白鼠30只,随机分4组,生理盐水组5只、壳聚糖组5只、壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒组10只和免疫核糖核酸组10只。腋下和腹股沟皮下分别多点注射生理盐水、壳聚糖、壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒和免疫核糖核酸溶液后,无菌取出小鼠脾脏,制成单细胞悬液,加入乙肝疫苗和小牛血清1640液及实验试剂,单纯脾细胞悬液作为对照,根据公式[(对照孔A值-实验孔A值)/对照孔]×100%计算黏附抑制指数。体外白细胞黏附抑制指数测定:取健康小鼠1只,制备脾细胞悬液,于培养孔板中加入健康小鼠脾细胞悬液、乙肝疫苗、壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒或免疫核糖核酸溶液或壳聚糖,对照孔不加乙肝疫苗,测定方法同上。结果:①壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒的物理特性:新鲜制备的壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒多呈球形,放置时间在48h以内形态较稳定,但粒径略有增大,放置时间超过72h以后肉眼可见液体中有絮状物析出。Zeta电位/粒度分析仪测定放置3,24,48,72h的壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒的平均粒径分别为132.60,138.46,167.28,486.24nm,平均表面电位为+12.8,+12.5,+10.59,+3.86mV。②壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒的酶保护试验结果:由于壳聚糖与免疫核糖核酸形成了复合物,免疫核糖核酸未被核糖核酸酶降解。当减少壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒量而加大核糖核酸酶量,免疫核糖核酸部分得到保护,部分被核糖核酸酶降解。③壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒免疫活性:体内白细胞黏附抑制试验结果纳米粒组显著高于其他3组(34.51±13.25,-5.50±8.78,5.87±2.06,12.39±6.51,P<0.01),免疫核糖核酸组显著高于壳聚糖和生理盐水组(P<0.05)。体外白细胞黏附抑制试验壳聚糖-免疫核糖核酸纳米粒白细胞黏附抑制率高于免疫核糖核酸和壳聚糖的黏附抑制指数(31.00%,6.55%,7.12%)结论:壳聚糖纳米粒可以有效的保护免疫核糖核酸,提高抗乙肝免疫核糖核酸的利用率和免疫活性,其保护作用与核糖核酸酶呈剂量效应关系。

微小核糖核酸在心肌梗死后的作用及机制研究进展

微小核糖核酸（microRNAs,miRNAs）是一类基因编码长度约22个核苷酸的非编码单链核糖核酸分子,参与调控转录后基因表达。通过与目的基因翻译结合抑制靶基因,从而调控蛋白质的表达,调节生理稳态,并参与包括心脏病、肌营养不良、糖尿病等多种疾病的发生和调节。目前miRNAs已成为分子生物学研究热点,通过对13个物种的检测发现14 197种miRNAs前体,

抗组织相容性复合物Ⅱ类分子转录激活因子核糖核酸酶P的切割活性

目的 研究抗组织相容性复合物(MHC)Ⅱ类分子转录激活因子(CⅡTA)核糖核酸酶P(RNaseP)抑制肝细胞表面MHC Ⅱ分子的表达。方法 M1—RNA是RNaseP的催化活性单位,设计并克隆针对C Ⅱ TA第629位点的M1-RNA(M1—629—GS)及其对应的C Ⅱ TA靶序列,分别插入腺相关病毒载体psNAV(psNAV—M1—629-GS)及pGEM—7zf(+)载体(pGEM—629),进行体外转录和切割反应鉴定其活性。通过纳米载体介导psNAV—M1—629—GS稳定转染人胎肝细胞,流式细胞术检测MHC Ⅱ类抗原表达,逆转录聚合酶链反应检测CⅡTA mRNA水平。结果 M1—629—GS与pGEM—800体外切割产物电泳见预期切割条带(553 nt和176 nt)。psNAV—M1—629—GS^+肝细胞表面人白细胞抗原(HLA)—DR、DP、DQ的诱导型表达分别为(1.01±0.51)％、(4.37±1.28)％、(1.98±0.42)％,对照组psNAV-M1—452-GS^+分别为(10.81±3.09)％、(40.12±2.60)％、(5.71±0.11)％,两组比较分别下调90.65％、89.11％及65.32％;psNAV—M1-629一GS^+克隆诱导型CⅡTA mRNA与β-actin比值为0.94±0.25,空载体组比值为2.30±0.49,M1—629—GS可明显下调C Ⅱ TA mRNA含量(t=5.56,P<0.01)。结论 抗C Ⅱ TA RNasep-M1—629—GS可发展为新一代抗肝移植排斥的核酸药物。

耐核糖核酸酶病毒样颗粒的构建和表达

目的 为耐核糖核酸酶 (RNase)的RNA标准品和质控品的表达制备提供 1个通用载体平台。方法 将MS2 噬菌体基因组中成熟酶蛋白和包膜蛋白基因编码序列的 1 7kbcDNA目的片段 ,用HindⅢ和EcoRⅠ酶切后 ,用于相同内切酶酶切的表达载体质粒pET2 8b中 ,并在T4 DNA连接酶的存在下连接 ,构建一新的表达载体pINCCL ,再转化BL2 1 DE3E Coli进行原核表达。结果 成功构建出新的表达载体pINCCL ,经原核表达为耐RNase的病毒样颗粒。结论 本研究得到的pINCCL表达载体及原核表达系统 ,可作为 1个耐RNase的RNA标准品与质控品的构建和制备表达通用载体平台 ,以促进有关标准品和质控品的研究。

核糖核酸酶抑制因子对四氯化碳诱发小鼠肝脏损伤的保护作用

核糖核酸酶抑制因子(RI),是RNA酶的体内抑制剂,广泛存在于哺乳动物细胞内[1],RI分子中半胱氨酸的氧化还原状态,直接影响到其结合与抑制RNA酶的活性[2].根据以往的研究[3],试图证明核糖核酸酶抑制因子是否在体内具有抵抗过氧化损伤的作用,并试图阐明其抗氧化损伤的机制.

A组溶血性链球菌抗DNA酶B抗体检测的临床应用价值探讨

应用微量法检测抗DNA酶B ,以探索其在A组溶血性链球菌感染所致疾病中的临床应用价值 ,同时用乳胶凝集法检测抗链球菌溶血素O (ASO)。结果显示 :风心组、急性肾小球肾炎组抗DNA酶B阳性率分别为 86 .5 %和 90 .7% ,显著高于ASO阳性率 5 1.9%、5 5 .8% (P <0 .0 5 )。而两者联合检测阳性率在 90 %以上。风湿热组、咽炎扁桃体炎组抗DNA酶B阳性率分别为 73 .5 %和 2 8.8% ,虽和ASO (6 7.6 % ,38.5 % )差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,但两者联合检测阳性率可达88.2 %和 5 7.7%。提示抗DNA酶B对急性肾小球肾炎、风湿热、风心病的诊断有重要的临床价值。ASO联合抗DNA酶B检测可提高A组溶血性链球菌的检出率 。

端粒酶特异性核酶抑制宫颈癌细胞的作用

目的 :研究端粒酶RNA特异性核酶对宫颈癌细胞活性的影响。方法 :通过脂质体将核酶转染至宫颈癌Hela细胞 ,以G4 18筛选细胞 ,经斑点杂交提示转染成功后 ,检测细胞活力及细胞周期变化 ,测定细胞端粒酶活性 ,观察细胞的增殖情况。结果 :试验组细胞的活力较对照组明显减弱。转染后细胞受阻于G1期的细胞明显增多 ,S期细胞比例明显降低 ,P <0 0 1。转核酶细胞端粒酶活性较对照组明显减低 ,转染空载体的细胞端粒酶活性与未转染细胞比较则无明显变化。结论 :端粒酶RNA特异性核酶可抑制宫颈癌细胞端粒酶活性 ,抑制细胞增殖 。