伴刀豆球蛋白亲和色谱柱的制备及其在糖蛋白核糖核酸酶B结构分析中的应用

通过对硅胶基质进行化学改性键合伴刀豆球蛋白(C on A),制备了对糖蛋白具有特异亲和作用的亲和色谱固定相;该固定相非特异性吸附弱,对于糖蛋白和糖肽的分离效果良好。对亲和色谱的分离条件进行了优化,以标准糖蛋白核糖核酸酶B(RN ase B)为模型,对其进行了纯化;用糖苷酶切除糖链,并对切除糖链前后的RN ase B用胰蛋白酶酶解;用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALD I-TO F M S)对亲和色谱分离得到的糖蛋白、糖链及糖肽进行了分析,确定了RN ase B的一级结构、糖含量、糖基化位点及糖连接方式。该方法快速准确,适于糖蛋白和糖肽的分离表征。将其应用于血清中糖蛋白及酶解后血清中糖肽的分离富集,取得了很好的效果。

MALDI-TOF-MS研究糖蛋白核糖核酸酶B的一级结构

本文应用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱 ( MALDI- TOF- MS)测定了糖蛋白核糖核酸酶 B的平均分子量及其糖基化程度。结合蛋白酶及内切糖苷酶酶切的方法 ,确证了核糖核酸酶 B的糖基化位点及糖苷键类型 ,测定值与理论值相符。为糖蛋白一级结构的直接质谱分析建立子快速、准确的方法。

甲链感染及抗链球菌脱氧核糖核酸酶B（ADNaseB）测定的价值

在进行甲组乙型溶血性链球菌（GAS）流行病学调查时，对GAS感染后产生的抗体抗链球菌脱氧核糖核酸酶（B（ADNaseB)进行了为期一年的追踪观察。结果显示重庆地区的ADNaseBGMT水平城乡分别为117u/ml与101u/ml，正常值最高限为200u/ml,≥240u/ml为异常值，城乡GAS感染率分别为26.2%与23.2%。ADNaseB、GAS感染率、风湿热9RF）发病率形成密切的联系。

甲链感染及抗链球菌脱氧核糖核酸酶B（ABDNaseB）测定的价值

在进行甲组乙型溶血性链球菌（GAS）流行病学调查时，对GAS感染后产生的抗体抗链球菌脱氧核糖核酸酶B（ADNaseB)进行了为期一年的观察，结果显示出重庆地区的ADNaseB GMT水平城乡分别为117u/ml与101u/ml，正常最高限为200u/ml,240u/ml为异常值，城乡GAS感染率分别为26．2％与23．2％，ADNaseBGAS感染率，风湿热（RF）发病率表成密切的联系。

抗DNA酶B检测在血清阴性脊柱关节病患者中的临床价值

目的:探讨血清阴性脊柱关节病(SpA)患者血清中抗DNA酶B滴度测定的临床意义。方法:采用微量滴定法和胶乳凝集法分别测定102例血清阴性脊柱关节病患者的抗DNA酶B和ASO滴度,同时检测其ESR、CRP和心电图,记录发热、周围关节痛、周围关节肿胀、心脏炎等症状、体征,按抗DNA酶B滴度阳性和阴性分成两组进行对比分析。结果:102例病人中抗DNA酶B阳性率为68.8%,ASO阳性率为34.3%,两者联合阳性率75.5%,周围关节痛在两组间有显著差异。结论:SpA患者中链球菌感染发生率较高,血清抗DNA酶B检测对于鉴别SpA合并GSA感染与单纯SpA病情活动有一定参考价值。

系统性红斑狼疮患者血清抗DNA酶B抗体检测的临床意义

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中抗DNA酶B抗体滴度测定的临床意义。方法采用微量滴定法分别测定了SLE患者77例和正常人43例血清中的抗DNA酶B抗体滴度,并结合临床资料进行对比分析。结果SLE组抗DNA酶B抗体的阳性率为76.6%;对照组55.8%,2组差异有统计学意义(χ2=5.60,P=0.018)。血清抗DNA酶B抗体阳性的SLE患者发热、关节炎、肾损害的发生率均显著增高(χ2依次为4.084,5.502,8.606,P分别为0.043,0.019,0.003);血清CRP增高,补体C3降低以及抗ds-DNA抗体、抗核小体抗体阳性者亦显著增多(χ2依次为4.247,9.899,4.987,6.512,P分别为0.039,0.002,0.026,0.011)。SLE活动期和非活动期抗DNA酶B抗体的阳性率分别为67.8%和16.7%,活动期患者显著为高(χ2=14.62,P=0.000)。结论SLE患者中A组溶血性链球菌(GAS)感染发生率高于正常人,SLE合并肾损害时需要排除GAS感染。GAS感染与SLE病情活动有一定的关系。

抗DNA酶B和ASO联合检测对急性肾小球肾炎诊断的临床价值

目的:探讨抗DNA酶B和ASO联合检测对A组溶血性链球菌(GSA)感染所致的急性肾小球肾炎(AGN)诊断的临床价值。方法:用微量中和法和散射速率法分别测定68例AGN病例的抗DNA酶B和ASO。结果:AGN组抗DNA酶B和ASO的阳性分别为77.9％和69.1％,二者联合检测的阳性率可提高至86.8％,AGN亚组中,抗DNA酶B和ASO的阳性率上感组为73.5％和69.4％,二者联合为83.7％,皮损组为89.5％和52.6％,二者联合为94.7％。结论:抗DNA酶B和ASO联合检测可提高GAS感染所致的AGN的病原学诊断阳性率,具有重要的临床价值。

A组β-溶血性链球菌DNase B基因序列的克隆与序列分析

目的 克隆A组β -溶血性链球菌 (GroupAStreptococcus,GAS)DNaseB基因序列。 方法 根据genBank中登录的多种DNA酶B的序列 ,进行同源性分析 ,设计相对保守的针对DNaseB基因的引物 ,以链球菌基因组为模板进行PCR扩增 ,目的片段经TA克隆至pMD18-T质粒后测定其核酸序列 ,然后进行序列的查询与比对。结果 成功克隆出A组链球菌DNaseB基因全长序列共 810bp ,其中包括中 12 8bp的信号肽编码区和 6 81bp的成熟肽编码区 ,以及 5’端非编码区的一个T。结论 A组 β-溶血性链球菌DNaseB基因序列的成功克隆 。

我国部分地区学龄儿童抗DNA酶B正常值水平探讨

目的探讨我国部分地区学龄儿童抗DNA酶B抗体正常值水平.方法从1994年9月至1995年8月,对我国不同地理位置4个省的学龄儿童[年龄8～13岁,平均(11.0±2.3)岁],包括湖北103名、广东589名、四川283名、吉林215名,共1190名(男618名,女572名),每3个月抽血1次,用微量法统一测定血清抗DNA酶B抗体水平.结果①抗DNA酶B的几何均值(GMT)水平:各地区间均差异有显著性(P＜0.01),以湖北最高(198 U/ml),其次是广东(140 U/ml)、四川(122 U/ml),吉林最低(85 U/ml).GMT水平较高的季节多在冬、春和秋季,夏季普遍较低.男女间差异无显著性(P＞0.05).②抗DNA酶B正常值上限:我国不同地区学龄儿童正常值上限为200～320 U/ml,4省合计为240 U/ml.其中湖北最高(320 U/ml),广东次之(240 U/ml),吉林和四川相同(200U/ml).结论正常值上限(240 U/ml)基本反映了我国不同地区学龄儿童抗DNA酶B正常水平,结果可信,可作正常值供临床和科研工作者参考.

ASO和抗DNA酶B抗体联合检测对风湿病诊断的临床意义

目的:研究溶血性链球菌感染引起的风湿病患者抗DNA酶B和ASO的血清学变化及意义。方法:收集30例急性风湿热、30例活动期风湿性心脏病、30例风湿性关节炎患者血清,免疫散射比浊法检测其抗DNA酶B和ASO水平。结果:三组患者的ASO阳性率分别为80%、57.3%、53.3%,抗DNA酶B检测阳性率分别为70%、85.7%、60%。除活动期风湿性心脏病组外,其余两组患者的ASO阳性率与抗DNA酶B检测阳性率间的差异无统计学意义(P>0.05)。三组患者的抗DNA酶B和ASO联合检测阳性率分别为90%、92.8、80%,均高于单一检测(P<0.05)。结论:ASO和抗DNA酶B抗体联合检测可提高风湿热诊断阳性率,对风湿热的诊断具有重要的临床意义。

抗DNA酶B在小儿A型溶血性链球菌感染中的诊断意义

目的探讨抗脱氧核糖核酸酶 B(抗 DNA酶 B)在小儿 A型溶血性链球菌感染所致疾病中的诊断价值。方法用抗 DNA酶 B微量法 ,测定 12 6例 A型溶血性链球菌感染所致疾病的小儿血清抗 DNA酶 B抗体 ,同时检测抗链球菌溶血素 O(ASO) ,对两种检测方法的阳性率进行比较。结果肾炎皮损组、咽炎痊愈及肾炎恢复组抗 DNA酶 B阳性率 10 0 % .0及 63 .3 % ,显示高于 ASO阳性率 2 0 .0 %及 2 3 .3 % ,两者联合检测阳性率均在 70 .0 %以上 ;不典型风湿热组 ,肾炎上感组及咽炎组抗 DNA酶 B阳性率分别为 10 0 .0 %、87.5 %和 62 .0 % ,虽和 ASO(80 .0 %、5 0 .0 %和 72 .0 % )无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ,但两者联合检测阳性率可达 10 0 %及 84.0 % ,提示抗DNA酶 B对急性肾小球肾炎诊断有重要的临床价值。结论 ASO联合抗 DNA酶 B检测可提高 A型溶血性链球菌感染的检出率。

川西地区学龄儿童抗DNA酶B在风湿热流行病学研究中的运用

目的:探讨川西地区学龄儿童抗DNA酶B抗体流行病学特点。方法:从1993年09月～1994年08月对四川省成都市青白江区城市和农村学龄儿童(年龄9～11岁),共197名(男113名,女84名)。每3个月抽血1次,用微量法统一测定血清抗DNA酶B抗体水平。结果:1.抗DNA酶B抗体滴度水平差异与季节、性别、地区关系:DNA酶B冬季稍高,其他三季相差小(P>0.05)。男性DNA酶B值高于女性DNA酶B值,其差异有统计学意义(P<0.05)。农村学生DNA酶B值冬季明显高于城市学生(P<0.05)2.DNA酶B与风湿热(RF)关系:DNA酶B随季节有一定变化,但尚未见统计学差异,以冬季稍高,而风湿热则明显秋冬季较高,两者流行趋势相似。结论:农村儿童青少年DNA酶B较城区几何滴度高,冬季较其他季节高均证实这一点。测定某一地区学龄儿童血清抗DNA酶B水平,可作为该地区RF流行水平的初步估测和进一步研究的参考。

抗DNA酶B检测用于强直性脊柱炎诊断临床价值研究

目的研究强直性脊柱炎患者血清中抗DNA酶B测定的临床价值。方法采用胶乳凝集法和酶联免疫吸附法(ELISA)测定2009年4—9月山东大学附属省立医院风湿免疫科门诊和病房收治的65例强直性脊柱炎(AS)患者和96名正常人血清中抗溶血性链球菌溶血素O(ASO)和抗DNA酶B抗体滴度,并按抗DNA酶B滴度阳性和阴性分成两组进行临床分析。结果 AS组ASO阳性率为47.7%,显著高于对照组(20.8%,P<0.05);AS组DNA酶B抗体阳性率58.5%,显著高于对照组(25.0%,P<0.05)。DNA酶B抗体和ASO两种抗体的检测在AS患者中差异无统计学意义(P>0.05)。抗DNA酶B阳性组的AS患者平均年龄明显低于阴性组(P<0.05)。AS患者抗DNA酶B阳性组膝关节、踝关节肿痛、臀部疼痛、"4"字征阳性、WBC升高、C反应蛋白升高的发生率明显高于阴性组(P<0.05)。结论 AS患者溶血性链球菌感染发生率高于正常人,链球菌感染与AS病情活动有一定的关系。

链球菌联合抗体测定对诊断风湿热、急性肾炎的临床价值

介绍抗链球菌脱氧核糖核酸酶B(ADNB)微量测定法,并评价了其联合抗链球菌溶血素“O”(ASO),对诊断急性风湿热(ARF)和急性肾小球肾炎(AGN)的价值,可使ARF由单项ASO测定的阳性检出率由70%提高至84%,使AGN由70%提高至81%,对帮助临床诊断A组乙型溶血性链球菌(AGS)感染及其后发症ARF和AGN具有重要价值.

糖蛋白糖基化位点及糖型的多重质谱分析

以糖蛋白核糖核酸酶B(RNase B)为研究对象,采用基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)、傅里叶变换离子回旋共振质谱(FT-ICR-MS)的碰撞活化解离(CAD)和电子转移解离(ECD)多种质谱技术对RNase B的糖肽的完整信息进行解析。通过多种质谱相互验证,确定了RNase B的糖肽组分的氨基酸序列为SRNLTK、糖链结构为(Hex NAc)2(Hex)5-(Hex NAc)2(Hex)9及糖基化位点为第34位氨基酸残基。本方法为糖蛋白结构的全面解析提供了一种快速、有效、全面的研究思路。

尿穿孔素和粒酶Bm RNA检测在诊断移植肾急性排斥反应中的意义

目的 探讨尿穿孔素、粒酶BmRNA检测在诊断移植肾急性排斥反应中的作用价值。 方法 应用竞争PCR方法对 34例肾移植患者 4 5份尿样中的穿孔素和粒酶BmRNA进行定量检测。 结果 急性排斥反应组 (n =10 )尿中穿孔素mRNA值 (1.2± 0 .4 )fg/μg总RNA ,粒酶BmR NA值 (1.1± 0 .5 )fg/μg总RNA ,显著高于非排斥组 [n =2 4 ,分别为 (- 0 .6± 0 .3)fg/μg总RNA和(- 0 .8± 0 .2 )fg/μg总RNA],P <0 .0 0 1。尿中细胞毒性分子mRNA水平与急性排斥反应发生时间和严重程度 (Banff分类级别 )无显著相关。当穿孔素mRNA值为 0 .9fg/μg总RNA时 ,诊断急性排斥反应的灵敏度和特异度分别为 85 %和 83% ,粒酶BmRNA值为 0 .4fg/μg总RNA时 ,诊断急性排斥反应的灵敏度和特异度分别为 81%和 78%。 结论 尿中穿孔素及粒酶BmRNA水平检测可以监测和诊断急性排斥反应的发生。

Cenicriviroc对HeLa细胞CCL2/CCL5 APOBEC3A/B以及HPV18 E6/E7 mRNA转录水平的影响

目的观察cenicriviroc处理后HeLa细胞中CCL2/CCL5、载脂蛋白B信使核糖核酸(mRNA)编辑酶催化多肽样蛋白3(APOBEC3)A/APOBEC3B(A3A/A3B)以及人乳头瘤病毒(HPV)18早期基因E6/E7 mRNA的相对表达量,探讨趋化因子受体与APOBEC3,以及与HPV早期基因mRNA转录水平间的关联性。方法MTT法检测不同浓度cenicriviroc对HeLa细胞的毒性;实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测50和25 nM cenicriviroc作用于HeLa细胞12、24、48 h后胞中CCR2/CCR5、CCL2/CCL5、A3A/A3B和HPV18 E6/E7 mRNA的相对表达量,并与未处理的HeLa细胞作比较。结果100 nM以下的cenicriviroc作用48 h内对HeLa细胞基本无毒性。50 nM cenicriviroc在处理12、24、48 h后,对CCR2/CCR5、CCL2/CCL5和HPV18 E6/E7 mRNA的转录水平均有一定的下调作用;而25 nM组仅在处理12 h时能显著下调CCR2、E6 mRNA的转录水平(P<0.05)。除12 h 25 nM组与对照组间A3A基因mRNA的相对表达量差异无统计学意义外,其余各时间点50、25 nM组均可明显升高A3A mRNA的相对表达量(P<0.05);两个浓度组胞内A3B mRNA的相对表达量均没有明显变化(P>0.05)。结论cenicriviroc在体外能抑制HeLa细胞CCR2/CCR5、CCL2/CCL5、HPV18 E6/E7 mRNA的转录水平,并上调胞内A3A mRNA的转录。