核糖醇发酵工艺研究

目的:研究球头三型孢菌Trichosporonoides oedocephalis ATCC 16958发酵生产核糖醇的工艺。方法:采用摇瓶发酵优化的方式,探索培养基组份及三羧酸循环抑制剂对该菌生长及发酵生产核糖醇的影响,并在7L发酵罐中对优化的条件进行发酵验证。结果:对于核糖醇生产,葡萄糖和酵母膏分别是最佳的碳源和氮源,当葡萄糖浓度为20%时,核糖醇产量为38.60g/L。以1%酵母膏为氮源时,核糖醇浓度为37.82g/L。发酵24h添加0.2%的柠檬酸,核糖醇产量提高30.35%。采用摇瓶培养的优化条件,在7L发酵罐中发酵120h核糖醇产量为38.66g/L。结论:实验获得的优化条件可进一步用于指导生产。

离子交换树脂纯化发酵液中的核糖醇

为从发酵液中获得核糖醇产品,采用离子交换树脂对发酵液中的核糖醇进行分离纯化,探讨了进样浓度、柱的高径比、温度以及洗脱速度对分离效果的影响。结果表明,PCR-642钙型离子交换树脂具有良好的选择性,在发酵液脱色、减压浓缩至原液的20%,进料量为25 g、层析柱的高径比为25,洗脱流速为3.0 mL/min的条件下对核糖醇发酵液进行分离,得到核糖醇组分的收率为91.60%,核糖醇产品纯度达99%以上,结构经红外光谱确证。

5-氧-烯丙基-2,3,4-三-氧-苄基-D-核糖醇的合成工艺改进

目的合成5-氧-烯丙基-2,3,4-三-氧-苄基-D-核糖醇。方法以D-核糖为原料,经甲苷化、苄基化、水解、肟保护、烯丙基化、脱肟、还原7步反应得到5-氧-烯丙基-2,3,4-三-氧-苄基-D-核糖醇。结果与讨论总收率55%,目标产物结构经核磁共振氢谱确认。该合成路线步骤少,绿色环保,适合工业化生产。

7,8-二甲基-10-(D-1-核糖醇基)-异咯嗪粗产品的HPLC-MS分析

报道了利用HPLC-MS方法分离分析半合成工艺生产的7,8-二甲基-10-(D-1-核糖醇基)-异咯嗪粗产品的方法．该方法以C18柱为色谱柱,甲醇／水为流动相,通过优化色谱条件,使产品中各杂质组分都得到了很好的基线分离．并对产品中各组分分别做了定性指派和定量分析．

巴西橡胶树葡萄糖/核糖醇脱氢酶基因的克隆和表达分析

割胶显著刺激新开割橡胶树胶乳产量,前期的比较蛋白质组学的研究中,已通过双向电泳的方法分离到一个随割胶下调的葡萄糖/核糖醇脱氢酶(GRDH,glucose/ribitol dehydrogenase)。通过搜索本实验室的橡胶树EST数据库和PCR扩增得到该蛋白点对应的全长c DNA序列并命名为Hb GRDH1。序列分析显示,c DNA的编码序列(CDS)为882 bp,推测编码294个aa,分子量大小为32.2 ku,等电点为5.18,基因组序列包含4个外显子和3个内含子。通过Realtime PCR和Solexa高通量转录组测序分析发现,Hb GRDH1主要在胶乳和雌花中表达,在叶片发育稳定期呈现明显的下调表达趋势;在新开割树胶乳中,前4刀该基因表达变化不明显,而第5刀开始呈现上调表达趋势;在胶乳中,乙烯利处理对该基因表达前12 h无明显影响,在24 h时呈明显的下调表达。本研究结果有助于进一步阐明橡胶树中Hb GRDH1基因的功能,特别是其参与橡胶树胶乳再生调控的分子机理。

弗氏葡糖杆菌产核糖醇脱氢酶研究

目的:研究弗氏葡糖杆菌产核糖醇脱氢酶的培养条件。方法:采用单因素实验研究了葡萄糖、氮源、金属离子Zn2+和Fe3+以及诱导物核糖醇对弗氏葡糖杆菌产酶的影响,并用优化的条件培养产酶进行核糖醇生物转化反应。结果:对于弗氏葡糖杆菌核糖醇脱氢酶的生产,当葡萄糖浓度2.5%、氮源玉米浆粉为1.0%、Zn2+浓度为4μmol/L、Fe3+浓度为2μmol/L时,对应的核糖醇脱氢酶活力分别为0.45U/mg、0.43U/mg、0.25U/mg和0.18 U/mg,生物转化验证实验表明反应30 h后核糖醇的转化率达97.73%,质谱分析表明产品符合L-核酮糖的结构。结论:实验获得的优化条件可进一步用于指导生产。

b型流行性感冒嗜血杆菌结合疫苗(磷酸多核糖基核糖醇-白喉毒素突变体197)的安全性和免疫原性研究

目的评价b型流行性感冒嗜血杆菌结合疫苗(Haemophilus Influenzae Typeb Conjugate Vaccine,Hib)[磷酸多核糖基核糖醇-白喉毒素突变体197(Polyribosylribitol Phosphate-Cross Reacting Material197,PRP-CRM197)]在中国儿童使用的安全性、免疫原性和加强免疫后的抗体应答。方法研究分三个阶段:第一阶段为I期安全性研究,先入组20名16～20月龄的幼儿,接种1剂Hib PRP-CRM197;15d后入组20名2～4月龄的婴儿,按间隔1个月的程序接种3剂Hib PRP-CRM197。每剂接种后收集30d内的安全性数据。第二个阶段为Ⅲ期基础免疫,入组916名2～4月龄受试者,随机分配到试验组(611人)和对照组(305人),分别接种3剂Hib PRP-CRM197或Hib PRP-T(Tetanus Toxoid,TT;破伤风类毒素)对照疫苗,每剂间隔1个月。第三个阶段为Ⅲ期加强免疫,对基础免疫完成3剂疫苗接种的受试者,于1周岁后加强免疫1剂。在Ⅲ期临床研究中,收集安全性和免疫原性的数据。抗-PRP抗体测定采用酶联免疫吸附试验。结果Ⅰ期安全性研究发现,Hib PRP-CRM197在两个年龄组(婴儿和幼儿)都有良好的耐受性。基础免疫和加强免疫的Ⅲ期临床研究表明,Hib PRP-CRM197的安全性和HibPRP-T相似。在完成基础免疫后1个月,实验组和对照组的所有受试者均达到了短期血清保护性抗-PRP抗体水平[≥0.15微克/毫升(g/ml)],且分别有99%和97%的受试者达到了长期血清保护性抗-PRP抗体水平(≥1.0g/ml)。在完成加强免疫后,所有受试者均达到了短期和长期的血清保护性抗体水平。与HibPRP-T组相比,接种HibPRP-CRM197始终产生更高的抗体几何平均浓度。结论 Hib PRP-CRM197疫苗在基础免疫和加强免疫后,都显示了良好的耐受性和快速的抗-PRP抗体应答。Hib PRP-CRM197的免疫原性不劣于HibPRP-T,且安全性也相似。Hib PRP-CRM197可用于中国儿童抗Hib感染的常规免疫接种。临床试验注册国家食品药品监督管理局《药物临床批件》2008L03160。

b型流行性感冒嗜血杆菌结合疫苗(磷酸多核糖基核糖醇-白喉毒素突变体197)在13～59月龄儿童中的安全性和免疫原性研究

目的评价b型流行性感冒嗜血杆菌结合疫苗(Haemophilus Influenzae Typeb Conjugate Vaccine,Hib)[磷酸多核糖基核糖醇-白喉毒素突变体197(Polyribosylribitol Phosphate-Cross Reacting Material197,PRP-CRM197)]在13～59月龄儿童中使用的安全性和免疫原性。方法选择728名13～59月龄儿童,按1:1的比例随机分配到试验组(365人)和对照组(363人),分别肌内注射接种1剂PRP-CRM197或Hib[PRP-T(Tetanus Toxoid,TT;破伤风类毒素)],观察接种后7d内的局部和全身反应,收集接种后30d内的不良事件和用药情况。在接种疫苗前和接种疫苗后30d采集静脉血,用酶联免疫吸附试验检测抗-PRP抗体(Antibody to PRP,Anti-PRP)。结果分别有99%和100%接种PRP-CRM197和PRP-T的受试者,达到了短期[≥0.15微克/毫升(g/ml)]和长期(≥1.0g/ml)血清保护性Anti-PRP水平。两种疫苗的安全性相似。结论 Hib(PRP-CRM197)的耐受性良好,免疫原性不劣于Hib(PRP-T),为99%的受试者提供了血清保护性Anti-PRP。Hib(PRP-CRM197)可在13～59月龄儿童中进行免疫。临床试验注册国家食品药品监督管理局《药物临床批件》2008L03160。

两种多元醇水热条件下还原所得产物铜的形貌

借助X射线衍射和扫描电镜,研究了180℃水热条件下,以CuSO4-5H2O和NaOH为原料,当[Cu2+]/[OH-]为1:4时,分别添加不同质量的两种多元醇D-山梨醇和核糖醇时还原产物铜的形貌.结果表明,在两种质量下,添加不同多元醇的产物有很明显的区别,添加D-山梨醇所得产物为叶形,添加核糖醇所得产物大多为表面粗糙的八面体.其机理是,当[Cu2+]/[OH-]为1:4时,D-山梨醇不仅作还原剂,而且可能与[Cu(OH)4]2-配位作导向剂决定晶体生长,而核糖醇仅作为还原剂.

N(3 ,4二甲苯胺基)-D-核糖苷加氢新型负载化镍催化剂(英文)

将活性组分镍分别担载于活性炭、海泡石、γ氧化铝、硅胶、锆胶、钛胶、ＮａＹ 型分子筛、硅藻土和白土等载体上，用作Ｎ（３ ，４二甲苯胺基）Ｄ核糖苷加氢反应的催化剂． 结果表明，载体酸碱性对加氢催化剂的活性与选择性有显著的影响，其中弱碱性的Ｎｉ／Ｃ 是该氢化反应有效的催化剂，Ｎ（Ｄ）脱氧核糖醇基３ ，４二甲苯胺的收率可达３５ ％ ．

L-核糖的生产研究进展

L-核糖是合成许多抗病毒药物的关键中间体,自然界和生物体中并不存在。L-核糖的制备方法有化学合成法和生物合成法。与化学合成法相比,生物合成法对环境更加有利。生物合成法是应用微生物及其酶以核糖醇或L-阿拉伯糖为原料生产L-核糖。综述了L-核糖的制备方法以及产品的分离纯化技术,并对L-核糖的研究现状和前景进行了展望。

生物转化生产稀有糖醇——阿洛醇(蒜糖醇)研究进展

阿洛醇(又称蒜糖醇)是一种低热量六碳稀有糖醇,不会导致肥胖和血糖升高,适合于肥胖、糖尿病人群。此外,因其具有润肠通便等作用,在食品、医药等领域具有重要应用。同时,阿洛醇还是合成其他具有重要生理功能的D/L-型稀有糖的原料。文中介绍了阿洛醇的应用价值、生物合成方法,对生物合成阿洛醇的生物酶、生产工艺及研究进展进行了综述,并对阿洛醇的生物合成进行了展望。

CRPPA基因变异导致肢带型肌营养不良症1例

报告1例CRPPA基因变异所致常染色体隐性遗传性肢带型肌营养不良症患者,总结CRPPA基因相关肌病的临床特点和致病变异谱。患者主要临床表现为双下肢无力7年,进行性加重。血清肌酸激酶水平轻度增高。肌电图提示肌源性损害。肌肉MRI表现为双侧大腿、小腿多发肌群信号异常。骨骼肌活检组织电镜下可见肌细胞胞浆内肌浆网轻度扩张,小脂滴轻度增多,可见少量萎缩肌细胞。基因检测提示携带CRPPA基因c.1114_1116delGTT(p.V372del)纯合变异。患者父母携带该位点杂合变异。根据ACMG指南将该变异分类为致病性变异。患者明确诊断为肌营养不良-抗肌萎缩相关糖蛋白病C7型。本文拓展了CRPPA基因和抗肌萎缩相关糖蛋白病的遗传变异谱和临床表型谱。

转基因植物生物安全标记基因

在大量转基因植物被推向市场的同时 ,人们对转基因植物对环境及人类健康等许多方面可能存在的风险感到担扰。标记基因的生物安全性成为人们普遍关注的问题之一。新的标记基因不仅要求能够对转基因植物进行筛选和鉴定 ,而且必须对环境和生物都是安全的。概述并评价了绿色荧光蛋白基因、核糖醇操纵子、6 磷酸甘露糖异构酶基因、木糖异构酶基因以及谷氨酸 1

10—1000BFC高压反应釜的生产应用

阐述了 10— 10 0 0 BFC高压反应釜的特点及 N— D—核糖醇基— 3 ,4—二甲苯胺生产中出现的问题 ,分析了设备产生故障的原因 ,提出了解决问题的改进措施。

水稻黄绿叶突变体yellow-green leaf 4的表型鉴定及候选基因定位和功能分析

[目的]本研究旨在对水稻黄绿叶突变体yellow-green leaf 4(ygl4)进行表型分析及基因定位和功能分析,探讨水稻叶绿体发育分子机制。[方法]水稻黄绿叶突变体ygl 4来自粳稻品种‘中花11’化学诱变突变体库。ygl 4与籼稻品种‘N22’杂交构建F_(2)分离群体以进行YGL 4基因定位,并利用实时定量PCR和亚细胞定位等技术对基因进行初步功能分析。[结果]相比于野生型,ygl 4在幼苗2~3叶龄出现黄绿叶症状,在6月下旬移栽大田后,黄绿叶症状加剧,甚至开始出现白化,突变性状可以一直保持到全生育期直到种子成熟。温敏性试验表明,ygl 4突变体在20℃表现出更严重黄化表型。透射电镜观察表明,ygl 4的叶片细胞结构中出现了较多的双膜囊泡结构。基因定位显示,ygl 4突变性状由1个隐性核基因LOC_Os 04g42000突变导致。该基因编码一个核黄素合成途径中的关键酶,6,7-二甲基-8-核糖醇基二氧四氢蝶啶合酶(LS),且突变体叶色表型可被外施核黄素恢复为正常表型。亚细胞定位结果显示YGL4定位于叶绿体。实时定量PCR分析表明,在突变体中,叶绿素暗反应阶段参与5-氨基乙酰丙酸(ALA)到原叶绿素酸酯合成过程的基因表达上调。[结论]水稻YGL 4编码LS基因,并通过调控植物体内核黄素合成途径影响叶色和叶绿体发育。

对乙型肝炎患者检测乙肝表面抗原大蛋白和前S_1抗原的区别和临床意义

目的检测乙型肝炎(下称乙肝)患者血清中乙肝表面抗原大蛋白(LHBs)、乙肝前S1、HBV-DNA,探讨LHBs用于乙肝患者临床诊断的意义。方法采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测LHBs以及乙肝前S1,采用化学发光方法检测乙肝两对半,采用荧光定量PCR方法对患者HBV-DNA进行检测。结果 (1)相同乙肝模式患者血清LHBs与HBV-DNA检出率差异无统计学意义(P>0.05);(2)HBeAg阳性患者血清中LHBs与HBV-DNA阳性率均明显高于HBeAg阴性患者,差异有统计学意义(P<0.05);(3)相同乙肝模式患者血清乙肝前S1的检出低于HBV-DNA的检出,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LHBs可以弥补由于乙肝病毒变异引起的HBeAg检测的不足,并在一定程度上反映了乙肝患者肝功能状况。

枳黄方对酒精性肝损伤大鼠肝胃ADH_1 mRNA的影响

目的:探讨枳黄方对大鼠酒精性肝损伤的防护作用及其机理。方法:将30只SD大鼠随机分为3组:空白对照组、酒精攻击组、枳黄方防护组,每组10只。10天后,处死大鼠,取大鼠肝脏进行HE染色观察肝病理变化,RT-PCR法测定肝、胃组织ADH1mRNA的变化。结果:枳黄方能缩短大鼠醉酒时间(P<0.05),枳黄方防护组肝、胃病理表现较模型组明显改善,其肝、胃ADH1mRNA表达量高于模型组(P<0.01)。结论:枳黄方对大鼠酒精性肝损伤有较明显的防护作用,这可能与其能提高肝、胃ADH1mRNA的表达有关。