雌二醇对骨髓基质细胞核结合因子α_1基因及成骨细胞生成的影响(英文)

目的研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的条件培养体系中,17β-雌二醇(E2)对其核结合因子α1(Cbfα1)基因表达的影响,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。方法取自1只3月龄雌性SD大鼠骨髓基质细胞在生长培养基中传代后,用1,25(OH)2D3和地塞米松(DEX)诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化。应用半定量RT-PCR技术,观察不同浓度E2对骨髓基质细胞分化过程中核结合因子α1mRNA表达的影响,以α-磷酸奈酚为底物,测定细胞碱性磷酸酶的活性,VanGieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量。结果E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中Cbfα1mRNA的表达,且呈剂量依赖性。E2浓度为0,1×10-10,1×10-8和1×10-6mmol/L时,Cbfα1mRNA的表达量分别为23.4%±1.8%,21.8%±2.0%,15.8%±1.5%(t=6.3,P<0.01)和5.8%±0.8%(t=17.8,P<0.01)。Northernblot结果显示Cbfα1mRNA的表达量分别为4.22±0.11,2.51±0.12(t=21,P<0.01),1.88±0.10(t=31,P<0.01)和1.17±0.09(t=41,P<0.01)。ALP活性随E2浓度增加而降低,在上述E2浓度时,ALP活性分别为(42.6±2.5)U/g,(17.9±2.0)U/g(t=15,P<0.01),(10.8±1.5)U/g(t=21,P<0.01)和(3.6±0.7)U/g(t=29,P<0.01)。细胞Ⅰ型胶原的含量随E2浓度增加而降低。结论E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中Cbfα1mRNA的表达。

雌二醇对骨髓基质细胞核结合因子α1基因表达的影响

目的 :研究骨髓基质细胞 (MSCs)在向成骨细胞(OB)分化的条件培养体系中 ,17β 雌二醇 (E2 )对其核结合因子α1(corebindingfactorα1,Cbfα1)基因表达的影响 ,探讨E2对OB生成的作用及绝经后高转换骨代谢的可能机制 .方法 :取自 3mo龄雌性SD大鼠MSCs在生长培养基中传代后 ,用1,2 5 (OH) 2 D3 和地塞米松 (DEX)诱导MSCs向OB分化 .应用半定量RT PCR技术 ,观察不同浓度E2 对MSCs分化过程中Cbfα1mRNA表达的影响 ;以α 磷酸奈酚为底物 ,测定细胞碱性磷酸酶 (ALP)的活性 ;VanGieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量 .结果 :E2 能明显抑制MSCs分化过程中Cbfα1mR NA的表达 ,从 (2 3.4± 1.8) %降至 (15 .8± 1.5 ) %和 (5 .8± 0 .8) % (P <0 .0 5 ) ;细胞ALP活性随E2 浓度增加而降低 ,从(70 6± 37)nkat·g-1(protein)降至 (6 3± 5 )nkat·g-1(P <0 .0 5 ) .E2 降低细胞Ⅰ型胶原的合成 ,用VanGieson染色细胞 ,随着E2 浓度的增加 ,胞质染色由鲜红、淡红到黄色 .结论 :E2能明显抑制MSCs分化过程中Cbfα1mRNA的表达 ,减少OB的生成 .

应力对纯钛表面成骨细胞核结合因子α1形成和表达的影响

目的观察应力对纯钛表面成骨细胞核结合因子α1(Cbfα1)形成及表达的影响,揭示应力对支抗种植体周骨反应的调控机制。方法用大小为2.205N的间断离心力刺激接种于纯钛表面的成骨细胞,刺激频率为每培养4h加力15min,分别于4、8、12h后收集细胞,采用免疫荧光法检测Cbfα1的形成,提取总RNA并应用逆转录聚合酶链反应检测Cbfα1mRNA的表达。结果纯钛表面加力组和不加力组MG-63成骨细胞的细胞核内均有Cbfα1荧光染色,且加力组Cbfα1蛋白荧光强度较不加力组多,差异有统计学意义(P<0.05);纯钛表面加力组和不加力组MG-63成骨细胞Cbfα1mRNA表达均为阳性,且加力组Cbfα1mRNA表达较不加力组多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成骨细胞受力后Cbfα1基因形成和表达增强,提示间歇性的牵引应力可以促进纯钛表面成骨细胞的活性。

重组结缔组织生长因子对体外培养成骨细胞核结合因子α1基因表达的影响

目的:研究发现,结缔组织生长因子可促进软骨细胞和成骨细胞的增殖及其表型的发生,在骨骼发育以及骨量维持方面发挥重要作用,但其对成骨细胞的作用机制目前尚不清楚。观察重组结缔组织生长因子对体外培养人成骨细胞核结合因子α1基因表达的影响。方法:实验于2006-01/2007-01在日照市人民医院完成。①实验材料:外科手术取正常成人髂骨松质骨,患者对试验知情同意。②实验方法:体外培养正常人成骨细胞,用不同浓度0,50,100,200,1000μg/L的重组结缔组织生长因子(0μg/L作为空白对照组)干预48h后,抽提细胞总RNA和总蛋白。③实验评估:采用半定量反转录-聚合酶链反应和蛋白免疫印迹分析方法观察不同浓度重组结缔组织生长因子对体外培养人成骨细胞核结合因子α1基因表达的影响。结果:半定量反转录-聚合酶链反应和蛋白免疫印迹结果显示,50,100,200,1000μg/L重组结缔组织生长因子干预后均可显著上调成骨细胞核结合因子α1的表达,并呈明显剂量依赖关系,与空白对照组比较,差异显著(P<0.01)。结论:重组结缔组织生长因子可剂量依赖性上调成骨细胞核结合因子α1基因的表达,核结合因子α1可能参与了结缔组织生长因子对成骨细胞增殖和分化的调节。

核结合因子相关的急性髓系白血病的临床分析

目的探讨影响核结合因子(CBF)相关的急性髓系白血病(AML)患者临床特征、细胞遗传学特点及影响其生存、预后的主要因素。方法对130例CBF AML[其中AML伴t(8;21)87例、AML伴inv(16)/t(16;16)43例]患者进行随访,分析其免疫表型、染色体核型及治疗、生存情况、影响总体生存时间及无复发生存时间的因素。结果 130例CBF AML患者总完全缓解率96.1%,其中1疗程总完全缓解率77.2%。中位生存期(OS)51.64(0.26～132.5)个月,中位无复发生存期(RFS)未达1.18～96.62个月。3年OS率50%,5年OS率41%;3年RFS率59%,5年RFS率54%。年龄、染色体核型与OS有关,其中年龄≥45岁患者、染色体核型伴9q-的患者预后差、生存期短。在巩固治疗过程中采用≥2疗程的中剂量阿糖胞苷(Ara-C)巩固治疗方案的患者预后好,生存期长。OS、RFS对比分析显示:AML伴inv(16)/t(16;16)的OS较AML伴t(8,21)明显延长(P=0.046),但AML伴t(8,21)的RFS较AML伴inv(16)/t(16;16)明显延长(P=0.038)。结论年龄、染色体核型及巩固治疗的方案是影响CBFAML患者生存、预后的主要因素,在巩固治疗中采用≥2疗程的中剂量Ara-C可以延长CBF AML患者的OS、RFS。AML伴inv(16)/t(16;16)患者较AML伴t(8,21)患者总体生存期长、预后好。

中药骨康调控成骨细胞核内结合因子α1的表达

背景:中药骨康在临床上治疗骨质疏松疗效明确,但其具体作用途径尚不清晰。目的:假设中药骨康通过调节核内结合因子 a1 水平,控制其下游基因核因子κB受体活化因子配体和骨保护素表达,起到调控成骨细胞生长发育的作用。方法:新生 24 h 内的 SD 乳鼠用于成骨细胞的分离培养。成年 SD 雌性大鼠用于制备药物血清,随机分为正常血清组和中药骨康组。2 组大鼠按体表面积的方法给予中药骨康方的提取药物和生理盐水灌胃,连续给药 1周。最后一次用药后 2 h 行心脏采血,分离血清。原代培养并传至第 3 代经碱性磷酸酶鉴定取得的大鼠成骨细胞,消化计数铺板并分为 2 组,以上述血清处理 72 h,MTT 法检测成骨细胞的增殖率,ELISA 方法检测碱性磷酸酶分泌量并以相应吸光度值进行纠正,运用 RT-PCR 检测 2 组成骨细胞核内结合因子α1 及其下游核因子κB受体活化因子配体和骨保护素 mRNA 表达情况。结果与结论:中药骨康组成骨细胞骨保护素和核内结合因子 a1 mRNA 水平显著高于正常血清组,核因子κB受体活化因子配体蛋白和 mRNA 水平显著低于正常血清组(P < 0.01)。实验结果证实,中药骨康可通过影响核内结合因子 a1 表达,调控其下游基因核因子κB受体活化因子配体和骨保护蛋白表达和分泌,进而发挥治疗骨质疏松的作用。

核结合因子a1的调控机制

Cbfa1是骨发育过程中调节骨髓基质干细胞向成骨细胞分化和成熟的重要转录因子。Cbfa1的表达水平异常与骨骼系统疾病有关。体内体外实验证实多种通路(如Wnt/LRP5/-catenin,BMP/Smads,1,25-(OH)2-vitaminD3/VDR/VDRE途径)和调节蛋白(Msx2,Dlx5,Twists)在Cbfa1基因表达、活性和随后的骨形成过程中起关键作用。这些发现对调控成骨细胞分化和治疗骨质疏松以及其他伴有骨量改变的疾病治疗提供了新的思路,这些疾病有可能用控制Cbfa1表达来进行治疗。

氧化应激基因表达与k基因结合核因子

氧化应激基因表达与ｋ基因结合核因子周玫，陈瑗（第一军医大学自由基医学研究室，广州５１０５１５）关键词ｋ基团结合核因子，氧化应激，基因表达调控氧化应激在很多疾病的发病机制中起着重要作用，并直接与衰老过程有关。细胞对氧化应激的反应特点是很快地诱导很多基因...

核结合因子1表达的调控

核结合因子 1(Cbfa1)是成骨细胞分化的一个特异性转录因子 ,在骨骼发育过程中起着重要的作用。体内体外实验表明Cbfa1的表达受多种因素影响 ,同时它又对成骨细胞数个基因的表达起着调节作用 。

辛伐他汀对兔动脉粥样硬化斑块中核因子κB-DNA结合活性和基质金属蛋白酶1及3表达的影响

目的观察辛伐他汀对兔动脉粥样硬化斑块中核因子κB-DNA结合活性和基质金属蛋白酶1及3表达的影响,进一步探讨辛伐他汀降脂效应以外的抗动脉粥样硬化作用机制。方法36只雄性新西兰大耳白兔被随机分为低脂对照组、高脂对照组和辛伐他汀组,喂养12周。实验结束时,分别用酶标法、电泳移动迁移技术、免疫组织化学和形态学方法观察三组兔的血脂水平、主动脉组织中核因子κB-DNA结合活性、基质金属蛋白酶1和3的表达及血管内膜厚度。结果实验结束时,低脂对照组和辛伐他汀组血脂水平、核因子κB-DNA结合活性、基质金属蛋白酶1和3的表达及血管内膜厚度均明显低于高脂对照组(P<0.05);辛伐他汀组血脂水平与低脂对照组相比无明显差异,但核因子κB-DNA结合活性、基质金属蛋白酶1和3的表达及血管内膜厚度均明显低于低脂对照组(P<0.05)。结论辛伐他汀可以抑制核因子κB-DNA结合活性,减弱基质金属蛋白酶1和3的表达,延缓动脉粥样硬化的形成。

κ基因结合核因子、白细胞介素-24以及Mimecan基因与临床子宫内膜癌的关联性研究

目的探讨κ基因结合核因子(NF-κB)、白细胞介素-24(IL-24)以及Mimecan基因与临床子宫内膜癌的关联性。方法将子宫内膜癌患者115例依照子宫内膜癌分期的不同分为子宫内膜癌Ⅰ期组(30例)、子宫内膜癌Ⅱ期组(32例)、子宫内膜癌Ⅲ期组(28例)以及子宫内膜癌Ⅳ期组(25例),另外选取健康女性30例为健康组进行对比研究,5组分别测定血清中NF-κB、IL-24以及Mimecan基因水平并进行相关性分析。结果子宫内膜癌Ⅰ期组、Ⅱ期组、Ⅲ期组以及Ⅳ期组患者血清中NF-κB、IL-24以及Mimecan基因含量较健康组均有明显的升高(P均<0.05);子宫内膜癌4组间两两比较,NF-κB、IL-24以及Mimecan基因均具有明显的差异(P均<0.05);子宫内膜癌患者血清中κ基因结合核因子、IL-24以及Mimecan基因含量与病情严重度存在正相关(r=0.81,r=0.70,r=0.74,P<0.05);子宫内膜癌患者血清中NF-κB水平与Mimecan基因水平存在正相关(r=0.77,P均<0.05),NF-κB水平与IL-24水平也存在正相关(r=0.79,P<0.05)。结论 NF-κB、IL-24以及Mimecan基因三者之间的相互协同作用,共同促进了临床子宫内膜癌的发生以及发展。

核结合因子促进骨髓间质细胞MBA-1凋亡

目的:研究核结合因子(core b ind ing factor alpha 1,Cbfa1)的2种亚型Cbfa1/P56和Cbfa1/P57对骨髓间质细胞MBA-1凋亡的影响,并探讨其促进MBA-1凋亡的作用机制。方法:用带有Cbfa1/P56或Cbfa1/P57全长cDNA的质粒瞬时转染到骨髓间质细胞MBA-1,72 h后用流式细胞仪观察细胞凋亡率的变化,并抽提蛋白进行Cbfa1及相关凋亡蛋白Bax,Bc l-2,cytochrom e-C,caspase-3,caspase-9和TNF-α的免疫印迹检测。结果:流式细胞仪检查发现,转染Cbfa1/P56或Cbfa1/P57质粒后,MBA-1细胞的凋亡率明显增加。W estern b lot显示,Cbfa1/P56或Cbfa1/P57能增加Bax蛋白表达和Bax/Bc l-2比值,并增加cytochrom e-C,caspase-3,caspase-9,TNF-α蛋白的表达。结论:Cbfa1/P56和Cbfa1/P57能诱导骨髓间质细胞MBA-1凋亡。Cbfa1促进MBA-1凋亡的机制包括线粒体途径和膜受体途径2种,凋亡相关蛋白Bax,Bc l-2,cytochrom e-C,caspase-9和caspase-3组成的信号级联反应构成了Cbfa1促进MBA-1凋亡的信号转导通路,TNF-α也参加了该凋亡的信号转导。

核基质结合因子SAFB蛋白家族的研究进展

SAFB(scaffold attachment factor B)是一种核基质结合因子,属于一个核蛋白家族,目前共发现3个家族成员,首先发现的是SAFB1,第二个是SAFB2,第三个是SLTM。SAFB结构上有一些重要的功能域,包括N端DNA结合域(SAF-Box),中部含有RRM(RNA recognition motif),C端富含Glu/Arg和Gly。这些高度保守的区域反映了SAFB在转录和细胞功能中起着非常重要的作用。研究证明,SAFB参与了包括转录调节、RNA剪接、细胞增殖和凋亡、生长发育和繁殖等生物学进程。文章主要对SAFB蛋白家族的结构和生物学功能进行了论述,以期为SAFB蛋白在生物医学领域研究中提供新的方向和思路。

与A20结合的核因子-κB抑制蛋白1的研究进展

与A20结合的核因子κB抑制蛋白1(A20 binding inhibitor of NF-κB activation,ABIN1)是近年来研究发现的一个新泛素结合蛋白。最初的研究表明,ABIN1通过结合锌指结构蛋白A20在NF-κB信号通路中发挥重要的调节作用。目前发现,ABIN1在过表达的条件下能抑制肿瘤坏死因子、白细胞介素1、脂多糖、表皮生长因子等诱导的NF-κB的活性,从而发挥抗炎和免疫调节作用。因此,以ABIN1为新靶点调节NF-κB活性的研究日益受到关注。本文就ABIN1蛋白结构、功能及其研究进展做一综述。

核结合因子a1在成骨细胞分化和骨形成中的作用

核结合因子a1(corebindingfactora1,Cbfa1)是近年来发现的一个成骨细胞特异性转录因子,在转录水平与多种成骨细胞相关基因的启动子相结合调控其表达,Cbfa1在间充质干细胞向成骨细胞分化及成骨细胞产生细胞外基质矿化成骨过程起重要作用。抑制或增强Cbfa1的表达均将引起相应表型的变化。

核受体结合因子2对自噬起始复合物PI3KC3-C1活性的调节作用

目的·研究核受体结合因子2(nuclear receptor-binding factor 2,NRBF2)的不同磷酸化水平对Ⅲ型磷脂酰肌醇-3-激酶复合物Ⅰ(classⅢphosphatidylinositol 3-kinase complexⅠ,PI3KC3-C1)的活性影响,寻找一种活性最高的PI3KC3-C1作为自噬特异性小分子抑制剂筛选的靶标。方法·首先通过建立体外蛋白纯化体系,分别获得四元不含NRBF2的PI3KC3-C1和五元包含不同磷酸化水平NRBF2的PI3KC3-C1,通过凝胶过滤色谱检测复合物的完整性,然后体外测定纯化的不同PI3KC3-C1的激酶活性差异,观察NRBF2的磷酸化对PI3KC3-C1活性的影响。结果·纯化的PI3KC3-C1具有良好的纯度和产量。包含NRBF2的五元PI3KC3-C1表现出比四元的蛋白复合物更高的激酶活性,其中包含持续去磷酸化NBRF2的PI3KC3-C1具有最高的酶活性。结论·NRBF2确实作为PI3KC3-C1的组分之一稳定存在,NRBF2的存在可提升PI3KC3-C1的激酶活性;包含持续去磷酸化NRBF2的PI3KC3-C1可以作为一种新的自噬调控靶标,用来筛选自噬特异性小分子抑制剂。

核结合因子-κB及bcl-2/bax在PQ中毒鼠肺组织中的表达

目的探讨NF-κβ、bcl-2/bax基因在百草枯中毒鼠所致急性肺损伤中的表达.方法 80只SD雄性大鼠分为对照组(C组30只)、百草枯中毒组(PQ组50只).PQ组一次性灌胃PQ 25 mg/kg染毒,C组予等体积生理盐水灌胃.观察各组大鼠在中毒后6 h、12 h、1 d、3 d、5 d肺组织病理改变,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织bcl-2和bax m RNA的表达.采用ELISA方法检测肺泡灌洗液中PMN的NF-κβp65表达.结果 C组肺组织结构完整,无炎症细胞渗出.PQ组肺组织炎性细胞浸润明显增多,且随时间推移肺损伤加重.PQ组bcl-2m RNA的表达于6 h后最强,至3 d仅有少量表;bax m RNA的表达于1 d达高峰,第5天仍有少量表达;bcl-2/bax比例为促凋亡的bax基因占优势,且随着时间的推移这种优势越来越明显;与相应点C组相比差异有统计学意义(P<0.05);PQ组染毒1d时NF-κβp65即有明显表达,3d时表达最强,5d后明显减弱,与C组比较差异有统计学意义(P<0.01).PQ组NF-κβp65与bcl-2表达呈正相关(r=0.71,P<0.01);NF-κβp65与bax表达呈负相关(r=-0.77,P<0.01).结论 NF-κβ、bcl-2/bax介导的肺细胞炎症反应可能是PQ中毒所致急性肺损伤的机制之一.

肿瘤坏死因子受体相关因子联合核因子-κB激酶结合激酶1和干扰素刺激因子基因在介导DNA疫苗免疫中的作用

肿瘤坏死因子受体相关因子联合核因子-κB激酶结合激酶1(TBK1)基因不但在DNA疫苗诱导体液免疫和细胞免疫等特异性免疫时发挥着重要的作用,而且在诱导固有免疫方面也有其独特的作用。干扰素刺激因子基因(STING)是由TBK1基因诱导Ⅰ型干扰素产生从而在固有免疫反应时不可缺少的组分。本文就TBK1和STING基因在介导DNA疫苗免疫中的作用作一综述。

淀粉样前体蛋白5'端启动子非翻译区域的核因子结合区可调控基因表达

细胞外大量β淀粉样蛋白（Aβ蛋白）的堆积是Alzheimer病（AD）和DOWN综合症的神经病理学表现。Aβ蛋白来源于大量的有差别剪接的淀粉样前体蛋白（APP）。有数据显示APP基因的表达水平对AB蛋白堆积的病理过程有重要作用。APP基因的5’端非翻译区域（UTR），包含147对碱基对，从转录位点的（＋1）到翻译起始位点，决定着APP的表达。转录起始位点临近部位的缺失可在转录水平上部分降低APP启动子的表达，尽管去除位点＋50～＋104对转录激活没有作用，

微小RNA-155通过调控核苷酸结合寡聚化结构域蛋白1/核因子κB信号通路加剧新生大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的探讨微小RNA-155(miRNA-155)是否通过调控核苷酸结合寡聚化结构域蛋白1(NOD1)/核因子κB(NF-κB)信号通路在新生大鼠缺氧、缺血性脑损伤中发挥作用。方法选择新生雄性大鼠40只,分4组,每组10只。分别是假手术组、缺氧缺血组(HI组)、阴性对照组(NC antagomir组)、miRNA-155抑制组(miRNA-155antagomir组)。大鼠经10%水合氯醛(400 mg/kg)麻醉后取左脑测定脑组织含水量;采用HE染色,于光学显微镜下观察各组大鼠脑海马组织病理形态学改变;采用Western blotting法检测各组大鼠脑组织中NOD1、NF-κB p65、NF-κB p50、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)和p-NF-κB p50的蛋白表达水平;采用Real-time PCR法检测各组大鼠脑组织及血清中miRNA-155、NOD1、NF-κB p65和NF-κB p50的mRNA表达水平。结果与假手术组相比,HI组和NC antagomir组新生大鼠脑组织含水量显著升高,miRNA-155 antagomir组显著降低(P <0. 05);假手术组海马细胞排列整齐,细胞形态结构及层次清晰完整,无空泡,间质无水肿;HI组和NC antagomir组可见海马细胞排列紊乱,形成空泡,胶质细胞增生,细胞间隙增宽出现水肿,坏死细胞数增多;miRNA-155 antagomir组脑组织水肿明显减轻,海马细胞排列紊乱现象有所改善,坏死细胞数减少。与假手术组相比,HI组和NC antagomir组新生大鼠NOD1、p-NF-κB p65和p-NF-κB p50蛋白表达水平显著升高,而miRNA-155 antagomir组与HI组和NC antagomir组相比显著降低,差异均具有统计学意义(P <0. 05);HI组和NC antagomir组新生大鼠脑组织及血清NOD1 mRNA表达水平显著高于假手术组,miRNA-155 antagomir组NOD1 mRNA表达水平与HI组和NC antagomir组相比显著降低(P <0. 05),但各组大鼠NF-κB p65及NF-κB p50的表达水平差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 MiRNA-155可通过调控NOD1/NF-κB信号通路促进新生大鼠缺氧、缺血性脑损伤,其作用机制可能与miRNA-155激活NOD1信号通路,促进下游NF-κB发生磷酸化,加剧缺氧、缺血新生乳大鼠脑组织炎症。