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鸟嘌呤核苷酸交换因子1与厚体1在胃癌发生发展及转移过程中的作用研究
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作者 白力嘎 王家宏 宋一波 《当代医学》 2024年第3期35-39,共5页
目的检测鸟嘌呤核苷酸交换因子1(Vav1)、厚体1(Dkk1)在胃癌及癌旁组织中的表达水平,探讨Vav1和Dkk1在胃癌发生发展及转移过程中的作用及临床价值。方法选取2020年6月至2022年6月于内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院外科行胃癌根治... 目的检测鸟嘌呤核苷酸交换因子1(Vav1)、厚体1(Dkk1)在胃癌及癌旁组织中的表达水平,探讨Vav1和Dkk1在胃癌发生发展及转移过程中的作用及临床价值。方法选取2020年6月至2022年6月于内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院外科行胃癌根治术且经过病理确诊的57例胃癌患者作为研究对象,收集患者胃癌组织、癌旁组织(癌组织边缘5 cm)各57份。应用免疫组化法检测Vav1和Dkk1在胃癌及癌旁组织中的表达,分析胃癌中Vav1与Dkk1阳性表达率的相关性,不同临床病理特征与Vav1和Dkk1表达情况的关系,ROC曲线分析Vav1和Dkk1在胃癌中的诊断价值。结果胃癌组织中Vav1和Dkk1的阳性表达均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。Vav1和Dkk1在癌旁组织很少表达,Vav1和Dkk1在胃癌组织中表达于细胞质,镜下可见胞质中散在黄色或黄褐色染色的颗粒。Vav1阳性与阴性患者肿瘤分期、淋巴结转移、肿瘤直径比较差异有统计学意义(P<0.05),性别、年龄、肿瘤部位、分化程度比较差异无统计学意义。Dkk1阳性与阴性患者分化程度、肿瘤分期、淋巴结转移和肿瘤直径比较差异有统计学意义(P<0.05),性别、年龄、肿瘤部位比较差异无统计学意义。胃癌中Vav1与Dkk1阳性表达率呈正相关(r>0,P<0.05)。Vav1和Dkk1的AUC分别为0.952和0.857,对胃癌的诊断效能均较理想。结论Vav1、Dkk1在胃癌中的表达呈正相关。Vav1和Dkk1在胃癌发生发展及转移过程中起重要作用,Vav1、Dkk1特异性靶向药物有望为胃癌有效治疗提供新思路。 展开更多
关键词 胃癌 鸟嘌呤核苷酸交换因子1 厚体1 免疫组化法
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前列腺癌组织肝激酶B1,Rab鸟嘌呤核苷酸交换因子-5 mRNA表达水平与临床病理特征和预后的相关性研究 被引量:2
2
作者 荣蓉 古颖 +1 位作者 高翔 张磊 《现代检验医学杂志》 CAS 2021年第6期1-5,26,共6页
目的研究前列腺癌患者癌组织中肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1)及Rab鸟嘌呤核苷酸交换因子-5(Rab guanine nucleotide exchage factor-5,Rab EX-5)mRNA表达及临床意义。方法应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测92例前列腺癌组织和80例良... 目的研究前列腺癌患者癌组织中肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1)及Rab鸟嘌呤核苷酸交换因子-5(Rab guanine nucleotide exchage factor-5,Rab EX-5)mRNA表达及临床意义。方法应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测92例前列腺癌组织和80例良性前列腺增生组织中LKB1及RabEX-5 mRNA的表达,比较LKB1,RabEX-5 mRNA表达组间差异及与临床病理特征的关系。Pearson线性相关分析LKB1与RabEX-5 mRNA表达的相关性。Kaplan-Meier生存分析LKB1,RabEX-5 mRNA表达与前列腺癌患者生存预后的关系。多因素COX回归分析影响前列腺癌患者生存预后的危险因素。结果与前列腺增生组织相比,前列腺癌组织中RabEX-5 mRNA表达明显升高(1.311±0.374 vs 0.457±0.083),差异有统计学意义(t=20.758,P=0.000),而LKB1 mRNA表达显著降低(0.373±0.052 vs 1.234±0.268),差异有统计学意义(t=30.181,P=0.000)。LKB1,RabEX-5 mRNA表达与Gleason评分、骨转移、TNM分期有关(t=2.419~9.965,均P<0.05),与年龄、前列腺特异抗原(PSA)水平无关(t=0.379~1.453,均P>0.05)。前列腺癌组织中LKB1与RabEX-5 mRNA的表达呈显著负相关(r=-0.402,P=0.000)。低LKB1表达组3年总体生存率低于高LKB1表达组(χ^(2)=55.605,P=0.000),高RabEX-5表达组3年总体生存率低于低RabEX-5表达组(χ^(2)=29.435,P=0.000)。多因素COX回归分析结果表明,Gleason评分≥7分(OR=2.671,P=0.018)、骨转移(OR=1.528,P=0.031)、TNM分期为Ⅲ期(OR=1.634,P=0.037),LKB1 mRNA低表达(OR=1.764,P=0.008)及RabEX-5 mRNA高表达(OR=2.587,P=0.000)是影响前列腺癌患者生存预后的危险因素(P<0.05)。结论前列腺癌组织中RabEX-5 mRNA表达升高,而LKB1 mRNA表达降低,二者共同参与前列腺癌的发生发展,有望成为评估前列腺癌患者预后的组织肿瘤标志物。 展开更多
关键词 前列腺癌 肝激酶B1 Rab鸟嘌呤核苷酸交换因子-5 临床病理特征
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Rho鸟嘌呤核苷酸交换因子家族及其在疾病发生中的作用 被引量:6
3
作者 刘明涛 杨军 王志钢 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期63-67,共5页
Rho GTP酶(Rho GTPase)家族在真核生物细胞中参与细胞骨架调节、基因转录、膜泡运输等过程,扮演着分子开关的角色。Rho型鸟嘌呤核苷酸交换因子(RhoGEF)是调节Rho GTPase活性的关键因子,在Rho GTPase信号调节、组织器官的生长发育及免疫... Rho GTP酶(Rho GTPase)家族在真核生物细胞中参与细胞骨架调节、基因转录、膜泡运输等过程,扮演着分子开关的角色。Rho型鸟嘌呤核苷酸交换因子(RhoGEF)是调节Rho GTPase活性的关键因子,在Rho GTPase信号调节、组织器官的生长发育及免疫应答中起着至关重要的作用。RhoGEF与肿瘤、发育及神经类疾病、病原微生物感染等也有密切关系,对其功能的深入了解有助于人们认识某些生理和病理现象的发生机制。 展开更多
关键词 RHO GTPase鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)疾病发生
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鸟嘌呤核苷酸交换因子C3G生物学功能研究进展
4
作者 吴国金 安输 +3 位作者 杨洋 刘莹 徐天瑞 郭晓汐 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2016年第4期426-433,共8页
Crk SH3域结合鸟嘌呤核苷酸交换因子[v-Crk sarcoma virus CT10 oncogene homolog(avian)SH3-domain-binding guanine nucleotide exchange factor,C3G]属于鸟嘌呤核苷酸交换因子(guanine nucleotide exchange factors,GEFs),是一种在... Crk SH3域结合鸟嘌呤核苷酸交换因子[v-Crk sarcoma virus CT10 oncogene homolog(avian)SH3-domain-binding guanine nucleotide exchange factor,C3G]属于鸟嘌呤核苷酸交换因子(guanine nucleotide exchange factors,GEFs),是一种在细胞内普遍表达的蛋白质分子。C3G激活小GTP酶并参与各种信号所触发的通路,对哺乳动物胚胎发育和许多组织的细胞功能来说,都是必不可少的。C3G参与细胞的黏附和迁移,细胞连接的维持,突起的生长等需要细胞骨架重构重要生物功能的调控。在细胞信号转导通路中,C3G的功能不仅依赖其催化活性,更重要的是,C3G在不同细胞类型中与不同的蛋白质相互作用,从而激活相应的信号转导通路。该文总结了目前C3G研究的最新进展,并概述了C3G的不同表达亚型对癌症、心脏病的影响及其生物功能背后的分子作用机制。对C3G及其相互作用蛋白质的研究将为卵巢癌、心脏病等疾病的诊断和治疗提供重要的科学依据。 展开更多
关键词 CRK SH3域结合鸟嘌呤核苷酸交换因子 鸟嘌呤核苷酸交换因子 GTP酶 RAP
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敲减核苷酸交换因子SIL1的表达抑制肿瘤蛋白53突变型胶质瘤细胞迁移和干细胞特性
5
作者 吴力新 宋振宇 +1 位作者 朱旭强 林文阳 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2022年第7期1310-1313,共4页
目的探究胶质瘤中核苷酸交换因子SIL1(SIL1)与肿瘤蛋白53(TP53)的关系,观察敲减SIL1对TP53突变型胶质瘤细胞增殖、迁移和干细胞特性的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测TP53突变型胶质瘤细... 目的探究胶质瘤中核苷酸交换因子SIL1(SIL1)与肿瘤蛋白53(TP53)的关系,观察敲减SIL1对TP53突变型胶质瘤细胞增殖、迁移和干细胞特性的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测TP53突变型胶质瘤细胞系SW1088、U-118 MG和TP53野生型细胞系U87中SIL1 mRNA和蛋白表达的差异;在U-118 MG细胞中转染野生型TP53过表达质粒,Western blot检测TP53和SIL1蛋白表达变化。然后将U-118 MG细胞随机分成3组,对照组(不进行任何处理)、对照短发卡RNA(shRNA)组(转染对照shRNA质粒)和Sh-SIL1组(转染Sh-SIL1质粒)。细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞迁移;Western blot检测干细胞特性相关基因OCT4和CD133的表达。多组间差异比较采用单因素方差分析,两组间差异比较采用t检验。结果SW1088和U-118 MG细胞中SIL1 mRNA和蛋白水平均高于U87细胞(SIL1 mRNA:2.16±0.19比1.00±0.06,t=9.804,P<0.01;3.51±0.24比1.00±0.06,t=17.350,P<0.01。SIL1蛋白:0.52±0.06比0.16±0.07,t=7.315,P<0.01;1.16±0.11比0.16±0.07,t=13.680,P<0.01)。在U-118 MG细胞中转染野生型TP53过表达质粒后,TP53蛋白表达高于空载体组(2.00±0.13比0.15±0.06,t=21.950,P<0.01),而SIL1蛋白表达低于空载体组(0.07±0.01比0.24±0.03,t=9.128,P<0.01)。Sh-SIL1组中SIL1蛋白水平(0.05±0.03比0.36±0.04,t=9.539,P<0.01),细胞活力(t48=8.317,P<0.01;t72=10.310,P<0.01),克隆形成数目(115±9比167±15,t=4.997,P<0.01),迁移细胞数目(31.33±4.16比67.33±7.51,t=7.265,P<0.01),OCT4(0.25±0.04比0.61±0.05,t=9.227,P<0.01)和CD133(0.09±0.02比0.35±0.03,t=11.960,P<0.01)蛋白表达均低于对照shRNA组。结论SIL1在TP53突变的胶质瘤细胞中表达增加,野生型TP53可抑制SIL1的表达。在TP53突变的胶质瘤细胞中敲减SIL1可抑制细胞增殖、迁移和干细胞特性。 展开更多
关键词 核苷酸交换因子SIL1 肿瘤蛋白53 胶质瘤 迁移 干细胞
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雌激素受体α36与鸟嘌呤核苷酸交换因子GNEF-Vav3和存活素在人甲状腺乳头状癌中的表达及其意义
6
作者 代宇婕 赵乐 +3 位作者 朱平 莫小梅 赵婷婷 刘智敏 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第22期2027-2031,共5页
目的研究雌激素受体α36(ERα36)、鸟嘌呤核苷酸交换因子(GNEF)-Vav3和存活素在人甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及意义。方法选取112例癌旁正常组织为对照组,124例甲状腺乳头状癌组织为试验组,用免疫组织化学SP法检测ERα36、GNEF-Vav3... 目的研究雌激素受体α36(ERα36)、鸟嘌呤核苷酸交换因子(GNEF)-Vav3和存活素在人甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及意义。方法选取112例癌旁正常组织为对照组,124例甲状腺乳头状癌组织为试验组,用免疫组织化学SP法检测ERα36、GNEF-Vav3和存活素的表达情况,并分析其与临床病理指标的关系和三者表达的相关性。结果在124例PTC组织中,ERα36、GNEF-Vav3和存活素的阳性表达率分别为55.6%(69/124例)、56.5%(70/124例)和57.3%(71/124例),三者在PTC中的表达显著高于正常组织,差异有统计学意义(P<0.001)。在有颈部淋巴结转移的PTC组织中,ERα36、GNEF-Vav3和存活素的阳性表达率分别为80.9%(55/68例)、77.9%(53/68例)和82.4%(56/68例),明显高于无淋巴结转移组织的25.0%(14/56例)、30.4%(17/56例)和26.8%(15/56例),差异有统计学意义(P<0.001)。在TNMⅢ-Ⅳ期的PTC组织中,ERα36、GNEF-Vav3和存活素的阳性表达率分别为81.7%(49/60例)、75.0%(45/60例)和78.3%(47/60例),明显高于Ⅰ-Ⅱ期的31.3%(20/64例)、39.1%(25/64例)和37.5%(24/64例),差异有统计学意义(P<0.001)。经Spearman等级相关分析,在124例PTC中,ERα36为78.3%(54/69例,高表达)与GNEF-Vav3为77.1%(54/70例)的阳性表达率呈显著正相关(P<0.001);ERα36为72.5%(50/69例,高表达)与存活素为70.4%(50/71例)的阳性表达率呈显著正相关(P<0.001);GNEF-Vav3为68.6%(48/70例)与存活素67.6%(48/71例)的阳性表达率呈显著正相关(P<0.01)。ERα36/GNEF-Vav3、ERα36/存活素和GNEF-Vav3/存活素的这三种情况下的两种蛋白同时表达率分别为81.5%,80.0%,83.3%,这与其中仅有一种蛋白表达的48.4%,57.5%,60.0%比较,与颈部淋巴结转移的相关性更为显著,差异有统计学意义(均P<0.05)。此外,ERα36、GNEF-Vav3和存活素的这三种蛋白联合表达率为88.9%,这与只表达一种或两种蛋白的40.9%比较,与颈部淋巴结转移的相关性更为显著,差异有统计学意义(P<0.001)。结论 ERα36、GNEF-Vav3和存活素在PTC中的表达存在协同作用,并可作为监测PTC颈部淋巴结转移的指标。 展开更多
关键词 雌激素受体α36 鸟嘌呤核苷酸交换因子Vav3 存活素 甲状腺乳头状癌 免疫组化
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鸟苷酸交换因子C3G对心肌细胞生存力的影响及其可能机制 被引量:3
7
作者 张旭 李刚 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1172-1177,共6页
目的探讨过表达鸟苷酸交换因子C3G(Crk SH3-domain-binding guanine-nucleotide-releasing factor)对心肌细胞生存力的影响及其机制。方法分别用pCXN2-Flag、pCXN2-Flag-hC3G(过表达人C3G mRNA)质粒瞬时转染H9C2心肌细胞,并进行缺氧/复... 目的探讨过表达鸟苷酸交换因子C3G(Crk SH3-domain-binding guanine-nucleotide-releasing factor)对心肌细胞生存力的影响及其机制。方法分别用pCXN2-Flag、pCXN2-Flag-hC3G(过表达人C3G mRNA)质粒瞬时转染H9C2心肌细胞,并进行缺氧/复氧(H/R)干预。实验分为空白组、空质粒组、C3G过表达组、空白+H/R组、空质粒+H/R组,C3G过表达+H/R组。用RT-PCR法检测心肌细胞C3G mRNA的表达,蛋白质印迹分析法检测心肌细胞C3G、p-ERK1/2蛋白的表达,MTT法检测细胞的增殖率,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果 C3G过表达组较空白组和空质粒组,C3G过表达+H/R组较空白+H/R组和空质粒+H/R组人C3GmRNA、C3G蛋白、p-ERK1蛋白、细胞增殖率均增加(P均<0.01),凋亡率均降低(P<0.05,P<0.01);C3G过表达+H/R组较空白+H/R组、空质粒+H/R组p-ERK2蛋白增加(P<0.01)。结论过表达C3G能促进心肌细胞的生存力,该过程可能是由p-ERK1/2蛋白表达增加和心肌细胞凋亡降低介导的。 展开更多
关键词 鸟嘌呤核苷酸交换因子 C3G 心脏肌细胞 细胞存活
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环腺苷酸结合蛋白在心脏功能及相关心脏疾病中的作用研究进展 被引量:2
8
作者 王鑫 董六一 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2018年第7期764-768,共5页
3,5-环磷酸腺苷(cAMP)是心血管系统中细胞对于外界刺激反应的关键信号分子。它控制很多生物效应,如细胞增殖、变异和凋亡等。cAMP是ATP通过跨膜腺苷酸环化酶激活的G蛋白偶联受体^([1])。细胞内cAMP不仅由腺苷酸环化酶产生,而且由cAM... 3,5-环磷酸腺苷(cAMP)是心血管系统中细胞对于外界刺激反应的关键信号分子。它控制很多生物效应,如细胞增殖、变异和凋亡等。cAMP是ATP通过跨膜腺苷酸环化酶激活的G蛋白偶联受体^([1])。细胞内cAMP不仅由腺苷酸环化酶产生,而且由cAMP的磷酸二酯酶调控其降解,催化cAMP水解成5-AMP。 展开更多
关键词 心脏病 3′ 5′-环AMP磷二酯酶 环AMP依赖性蛋白激酶类 鸟嘌呤核苷酸交换因子
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鸟嘌呤核苷酸转化因子交换蛋白1对大鼠糖尿病机械性疼痛的影响
9
作者 袁欢欢 李琳 +2 位作者 徐凤霞 张志芳 李全民 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期149-153,共5页
目的研究鸟嘌呤核苷酸转化因子交换蛋白1对大鼠糖尿病机械性疼痛的影响。 方法雄性SD大鼠随机分为CON组和STZ组,CON组随机分为CONshRNA组、CONEpac1shRNA组,STZ组大鼠诱导成为糖尿病机械性疼痛(DMA)模型后随机分为DMAshRNA组、DMAE... 目的研究鸟嘌呤核苷酸转化因子交换蛋白1对大鼠糖尿病机械性疼痛的影响。 方法雄性SD大鼠随机分为CON组和STZ组,CON组随机分为CONshRNA组、CONEpac1shRNA组,STZ组大鼠诱导成为糖尿病机械性疼痛(DMA)模型后随机分为DMAshRNA组、DMAEpac1shRNA组、DMANS组、DMA8-pCPT组。Epac1shRNA慢病毒载体用于抑制Epac1的表达,对照shRNA慢病毒载体为阴性对照,8-pCPT为Epac1的激活剂。CONshRNA组、DMAshRNA组鞘内注射对照shRNA慢病毒载体,CONEpac1shRNA组、DMAEpac1shRNA组鞘内注射Epac1shRNA慢病毒载体,DMANS组足底注射生理盐水,DMA8-pCPT组足底注射8-pCPT。观察各组大鼠的后爪回缩阈值(PWT)变化,用实时PCR、Western印迹检测大鼠背根神经节(DRG)部位鸟嘌呤核苷酸转化因子交换蛋白1(Epac1)mRNA和蛋白表达的变化。 结果与CON组大鼠相比,STZ组大鼠的机械疼痛敏感性阈值下降(P=0.035)。DMA大鼠注射Epac1激活剂8-pCPT组与生理盐水组相比,疼痛时间延长(2 h P=0.012,4 h P=0.020)。DMA组与CON组相比Epac1mRNA和蛋白的表达升高(均P〈0.01),鞘内注射shRNA可降低Epac1的mRNA和蛋白表达(P〈0.01, P=0.020)。DMA组的PWT值明显低于CON组(P=0.006)。 结论Epac1在糖尿病机械性疼痛大鼠中表达增高,下调Epac1可缓解疼痛。 展开更多
关键词 鸟嘌呤核苷转化因子交换蛋白 糖尿病机械性疼痛 背根神经节
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6种禾本科植物GEF基因家族鉴定与抗旱性分析
10
作者 申晨 方远鹏 谢鑫 《山地农业生物学报》 2024年第4期1-10,共10页
小G蛋白介导的鸟嘌呤三核苷酸磷酸/鸟嘌呤二核苷酸磷酸(GTP/GDP)信号通路对于植物抗性十分重要,鸟嘌呤核苷酸交换因子(Guanine Nucleotide Exchange Factor, GEF)可对多种小G蛋白进行调节。植物基因组中包括BIG(Brefeldin A-inhibited G... 小G蛋白介导的鸟嘌呤三核苷酸磷酸/鸟嘌呤二核苷酸磷酸(GTP/GDP)信号通路对于植物抗性十分重要,鸟嘌呤核苷酸交换因子(Guanine Nucleotide Exchange Factor, GEF)可对多种小G蛋白进行调节。植物基因组中包括BIG(Brefeldin A-inhibited Guanine Nucleotide Exchange Protein)和GBF(Golgi Brefeldin A-Resistant Guanine Nucleotide Exchange Factor)两类GEF基因,目前,这些GEF基因的系统性鉴定与表达分析尚不明确。因此,本研究采用基因家族鉴定的方法,对禾本科GEF基因家族进行比较分析。结果表明:从6种禾本科(水稻Oryza sativa、小麦Triticum aestivum、节节麦Sorghum bicolor、高粱Aegilops tauschii、谷子Setaria italica、玉米Zea mays)基因组中获得58个GEF基因,分布于45条不同的染色体上。系统发育分析表明,禾本科GEF基因家族包含5个亚家族(BIG1/4、BIG2/3、BIG5、GNL2、GNON),并且存在单拷贝以及基因选择性保留特性。共线性分析进一步确定禾本科GEF基因存在复杂的演化历程。干旱表达结果显示,GEF基因家族在不同禾本科植物、不同亚家族以及拷贝水平上均已产生抗旱性分化。本研究结果将为禾本科作物的抗旱基因筛选提供基础。 展开更多
关键词 禾本科 鸟嘌呤核苷酸交换因子 基因家族 表达分析
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Epac/Rap1信号通路在急性肺损伤中作用的研究进展 被引量:9
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作者 汪雪峰 陈思煜 陈锋 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期680-683,共4页
急性肺损伤(ALI)中炎症信号通路的失调控以及炎症因子平衡紊乱是其发生和发展的重要原因。能直接被cAMP活化的交换蛋白(Epac)在调节肺部气道炎症和细胞增殖方面是一个新的效应器,新的关于cAMP依赖性蛋白激酶A(PKA)非依赖性通路研究表明,... 急性肺损伤(ALI)中炎症信号通路的失调控以及炎症因子平衡紊乱是其发生和发展的重要原因。能直接被cAMP活化的交换蛋白(Epac)在调节肺部气道炎症和细胞增殖方面是一个新的效应器,新的关于cAMP依赖性蛋白激酶A(PKA)非依赖性通路研究表明,cAMP/Epac/Rap1信号通路参与并行使许多类型细胞的功能,包括细胞分泌、细胞间黏附和连接、细胞凋亡、细胞增殖和分化等。cAMP能通过Epac/Rap1信号通路参与ALI的发病过程,Epac/Rap1信号通路是ALI防治的潜在靶点。本文综述Epac/Rap1信号通路在肺部相关炎症及急性肺损伤中作用机制的国内外研究进展。 展开更多
关键词 急性肺损伤 鸟嘌呤核苷酸交换因子 气道炎症 环磷腺苷
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人pEGFP-GEF-H1载体的构建及其表达
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作者 徐卫东 钱元霞 曹俊 《胃肠病学》 2014年第9期540-543,共4页
背景:研究表明GEF-H1能激活Rho蛋白,与肿瘤发生、发展、浸润、迁移等密切相关。目的:构建人pEGFPGEF-H1载体并稳定转染结肠癌HCT116细胞后检测GEF-H1表达。方法:在线合成引物软件设计人GEF-H1基因引物,构建重组质粒pEGFP-GEF-H1,并转染... 背景:研究表明GEF-H1能激活Rho蛋白,与肿瘤发生、发展、浸润、迁移等密切相关。目的:构建人pEGFPGEF-H1载体并稳定转染结肠癌HCT116细胞后检测GEF-H1表达。方法:在线合成引物软件设计人GEF-H1基因引物,构建重组质粒pEGFP-GEF-H1,并转染结肠癌HCT116细胞,以转染空质粒和未转染的细胞分别作为空质粒组和空白对照组。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测GEF-H1 mRNA和蛋白表达水平。结果:成功构建了人pEGFP-GEF-H1载体,测序结果表明序列正确。转染重组质粒pEGFP-GEF-H1后,荧光显微镜下可见较强的绿色荧光,GEF-H1 mRNA和蛋白表达水平均较空质粒组和空白对照组明显上调。结论:体外成功构建了人pEGFP-GEF-H1载体,且转染结肠癌HCT116细胞后高表达GEF-H1,为进一步探讨结肠癌与GEF-H1的关系提供了必要的实验材料。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 鸟嘌呤核苷酸交换因子 RHO蛋白 载体构建 转染
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染色质解旋酶/ATP酶的DNA结合蛋白1样基因致瘤机制研究进展
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作者 傅点 王玲 +1 位作者 田丰 程文 《医学综述》 2015年第14期2562-2565,共4页
染色质解旋酶/ATP酶的DNA结合蛋白1样基因(CHD1L)是一种新近被证实与在许多实体瘤中表达增多的致癌基因,它定位于第1号染色体q21区。CHD1L在肝细胞癌和其他肿瘤中的功能性研究提示,该基因在肿瘤形成过程中可以引起细胞增殖、调节G1/S过... 染色质解旋酶/ATP酶的DNA结合蛋白1样基因(CHD1L)是一种新近被证实与在许多实体瘤中表达增多的致癌基因,它定位于第1号染色体q21区。CHD1L在肝细胞癌和其他肿瘤中的功能性研究提示,该基因在肿瘤形成过程中可以引起细胞增殖、调节G1/S过渡期并且可以抑制细胞凋亡。CHD1L活化的潜在机制可能是通过结合凋亡蛋白Nur77,或通过上调CHD1L调控的靶基因(如ARHGEF9、SPOCK1或TCTP)受体以激活蛋白激酶B通路,从而干扰细胞死亡程序。CHD1L目前已经被认为是一种新的可独立评价一些实体性肿瘤进展、预后以及生存率的生物标志物。现有的对CHD1L的认识在将来也许可以激励大家进行对一些特定肿瘤的靶向治疗研究。 展开更多
关键词 染色质解旋酶/ATP酶的DNA结合蛋白1样基因 致癌基因 染色体1q21 扩增 ρ鸟嘌呤核苷酸交换因子9 蛋白聚糖1 Nur77
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遗传性肾小管运输疾患的研究现状
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作者 龚新顺 《天津医药》 CAS 北大核心 2005年第11期740-742,共3页
关键词 肾小管 近端 肾小管 远端 遗传性疾病 先天性 离子通道 鸟嘌呤核苷酸交换因子 肾小管 遗传性 运输 疾患 分子遗传学
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融合蛋白TAT-RabGEF1原核表达载体的构建及蛋白表达 被引量:3
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作者 方虹仪 郭娜 +1 位作者 邢纪斌 罗晨芳 《中山大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期61-67,共7页
【目的】构建PET28a-TAT-RabGEF1重组质粒载体,在E.coli Rosetta(DE3)菌株中高效表达并纯化融合蛋白,研究TAT-RabGEF1融合蛋白对肥大细胞的跨膜转导活性。【方法】以小鼠组织cDNA为模板,设计上游和下游含有限制性酶切位点和TAT序列的引... 【目的】构建PET28a-TAT-RabGEF1重组质粒载体,在E.coli Rosetta(DE3)菌株中高效表达并纯化融合蛋白,研究TAT-RabGEF1融合蛋白对肥大细胞的跨膜转导活性。【方法】以小鼠组织cDNA为模板,设计上游和下游含有限制性酶切位点和TAT序列的引物,PCR扩增目的片段TAT-RabGEF1,并通过双酶切构建PET28a-TAT-RabGEF1重组质粒载体,在E.coli Rosetta(DE3)大肠杆菌中诱导表达融合蛋白,产物用亲和层析柱纯化后测量浓度及鉴定。CCK-8检测融合蛋白的细胞毒性,并用荧光显微镜及荧光分光光度计定性定量观察其对小鼠肥大细胞瘤细胞P815的转导活性。【结果】成功构建了PET28a-TAT-RabGEF1重组载体,高效表达了具有较高特异性,相对分子质量约为57 ku的融合蛋白TAT-Rab GEF1,0.1、1、10μmol/L浓度的TAT-RabGEF1蛋白对细胞无明显毒性,荧光显微镜显示1μmol/L浓度的融合蛋白TAT-RabGEF1具有快速转导进入P815细胞内的能力,且为进入细胞的饱和浓度。【结论】通过TAT-RabGEF1的原核表达和蛋白纯化分析,证实了TAT-PTD的跨膜转导活性,为研究RabGEF1在肥大细胞激活途径中的作用提供了物质基础。 展开更多
关键词 鸟嘌呤核苷酸交换因子1 TAT蛋白 融合蛋白 载体构建
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大鼠非梗死区心肌C3G蛋白的表达及苯肾上腺素对其的干预 被引量:3
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作者 牟杨 李刚 +1 位作者 张灿晶 王志华 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2010年第5期391-394,共4页
目的:探讨非梗死区心肌C3G蛋白的表达及苯肾上腺素对其的干预。方法:选择雄性SD大鼠32只。按Litwin方法建立心肌梗死(简称心梗)及假手术模型。术后3天仍存活的雄性SD大鼠分为假手术组、心梗组、假手术苯肾上腺素组和心梗苯肾上腺素组(各... 目的:探讨非梗死区心肌C3G蛋白的表达及苯肾上腺素对其的干预。方法:选择雄性SD大鼠32只。按Litwin方法建立心肌梗死(简称心梗)及假手术模型。术后3天仍存活的雄性SD大鼠分为假手术组、心梗组、假手术苯肾上腺素组和心梗苯肾上腺素组(各组n=8)。假手术组及心梗组给予生理盐水1ml/(kg.d),假手术苯肾上腺素组及心梗苯肾上腺素组给予苯肾上腺素0.65mg/(kg.d),腹腔注射,至干预后8周。干预后应用免疫印迹法检测非梗死区心肌C3G蛋白的表达。结果:干预后12周,非梗死区心肌C3G蛋白表达积分光密度值(免疫印迹)分别为:假手术组(0.33±0.06),心梗组(0.81±0.05),假手术苯肾上腺素组(0.40±0.06),心梗苯肾上腺素组(0.62±0.07)。与假手术组比较,心梗组、心梗苯肾上腺素组非梗死区心肌C3G蛋白表达均增加,差异均有统计学意义(P<0.05);心梗苯肾上腺素组较心梗组非梗死区心肌C3G蛋白的表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);而假手术苯肾上腺素组较假手术组非梗死区心肌C3G蛋白表达差异无统计学意义。结论:非梗死区心肌C3G蛋白的表达显著增加,而苯肾上腺素可显著调低其表达,提示C3G蛋白与梗死后心室重塑有关。 展开更多
关键词 鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF) C3G蛋白 心肌梗塞 苯肾上腺素
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ALKBH5调控GEFT的m6A修饰对胆管癌转移及EMT的实验研究 被引量:1
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作者 王希方 郑伟 +5 位作者 马东瑞 何莉 孙晶莹 孙杨 孟莲 孙超 《现代检验医学杂志》 CAS 2023年第4期1-7,21,共8页
目的探究alkB同源蛋白5(ALKBH5)调控鸟嘌呤核苷酸交换因子T(guanine nucleotide exchange factors T,GEFT)的m6A修饰对胆管癌转移和上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法将HuCCT1细胞按照转染类别分为Con... 目的探究alkB同源蛋白5(ALKBH5)调控鸟嘌呤核苷酸交换因子T(guanine nucleotide exchange factors T,GEFT)的m6A修饰对胆管癌转移和上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法将HuCCT1细胞按照转染类别分为Control组,NC-sh组、ALKBH5-sh组、NC-LV组、ALKBH5-LV组、ALKBH5-LV+NC-sh组和ALKBH5-LV+GEFT-sh组。Control组细胞不进行转染,使用Lipofectamine 2000对其他组细胞分别转染相应的慢病毒。采用MTT法检测细胞增殖水平,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭水平。采用RT-qPCR分析HuCCT1细胞中的ALKBH5,GEFT,Bax,Bcl-2,MMP2,MMP9,E-cadherin,N-cadherin和Vimentin的mRNA水平。采用Western blot分析HuCCT1细胞中的ALKBH5和GEFT蛋白水平。采用MeRIP-qPCR分析HuCCT1细胞中GEFT m6A甲基化水平。结果与Control组和NC-sh组比较,ALKBH5-sh组ALKBH5和GEFT的mRNA和蛋白水平降低,相对细胞活力降低,细胞凋亡率和Bax mRNA水平升高,Bcl-2 mRNA水平降低,迁移和侵袭细胞数量降低,MMP2和MMP9 mRNA水平降低,E-cadherin mRNA水平升高,N-cadherin和Vimentin水平降低,GEFT m6A甲基化水平升高,差异具有统计学意义(F=43.347~1995.868,均P<0.001)。与Control组和NC-LV组比较,ALKBH5-LV组ALKBH5和GEFT的mRNA和蛋白水平升高,相对细胞活力升高,细胞凋亡率和Bax mRNA水平降低,Bcl-2 mRNA水平升高,迁移和侵袭细胞数量升高,MMP2和MMP9 mRNA水平升高,E-cadherin mRNA水平降低,N-cadherin和Vimentin水平升高,GEFT m6A甲基化水平降低,差异具有统计学意义(F=42.421~720.275,均P<0.001)。与ALKBH5-LV+NC-sh组比较,ALKBH5-LV+GEFT-sh组GEFT的mRNA和蛋白水平降低,相对细胞活力降低,细胞凋亡率和Bax mRNA水平升高,Bcl-2 mRNA水平降低,迁移和侵袭细胞数量降低,MMP2和MMP9 mRNA水平降低,E-cadherinmRNA水平升高,N-cadherin和Vimentin水平降低,差异具有统计学意义(t=7.175~77.872,均P<0.001)。结论ALKBH5和GEFT均促进胆管癌细胞的生长和转移,ALKBH5可能通过调控GEFT m6A甲基化修饰来影响胆管癌的转移及EMT。 展开更多
关键词 胆管癌 m6A甲基化 alKB同源蛋白 鸟嘌呤核苷酸交换因子 上皮间充质转化
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ARHGEF7遗传变异与颅内动脉瘤相关 被引量:2
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作者 吴毅毅 张梅 +4 位作者 杨云云 李亚强 李静 贺佳乐 张伟丽 《基础医学与临床》 2023年第4期576-582,共7页
目的探讨Rho鸟嘌呤核苷酸交换因子7(ARHGEF7)基因遗传变异与颅内动脉瘤形成和破裂风险的关系。方法收集颅内动脉瘤患者121例(包括未破裂组患者41例,破裂组患者80例)和健康对照155名,检测ARHGEF7的10个遗传变异。利用logistic回归模型分... 目的探讨Rho鸟嘌呤核苷酸交换因子7(ARHGEF7)基因遗传变异与颅内动脉瘤形成和破裂风险的关系。方法收集颅内动脉瘤患者121例(包括未破裂组患者41例,破裂组患者80例)和健康对照155名,检测ARHGEF7的10个遗传变异。利用logistic回归模型分析ARHGEF7遗传变异与颅内动脉瘤发生和破裂风险的关系。结果在校正年龄、性别和传统心血管危险因素后,与rs4145274GG基因型相比,rs4145274GA与颅内动脉瘤破裂风险降低相关,比值比为0.24[95%可信区间(CI):0.09~0.69,P<0.05];与rs1555751CC基因型相比,rs1555751CT与颅内动脉瘤破裂风险降低也相关,比值比为0.17(95%CI:0.05~0.63,P<0.05)。rs4145274和rs1555751的联合效应提示患者遗传风险评分越高,颅内动脉瘤破裂风险越低,比值比为0.14(95%CI:0.04~0.55,P<0.05)。结论ARHGEF7遗传变异可能是颅内动脉瘤破裂风险的遗传标记。 展开更多
关键词 Rho鸟嘌呤核苷酸交换因子7 遗传变异 颅内动脉瘤 疾病风险
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电针对佐剂性关节炎大鼠膝关节滑膜VEGF/Vav2/Rac1信号通路的影响 被引量:1
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作者 孙晓莹 龙轶映 +6 位作者 赵凌云 吴庆泽 瞿启睿 祁芳 刘梨 艾坤 张亮 《湖南中医药大学学报》 CAS 2023年第10期1830-1837,共8页
目的观察电针对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠膝关节滑膜组织内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、鸟嘌呤核苷酸交换因子2(vav guanine nucleotide exchange factor 2,Vav2)和Ras相关C3肉毒素底物... 目的观察电针对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠膝关节滑膜组织内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、鸟嘌呤核苷酸交换因子2(vav guanine nucleotide exchange factor 2,Vav2)和Ras相关C3肉毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)表达的影响,探究电针干预类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)血管新生的可能机制。方法将40只SPF级SD雄性大鼠随机分成4组(空白组、模型组、西药组和电针组),每组10只。除空白组,其他3组采用尾根部皮下注射完全弗氏佐剂制成AA大鼠模型。造模后第2天开始干预,电针组进行电针干预,以左侧足三里与关元穴配穴,右侧足三里与同侧阿是穴配穴,每次20 min,每天干预1次,共干预21次;西药组给予甲氨蝶呤灌胃给药,每周1次,共干预3次。观察各组体质量、关节红肿等一般情况,每3天测量1次大鼠后双侧足跖容积。干预结束后,通过大鼠一般情况、体质量、足跖容积分析各组大鼠足跖肿胀程度,HE染色观察AA大鼠膝关节滑膜组织的病理形态学,免疫组织化学法检测膝关节滑膜组织内CD31表达变化,Western blot法检测大鼠膝关节滑膜组织VEGF、Vav2和Rac1蛋白表达量。结果与空白组相比,模型组大鼠第21天足跖容积均明显增大(P<0.01),膝关节滑膜组织出现显著性病理改变,CD31表达量明显升高(P<0.05),VEGF、Vav2、Rac1蛋白表达量显著升高(P<0.01)。与模型组相比,西药组足跖容积在第21天显著减小(P<0.01),膝关节滑膜组织病理改变明显改善,VEGF、Vav2表达量明显下降(P<0.05),Rac1蛋白表达量显著下降(P<0.01);电针组足跖容积在第21天显著减小(P<0.01),膝关节滑膜组织病理改变明显改善,VEGF、Rac1表达量明显下降(P<0.05),Vav2蛋白表达量显著下降(P<0.01)。结论电针改善RA的作用机制可能与抑制VEGF/Vav2/Rac1信号通路,进而抑制血管新生有关。 展开更多
关键词 佐剂性关节炎 电针 血管内皮生长因子 鸟嘌呤核苷酸交换因子2 Ras相关C3肉毒素底物1 血管新生
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丹参SmRopGEF1基因的克隆、亚细胞定位与表达分析 被引量:1
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作者 陈颖 满金辉 +8 位作者 石玥 黄钰莹 张晓芹 王馨 刘珊瑚 何高洁 安克露 王晓晖 魏胜利 《中国现代中药》 CAS 2023年第6期1199-1206,共8页
目的:克隆丹参SmRopGEF1基因,研究其编码蛋白的亚细胞定位及其对逆境胁迫的应激反应和激素诱导下的表达水平。方法:根据前期丹参转录组测序结果设计SmRopGEF1基因特异引物,利用聚合酶链式反应(PCR)扩增SmRopGEF1基因序列;使用生物信息... 目的:克隆丹参SmRopGEF1基因,研究其编码蛋白的亚细胞定位及其对逆境胁迫的应激反应和激素诱导下的表达水平。方法:根据前期丹参转录组测序结果设计SmRopGEF1基因特异引物,利用聚合酶链式反应(PCR)扩增SmRopGEF1基因序列;使用生物信息学方法分析SmRopGEF1蛋白序列特征及进化关系;构建pET28a-SmRopGEF1原核表达载体并转化至大肠埃希氏菌中诱导表达,构建35S启动的SmRopGEF1的绿色荧光蛋白原生质体瞬时表达载体,利用激光共聚焦显微镜观察SmRopGEF1的亚细胞定位;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测逆境胁迫(低温、盐及干旱)和激素诱导(生长素、脱落酸、茉莉酸甲酯)下的基因表达量。结果:丹参SmRopGEF1基因开放阅读框(ORF)全长为1701 bp,编码566个氨基酸,蛋白相对分子质量是62362.99。生物信息学分析显示SmRopGEF1蛋白含有1个PRONE保守结构域,系统进化树分析表明SmRopGEF1蛋白与芡欧鼠尾草和一串红RopGEF1蛋白为高同源蛋白。成功构建pET28a-SmRopGEF1原核表达载体并在大肠埃希氏菌Rosetta(DE3)菌株中表达、纯化出SmRopGEF1重组蛋白。亚细胞定位的结果显示SmRopGEF1存在于植物细胞的细胞核中。qRT-PCR实验结果表明盐胁迫和冷胁迫能够显著提高SmRopGEF1的表达量;干旱胁迫后丹参愈伤中SmRopGEF1表达量下降。茉莉酸甲酯诱导后SmRopGEF1表达量升高。结论:克隆了丹参SmRopGEF1基因,其在抗逆胁迫中起到重要作用并且可能参与茉莉酸甲酯信号转导。研究结果丰富了丹参防御反应机制的研究,为选育丹参抗逆优良品种、提高丹参的产量与品质提供了参考。 展开更多
关键词 丹参 鸟嘌呤核苷酸交换因子 序列分析 基因表达
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