核苷酸内焦磷酸酶/磷酸二酯酶1基因K121Q多态性与儿童青少年肥胖及代谢指标的相关性研究

目的:研究核苷酸内焦磷酸酶/磷酸二酯酶1(ectonucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase1,ENPP1)基因K121Q与青少年儿童肥胖及其相关代谢指标的相关性。方法:6～18岁肥胖/超重儿童青少年464例,体质量正常对照者223例,分别测量身高体质量,计算体质量指数(BMI);测定血清空腹葡萄糖(FPG)、空腹胰岛素(FIns)、三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和敏感指数(QUICKI)。抽提外周血基因组DNA,采用Taqman-MGB探针技术检测ENPP1基因K121Q多态性。采用国际肥胖工作组BMI标准评估肥胖程度,分析基因型与生化指标和体质量指标间的关联性。结果:(1)肥胖/超重合并组的体质量指数、FPG、Fins、TG、HOMA-IR均显著高于体质量正常对照组。(2)肥胖组K等位基因频率89.4%,Q等位基因10.6%;在超重组K等位基因90.7%,Q等位基因9.3%;正常对照组K等位基因87.9%,Q等位基因为52例12.1%,3组间无显著差异(P=0.4171)。(3)不同基因型的FPG、FIns、TG、TC、HOMA-IR、QUICKI均无显著性差异。结论:ENPP1基因K121Q多态性与中国汉族青少年单纯性肥胖及其代谢指标间无显著关联性,提示该多态性位点可能不是中国儿童肥胖和代谢综合征的关键位点。

核苷酸内焦磷酸酶磷酸二酯酶1基因K121Q多态性与2型糖尿病的相关性研究

目的探讨中国黑龙江汉族人群核苷酸内焦磷酸酶磷酸二酯酶1（Ecto—nucleotidepyrophosphatase／phosphodies-terase1，ENPPl）基因第4外显子K121Q对糖尿病发病的影响及其两者之间的关系。方法运用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）方法检测146例2型糖尿病（T2DM）患者（T2DM组）和238例糖耐量正常对照健康人（对照组）EN—PPl基因K121Q的多态性分布，同时检测其临床及生化指标，进行随机对照研究。结果①T2DM组XQ（KQ＋QQ）基因型频率高于对照组（21．23％VS10．50％，P=0．0038），其Q等位基因频率亦高于对照组（10．96％VS5．25％，P=0．0034），差异有统计学意义；②携带Q等位基因个体与携带K等位基因个体两组比较，在性别构成、年龄、身高、体重、体重指数（BMI）l、腰围、臀围、腰臀比（WHR）、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素水平（FINS）、HOMA—IR差异均无统计学意义（P〉0．05）；（④Logistic回归显示，ENPPl基因K121Q多态性与T2DM相关（OR=2．30，95％CI=1．29—4．08，P=0．0038）；④汉族人群Q等位基因携带频率低于其他人群（非西班牙裔白人、美国黑人和西班牙人）。结论①ENPPl基因K121Q位点Q等位基因与中国黑龙江省汉族人群T2DM发病相关；②T2DM患者中携带Q等位基因个体无明显胰岛素抵抗表现；（~）ENPPl基因K121Q位点的多态性有明显种族地域差异性。

妊娠期糖尿病患者核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1基因多态性研究

目的了解妊娠期糖尿病(GDM)患者核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1(ENPP1)基因位点rs1044498 K121Q,rs7754561 A>G+1044TGA和rs1799774 IVS20deIT-1 1多态性的分布情况。方法选取94例GDM患者(GDM组)与94例健康孕妇(对照组)。采用聚合酶链反应-高分辨率溶解曲线(PCR-HRM)技术检测ENPP1基因位点rs1044498 K121Q,rs7754561 A>G+1044 TGA和rs1799774 IVS20de1T-1 1的3个基因型。样本的群体代表性进行哈丁温伯格遗传平衡(HWE)检验;组间基因型频率比较采用SPSS 20.0软件进行x^2检验,连锁不平衡采用SHEsis软件进行分析。结果 rs1044498的C等位基因在GDM组的频率为68.1%高于对照组的12.2%,差异有统计学意义(P<0.01);CC、AC基因型携带者患GDM的风险分别是AA基因型携带者的90.46和2.339倍。rs7754561的A等位基因在GDM组的频率为43.1%高于对照组的32.4%,差异有统计学意义(P<0.05);AA、AG基因型携带者患GDM的风险分别是GG基因型携带者的3.576和0.445倍。rs1799774等位基因频率分布差异无统计学意义,-I-基因型携带者患GDM的风险是TT型携带者的3.084倍,是Tdel+TT携带者的3.478倍。单倍型AAT、ACdel、GAT、GCT、ACT与GDM发病正相关(OR>1)。结论 rs1044498 K121Q和rs7754561 A>G+1044TGA位点的基因多态性与GDM有关,rs1044498 C等位基因和rs7754561 A等位基因可能是导致GDM发病的高危因素。

dCTP焦磷酸酶1调节肿瘤细胞核苷酸代谢及表型的研究进展

三磷酸脱氧胞苷焦磷酸酶1(dCTP焦磷酸酶1,DCTPP1)是新发现的靶向三磷酸脱氧胞苷(dCTP)的焦磷酸酶,它不仅通过水解常规性和修饰性dCTP调节胞嘧啶代谢,而且参与其他嘧啶核苷酸的稳态调节。肿瘤细胞进程中,DCTPP1的高表达有利于稳定脱氧核苷三磷酸池(dNTP池)的平衡和基因组的甲基化水平,维持肿瘤细胞基因组稳定性。此外,DCTPP1通过不同的信号途径促进肿瘤细胞的增殖、转移等恶性表型,并与肿瘤耐药及临床不良预后相关。DCTPP1或将成为抗肿瘤药物研发的“明星”靶点。对其调节机制的深入研究有望为肿瘤核苷酸代谢类靶向抑制剂研发提供新策略。

核酸酶P1研究进展

核酸酶P1是由桔青霉产生的一种能将单链DNA和RNA水解为 5′ 核苷酸的磷酸二酯酶 ,也是酶法生产 5′ 核苷酸的主要工业用酶 ,其水解产物 5′ 核苷酸广泛用于食品、医药、以及分子生物学等方面。文章概述了核酸酶P1的分子结构、催化特性、影响因素。

胞外腺苷代谢酶ENPP1的功能和药物研发进展

胞外腺苷代谢系统在多种生理病理过程中发挥重要作用,已成为重要的药物靶点,但针对胞外核苷酸-焦磷酸酶/磷酸二酯酶-1(ENPP1)的研究进展较少。近年来发现ENPP1是胞外环磷酸鸟苷-腺苷合成酶最主要的水解酶,其作用得到越来越多的重视。本文在简要回顾ENPP1结构的基础上,重点介绍其在生物矿化、肿瘤等生理病理过程中的作用,以及针对ENPP1靶点在酶替代疗法和小分子药物方面的研发进展。

核酸水解酶及酶解法生产核苷酸研究进展

综述了目前主要核酸水解酶的种类、来源、蛋白质特性和生产方法;介绍了目前酶解法生产核苷酸的几种主要方法,比较了各种方法的优缺点及工业化应用前景;简单综述了水解液中四种核苷酸的分离提取方法;探讨了酶解法生产核苷酸的未来研究方向.结论为酶解法的关键是必须通过广泛采用现代高新生物技术来降低生产成本.

外核苷酸焦磷酸酶/碱性磷酸二脂酶IK121Q基因多态性与多囊卵巢综合征发病相关性分析

目的:探讨外核苷酸焦磷酸酶/碱性磷酸二脂酶I基因多态性与多囊卵巢综合征发病的相关性及该突变对多囊卵巢临床表型的影响。方法:采用PCR-限制性片段长度多态性分析外核苷酸焦磷酸酶/碱性磷酸二脂酶I基因多态性并鉴定基因型,比较正常人与多囊卵巢综合征患者基因型的分布频率,并比较不同基因型之间患者的临床指标。结果:70例多囊卵巢综合征患者外核苷酸焦磷酸酶/碱性磷酸二脂酶I K121Q突变率明显高于67例对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。无胰岛素抵抗的多囊卵巢综合征患者外核苷酸焦磷酸酶/碱性磷酸二脂酶I K121Q突变率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。无胰岛素抵抗的患者中外核苷酸焦磷酸酶/碱性磷酸二脂酶I基因突变组睾酮、促黄体激素均高于野生型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:外核苷酸焦磷酸酶/碱性磷酸二脂酶I K121Q基因多态性与多囊卵巢发病相关,并且独立于胰岛素抵抗独立存在。

ENPP1基因在人卵巢的定位表达及其与多囊卵巢综合征的关系

目的胰岛素抵抗及其伴随的高胰岛素血症是多囊卵巢综合征(PCOS)重要的病理生理改变,核苷酸内焦磷酸酶/磷酸二酯酶1(ENPP1)表达异常与胰岛素抵抗有关,本研究拟了解ENPP1基因在卵巢颗粒细胞中的表达及其与PCOS的关系,为进一步研究ENPP1在卵巢中的生理功能及PCOS的发病机制打下基础。方法收集PCOS患者(PCOS组)12例,以及排卵功能正常的单纯输卵管因素不育及男性不育的正常体重妇女(非PCOS组)22例患者的卵巢颗粒细胞。利用mRNA RT-PCR、原位杂交和实时荧光定量PCR的方法检测ENPP1在育龄期妇女及PCOS妇女颗粒细胞中的表达。结果RT-PCR的方法及原位杂交结果均显示,ENPP1在颗粒细胞胞浆中表达。ENPP1在PCOS组的2-ΔCt值为1.67±0.89,高于非PCOS组的2-ΔCt值0.94±0.76,两组间差异有统计学意义(P=0.017)。结论ENPP1在卵巢颗粒细胞中的表达差异提示,ENPP1参与了颗粒细胞的生理功能及卵巢中PCOS发病的病理机制。

过表达三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸焦磷酸酶1促进前列腺癌细胞株LNCaP细胞周期活动

目的探讨人三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸(dCTP)焦磷酸酶1在前列腺癌组织和前列腺癌细胞株LNCaP中的表达,观察dCTP焦磷酸酶1的过表达对LNCaP细胞周期的影响。方法免疫组织化学法分析前列腺癌及非癌组织中dCTP焦磷酸酶1的表达量;通过Westernblot检测LNCaP的dCTP焦磷酸酶1表达量(LNCaP:1.26±0.13比RWPE-1:0.52±0.01,P=0.000)。构建dCTP焦磷酸酶1过表达的LNCaP细胞株,并通过流式细胞仪检测LNCaP细胞株细胞周期的变化(LNCaP-dCTP焦磷酸酶1过表达组:48.23±0.66比LNCaP-空载体组:30.10±1.01,P=0.022)。结果dCTP焦磷酸酶1在癌组织中表达上调[免疫组织化学评分:非癌组:(2.00±1.55)分,前列腺癌组:(4.00±1.52)分,P=0.000],dCTP焦磷酸酶1的高表达增加了LNCaP细胞的S+G2期的比例(P=0.000)。结论前列腺癌中的dCTP焦磷酸酶1表达增加,其高表达可能会促进前列腺癌细胞分裂。

编码大鼠ENPP1蛋白的cDNA克隆及重组腺相关病毒构建

目的:克隆编码大鼠外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1(ENPP1)的全长cDNA片段,构建ENPP1重组腺相关病毒载体(AAV-ENPP1)。方法:以大鼠血管平滑肌细胞mRNA为模板,通过RT-PCR扩增获得大鼠ENPP1基因大片段并克隆至pCDH载体中,经过EcoR I/Xho I酶切、连接、转化将该片段克隆至腺相关病毒载体pAAV-MCS中,酶切及DNA测序对阳性克隆进行鉴定。重组AAV-ENPP1经包装后转染目的血管平滑肌细胞,Western blot检测目的蛋白ENPP1的表达。结果:RT-PCR成功克隆出2721 bp的大鼠ENPP1基因大片段,并最终获得测序正确的pAAV/ENPP1克隆,Western blot检测显示目的蛋白ENPP1的表达升高。结论:成功构建大鼠ENPP1重组腺相关病毒载体。

ENPP1低表达对口腔鳞癌细胞上皮间质转化的作用及机制

目的探讨外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1(ENPP1)低表达对口腔鳞状细胞癌(简称口腔鳞癌)细胞上皮间质转化的作用。方法取正常人口腔黏膜上皮细胞系、人口腔鳞癌细胞系CAL-27进行培养、传代,检测ENPP1 mRNA表达。取对数生长期CAL-27细胞进行转染,分为空白组(未处理)、对照组(转染NC-siRNA质粒)及转染组(转染ENPP1-siRNA),检测ENPP1 mRNA、蛋白表达。取对数生长期CAL-27细胞进行转染,分为A组(未转染)、B组(转染NC-siRNA质粒)、C组(转染ENPP1-siRNA质粒+MAPK激动剂)、D组(转染ENPP1-siRNA质粒)、E组(MAPK激动剂),检测CAL-27细胞增殖活性、侵袭细胞数、迁移能力及磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-MAPK)、磷酸化胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白表达。结果各时段吸光度(A)值,D组<C组<A组、B组<E组(均P<0.05);A组、B组、C组、D组、E组侵袭细胞数分别为(85.23±2.22)个/视野、(85.41±1.59)个/视野、(53.67±2.10)个/视野、(37.39±2.06)个/视野、(111.08±5.20)个/视野,D组<C组<A组、B组<E组(均P<0.05);划痕宽度百分比,E组<A组、B组<C组<D组(均P<0.05);p-MAPK、p-ERK1、p-ERK2蛋白相对表达量,D组<C组<A组、B组<E组(均P<0.05)。结论ENPP1低表达可抑制口腔鳞癌细胞上皮间质转化,机制可能与抑制MAPK信号通路有关。

后纵韧带骨化症患者基因变异及表型分析

目的:通过对后纵韧带骨化症(OPLL)患者进行全外显子组测序(WES),明确其可能的致病原因。方法:提取2017年1月至2019年12月收治的93例OPLL患者外周血基因组DNA,进行WES及生物信息学分析,筛查与OPLL相关的基因变异。结果:在2例OPLL患者中发现了ENPP1基因的2个错义变异,其中患者1携带1个c.T802C(p.Tyr268His)杂合变异,患者2携带1个c.T253C(p.Cys85Arg)杂合变异和1个c.T802C(p.Tyr268His)杂合变异。2个变异位点在不同物种中均具有高度保守性,多种蛋白预测软件均预测变异有害或可能有害,表型分析发现2例患者均发生了颈椎、胸椎OPLL及黄韧带骨化症。患者2血清磷水平在正常低限,血清碱性磷酸酶水平高于正常值。结论:ENPP1基因变异可能是OPLL患者的致病原因。该研究丰富了ENPP1基因变异谱,也为今后OPLL患者应用新的治疗方法提供了分子诊断依据。