核苷酸切除修复对UVB光损伤的识别机制

中波紫外线(UVB)会对皮肤造成各种损伤,这些都根源于UVB对皮肤细胞DNA的光损伤。光损伤产物主要有环丁烷嘧啶二聚体(CPD)和6-4光产物(6-4PP)两类,还包括少量的氧化损伤。CPD和6-4PP的修复是由核苷酸切除修复(NER)执行的。NER可分为全基因组核苷酸切除修复(GGR)和转录耦联核苷酸切除修复(TCR)两个亚途径。识别因子XPC通过一种不直接识别损伤本身的机制在GGR识别过程中发挥作用;在TCR识别过程中强调了关键因子CSB单体及二聚体两种形式的转换。在染色质水平上,DDB介导的泛素化作用是NER识别过程中重要的调控要素。另外,完成使命的识别因子的最终走向也是NER途径中的一个重要环节。通过分析上述生化过程,较清楚地总结了GGR及TCR对UVB导致的光损伤的识别机制。

核苷酸切除修复基因表达低下与肺癌的关系

目的 探讨核苷酸切除修复基因ERCCl(excisionrepaircross -complementing 1 )的表达与肺癌发病的关系。方法 用RT -PCR(reversetranscription -polymerasechainreaction)技术检测 1 50例肺癌组织和 50例正常肺组织中ERCCl基因的mRNA表达 ;免疫组化法检测ERCC1和癌变相关基因P53、C -MYC、K -RAS、BCL - 2和hTERT(端粒酶逆转录酶 )基因的蛋白表达 ;分析有关暴露因素对修复基因ERCCl表达的影响 ,并探讨ERCC1基因与P53、C -MYC、K -RAS、BCL - 2和hTERT等癌变相关基因的关系。结果 30 7% (46/ 1 50 )的肺癌组织和 4 0 % (2 / 50 )的正常肺组织存在ER CC1基因的表达低下 ;修复基因ERCC1表达低下与肺癌发生有关联 ,其危险度OR为 1 0 62 (2 38,65 98) ,P <0 0 0 1 ,人群归因危险度PARP为 8 87%。分析各种可能影响ERCC1基因表达的暴露因素 ,发现吸烟可抑制ERCC1基因的表达。另外发现 ,P53突变蛋白和K -RAS癌基因的过度表达与ERCC1表达低下有关。P分别为 0 0 388和 0 0 4 5 6。ERCC1与C -MYC、BCL - 2和hTERT基因的表达无关联。结论 ERCC1表达低下在肺癌发病中起着重要的作用 。

核苷酸切除修复基因XPD反义RNA表达载体的构建及功能研究

目的 构建核苷酸切除修复基因XPD反义RNA表达载体 ,初步探讨其对肺癌细胞DNA损伤修复能力及药物敏感性的影响。方法 通过RT PCR技术获取XPDcDNA (2～ 6 6 7bp)片段并反向插入真核 7表达载体反义载体pcDNA3 1,采用脂质体法将构建的载体质粒转染肺癌细胞株A5 4 9,经G4 18筛选 ,采用抗肿瘤药物阿霉素、顺铂对细胞进行染毒干预 ,干预结果采用SCGE和MTT综合判定。结果 转染细胞XPDmRNA表达受到抑制。单细胞凝胶电泳显示转染细胞DNA损伤修复能力降低。MTT法显示转染细胞药物敏感性增高。结论 XPD反义RNA能降低肺癌细胞DNA损伤修复能力 。

核苷酸切除修复交叉互补基因-1在结直肠癌中的表达及其意义

目的:探讨核苷酸切除修复交错互补基因-1(ERCC1)在人结直肠癌中的表达水平,分析其与铂类药物化疗敏感性及生存时间的关系.方法:以西安交通大学第一附属医院行结直肠癌根治术患者45例和剖腹探查术患者18例的标本为材料,采用免疫组织化学Elivision法检测其ERCC1表达水平.其中40例复发、转移及晚期患者行草酸铂为基础方案化疗.所有入组患者随访6年.结果:肿瘤组织中ERCC1的阳性率为52.08%,低于对照组.病理分级与ERCC1的阳性率之间有关(P=0.040),病理分级越高,ERCC1阳性率越低,表达强度越弱.ERCC1阴性者铂类药物化疗有效率为60.00%(12/20),而阳性者则为25.00%(5/20),二者之间具有统计学差异(P=0.025);Cox回归分析显示ERCC1表达为结直肠癌患者独立预后因子(P=0.048).结论:ERCC1表达可作为预测结直肠癌患者对铂类药物敏感性及预后判断的指标之一.

晚期三阴性乳腺癌核苷酸切除修复交叉互补基因1表达与化学治疗效果的关系

目的探讨晚期三阴性乳腺癌(TNBC)核苷酸切除修复交叉互补基因1(ERCC1)表达与化学治疗效果的关系。方法回顾性分析郑州市第三人民医院2010年5月至2015年6月收治的97例晚期TNBC患者,其中38例患者采用TAC(紫杉醇+吡柔比星+环磷酰胺)方案进行化学治疗、26例患者采用TP(紫杉醇+顺铂)方案进行化学治疗、33例患者采用TX(紫杉醇+卡培他滨)方案进行化学治疗,化学治疗后观察其疗效;将所有患者术后病理标本或穿刺活检蜡块采用液相芯片技术检测ERCC1 mRNA表达情况,观察ERCC1 mRNA表达在TNBC中的特点及与不同化学治疗方案疗效的关系。结果 ERCC1 mRNA表达水平与患者的年龄、月经状态、组织学分级、转移部位、Ki67指数及体力状况评分均无明显相关性(P>0.05);ERCC1 mRNA表达水平与TAC、TX方案治疗效果无关(χ~2=0.067、0.122,P>0.05),与TP方案治疗效果关系密切,低表达者治疗效果优于中、高表达者(χ~2=9.458,P<0.05);多因素分析显示,腋窝转移状态、Ki67指数及ERCC1 mRNA表达为TNBC化学治疗效果的预测因子。结论 ERCC1 mRNA表达在不同临床特征的TNBC患者中无明显差异,并且ERCC1有可能成为TNBC铂类药物疗效的预测基因。

核苷酸切除修复基因XPA反义RNA增强肺癌细胞对顺铂的敏感性

背景与目的:目前认为,肿瘤细胞自身核苷酸切除修复(nucleotideexcisionrepair,NER)能力增强是肿瘤细胞产生耐药性最重要的机制之一。着色性干皮病A(xerodermapigmentosungroupA,XPA)基因在核苷酸切除修复早期发挥核心作用。本研究拟探讨XPA基因表达与肺癌细胞株对顺铂敏感性的关系。方法:将XPA的反义RNA稳定转染人肺癌细胞株A549,用有限稀释法筛选阳性细胞克隆。分别用Northernblot和Westernblot法检测阳性细胞克隆XPAmRNA和蛋白水平;MTT法检测肿瘤细胞对顺铂敏感性;宿主细胞再活化反应(hostcellreactivation,HCR)检测肿瘤细胞DNA损伤修复能力。结果:筛选得到6个阳性克隆AS1～AS6,其中AS3～AS6细胞克隆的XPAmRNA和蛋白水平均明显降低。剂量依赖实验表明,顺铂对A549细胞与AS1～AS6细胞克隆的半数抑制浓度(IC50)分别为8.1、7.6、4.7、3.2、1.9、2.8、4.1滋g/ml。统计学分析表明,与A549细胞相比,AS3～AS6细胞对顺铂的敏感性明显增强(F=9.75、9.14、7.39、8.91,P=0.005、0.006、0.012、0.006),而且XPAmRNA表达水平与细胞IC50值呈显著相关(r=0.927,P=0.003)。处理24、48、72h后,AS3～AS6细胞对顺铂的敏感性同样显著增强。HCR实验结果表明,AS3～AS6细胞的NER能力显著减弱,而且XPAmRNA表达水平与细胞NER能力呈?

核苷酸切除修复基因XPA反义RNA表达载体的构建及其抑瘤功能

采用RT PCR方法扩增出 4 2 6bp着色性干皮病A(xerodermapigmentosumgroupA ,XPA)cDNA片段 (2～ 4 2 7bp) ,反向插入pcDNA3 1质粒构建XPA反义RNA表达载体 .经测序证实 ,该片段序列与XPAmRNA对应片段完全互补 .通过脂质体Lipofectamine 2 0 0 0将重组质粒转染肺癌A5 4 9细胞 ,RT PCR检测表明转染XPA反义RNA重组质粒能够抑制肺癌细胞XPAmRNA表达 ;MTT实验表明转染XPA反义RNA的肺癌细胞对顺铂敏感性增强 .

核苷酸切除修复基因多态性和铂类药物耐药性关系研究进展

铂类药物广泛用于实体肿瘤的化疗,其作用机制与肿瘤细胞DNA的损伤有关,然而,机体的DNA修复机制可以将这些损伤修复。核苷酸切除修复是DNA修复中的一种,目前认为核苷酸切除修复与铂类药物的耐药相关。本文就核苷酸切除修复基因多态性和铂类药物耐药性关系研究进展作一综述。

天冬氨酸蛋白酶A、甲状腺转录因子-1、核苷酸切除修复交叉互补基因1检测在肺癌患者中的应用价值

目的探讨检测天冬氨酸蛋白酶A(NapsinA)、甲状腺转录因子-1(TTF-1)、核苷酸切除修复交叉互补基因1(ERCC1)的表达在肺癌患者中的应用价值.方法选取40例肺癌患者的手术切除肺癌病理标本,以40例癌旁正常组织作为对照,检测NapsinA、TTF-1、FERCC1表达.结果肺癌组织中NapsinA、TTF-1、ERCC1表达水平、阳性率显著高于癌旁正常组织(P<0.05);不同病理类型、分化程度者NapsinA表达阳性率差异有统计学意义(P<0.05);不同病理类型、TNM分期者TTF-1表达阳性率差异有统计学意义(P<0.05);NapsinA、TTF-1、ERCC1之间无显著相关性(P>0.05).结论临床可经检测NapsinA、TTF-1、FERCC1表达判断肺癌患者病情.

人肿瘤细胞核苷酸切除修复蛋白表达与抗癌药耐药的相关性(英文)

背景与目的:核苷酸切除修复(Nucleotideexcisionrepair,NER)是真核细胞中的DNA修复多酶系统,它可能与人肿瘤细胞对抗癌药的耐药有关。本实验将探讨NER蛋白(XPA,XPB,XPD和ERCC1)的表达与人肿瘤细胞耐药的关系。方法:采用westernblot检测美国国家癌症研究所(NationalCancerInstitute,NCI)用于抗癌药筛选的60株人肿瘤细胞的ERCC1,XPA,XPBXPD表达,并与170种抗癌药物的细胞毒试验结果进行相关性分析。结果:ERCC1,XPB和XPD的蛋白表达与抗癌药物敏感性呈负相关,在170种抗癌药物中分别有13,17和32种的耐药性与上述蛋白水平相关性显著或非常显著(P<0.05)。而XPA的表达与药物敏感性无明显正/负相关。根据已确定的6种药物作用机理分析,肿瘤细胞XPD表达与其对烷化剂类抗癌药耐药相关性显著。结论:本实验结果肿瘤细胞的XPD蛋白表达与烷化剂类抗癌药的耐药相关,提示XPD在肿瘤细胞耐药过程中起重要作用。

核苷酸切除修复基因多态性与肺癌发生风险的研究进展

肺癌是由基因-环境相互作用引起的对人类健康及生命具有严重威胁的高致死性恶性肿瘤之一,既往的研究倾向于肺癌与吸烟的因果关系,但近几年的研究显示个人的遗传特征决定肺癌的易患性。有关核苷酸切除修复基因在肺癌发生过程中产生的作用备受关注,单核苷酸多态性是目前受到高度重视的新一代遗传标志,主要涉及单核苷酸多态的差异性表达和DNA修复能力的改变过程。

核苷酸切除修复交叉互补因子1蛋白与非霍奇金淋巴瘤临床特征及预后的关系

目的探讨核苷酸切除修复交叉互补因子(ERCC)1蛋白在非霍奇金淋巴瘤(NHL)组织中的表达与临床特征及预后的关系。方法选择该院首诊的76例NHL患者,取其组织标本作为实验组,另选择同期肿瘤周围组织清扫的非肿瘤侵袭的淋巴结增生的12例患者,取其炎症组织标本作为对照组,运用免疫组化SP法对ERCC1蛋白的表达情况进行检测,统计并分析其与NHL临床特征及预后的关系。结果两组ERCC1蛋白阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05);ERCC1蛋白阳性表达与性别、年龄、病理亚型、临床分期、有无B症状、乳酸脱氢酶(LDH)水平无关(P>0.05),与有无巨大肿块有关(P<0.05);ERCC1蛋白阳性表达组5年生存率高于阴性表达组(P<0.05)。结论 ERCC1蛋白表达阳性者具有较好的预后效果。

DNA修复基因:核苷酸切除修复基因单核苷酸多态与癌症发生风险的研究进展

单核苷酸多态(singIe nucleotide polymorphism,SNP)是目前受到高度重视的全新一代遗传标记,将是今后基因组学研究的一大主要工具。DNA修复系统基因在维持基因组功能整体性,修复致癌因素所致的损伤及抗癌过程中有着重要作用。一些普通的及新的DNA修复基因单核苷酸多态与癌症发生风险的关联已经被验证或正在被验证,本文仅就核苷酸切除修复基因单核苷酸多态与癌症发生风险的研究进展作一综述。

核苷酸切除修复基因与癌症关系的研究

核苷酸切除修复（nucleotide excision repair, NER）是人类重要的 DNA 修复系统,可识别并修复多种结构不相关的 DNA 损伤,主要修复嘧啶二聚体和结构大的致癌物-DNA 加合物和各种引起DNA螺旋扭曲变形的损伤[1]。在该修复系统中包括两条途径,一条为全基因组修复（GG-NER）途径,可修复全基因组的 DNA 损伤,特点是速度较慢；第二条是转录藕联修复（TCR）途径,它主要修复各种阻碍RNA 聚合酶延伸的 DNA 损伤,特点是修复速度相对较快。这两条途径在识别损伤以后的修复过程基本相同。环境致癌物进入人体可引起DNA损伤,若机体不能及时正确地修复受损的DNA,就可能引起基因突变,从而导致肿瘤的发生。机体有近30个基因产物参与其切除修复的全过程,本文就常见的核苷酸切除修复基因与癌症发生的关系进行了探讨。

核苷酸切除修复基因XPB反义RNA表达质粒的构建及其功能的初步研究

背景与目的:核苷酸切除修复机制是细胞修复损伤DNA的重要途径,肿瘤细胞的耐药常伴随DNA损伤修复基因表达增强,采取反义策略降低细胞的DNA损伤修复能力可以增加肿瘤细胞的药物敏感性。本研究拟构建能在哺乳动物细胞中表达XPB反义RNA的表达质粒pcDNA-XPB/AS(XPB:着色性干皮病B基因),并初步探讨其对肺癌细胞DNA损伤修复能力及抗肿瘤药物耐药性的影响。方法:采用RT-PCR技术扩增的XPBcDNA5'端一段69～520bp的序列被反向插入表达质粒pcDNA3.1/His。将该重组质粒瞬时转染肺癌A549细胞。单细胞凝胶电泳(SCGE)比较阿霉素诱导的转染前后细胞DNA损伤修复情况。MTT法检测转染前后细胞对阿霉素的敏感性。结果:酶切图谱分析和基因测序证实反义表达质粒构建成功。RT-PCR显示转染细胞XPBmRNA表达水平下降。以4.0μg/ml阿霉素诱导细胞DNA损伤,SCGE显示转染细胞修复DNA损伤能力受到抑制。MTT显示未转染细胞与转染细胞对阿霉素的敏感性存在差别,但无统计学意义。结论:构建的反义表达质粒能下调转染细胞XPBmRNA表达,抑制细胞DNA损伤修复能力,为进一步研究XPB基因功能奠定了基础。

核苷酸切除修复交叉互补组基因1和人类X射线交错互补修复基因1基因多态性与结直肠癌奥沙利铂疗效的相关性

目的探讨核苷酸切除修复交叉互补组基因1(ERCC1)和人类X射线交错互补修复基因1(XRCC1)单核苷酸多态性(SNP)与接受以奥沙利铂为基础的化疗方案治疗晚期结直肠癌(CRC)疗效的关系。方法选取2017年11月至2019年4月收治于荆门市第一人民医院经病理组织学确诊为晚期直肠癌病人95例,均接受含奥沙利铂为基础的化疗方案化疗至少3个周期后评价疗效。采用荧光染色原位杂交测序法对化疗病人外周血中ERCC1 Asn118Asn、XRCC1 Gln399Arg基因型进行检测,分析各基因型与CRC病人近期化疗疗效的相关性。结果本研究所选取的病人中各多态性位点的基因型分布均符合HardyWeinberg平衡。病人的性别、年龄、结直肠癌分期(TNM分期)、肿块部位(结肠部位、直肠部位)和含奥沙利铂为基础的化疗方案疗效均差异无统计学意义(P>0.05)。95例CRC病人中,携带ERCC1 Asn118Asn GG、AG+AA基因型的病人化疗后有效率分别为51.9%(28/54)和24.4%(10/41),ERCC1 Asn118Asn AG+AA基因型病人化疗失败的可能性是GG型的3.338倍,OR=3.338,95%CI为1.370~8.134,P<0.05;携带XRCC1 Gln399Arg CC、TC+TT基因型的病人化疗后有效率分别为52.0%(26/50)和26.7%(12/45),XRCC1 Gln399Arg TC+TT基因型病人化疗失败的可能性是CC型之间的2.979倍,OR=2.979,95%CI为1.257~7.060,P<0.05。结论就含奥沙利铂为基础联合化疗失败的可能性而言,携带ERCC1 Asn118Asn AG+AA基因型比GG型高;携带XRCC1 Gln399Arg TC+TT基因型比CC型高。检测ERCC1 Asn118Asn和XRCC1 Gln399Arg单核苷酸多态性可以成为预测结直肠癌病人接受含奥沙利铂为基础的化疗方案疗效的指标。

GTF2H2的核苷酸切除修复功能对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨通用转录因子ⅡH亚基2(GTF2H2)在肝癌细胞中的核苷酸切除修复(NER)功能及对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法使用siRNA构建GTF2H2敲低的肝癌细胞模型,采用细胞计数试剂盒(CCK8)实验检测肝癌细胞的增殖能力;流式细胞术检测肝癌细胞株的凋亡情况。定量实时聚合酶链式反应(q-RT-PCR)检测增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡蛋白半胱天冬酶(Caspase-3)的表达情况。进一步构建肝癌细胞的紫外线(UV)照射模型,分析GTF2H2敲低后UV照射引起的NER的标志物环丁烷嘧啶二聚体(CPD)和嘧啶(6-4)嘧啶酮光产物(6-4PP)的变化。结果GTF2H2敲低的肝癌细胞增殖能力相对明显增强增殖蛋白PCNA的表达相对增多。相反,凋亡能力相对减弱凋亡蛋白Caspase-3的表达相对降低。而GTF2H2敲低后,UV照射所致的NER标志物CPD和6-4PP含量相对增加。结论GTF2H2在肝癌细胞中发挥了NER功能,抑制了肝癌细胞的增殖,促进其凋亡,是肝癌发生的一个潜在抑制因子。

核苷酸切除修复的研究进展

核苷酸切除修复的研究进展明亮（杭州大学生命科学学院，杭州３１００１２）关键词核苷酸切除修复自１９５８年Ｒｕｐｅｒｔ等首次证明紫外线照射造成的ＤＮＡ损伤可由光裂合酶催化的光复活作用进行修复后，有关ＤＮＡ修复的研究和探索长期来为生命科学工作者所重视。ＤＮ...

核苷酸切除修复基因XPF无义突变与胃癌发生的相关性研究

目的探讨胃癌组织及胃癌细胞系中XPF C2169A无义突变与其发生的关系。方法对488例肿瘤患者外周血及64例胃癌组织进行基因组DNA的提取,应用Taqman MGB探针进行基因分型;应用免疫组化法检测XPF蛋白的情况。结果 488例肿瘤患者外周血中C2169A无一发生突变,然而64例胃癌组织中发现32例(50%)发生突变,并导致XPF蛋白表达水平降低,羧基端失去194个氨基酸;XPF C2169A突变仅出现在癌组织中,而癌旁正常组织中没有突变;突变后表达的截断蛋白t XPF不能与ERCC1相互作用,迅速通过泛素化降解。结论胃癌中XPF C2169A主要是单等位基因突变,表明XPF是一个单倍型剂量不足修复基因,XPF C2169A突变可以作为胃癌早期诊断和治疗的靶点。