宫颈癌患者血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体和相关细胞因子表达及临床意义

目的探究宫颈癌患者血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体和相关细胞因子的表达水平及临床意义。方法选取2021年3月至2024年3月收治的宫颈癌患者78例作为癌变组,选取同期宫颈上皮内瘤变患者78例作为癌前病变组。比较2组血清NLRP3炎症小体[NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)]、白细胞介素-18(IL-18)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;采用Pearson相关性分析血清NLRP3、ASC、Caspase-1与IL-18、IL-1β的关系;分析宫颈癌患者相关细胞因子水平和临床病理特征之间的关系。结果癌变组血清IL-18、IL-1β、NLRP3、ASC、Caspase-1水平均高于癌前病变组(P<0.01);Pearson相关性分析结果显示,患者血清NLRP3、ASC、Caspase-1水平与IL-18和IL-1β水平均呈正相关(P<0.05,P<0.01)。宫颈癌患者肿瘤临床分期越高、分化程度越低,IL-18和IL-1β水平越高(P<0.01);有淋巴结转移和无淋巴结转移的宫颈癌患者IL-18和IL-1β水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论宫颈癌患者血清IL-18、IL-1β水平和血清NLRP3炎症小体均异常升高,且其水平变化与肿瘤恶性进展有关。

电针干预脑缺血再灌注损伤模型大鼠核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3/半胱天冬氨酸蛋白酶1表达的变化

背景:对于脑缺血/再灌注损伤目前尚无有效的治疗方法,缓解脑缺血/再灌注损伤级联损伤对于治疗方法的探索至关重要。电针基于传统针灸和电疗法,可有效缓解缺血性脑卒中导致的神经功能损伤症状。目的:基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3/半胱天冬氨酸蛋白酶1通路,探讨电针对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用。方法:48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、抑制剂组,每组12只,后3组应用线栓法制备脑缺血再灌注模型。半胱天冬氨酸蛋白酶1抑制剂用Z-YVAD-FMK干预,穴位选取"合谷""尺泽""三阴交""足三里"。采用神经行为学评分评定神经功能症状,2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色法观察脑组织梗死情况,电镜观察神经元焦亡,荧光定量PCR和蛋白质印迹检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3及半胱天冬氨酸蛋白酶1表达,免疫荧光染色观察小胶质细胞水平,酶联免疫吸附实验检测白细胞介素1β、白细胞介素18及肿瘤坏死因子α表达水平。结果与结论:(1)与模型组比较,电针组和抑制剂组的神经功能缺损评分、脑组织梗死体积减少(P均<0.05);(2)与模型组比较,电针组和抑制剂组的神经元焦亡减轻;(3)与模型组比较,电针组和抑制剂组的小胶质细胞减少,白细胞介素1β、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α表达水平降低(P均<0.05);(4)与模型组比较,电针组和抑制剂组核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3及半胱天冬氨酸蛋白酶1表达水平降低(P均<0.05);(5)表明电针可通过减少小胶质细胞水平、减少炎症反应、下调核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3/半胱天冬氨酸蛋白酶1表达、减轻脑缺血再灌注损伤大鼠的神经元焦亡,发挥神经保护作用。

抑郁症与核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3信号通路相互关系的研究进展

抑郁症是常见的精神障碍性疾病之一,其会给患者和家庭带来沉重的经济负担和思想负担[1]。随着人类生活节奏的加快,来自各个方面的精神压力将会不断增加,促使部分人群出现不同程度的抑郁样行为,如心境低落、思维迟缓、意志活动减退等。如果不加以控制外界施加因素,部分人群就会出现抑郁症,其发病机制尚不清楚。

穴位埋线调控NOD样受体热蛋白结构域3/半胱氨酸蛋白酶-1信号通路抗溃疡性结肠炎损伤的机制研究

目的:观察穴位埋线对“虚、瘀”状态下溃疡性结肠炎(UC)大鼠的治疗作用及对NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)信号通路的调控作用,探讨穴位埋线治疗UC的作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白组10只和造模组48只,采用腺嘌呤、番泻叶分阶段灌胃,再予2,4,6-三硝基苯磺酸与乙醇复合物灌肠复制“虚、瘀”状态下UC大鼠模型。造模成功的大鼠按体质量随机分为模型组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组、非穴位埋线组和穴位埋线组,每组11只。穴位埋线组选“足三里”“天枢”“肾俞”等穴进行穴位埋线治疗,非穴位埋线组于大鼠臀部肌肉丰厚处进行埋线治疗,每14 d治疗1次,共治疗3次;SASP组予SASP溶液(50 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,每日1次,共治疗42 d。观察大鼠一般情况,计算大鼠疾病活动指数(DAI);测量各组大鼠结肠长度;肉眼评估结肠黏膜大体病理学改变,并进行结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分;HE染色评估结肠组织病理学改变,进行结肠病理损伤(TDI)评分;ELISA法检测各组大鼠血清NLRP3、白细胞介素(IL)-1β和IL-18含量;荧光定量PCR法检测各组大鼠结肠组织NLRP3、Caspase-1、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、IL-1β及IL-18 mRNA水平;Western blot法检测各组大鼠结肠组织NLRP3、Caspase-1蛋白表达水平;免疫组织化学染色法检测结肠组织ASC阳性表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠体质量降低(P<0.01),结肠长度明显缩短(P<0.01),结肠黏膜形成明显溃疡面,隐窝破坏明显,大量炎性细胞浸润,DAI、CMDI及TDI评分升高(P<0.01),血清中NLRP3、IL-1β及IL-18含量升高(P<0.01),结肠组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA水平和Caspase-1、ASC、NLRP3蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与模型组比较,穴位埋线组和SASP组体质量升高(P<0.01),大鼠结肠长度增长(P<0.01),结肠黏膜病理损伤明显减轻,DAI、CMDI及TDI评分显著降低(P<0.01),血清中NLRP3、IL-1β及IL-18含量显著降低(P<0.01),结肠组织内NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA和Caspase-1、ASC、NLRP3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。穴位埋线组各指标较非穴位埋线组均有明显改善(P<0.01)。结论:穴位埋线可通过调控NLRP3/Caspase-1信号通路抑制炎性小体活化,缓解UC大鼠的炎性反应。

细胞焦亡相关蛋白在胎膜早破孕妇胎膜组织中的表达及其与妊娠结局的关系

目的:探究细胞焦亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase-1)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)在胎膜早破孕妇胎膜组织中的表达及其与妊娠结局的关系。方法:选择2020年1月至2023年1月于常熟市中医院妇产科就诊并分娩的胎膜早破孕妇135例作为观察组,另选择同期产检并分娩的健康孕妇135例作为对照组,比较两组孕妇胎膜组织中NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表达。依据妊娠结局将135例胎膜早破孕妇分为妊娠不良组(n=50)和妊娠良好组(n=85),通过单因素和多因素Logistic分析胎膜早破孕妇妊娠不良的独立危险因素;应用Logistic回归模型结合限制性立方样条(restricted cubic splines,RCS)分析胎膜早破孕妇胎膜组织中细胞焦亡相关蛋白表达量与妊娠不良的剂量反应关系;依据独立因素构建列线图预测模型,并对模型进行验证。结果:观察组胎膜组织中NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表达显著高于对照组(P<0.001)。就诊时间≥2 h、生殖道感染、NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA高表达是胎膜早破孕妇妊娠结局不良的独立危险因素(P<0.05);RCS结果显示,胎膜早破孕妇胎膜组织中NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA表达量与妊娠结局不良呈非线性剂量反应关系,在NLRP3 mRNA表达量为1.20(OR=1.818,95%CI:1.673~1.932)和Caspase-1 mRNA表达量为1.25(OR=2.735,95%CI:1.132~3.821)处发生妊娠结局不良的风险最大;构建的列线图预测模型具有良好的区分度、准确性和临床适用性。结论:NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA在胎膜早破孕妇胎膜组织中呈高表达,二者是胎膜早破孕妇妊娠结局不良的独立危险因素,随着表达量升高,胎膜早破孕妇妊娠不良的危险性也随之升高。

基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路探讨苓桂气化方改善射血分数保留心力衰竭早期舒张功能的分子机制

目的观察苓桂气化方对射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)早期模型大鼠心脏舒张功能的干预效应,基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)/胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(cysteine-containing aspartate-specific proteases-1,Caspase-1)/消皮素D(Gasdermin D,GSDMD)通路探讨其潜在的分子作用机制。方法40只自发性高血压大鼠高盐高脂高糖饮食联合腹腔注射链脲佐菌素溶液建立HFpEF早期大鼠模型,分为HFpEF组、恩格列净组(1.8 mg/kg)、苓桂气化方低剂量组(4.96 g/kg)、苓桂气化方高剂量组(9.92 g/kg),予相应药物灌胃;正常血压组、空白组予等剂量生理盐水灌胃,连续干预9周。采用超声心动图检测大鼠左心房内径(left atrial diameter,LAD)、舒张早期二尖瓣血流速度(left ventricular early diastolic filling peak velocity,E)与舒张晚期二尖瓣血流速度(atrial systolic left ventricular filling peak velocity,A)比值、左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF);酶联免疫吸附测定法检测血清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)含量;苏木精—伊红染色观察心肌组织病理变化;蛋白质印迹(Western Blot,WB)法检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD和白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达。结果与正常血压组相比,HFpEF组LAD和E/A增加(P<0.05),LVEF无明显变化(P>0.05);血清ANP含量升高(P<0.05);病理观察显示心肌炎症浸润;WB结果示NLRP3、Caspase-1、GSDMD和IL-1β蛋白含量升高(P<0.05),表明建模成功。与HFpEF组比,恩格列净组和苓桂气化方低、高剂量组的LAD和E/A减小(P<0.05),血清ANP含量降低(P<0.05),病理观察显示心肌炎症浸润减轻,WB结果示恩格列净组NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β蛋白含量降低(P<0.05),苓桂气化方低剂量组NLRP3、IL-1β蛋白含量降低(P<0.05),苓桂气化方高剂量组NLRP3、GSDMD、IL-1β蛋白含量降低(P<0.05),其余蛋白含量有下降趋势。结论苓桂气化方能改善HFpEF早期模型大鼠心脏舒张功能,其机制可能与调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路、减轻心肌炎症浸润、抑制心房重构相关。

间充质干细胞介导NLRP3/Caspase-1通路对骨关节炎模型大鼠软骨细胞凋亡的影响

目的探讨与分析间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)介导核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nucleotide-binding oligomeric domain-like receptor protein 3,NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Cysteinerequiring aspartate protease-1,Caspase-1)通路对骨关节炎模型大鼠软骨细胞凋亡的影响。方法将骨关节炎模型大鼠42只随机分为3组:模型组、地塞米松组与MSCs组,每组14只。模型组给予生理盐水5mL/kg灌胃,每周2次;地塞米松组给予肌肉注射20mg/kg地塞米松约200μL,每周2次;MSCs组给予MSCs注射治疗,每周2次。3组分别在治疗第4周、治疗第8周各处死7只大鼠,检测软骨细胞凋亡情况。结果地塞米松组与MSCs组治疗第4周、第8周的血清碱性磷酸酶(ALP)含量、软骨细胞凋亡指数水平、软骨组织NLRP3和Caspase-1蛋白相对表达水平均低于模型组(P<0.05),且MSCs组低于地塞米松组(P<0.05)。地塞米松组与MSCs组治疗第4周、第8周的股骨、腰椎骨密度高于模型组(P<0.05),且MSCs组高于地塞米松组(P<0.05)。结论在骨关节炎模型大鼠中应用MSCs能降低血清ALP含量,提高股骨、腰椎骨密度,还可抑制软骨组织NLRP3、Caspase-1蛋白的表达,降低软骨细胞凋亡水平。

老年痛风性关节炎患者血清NALP3、Caspase-1、IL-18水平及与肾功能指标相关性分析

血尿酸(SUA)升高是痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)患者的主要病理特征,同时伴有大量的炎症因子浸润,临床表现为痛风石和疼痛等,严重者还可出现关节畸形和功能障碍,造成肾功能损伤,甚至肾功能衰竭[1-2]。研究证实[3-4],炎性因子在AGA的发生发展及肾功能损害中均发挥了重要作用。

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性小体在帕金森病中的研究进展

帕金森病是一种常见的神经退行性疾病,其特征是黑质多巴胺能神经元的进行性丧失。虽然帕金森病的病因可能是多因素的,但神经炎症是该疾病发病机制的重要组成部分。核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体是调节炎症的多蛋白先天免疫复合物。在帕金森病神经炎症中,NLRP3炎性小体复合物组装募集并激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1),激活的caspase-1切割炎性因子白细胞介素-1β和白细胞介素-18的前体,从而启动下游炎性级联反应,加重多巴胺神经元损伤。本综述中对NLRP3炎性小体在帕金森病病理生物学中最新研究进行总结,并且讨论了通过抑制NLRP3炎性小体缓解帕金森病进展的潜在策略。

丙泊酚通过NLRP3/ASC/Caspase-1通路对肺癌A549细胞增殖及焦亡的影响

目的探讨丙泊酚通过核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/凋亡相关斑点样蛋白(ASC)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路对肺癌A549细胞增殖及焦亡的影响。方法将肺癌A549细胞随机分为空白对照组、低浓度丙泊酚组(30μmol/L)、中浓度丙泊酚组(60μmol/L)、高浓度丙泊酚组(120μmol/L)、高浓度丙泊酚+NLRP3抑制剂组(120μmol/L+100 nmol/L);各组进行相应处理后。四甲基偶氮唑蓝法检测肺癌A549细胞增殖;酶联免疫吸附法检测肺癌A549细胞上清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平;Hoechst/碘化丙啶(PI)双重染色检测肺癌A549细胞焦亡;荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法分别检测肺癌A549细胞增殖[原癌基因(c-Myc)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)]、焦亡[消皮素D-N端(GSDM D-N)、IL-1β]及NLRP3、ASC、Caspase-1信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达水平。结果空白对照组细胞呈蓝色荧光;低、中、高浓度丙泊酚组红色荧光逐渐增加;与高浓度丙泊酚组相比,高浓度丙泊酚+NLRP3抑制剂组红色荧光较少;表明丙泊酚可促进肺癌A549细胞焦亡,NLRP3抑制剂可反转高浓度丙泊酚的作用效果。与空白对照组相比,低、中、高浓度丙泊酚组肺癌A549细胞存活率、c-Myc、CyclinD1 mRNA和蛋白表达水平依次降低,上清IL-6、IL-1β、IL-18水平、GSDM D-N、IL-1β、NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA和蛋白表达水平依次升高(P<0.05);与高浓度丙泊酚组相比,高浓度丙泊酚+NLRP3抑制剂组肺癌A549细胞存活率、c-Myc、CyclinD1 mRNA和蛋白表达水平升高,上清IL-6、IL-1β、IL-18水平、GSDM D-N、IL-1β、NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论丙泊酚可能通过激活NLRP3/ASC/Caspase-1通路来抑制肺癌A549细胞增殖,促进细胞焦亡。

沙棘熊果酸调控NLRP3/caspase-1轴在抗结核药物致人肝细胞损伤中的作用

目的探究沙棘熊果酸调控NLRP3/caspase-1轴在抗结核药物致人肝细胞损伤中的作用。方法正常肝细胞株HL-7702分正常组、模型组及沙棘熊果酸低、中、高浓度组。除正常组外,其余各组120μg/mL异烟肼和240μg/mL利福平联合处理构建抗结核药物致人肝细胞损伤模型,沙棘熊果酸低、中、高浓度组同时添加0.018、0.18、1.8μmol/L沙棘熊果酸共培养。CCK-8法检测细胞增殖能力;ELISA检测上清液中TNF-α、白IL-1β水平;SOD活性检测试剂盒、MDA检测试剂盒检测上清液中SOD、MDA水平;流式细胞术检测细胞凋亡能力;蛋白免疫印迹检测细胞中NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1(p10)蛋白水平。结果与正常组比较,模型组(12、24、36 h)细胞存活率、上清液中SOD水平降低(P<0.05);上清液中TNF-α、IL-1β、MDA水平,细胞凋亡率,细胞中NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1(p10)蛋白水平升高(P<0.05)。与模型组比较,沙棘熊果酸低、中浓度组(24、36 h)、沙棘熊果酸高浓度组(12、24、36 h)细胞存活率,沙棘熊果酸低、中、高浓度组上清液中SOD水平升高(P<0.05);沙棘熊果酸低、中、高浓度组上清液中TNF-α、IL-1β、凋亡率、细胞中NLRP3蛋白水平,沙棘熊果酸中、高浓度组上清液中MDA,细胞中pro-caspase-1、caspase-1(p10)蛋白水平降低(P<0.05)。随着沙棘熊果酸浓度的升高,(12、24、36 h)细胞存活率、上清液中SOD水平逐渐升高(P<0.05);上清液中TNF-α、IL-1β、MDA、凋亡率,细胞中NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1(p10)蛋白水平逐渐降低(P<0.05),呈浓度依赖效应。结论沙棘熊果酸在抗结核药物致人肝细胞中抑制NLRP3/caspase-1通路从而抑制炎症和氧化应激,抑制细胞病变发生,从而促进细胞增殖、抑制细胞凋亡,实现对肝细胞的保护。

参芍口服液对糖尿病肾病大鼠肾脏NLRP3炎症复合体相关蛋白表达的影响

目的探讨参芍口服液对糖尿病肾病(DN)模型大鼠肾脏核苷酸结合寡聚化结构域样受体3炎症性复合体(以下简称NLRP3炎症体)表达的影响及对肾脏的保护作用。方法选择健康雄性Wistar大鼠45只,随机分为模型组、治疗组、对照组各15只。模型组、治疗组予一次性腹腔注射STZ制备DN模型,对照组腹腔注射等剂量的生理盐水。造模成功后,治疗组给予参芍口服液250 mg/(kg·d)灌胃,对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃,均干预12周。各组大鼠干预12周后,以代谢笼收集24 h尿液,检测24 h尿量及尿蛋白定量(PRO),断尾取血测定血糖、血清Scr、血BUN。采用Masson染色法观察肾脏组织病理改变。采用免疫组化法检测肾脏组织NLRP3炎症体成分核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、IL-1β蛋白定性表达,采用Western blot法检测肾脏组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达量。结果治疗组、对照组血糖、24 h尿量、PRO、血Scr、血BUN均低于模型组(P均<0.05)。模型组肾小球中重度纤维化,系膜基质重度增生,基底膜明显增厚;治疗组病理改变较模型组明显减轻。模型组肾脏组织中NLRP3、Caspase-1及IL-1β的定性及定量表达均高于对照组及治疗组(P均<0.05)。结论参芍口服液可降低DN大鼠血糖水平、减轻肾脏纤维化、保护肾功能,其机制可能与降低肾脏组织中NLRP3炎症体相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β的表达有关。

基于NLRP3/caspase-1通路探讨芹菜素对脓毒症诱导急性呼吸窘迫综合征小鼠肺损伤的保护作用

目的基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP)3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-1通路探讨芹菜素对脓毒症诱导急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠肺损伤的保护作用。方法48只BALB/c健康、雄性小鼠分对照组、模型组、芹菜素组、芹菜素+NLRP3激活剂组各12只,除对照组,其余各组气道滴入2 mg/kg脂多糖(LPS)50μl,对照组相同方法滴入50μl磷酸盐缓冲液(PBS)。2 h后芹菜素组腹腔注射20 mg/kg芹菜素,芹菜素+NLRP3激活剂组腹腔注射20 mg/kg芹菜素+NLRP3激活剂尿酸单钠盐(MSU)。测定肺组织湿/干重比值;苏木素-伊红(HE)染色检测肺组织形态;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺泡灌洗液和肺组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平;Western印迹检测肺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1、pro-caspase-1蛋白水平。结果模型组肺组织断链、破损现象明显,大量炎症细胞浸润,肺泡间隔增厚;芹菜素组肺组织损伤状况明显减轻,仅出现少量炎症细胞浸润,肺泡间隔厚度变薄;芹菜素+NLRP3激活剂组肺组织症状介于模型组和芹菜素组之间。与对照组相比,模型组肺组织湿/干重比值,肺泡灌洗液和肺组织中IL-1β、IL-18水平,肺组织中NLRP3、ASC、pro-caspase-1/caspase-1蛋白水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,芹菜素组肺组织湿/干重比值,肺泡灌洗液和肺组织中IL-1β、IL-18水平,肺组织中NLRP3、ASC、pro-caspase-1/caspase-1蛋白水平明显降低(P<0.05);与芹菜素组相比,芹菜素+NLRP3激活剂组肺组织湿/干重比值,肺泡灌洗液和肺组织中IL-1β、IL-18水平,肺组织中NLRP3、ASC、pro-caspase-1/caspase-1蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论芹菜素可通过NLRP3/caspase-1通路抑制炎症反应,从而实现对脓毒症诱导的ARDS小鼠肺损伤的保护。

茱萸丸及其拆方对动脉粥样硬化模型小鼠主动脉斑块及主动脉组织NLRP3/ASC/Caspase-1信号通路的影响

目的探讨茱萸丸治疗动脉粥样硬化的可能作用机制及配伍意义。方法13只正常C57BL/6J小鼠作为空白组,40只同品系的ApoE-/-小鼠随机分为模型组、黄连组、吴茱萸组、茱萸丸组各10只。除空白组外,其余各组均采用高脂饲料连续12周喂养制备动脉粥样硬化模型。造模后黄连组给予黄连药液143.34 mg/(kg·d)灌胃,吴茱萸组给予吴茱萸药液301.78 mg/(kg·d)灌胃,茱萸丸组给予茱萸丸药液261.07 mg/(kg·d)灌胃,空白组及模型组每日给予0.3 ml生理盐水灌胃,各组小鼠均灌胃12周。各组小鼠采用生化法检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖水平;采用ELISA检测血清中空腹胰岛素,并计算胰岛素抵抗指数;采用HE染色观察小鼠主动脉组织、肝脏、附睾脂肪的病理学形态变化,油红O染色观察小鼠主动脉组织脂质沉积情况,并计算主动脉斑块面积占比、主动脉红染脂质面积占比、非酒精性脂肪肝活动性积分(NAS)评分、附睾脂肪横截面面积;采用ELISA检测血清中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)水平;采用Western blot检测主动脉组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3(NLRP3)蛋白表达;采用免疫荧光法检测含CARD结构域的凋亡相关颗粒样蛋白(ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)蛋白表达;采用实时荧光PCR法检测小鼠主动脉组织NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA表达量。结果与空白组比较,模型组血清TC、TG、LDL-C升高,空腹胰岛素降低,空腹血糖、胰岛素抵抗指数升高(P<0.01);主动脉斑块增大,肝脏脂质沉积增多,附睾脂肪细胞体积变大,主动脉斑块面积占比及红染脂质面积占比增加,肝脏NAS评分升高,附睾脂肪横截面面积变大,血清IL-1β、IL-18升高,主动脉组织NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白及mRNA表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,黄连组、吴茱萸组、茱萸丸组血清TC、TG、LDL-C降低,空腹胰岛素升高,空腹血糖、胰岛素抵抗指数降低(P<0.01);主动脉斑块明显缩小,肝脏脂质沉积减轻,附睾脂肪细胞体积缩小,主动脉斑块面积占比及红染脂质面积占比减小,肝脏NAS评分降低,附睾脂肪横截面面积减小,血清IL-1β、IL-18降低,主动脉组织NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白及mRNA表达水平降低(P<0.01),且茱萸丸组各指标改善优于黄连组、吴茱萸组(P<0.01)。结论茱萸丸对动脉粥样硬化斑块有较好的治疗作用,且黄连与吴茱萸配伍具有协同作用,其作用机制可能与调节主动脉NLRP3/ASC/Caspase-1信号通路,从而减轻血管炎症反应有关。

四磨汤口服液对肠粘连大鼠盲肠NLRP3炎症复合体相关蛋白表达的影响

目的探讨四磨汤口服液对肠粘连模型大鼠盲肠核苷酸结合寡聚化结构域样受体3炎症性复合体（以下简称NLRP3炎症体）表达的影响。方法选择健康雄性sD大鼠45只，随机分配为对照组、模型组和治疗组各15只。模型组和治疗组按Ellis法制备成肠粘连模型。造模成功后，治疗组给予四磨汤口服液lml／100g灌胃，对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃，均干预7天。参照Nair法对肠粘连程度进行评级；采用Western blot法检测盲肠组织NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（Caspase-1）、白细胞介素1β（IL—1β）的蛋白表达量。结果模型组的粘连程度明显升高，且NLRP3、Caspase-1、IL-1β在盲肠组织均有表达，明显高于对照组（P〈0．05）。与模型组相比，四磨汤口服液治疗组粘连程度明显减轻，差异有统计学意义（P〈0．05）；四磨汤口服液治疗组三个检测项目蛋白表达水平明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论肠粘连的形成可能与NLRP3炎症复合体相关蛋白的表达相关。四磨汤口服液减少大鼠盲肠组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达量，从而降低肠粘连程度。

金银花提取液通过调控NLRP3/ASC/caspase-1信号通路对溃疡性结肠炎大鼠肠道黏膜的影响

目的:探讨金银花提取液通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3(NLRP3)/含CARD结构域的凋亡相关颗粒样蛋白(ASC)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)信号通路对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠道黏膜的影响。方法:随机选取10只大鼠为对照组,另取55只大鼠在肛门约8 cm结肠处注射含5%TNBS和50%乙醇的混合液(4 ml/kg)构建大鼠UC模型,将造模成功的50只大鼠分为UC组、金银花低、中、高剂量组和金银花+NSS(NLRP3激活剂)组,每组10只。金银花低、中、高剂量组分别灌胃给予40、80、120 mg/(kg·d)金银花提取液,金银花+NSS组灌胃给予120 mg/(kg·d)金银花提取液和4 mg/(kg·d)NSS,对照组、UC组灌胃给予等体积生理盐水。观察大鼠一般情况,末次给药24 h后腹主动脉取血,处死大鼠,收集结肠组织,量取结肠长度。试剂盒检测大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、TNF-α、IL-6水平;HE染色检测大鼠结肠黏膜病理学变化;RT-PCR和Western blot检测大鼠肠道黏膜NLRP3/ASC/caspase-1通路mRNA和蛋白表达。结果:与对照组比较,UC组大鼠疾病活动指数(DAI)、结肠黏膜损伤程度、血清LDH、MDA、TNF-α、IL-6水平及结肠黏膜组织NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β mRNA和蛋白表达显著升高,结肠长度、血清SOD水平显著降低(P<0.05);与UC组比较,金银花低、中、高剂量组DAI、结肠黏膜损伤程度、LDH、MDA、TNF-α、IL-6水平及NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β mRNA和蛋白表达显著降低,结肠长度、血清SOD水平显著升高(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05);与金银花高剂量组比较,金银花+NSS组DAI、结肠黏膜损伤程度、LDH、MDA、TNF-α、IL-6水平及NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β mRNA和蛋白表达显著升高,结肠长度、SOD水平显著降低(P<0.05)。结论:金银花提取液可能通过抑制NLRP3/ASC/caspase-1信号通路激活缓解UC大鼠肠道黏膜损伤。

脓毒症所致脑功能障碍患者血清caspase-1、NLRP3变化及临床意义

目的探讨脓毒症所致脑功能障碍(SIBD)患者血清半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白水解酶-1(caspase-1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)水平变化及临床意义。方法选择2018年1月—2021年1月重庆大学附属涪陵医院神经外科收治SIBD患者60例为SIBD组,未合并脑功能障碍脓毒症患者72例为对照组。检测患者血清caspase-1、NLRP3水平,分析血清caspase-1、NLRP3与SIBD发病的关系及其诊断SIBD的价值。结果SIBD组患者入住ICU第1、3 d血清caspase-1、NLRP3水平均高于对照组(第1 d:t/P=4.233/<0.001、2.292/0.024;第3 d:t/P=9.473/<0.001、15.634/<0.001);脓毒症休克患者入住ICU第1、3 d血清caspase-1、NLRP3水平高于脓毒症患者(第1 d:t/P=8.631/<0.001、2.993/0.003;第3 d:t/P=23.134/<0.001、37.564/<0.001);高SOFA评分、高TNF-α、入住ICU第3 d高caspase-1、入住ICU第3 d高NLRP3是SIBD发病的危险因素[OR(95%CI)=1.385(1.132~1.695)、1.422(1.126~1.795)、1.303(1.078~1.576)、1.365(1.109~1.680)];入住ICU第3 d血清caspase-1、NLRP3及二者联合诊断SIBD的曲线下面积为0.693、0.755、0.884,二者联合高于单独检测(Z/P=3.642/<0.001、2.586/0.010)。结论SIBD患者血清caspase-1、NLRP3水平均明显升高,高水平caspase-1、NLRP3与SIBD发病有关,可作为SIBD诊断的辅助指标。

褪黑素调控NLRP3/caspase-1通路减轻脂多糖诱导的人肺泡上皮细胞损伤

目的探讨褪黑素通过调节核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)通路对脂多糖(LPS)诱导的人肺泡上皮细胞(A549)损伤的影响。方法体外培养A549细胞,分为对照组、LPS组(10 mg/L LPS)、LPS+褪黑素组(LPS+MT组,10 mg/L LPS+800μmol/L褪黑素)、LPS+抑制剂组(10 mg/L LPS+10μmol/L MCC950)。应用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)水平;RT-qPCR法检测细胞中NLRP3、caspase-1 mRNA表达水平;Western blot法检测细胞中NLRP3、caspase-1蛋白表达水平。结果与对照组比较,LPS组A549细胞增殖活性、S期比例、G2/M期比例降低,细胞凋亡率、G0/G1期比例、TNF-α、IL-1β、IL-6水平和NLRP3、caspase-1 mRNA及蛋白表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与LPS组比较,LPS+MT组与LPS+抑制剂组A549细胞增殖活性、S期比例、G2/M期比例显著升高,细胞凋亡率、G0/G1期比例、TNF-α、IL-1β、IL-6水平和NLRP3、caspase-1 mRNA及蛋白表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论褪黑素可减轻LPS诱导的A549细胞损伤,其作用机制可能与抑制NLRP3/caspase-1信号通路有关。

降钙素原对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞NLRP3和caspase-1表达的影响

目的 探讨降钙素原(procalcitonin,PCT)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)焦亡相关蛋白核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1 (caspase-1)表达的影响。方法 以LPS诱导HUVECs建立脓毒症内皮细胞炎症损伤模型。实验分为两部分:(1)将HUVECs随机分成正常对照组、LPS组(浓度1μg/mL)、PCT组(浓度10 ng/mL)及LPS+PCT组(各组n=3);(2)正常对照组、LPS组、LPS+PCT不同浓度(0.1、1、10、100 ng/mL)组(各组n=3)。采用实时荧光定量聚合酶链反应法和Western blot法检测各组细胞NLRP3、caspase-1 mRNA及其蛋白的表达。结果 (1)与正常对照组比较,LPS组、PCT组及LPS+PCT组NLRP3、caspase-1 mRNA和蛋白表达均上调(P<0.05);与LPS组比较,LPS+PCT组NLRP3、caspase-1 mRNA和蛋白表达均下调(P<0.05)。(2)与LPS组比较,LPS+PCT不同浓度组NLRP3、caspase-1 mRNA和蛋白表达下调;随PCT浓度增加,NLRP3、caspase-1 mRNA及蛋白表达逐渐下调(P<0.05)。结论 LPS可促进HUVECs焦亡相关因子NLRP3、caspase-1表达,PCT干预可抑制LPS诱导的HUVECs中焦亡相关蛋白NLRP3、caspase-1的表达,并呈浓度依赖性。

血清NLRP3炎性小体信号通路相关因子评估急性脑梗死患者脑血栓形成及临床应用价值

目的探讨血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体信号通路相关因子评估急性脑梗死(ACI)患者脑血栓形成及临床应用价值。方法选取2022年1—12月收治的ACI 120例作为观察组,另选取同期健康体检者120例作为对照组。观察组予以机械取栓术治疗,依据是否获取血栓组织分为血栓组和非血栓组2个亚组。比较观察组和对照组血清NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)水平及血栓组和非血栓组临床资料,分析ACI患者脑血栓形成相关因素,探讨血清NLRP3炎性小体信号通路相关因子评估ACI脑血栓形成和临床应用价值,分析ACI脑血栓形成者临床转归情况。结果血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18水平,观察组高于对照组,血栓组高于非血栓组(P<0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18均为ACI患者脑血栓形成的独立危险因素(P<0.01)。血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18联合评估ACI患者脑血栓形成的曲线下面积高于单独评估,且联合评估时净获益阈值范围大于单独检测(P<0.05)。血栓组出院时mRS评分4~6分所占比例(22/92,23.91%)高于非血栓组(1/28,3.57%)(P<0.05)。结论ACI患者血清NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18水平升高,其联合检测对脑血栓形成具有一定评估价值,且具有更高临床净获益。