微小RNA-155通过调控核苷酸结合寡聚化结构域蛋白1/核因子κB信号通路加剧新生大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的探讨微小RNA-155(miRNA-155)是否通过调控核苷酸结合寡聚化结构域蛋白1(NOD1)/核因子κB(NF-κB)信号通路在新生大鼠缺氧、缺血性脑损伤中发挥作用。方法选择新生雄性大鼠40只,分4组,每组10只。分别是假手术组、缺氧缺血组(HI组)、阴性对照组(NC antagomir组)、miRNA-155抑制组(miRNA-155antagomir组)。大鼠经10%水合氯醛(400 mg/kg)麻醉后取左脑测定脑组织含水量;采用HE染色,于光学显微镜下观察各组大鼠脑海马组织病理形态学改变;采用Western blotting法检测各组大鼠脑组织中NOD1、NF-κB p65、NF-κB p50、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)和p-NF-κB p50的蛋白表达水平;采用Real-time PCR法检测各组大鼠脑组织及血清中miRNA-155、NOD1、NF-κB p65和NF-κB p50的mRNA表达水平。结果与假手术组相比,HI组和NC antagomir组新生大鼠脑组织含水量显著升高,miRNA-155 antagomir组显著降低(P <0. 05);假手术组海马细胞排列整齐,细胞形态结构及层次清晰完整,无空泡,间质无水肿;HI组和NC antagomir组可见海马细胞排列紊乱,形成空泡,胶质细胞增生,细胞间隙增宽出现水肿,坏死细胞数增多;miRNA-155 antagomir组脑组织水肿明显减轻,海马细胞排列紊乱现象有所改善,坏死细胞数减少。与假手术组相比,HI组和NC antagomir组新生大鼠NOD1、p-NF-κB p65和p-NF-κB p50蛋白表达水平显著升高,而miRNA-155 antagomir组与HI组和NC antagomir组相比显著降低,差异均具有统计学意义(P <0. 05);HI组和NC antagomir组新生大鼠脑组织及血清NOD1 mRNA表达水平显著高于假手术组,miRNA-155 antagomir组NOD1 mRNA表达水平与HI组和NC antagomir组相比显著降低(P <0. 05),但各组大鼠NF-κB p65及NF-κB p50的表达水平差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 MiRNA-155可通过调控NOD1/NF-κB信号通路促进新生大鼠缺氧、缺血性脑损伤,其作用机制可能与miRNA-155激活NOD1信号通路,促进下游NF-κB发生磷酸化,加剧缺氧、缺血新生乳大鼠脑组织炎症。

基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路探讨苓桂气化方改善射血分数保留心力衰竭早期舒张功能的分子机制

目的观察苓桂气化方对射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)早期模型大鼠心脏舒张功能的干预效应,基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)/胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(cysteine-containing aspartate-specific proteases-1,Caspase-1)/消皮素D(Gasdermin D,GSDMD)通路探讨其潜在的分子作用机制。方法40只自发性高血压大鼠高盐高脂高糖饮食联合腹腔注射链脲佐菌素溶液建立HFpEF早期大鼠模型,分为HFpEF组、恩格列净组(1.8 mg/kg)、苓桂气化方低剂量组(4.96 g/kg)、苓桂气化方高剂量组(9.92 g/kg),予相应药物灌胃;正常血压组、空白组予等剂量生理盐水灌胃,连续干预9周。采用超声心动图检测大鼠左心房内径(left atrial diameter,LAD)、舒张早期二尖瓣血流速度(left ventricular early diastolic filling peak velocity,E)与舒张晚期二尖瓣血流速度(atrial systolic left ventricular filling peak velocity,A)比值、左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF);酶联免疫吸附测定法检测血清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)含量;苏木精—伊红染色观察心肌组织病理变化;蛋白质印迹(Western Blot,WB)法检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD和白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达。结果与正常血压组相比,HFpEF组LAD和E/A增加(P<0.05),LVEF无明显变化(P>0.05);血清ANP含量升高(P<0.05);病理观察显示心肌炎症浸润;WB结果示NLRP3、Caspase-1、GSDMD和IL-1β蛋白含量升高(P<0.05),表明建模成功。与HFpEF组比,恩格列净组和苓桂气化方低、高剂量组的LAD和E/A减小(P<0.05),血清ANP含量降低(P<0.05),病理观察显示心肌炎症浸润减轻,WB结果示恩格列净组NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β蛋白含量降低(P<0.05),苓桂气化方低剂量组NLRP3、IL-1β蛋白含量降低(P<0.05),苓桂气化方高剂量组NLRP3、GSDMD、IL-1β蛋白含量降低(P<0.05),其余蛋白含量有下降趋势。结论苓桂气化方能改善HFpEF早期模型大鼠心脏舒张功能,其机制可能与调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路、减轻心肌炎症浸润、抑制心房重构相关。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨积雪草酸对急性肺损伤大鼠氧化应激和NLRP3炎症小体的影响

目的 观察积雪草酸对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤大鼠氧化应激和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体相关蛋白的影响,并探讨其相关分子机制。方法 将60只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、积雪草酸低剂量组、积雪草酸高剂量组和地塞米松组,每组12只。除对照组外,其余组大鼠均采用LPS气管滴注法建立急性肺损伤模型。模型建立成功后第2天,积雪草酸低、高剂量组大鼠分别腹腔注射25 mg/kg和75 mg/kg积雪草酸溶液,地塞米松组大鼠腹腔注射2 mg/kg地塞米松注射液,对照组和模型组大鼠腹腔注射等量生理盐水,均1次/d,连续注射8周。HE染色观察大鼠肺组织病理形态,称重法计算肺组织湿/干重比值,TUNEL染色检测大鼠肺组织细胞凋亡情况,试剂盒检测大鼠支气管肺泡灌洗液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,Western blot法检测肺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白88(MyD88)、核转录因子-κB(NF-κB)和磷酸化NF-κB(p-NF-κB)表达情况。结果 与对照组比较,模型组大鼠肺组织可见明显病理损伤,肺组织湿/干重比值、细胞凋亡率、支气管肺泡灌洗液中MDA含量和肺组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、TLR4、MyD88蛋白相对表达量及p-NF-κB/NF-κB比值均显著升高(P均<0.05),支气管肺泡灌洗液中SOD、GSH-Px含量均显著降低(P均<0.05)。与模型组比较,积雪草酸低、高剂量组和地塞米松组大鼠肺组织病理损伤显著改善,肺组织湿/干重比值、细胞凋亡率、支气管肺泡灌洗液中MDA含量和肺组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、TLR4、MyD88蛋白相对表达量及p-NF-κB/NF-κB比值均显著降低(P均<0.05),支气管肺泡灌洗液中SOD、GSH-Px含量均显著升高(P均<0.05),且积雪草酸高剂量组和地塞米松组大鼠上述指标变化均显著优于积雪草酸低剂量组(P均<0.05)。结论 积雪草酸可通过抑制氧化应激和NLRP3炎症小体激活减轻LPS诱导的急性肺损伤,其作用机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

褪黑素通过NF-κB/NLRP3信号抑制子宫内膜异位症的进展机制研究

目的:探讨褪黑素(MEL)对子宫内膜异位症(EMT)进展的抑制作用,以及其对核转录因子κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)信号的调控机制。方法:通过自体子宫内膜皮下种植法构建EMT大鼠。动物实验模型分假手术组(Sham组,大鼠在造模过程中仅进行子宫片段剪取)和实验处理4组,分别为:模型组(EMT组,大鼠进行自体子宫内膜皮下种植)、褪黑素组(EMT+MEL组,以50 mg/kg的MEL灌胃处理)、EMT+NF-κB信号通路激活剂佛波酯(PMA)组(EMT+PMA组,以5 mg/kg的PMA腹腔注射)、EMT+MEL+PMA组(以50 mg/kg的MEL灌胃处理和5 mg/kg的PMA腹腔注射)。检测各组大鼠子宫内膜异位的质量、血清和腹腔液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的含量;免疫组化、免疫荧光检测各组样本中髓过氧化物酶(MPO)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达;Western blot实验检测各组样本中NF-κB/NLRP3信号通路相关蛋白的表达。结果:与Sham组相比,实验处理4组大鼠中动情周期紊乱的比例、异位子宫内膜的质量、血清以及腹腔液中TNF-α和IL-6的含量、MPO和VEGF的表达及NF-κB/NLRP3信号通路相关蛋白的表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与EMT组相比,EMT+MEL组和EMT+MEL+PAM组以上各项指标明显下降,而EMT+PAM组各项指标明显升高;与EMT+MEL组相比,EMT+MEL+PAM组、EMT+PAM组以上各项指标明显升高,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:MEL能明显抑制EMT中的炎症反应,抑制EMT的进展,这可能通过抑制NF-κB/NLRP3信号的激活实现的。

基于NF-κB/NLRP3/caspase-1通路研究白及多糖对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜炎症损伤的保护作用

目的:探究白及多糖对溃疡性结肠炎(UC)大鼠核因子κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱天冬酶-1(caspase-1)通路蛋白表达及对肠道屏障损伤的影响。方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)+乙醇法建立UC模型,并将SD大鼠随机分为空白组、模型组、白及多糖低(100 mg/kg)、中(200 mg/kg)、高(400 mg/kg)剂量组、柳氮磺胺吡啶阳性组(0.67 g/kg),除空白组外,其余各组均建立UC模型。白及多糖低、中、高剂量组和阳性组分别灌胃给予相应剂量白及多糖和柳氮磺胺吡啶,空白组和模型组灌胃给予10 ml/kg生理盐水,各组大鼠连续给药2周,1次/d。末次给药12 h后,观察大鼠一般行为并对大鼠进行疾病活动指数(DAI)评分;取大鼠结肠组织,苏木精-伊红染色观察组织病理形态;ELISA检测结肠组织髓过氧化物酶(MPO)、炎症因子IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及肠道屏障功能受损指标二胺氧化酶(DAO)和肠型脂肪酸结合蛋白(i-FABP)水平;Western blot检测结肠组织通路蛋白NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、NLRP3、caspase-1、cleaved caspase-1蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠形体消瘦、大便稀溏、结肠组织可见黏膜溃疡、充血、扩张及炎症细胞浸润等病理损伤,DAI评分、结肠组织MPO、IL-1β及TNF-α含量、p-NF-κB p65/NF-κB p65、NLRP3、caspase-1、cleaved caspase-1蛋白表达均升高(P<0.05),DAO和i-FABP含量均降低(P<0.05)。与模型组比较,白及多糖各剂量组及柳氮磺胺吡啶组大鼠DAI评分、结肠组织病理损伤程度、MPO、IL-1β及TNF-α含量、p-NF-κB p65/NF-κB p65、NLRP3、caspase-1、cleaved caspase-1蛋白表达均降低(P<0.05),DAO和i-FABP含量均升高(P<0.05),且呈剂量依赖性,高剂量白及多糖改善效果与柳氮磺胺吡啶相近(P>0.05)。结论:白及多糖可抑制NF-κB/NLRP3/caspase-1通路激活,降低炎症反应和肠屏障损伤,改善UC症状和肠黏膜损伤。

核苷酸结合寡聚化结构域2—受体相互作用蛋白2—核因子-κB信号通路在肺曲霉病中的表达情况及意义

目的研究核苷酸结合寡聚化结构域2(NOD2)—受体相互作用蛋白2(RIP2)—核因子-κB(NF-κB)信号通路在肺曲霉病患者肺泡灌洗液中的表达水平及其作用机制。方法选取2016年1月至2018年12月福建省老年医院呼吸与危重症医学科收治的62例肺曲霉病患者,男34例,女28例,年龄(53.58±12.34)岁,年龄范围为41~68岁,根据2008年美国感染病学会曲霉病诊治临床实践指南的分级诊断标准中的组织病理、微生物结果、临床症状等资料,将患者分为侵袭性肺曲霉病(IPA)组(n=28)和非侵袭性肺曲霉病(NIPA)组(n=34),并选取20例健康志愿者为健康组,男12例,女8例,年龄(50.23±6.59)岁,年龄范围为43~62岁。采用荧光定量——聚合酶链式反应(PCR)法检测NOD2 mRNA、RIP2 mRNA、NF-κB mRNA表达,采用Western blot法检测NOD2、RIP2、NF-κB蛋白表达,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肺泡灌洗液上清液超敏C反应蛋白(hs-CRP)与白细胞介素6(IL-6)表达水平,并探讨其相关性。结果IPA组NOD2 mRNA(7.46±1.86)、RIP2 mRNA(11.21±4.01)、NF-κB mRNA(58.80±14.23)和NIPA组NOD2 mRNA(3.38±0.97)、RIP2 mRNA(7.87±0.94)、NF-κB mRNA(39.10±9.84)的表达水平均高于健康组[(1.28±0.42)、(1.43±0.23)、(12.10±4.36)];IPA组NOD2(2.04±0.42)、RIP2(1.54±0.34)、NF-κB(1.33±0.31)和NIPA组NOD2(1.76±0.36)、RIP2(1.15±0.29)、NF-κB(1.03±0.31)蛋白的表达水平均高于健康组[(0.75±0.21)、(0.63±0.18)、(0.51±0.12)];IPA组IL-6[(23.72±6.54)μg/L]、hs-CRP[(17.38±4.42)mg/L]和NIPA组IL-6[(18.62±5.35)μg/L]、hs-CRP[(9.64±3.01)mg/L]均高于健康组[(5.02±1.64)μg/L、(3.63±1.61)mg/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,NOD2 mRNA与NF-κB mRNA呈正相关(r=0.483);RIP2 mRNA与NOD2 mRNA呈正相关(r=0.655);hs-CRP与NOD2 mRNA呈正相关(r=0.572);NOD2 mRNA与IL-6呈正相关(r=0.347),差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺曲霉病患者支气管灌洗液中NOD2、RIP2、NF-κB mRNA和蛋白表达均升高,与hs-CRP、IL-6炎症指标呈正相关性,NOD2可能通过RIP2依赖的NF-κB信号通路介导肺曲霉病患者致炎过程。

排毒保肾丸对糖尿病肾病大鼠炎症小体NLRP3表达及NF-κB信号通路的影响

目的:探究排毒保肾丸对糖尿病肾病(DKD)大鼠炎症小体核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达及核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:48只大鼠随机分为4组:对照组、模型组、排毒保肾丸组、阳性对照组(氯沙坦组)。模型组、排毒保肾丸组和氯沙坦组建立DKD大鼠模型,饲以高脂高糖饲料并腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)。排毒保肾丸组、氯沙坦组分别灌胃排毒保肾丸、氯沙坦,对照组、模型组灌胃给予等量生理盐水,连续8周。8周后测定尿蛋白、血肌酸酐、血尿素氮含量,处死大鼠并留取肾脏组织。ELISA检测血清IL-6、IL-1β及TNF-α含量;HE染色观察肾脏组织形态学改变;Masson染色观察肾脏组织纤维化改变;免疫组化染色及Western blot检测NLRP3、NF-κB p65、天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠肾脏组织损伤严重,尿蛋白、血肌酐、尿素氮含量、炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量、NLRP3、NF-κB p65、Caspase-1蛋白表达显著增加(均P<0.05);与模型组相比,排毒保肾丸组和氯沙坦组肾脏组织损伤减轻,尿蛋白、血肌酐、尿素氮含量、炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量、NLRP3、NF-κB p65、Caspase-1蛋白表达显著减少(均P<0.05)。结论:排毒保肾丸能够有效改善DKD损伤,抑制机体炎症反应,可能通过抑制炎症小体NLRP3表达和NF-κB信号通路发挥保护作用。

白桦脂酸通过抑制NLRP3/NF-κB信号通路保护四氯化碳所致肝损伤的机制研究

目的:研究白桦脂酸(betulinic acid,BA)对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的小鼠肝损伤的保护作用及其相关机制。方法:60只C57BL/6小鼠随机分为5组:空白对照组、CCl4组、CCl4+水飞蓟素组(silymarin,SL,100 mg/kg,阳性药物)、CCl4+BA低剂量组(20 mg/kg)、CCl4+BA高剂量组(40 mg/kg),采用CCl4诱导小鼠建立肝脏纤维化模型,24 h后取小鼠血和肝脏组织。各组小鼠肝脏组织做HE染色,检测血清和肝脏组织中谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β及肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的水平,并采用蛋白免疫印记法(Western Blot)与免疫组化方法检测肝脏组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(nucleotide-binding oligomerization domain,jeucine rich repeat and pyrin domain containing,NLRP3)/核因子(nuclear factor,NF)-κB的蛋白表达情况。结果:BA组(20、40 mg/kg)能显著降低CCl4诱导的肝损伤小鼠血清与肝脏组织中ALT、AST、IL-6、IL-1β和TNF-α的含量,能显著改善小鼠肝脏组织的病理学改变,降低肝脏组织中NLRP3/NF-κB的蛋白表达。结论:BA对CCl4诱导的小鼠肝损伤具有保护作用,这种效应可能与调控NLRP3/NF-κB信号通路有关。

二氨基庚二酸激活NOD1信号通路对心肌缺血再灌注损伤的影响

目的:探讨二氨基庚二酸(DAP)激活核苷酸结合寡聚化结构域蛋白1(NOD1)信号通路对心肌缺血再灌注(I/R)损伤的影响。方法:将40只C57/BL6雄性小鼠随机分为4组,即假手术组、I/R组、DAP组和I/R+DAP组,每组10只。对I/R组和I/R+DAP组小鼠进行心肌缺血再灌注模型制备,假手术组进行相同的手术操作,但只穿线不结扎,DAP组和I/R+DAP组小鼠在冠状动脉结扎前30 min腹腔注射DAP,假手术组和I/R组小鼠注射等剂量的生理盐水;观察各组小鼠心肌梗死、心肌细胞凋亡、炎症反应及NF-κB p65磷酸化情况。结果:I/R组NOD1 mRNA和NOD1蛋白表达水平均显著高于假手术组(P<0.05);I/R组梗死面积比值明显高于假手术组,且I/R+DAP组小鼠梗死面积最高(P<0.05),而DAP组与假手术组差异无统计学意义;I/R组和I/R+DAP组TUNEL阳性细胞数显着高于假手术组,I/R+DAP组阳性细胞数最多(P<0.05),而DAP组与假手术组差异无统计学意义;I/R组和I/R+DAP组炎症细胞浸润数明显多于假手术组,I/R+DAP组小鼠最高(P<0.05);I/R组和I/R+DAP组磷酸化的NF-κB p65蛋白水平显著高于假手术组,且I/R+DAP组最高(P<0.05)。结论:DAP激活NOD1可加重缺血再灌注损伤后小鼠心脏心肌细胞的梗死面积,增加心肌细胞的凋亡和炎症反应,该机制与NF-κB信号通路的激活有关。

菊苣酸调控p38 MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经元凋亡及炎症反应的影响

目的分析菊苣酸(CA)对缺血性脑卒中大鼠神经元凋亡、炎症反应的影响及其作用机制。方法采用改良线栓法制备缺血性脑卒中大鼠模型。将大鼠分为假手术组、模型组、CA组(10 mg/kg)、CA+p38 MAPK激活剂(Anisomycin)组(10 mg/kg CA+2 mg/kg Anisomycin),各组进行相应干预2 w,对大鼠进行Zea Longa评分和检测脑梗死体积百分比,尼氏(Nissl)染色检测大鼠海马组织神经元损伤,TUNEL法检测大鼠海马组织神经元凋亡,酶联免疫吸附法检测大鼠海马组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和IL-6水平,蛋白免疫印迹法检测大鼠海马组织磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、核因子-κB p65(NF-κB p65)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经元形态不规则、染色较浅,尼氏体数目明显减少,Zea Longa评分、脑梗死体积百分比、神经元细胞凋亡率、海马组织TNF-α、IL-1β、IL-6、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65、NLRP3蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,CA组大鼠神经元形态明显改善,形态较饱满,染色均匀,尼氏体密集,Zea Longa评分、脑梗死体积百分比、神经元细胞凋亡率、海马组织TNF-α、IL-1β、IL-6、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65、NLRP3蛋白表达水平显著降低(P<0.05);Anisomycin可逆转CA对缺血性脑卒中大鼠的上述改善作用。结论CA可通过抑制p38 MAPK/NF-κB/NLRP3信号通路,抑制炎症反应,减少神经元凋亡,缓解缺血性脑卒中引起的大鼠脑损伤。

TLR4/NF-κB/NLRP3通路抑制炎症反应作用的研究

Toll样受体(TLRs)是参与非特异性免疫的一类重要的蛋白质,是表达与固有免疫细胞最重要的模式识别受体之一,可识别来源于微生物的具有保守结构的分子,即病原体相关分子模式(PAMAs),从而激活机体产生免疫应答。核因子κB(NF-κB)在几乎所有类型的细胞和组织中都有表达,在调节对外部刺激的显著多样性的反应中起着关键作用,因此是多个生理和病理过程中的关键因素。而核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3),即NLRP3炎性小体通路在脑缺血再灌注和焦亡中具有重要意义,如NLRP3在脑缺血再灌注损伤时在小胶质细胞中被激活,随后在神经元和微血管内皮细胞中表达。由TLRs激活、NF-κB传递、NLRP3启动形成的TLR/NF-κB/NLRP3信号通路在机体各器官炎症反应中起到关键性作用,本文探讨了各类药物通过抑制该通路炎症反应,起到保护身体各大重要器官的作用。

基于NOD1/RIP2/NF-κB信号通路探讨丁酸钠对动脉粥样硬化大鼠斑块形成和炎症反应的影响

基于核苷酸结合寡聚域样受体1(nucleotide-binding oligodomain-like receptor 1,NOD1)/受体相互作用蛋白2(receptor-interacting protein 2,RIP2)/NF-κB信号通路探讨丁酸钠(sodium butyrate,NaB)对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)大鼠斑块形成和炎症反应的影响。给予41只大鼠球囊受损结合高脂饮食构建AS模型,共建模成功36只。将36只模型大鼠分为模型组、 NaB组和NaB+NOD1激动剂二氨基庚二酸(γ-D-glu-mesodiaminopimelic acid,iE-DAP)组,每组12只。另假手术组12只大鼠仅分离左侧颈总动脉后缝合。模型组、 NaB组和NaB+iE-DAP组给予高脂饲料饲养,假手术组给予基础饲料饲养;NaB组灌胃10 g/(kg·d)NaB,NaB+iE-DAP组灌胃10 g/(kg·d)NaB的同时腹腔注射1 mL/(只·周)iE-DAP;模型组、假手术组灌胃和腹腔注射等量的生理盐水;以上处理均持续12周。H-E染色观察主动脉形态;ELISA检测各组大鼠血清甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1)、超敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)、 TNF-α和IL-1的含量;免疫组化染色评估主动脉中细胞间黏附分子1(intercellular cell adhesion molecule 1,ICAM-1)蛋白表达情况;Western blotting检测主动脉组织中NOD1、 RIP2和NF-κB蛋白表达情况。结果显示,模型组主动脉受损严重,而NaB组主动脉损伤表现减轻,NaB+iE-DAP组表现有所加重。与假手术组相比,模型组血清TG、 TC、 LDL-C、 ox-LDL、 MCP-1、 hs-CRP、 TNF-α和IL-1含量,主动脉组织ICAM-1阳性率,NOD1、 RIP2及细胞核NF-κB蛋白表达水平显著升高(均P<0.05),HDL-C含量及细胞质NF-κB蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);与模型组相比,NaB组血清TG、 TC、 LDL-C、 ox-LDL、 MCP-1、 hs-CRP、 TNF-α和IL-1含量,主动脉组织ICAM-1阳性率,NOD1、 RIP2及细胞核NF-κB蛋白表达水平显著降低(均P<0.05),HDL-C含量及细胞质NF-κB蛋白表达水平显著升高(均P<0.05);与NaB组相比,NaB+iE-DAP组血清TG、 TC、 LDL-C、 ox-LDL、 MCP-1、 hs-CRP、 TNF-α和IL-1含量,主动脉组织ICAM-1阳性率,NOD1、 RIP2及细胞核NF-κB蛋白表达水平显著升高(均P<0.05),HDL-C含量及细胞质NF-κB蛋白表达水平显著降低(均P<0.05)。该研究提示,NaB能够抑制NOD1/RIP2/NF-κB信号通路,实现对AS大鼠斑块形成、炎症反应的缓解。

NLRP3炎症小体/白介素-1β信号通路与糖尿病视网膜病变

糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病严重的眼部并发症之一,多由于长期的高血糖状态引起的视网膜微血管病变。目前对DR的发病机制尚无定论,近年来研究发现,炎症反应贯穿DR发生发展的全病程。而由核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)、白介素-1β(IL-1β)等介导的炎症反应在DR病理过程中充当重要角色。故以NLRP3炎症小体/IL-1β信号通路介导的炎症反应为切入点开展治疗DR的机制研究,有望为防治DR提供新策略。本文就NLRP3炎症小体/白介素-1β信号通路介导糖尿病视网膜病变发病的研究进展做一综述。

lncRNA XIST通过NF-κB/NLRP3炎性体通路影响急性肺损伤大鼠炎症反应和细胞凋亡

目的探讨长链非编码RNA-X染色体失活特异转录物(lncRNA XIST)通过核转录因子-κB/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NF-κB/NLRP3)炎性体通路对急性肺损伤(ALI)大鼠炎症反应和细胞凋亡的影响。方法利用脂多糖(LPS)构建ALI模型,将造模成功的SD大鼠分为ALI组、lncRNA XIST-NC组、lncRNA XIST-shRNA组和lncRNA XIST-shRNA+CHPG组,每组12只,另选12只作为Control组。lncRNA XIST-NC组和lncRNA XIST-shRNA组大鼠分别于造模后从尾静脉注射lncRNA XIST-NC和lncRNA XIST-shRNA质粒脂质体复合物,lncRNA XIST-shRNA+CHPG组大鼠在lncRNA XIST-shRNA组大鼠的基础上再注射0.5 mg/kg NF-κB/NLRP3炎性体通路激活剂CHPG,而Control组和ALI组大鼠则注射等量的Opti-MEM培养基。7 d后处死各组大鼠,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测lncRNA XIST水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理变化;检测并计算肺湿/干比(W/D)和髓过氧化物酶(MPO)活力值;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-1β水平;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记技术(TUNEL)染色观察肺组织细胞凋亡;Western印迹检测肺组织中活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Caspase-3、NF-κB p65、p-NF-κB p65、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、NLRP3、Cleaved Caspase-1、Caspase-1表达。结果ALI组大鼠肺组织中lncRNA XIST水平明显高于Control组,lncRNA XIST-shRNA可显著降低lncRNA XIST表达(P<0.05)。与Control组比较,ALI组大鼠肺部炎症细胞明显增多,W/D值和MPO活力值明显增加,血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平显著上升,凋亡率、凋亡蛋白Cleaved caspase-3及NF-κB/NLRP3炎性体通路相关蛋白p-NF-κB p65、ASC、NLRP3和Cleaved caspase-1表达均显著上调(P<0.05)。沉默lncRNA XIST可明显减少ALI大鼠肺部炎症细胞的数量,降低W/D、MPO活力值和肺组织细胞凋亡率,下调凋亡和通路相关蛋白的表达(P<0.05)。而NF-κB/NLRP3炎性体通路激活剂CHPG干预使lncRNA XIST-shRNA对ALI大鼠炎症反应、细胞凋亡和蛋白表达的抑制作用得到逆转(P<0.05)。结论沉默lncRNA XIST可能通过抑制NF-κB/NLRP3炎性体通路,改善ALI大鼠的炎症反应和细胞凋亡。

糖尿病肾病大鼠NLRP3炎症小体、NF-κB表达的意义探讨

探讨糖尿病肾病(DN)大鼠核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体、核因子κB(NF-κB)表达的意义。目的 以30只8周龄健康雄性SD大鼠为研究对象,按随机数字表法分为对照组及干预组,予以干预组高脂饮食喂养(4周)+100mg/kg链脲菌尿素(STZ)腹腔注射处理后继续高脂饮食喂养(12周)用以制备DN模型,对照组予以正常饮食喂养(4周)+等体积柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液处理后继续正常饮食喂养12周,统计两组STZ注射48h血糖值及继续喂养12周后尿量及24h尿蛋白量,并留取肾组织进行碘酸雪夫氏染色(PAS)观察肾脏病理变化,运用Western blot及免疫组化法测定NLRP3、NF-κB蛋白及阳性细胞表达。结果:造模期间,干预组有2只大鼠死亡,干预组体质量、血糖及24h尿白蛋白均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。且PAS染色可见干预组小鼠基底膜增厚,呈紫红色,对照组则无上述变化;干预组NLRP3蛋白、pNF-κB相对表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);干预组NLRP3蛋白、pNF-κB阳性细胞表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NLRP3炎症小体、NF-κB表达上调可促进DN发生及进展过程。

蒲公英甾醇通过NOD1/NF-κB通路对Hp相关性胃炎脾胃湿热证小鼠改善作用研究

目的:探讨蒲公英甾醇对Hp相关性胃炎脾胃湿热证(HAG)小鼠改善和炎症抑制作用及机制。方法:80只C57BL/6小鼠随机分为正常组17只和造模组63只,正常组小鼠给予正常饮食+常规环境+同步饲养,造模组小鼠给予肥甘饮食+湿热环境+Hp菌液,制备HAG小鼠模型。将48只造模成功的小鼠随机分为模型组、蒲公英甾醇组、iE-DAP组和蒲公英甾醇+iE-DAP组,每组12只。蒲公英甾醇组小鼠灌胃蒲公英甾醇,5mg/kg,1次/d,连续灌胃4周;iE-DAP组小鼠腹腔注射iE-DAP,100μg/只,1次/周,连续注射4周;蒲公英甾醇+iE-DAP组小鼠灌胃蒲公英甾醇,5 mg/kg,1次/d,腹腔注射iE-DAP,100μg/只,1次/周,连续给药4周。实验过程中观察小鼠一般情况;ELISA检测小鼠血清干扰素诱导蛋白10(IP-10)和干扰素β(IFN-β)水平;快速尿素酶实验检测Hp定植;HE染色镜检小鼠胃黏膜组织病理学变化;qRT-PCR检测小鼠胃组织中核苷酸结合寡聚化结构域1(NOD1)mRNA和受体相互作用蛋白2(RIP2)mRNA表达水平;Western blotting检测小鼠胃黏膜组织p65、p-p65蛋白表达水平。结果:正常组小鼠胃黏膜组织结构完整、排列整齐、无炎症细胞浸润及充血肿胀;模型组小鼠出现脾胃湿热证症状,胃黏膜充血肿胀、结构破坏、排列无序、固有层有炎症细胞浸润;蒲公英甾醇组小鼠症状较模型组好转,胃黏膜病理损伤减轻;iE-DAP组小鼠脾胃湿热症状、胃黏膜组织病理损伤较模型组加重,蒲公英甾醇+iE-DAP组小鼠组脾胃湿热症状、胃黏膜组织病理损伤明显减轻。与模型组比较,蒲公英甾醇组小鼠血清IP-10和IFN-β水平,NOD1 mRNA和RIP2 mRNA相对表达量,以及p-p65蛋白表达降低,且HP定植减少(P<0.05),iE-DAP组小鼠血清IP-10和IFN-β水平,NOD1 mRNA和RIP2 mRNA相对表达量,以及p-p65蛋白表达升高,且Hp定植增加(P<0.05);与蒲公英甾醇组比较,蒲公英甾醇+iE-DAP组小鼠血清IP-10和IFN-β水平,NOD1 mRNA和RIP2 mRNA相对表达量,以及p-p65蛋白表达升高,且Hp定植增加(P<0.05);与iE-DAP组比较,蒲公英甾醇+iE-DAP组小鼠血清IP-10和IFN-β水平,NOD1 mRNA和RIP2 mRNA相对表达量,以及p-p65蛋白表达降低,且Hp定植减少(P<0.05)。结论:蒲公英甾醇可改善HAG小鼠脾胃湿热证症状,抑制炎症反应,作用机制可能与调控NOD1/NF-κB通路有关。

木犀草素对牙周炎大鼠NLRP3/IL-1β信号通路及骨改建的影响

目的:探讨木犀草素对牙周炎大鼠核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/白介素-1β(IL-1β)信号通路及骨改建的影响。方法:将SD雄性大鼠随机分为4组:对照组(灌胃等量生理盐水)、模型组(灌胃等量生理盐水)、木犀草素低、高剂量组(灌胃给予50 mg/kg、100 mg/kg木犀草素),每天1次,每组各10只,除对照组外,其它组大鼠制备牙周炎大鼠模型。连续给药7 d后,通过Micro-CT观察各组大鼠牙槽骨骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、骨小梁厚度(Tb.Th)及牙槽骨吸收情况;HE染色观察各组大鼠牙周组织病理变化;抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察各组大鼠牙周组织破骨细胞数;免疫组织化学测定核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和骨保护素(OPG)表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测牙周组织中NLRP3、IL-1β蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠牙周纤维排列紊乱,牙周膜狭窄,牙槽骨表面不平整有较多骨吸收陷窝,牙槽骨Tb.N、Tb.Th、牙周组织OPG表达显著降低(P<0.05),Tb.Sp、CEJ-ABC值、牙周组织破骨细胞数、RANKL表达、NLRP3、IL-1β蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,木犀草素低、高剂量组大鼠牙周纤维排列较整齐,上述病理症状明显减轻,牙槽骨Tb.N、Tb.Th、牙周组织OPG表达依次升高(P<0.05),Tb.Sp、CEJ-ABC值、牙周组织破骨细胞数、RANKL表达、NLRP3、IL-1β蛋白表达依次降低(P<0.05)。结论:木犀草素可能通过抑制NLRP3/IL-1β信号通路,减轻牙周组织损伤、促进牙槽骨改建。

四磨汤调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路对功能性消化不良大鼠十二指肠微炎症的影响

目的探讨四磨汤对功能性消化不良(FD)大鼠十二指肠微炎症及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/胱天蛋白酶1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)信号通路的影响。方法用多因素方法建立FD模型。将SD大鼠随机分成正常组、模型组(FD模型)、阳性对照组(灌胃给药0.305 mg·kg^(-1)莫沙必利)和高、中、低剂量实验组(分别灌胃给药5.62、2.81、1.40 g·kg^(-1)四磨汤)。测定小肠推进率、胃排空率;用酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定血清中白细胞介素(IL)-1β、IL^(-1)8水平;用蛋白质印迹法检测十二指肠组织NLRP3、GSDMD的蛋白表达情况。结果正常组、模型组、阳性对照组和高、中、低剂量实验组胃排空率分别为(58.34±5.72)%、(29.16±8.37)%、(48.77±6.10)%、(48.35±6.04)%、(48.20±3.49)%和(39.24±4.20)%;小肠推进率分别为(82.01±7.55)%、(41.95±9.53)%、(64.61±10.18)%、(75.04±9.76)%、(60.58±7.13)%和(45.89±7.40)%;血清IL^(-1)β水平分别为(12.86±0.88)、(43.73±4.60)、(18.84±0.86)、(24.61±1.57)、(19.14±0.77)和(29.04±0.72)pg·mL^(-1);IL^(-1)8水平分别为(95.00±3.74)、(170.60±8.78)、(108.50±3.05)、(118.90±3.45)、(99.90±8.70)和(141.00±3.71)pg·mL^(-1);NLRP3蛋白表达水平分别为0.32±0.02、0.84±0.05、0.42±0.03、0.48±0.02、0.61±0.04和0.62±0.05;GSDMD蛋白表达水平分别为0.34±0.05、0.93±0.06、0.35±0.03、0.52±0.02、0.53±0.06和0.55±0.05。模型组上述指标与正常组比较,高剂量实验组、阳性对照组上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论四磨汤能够有效改善FD大鼠一般状况及十二指肠微炎症,其机制可能与抑制十二指肠NLRP3/Caspase-l/GSDMD信号通路有关。

慢性阻塞性肺疾病急性发作期患者血清CG、NT-pro BNP、HIF-1α及NLRP3蛋白表达水平的意义

目的探讨慢性阻塞性肺疾病急性发作期(AECOPD)患者血清甘胆酸(CG)、N端B型脑钠肽(NT-pro BNP)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)蛋白表达特点及意义。方法选取我院2016年1月～2018年4月收治的COPD患者128例,其中急性加重期68例,稳定期60例,选取同期在我院门诊体检的健康患者100例作为对照组,分析COPD患者血清CG、NT-pro BNP、HIF-1α及NLRP3蛋白表达水平的意义。结果COPD组患者CG、NT-pro BNP、HIF-1α、NLRP3 mRNA表达水平高于对照组,且AECOPD组高于稳定期COPD组,差异有统计学意义(P<0. 05)。轻度组、中度组、重度组三组间CG、NT-pro BNP、HIF-1α、NLRP3 mRNA表达水平呈逐渐升高的趋势,差异有统计学意义(P<0. 05)。生存组患者CG、NT-pro BNP、HIF-1α、NLRP3 mRNA表达水平低于死亡组,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论 AECOPD患者血清CG、NT-pro BNP、HIF-1α及NLRP3蛋白表达水平升高,相关表达水平与患者的病情程度和预后有一定的相关性。

桑黄素通过调控NLRP3/NF-κB信号通路对糖基化终末产物诱导的软骨细胞凋亡的影响

目的通过体外细胞实验探讨桑黄素(Mh)在骨关节炎(OA)中的作用并揭示其潜在机制。方法成功从大鼠软骨组织中分离出软骨细胞并通过甲苯胺蓝染色鉴定后,将软骨细胞与糖基化终末产物(AGE)共同孵育以诱导炎症OA模型。CCK-8筛选最佳Mh干预浓度。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子水平;免疫荧光和Western印迹检测细胞外基质(ECM)降解;流式细胞仪和Western印迹检测细胞凋亡;Western印迹检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP)3/核因子(NF)-κB信号通路相关蛋白表达。结果Mh最佳干预浓度为20μmol/L。与Control组比较,AGE组肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-6表达、基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP13、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶(ADAMTS)-4和ADAMTS-5蛋白水平、细胞凋亡率、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和p-IκBα及细胞核中NF-κB p65蛋白水平均显著升高,CollagenⅡ和Aggrecan阳性细胞率、C-caspase 3、Bax、Bcl-2蛋白表达均显著降低(P<0.05)。与AGE组相比较,Mh组或MCC950组TNF-α、IL-1β和IL-6水平、MMP3、MMP13、ADAMTS-4和ADAMTS-5蛋白水平、细胞凋亡率、C-caspase 3、Bax蛋白表达、NLRP3、ASC和p-IκBα及细胞核中NF-κB p65蛋白水平均显著降低,CollagenⅡ和Aggrecan阳性率、Bcl-2蛋白表达均显著升高(P<0.05)。与Mh组相比,Mh+BMS-986299组软骨细胞中TNF-α、IL-1β和IL-6、MMP3、MMP13、ADAMTS-4和ADAMTS-5水平、细胞凋亡率、C-caspase3和Bax蛋白表达、NLRP3、ASC和p-IκBα及细胞核中NF-κB p65蛋白水平明显升高,CollagenⅡ和Aggrecan阳性率、Bcl-2蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论Mh可能通过抑制NLRP3/NF-κB通路减轻AGE诱导的软骨细胞炎症、ECM降解和细胞凋亡,从而保护软骨细胞免受AGE诱导的损伤。