2型糖尿病患者血清微小RNA-155和核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3水平变化及对颈动脉粥样硬化的诊断价值

目的探讨血清微小RNA(miR)-155、核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(NLRP3)水平变化及其对2型糖尿病(T_(2)DM)患者颈动脉粥样硬化(CAS)的诊断价值。方法选取2021年1月至2023年1月四川大学华西医院收治的T_(2)DM患者142例。根据是否存在CAS分为CAS组(72例)和非CAS组(70例)。收集和比较2组患者的一般资料,检测和比较2组患者血清miR-155和NLRP3水平。采用Pearson相关性分析方法分析T_(2)DM患者血清miR-155与NLRP3水平的相关性。采用多因素Logistic回归方法分析T_(2)DM患者CAS的影响因素。采用受试者工作特征曲线分析血清miR-155、NLRP3水平对T_(2)DM患者CAS的诊断价值。结果CAS组T_(2)DM病程长于非CAS组,吸烟史比例、糖化血红蛋白、稳态模型胰岛素抵抗指数、miR-155、NLRP3均高于非CAS组(均P<0.05)。Pearson相关性分析显示T_(2)DM患者血清miR-155与NLRP3水平呈正相关(r=0.765,P<0.001)。多因素Logistic回归模型结果显示T_(2)DM病程延长、吸烟史和糖化血红蛋白、稳态模型胰岛素抵抗指数、miR-155、NLRP3升高是影响T_(2)DM患者CAS的独立危险因素(均P<0.05)。受试者工作特征曲线分析显示血清miR-155、NLRP3水平二者联合诊断T_(2)DM患者CAS的曲线下面积大于血清miR-155、NLRP3水平单独诊断(0.900比0.791、0.799,Z=3.436、3.381,均P=0.001)。结论血清miR-155、NLRP3水平升高与T_(2)DM患者CAS发生密切相关,血清miR-155、NLRP3水平联合对T_(2)DM患者CAS的诊断价值较高。

结核分枝杆菌H37Ra诱导核苷酸结合寡聚结构域2基因敲除(NOD2-/-)小鼠的1型辅助T（Th1）细胞型免疫应答

目的探讨1型辅助T(Th1)细胞的细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)及多功能T细胞在感染结核分枝杆菌H37Ra的核苷酸结合寡聚结构域2基因敲除(NOD2-/-)小鼠中的作用.方法NOD2-/-小鼠与野生型C57BL/6小鼠气管分别滴入MTB减毒株H37Ra建立肺部感染模型并设立生理盐水对照组,每组10只.4周后,取肺组织进行HE染色及病理评分;ELISA检测肺组织匀浆中TNF-α和IFN-γ含量;流式细胞术检测脾细胞中多功能CD4+T/CD8+T细胞的比例.结果NOD2-/-小鼠感染H-37Ra后肺组织炎症加重,肺组织TNF-α和IFN-γ含量增加.与生理盐水组相比,两种小鼠感染后,CD4+/CD8+T细胞中TNF-α+、IFN-γ+单阳性细胞及TNF-α+IFN-γ+细胞均显著增加;与C57BL/6小鼠感染组相比,NOD2-/-小鼠感染组体内TNF-α+CD4+T细胞、IFN-γ+CD4+T细胞及IFN-γ+CD8+T细胞显著增加.结论H37Ra可诱导NOD2-/-小鼠的Th1细胞型免疫应答反应.

核苷酸结合寡聚化结构域2在大鼠烟曲霉菌性角膜炎角膜局部的表达

目的探讨大鼠角膜真菌感染后角膜局部核苷酸结合寡聚化结构域2(NOD2)的表达。方法在大鼠左眼角膜上制作烟曲霉菌性角膜炎的模型(实验组),右眼作为对照组。在感染后第2天(早期)、第6天(中期)及第14天(晚期)取下角膜组织,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测NOD2在不同病程角膜组织中的表达。结果在实验组角膜中,NOD2早期开始表达,中期达高峰,以后逐渐下降。实验组与对照组早、中期NOD2 mRNA表达的差异均有统计学意义(P值均<0.05),晚期的差异无统计学意义(P>0.05);且实验组早期与中期、中期与晚期表达的差异均有统计学意义(P值均<0.01)。结论NOD2参与角膜烟曲霉菌性感染后角膜局部的免疫反应。

Kruppel样因子15通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3表达影响胰岛素抵抗实验研究

目的:探讨Kruppel样因子15(KLF15)是否通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达影响胰岛素抵抗。方法:建立小鼠模型和细胞模型,细胞蛋白电泳检测细胞内目的蛋白表达,聚合酶链反应(PCR)检测KLF15表达量,Western blot检测NLRP3相对表达量,免疫组化法检测组织KLF15表达,免疫荧光染色检测细胞增殖相关蛋白。结果:在链脲佐菌素(STZ)诱导小鼠模型中,小鼠诱导后1~4个月,血清KLF15 mRNA表达量水平被抑制。用10、20、40 mmol/L葡萄糖诱导HepG2细胞24 h后,细胞内KLF15 mRNA表达量水平随葡萄糖浓度升高而减少(均P<0.05)。小鼠组织中,KLF15、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、胰岛素受体底物1(IRS1)在空白组表达最高,其次分别为1、2、4个月组;NLRP3在空白组表达最低,1、2、4个月组依次升高(均P<0.05)。在体外模型中,si-NLRP3质粒可以降低NLRP3表达量;抑制NLRP3表达可以减少干扰素-γ(INF-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-1β表达,同时增加IRS1、GLUT4表达量;NLRP3过表达质粒可以促进NLRP3表达量,过表达NLRP3可以促进INF-γ、TNF-α、IL-6和IL-1β表达,同时减少IRS1、GLUT4表达量;上调KLF15可以抑制NLRP3蛋白表达,抑制KLF15可以促进NLRP3蛋白表达(均P<0.05)。结论:KLF15表达量与2型糖尿病(T2DM)胰岛素抵抗有关,KLF15低表达量可能会增加胰岛素抵抗。KLF15可能通过抑制NLRP3表达量减少T2DM胰岛素的炎症水平,抑制胰岛素抵抗。KLF15可能为胰岛素抵抗的T2DM的潜在治疗和诊断靶点,为以后的相关研究提供实验依据。

嘌呤能2X7受体-核苷酸结合寡聚化结构域样受体3信号通路活化在慢性胰腺炎纤维化中的作用

目的:探讨嘌呤能2X7受体(P2X7R)-核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)炎性体信号通路在小鼠慢性胰腺炎模型胰腺纤维化进程中的作用。方法:通过反复腹腔注射雨蛙素造成小鼠慢性胰腺炎模型,分别用P2X7R拮抗剂氧化三磷酸腺苷(Ox ATP)和亮蓝G(BBG)进行干预,处死后观察胰腺组织病理学变化,并用Western Blot及RT-PCR法对P2X7R、NLRP3和半胱天冬酶1(caspase-1)的含量进行检测,比较各组的变化。结果:正常对照组的P2X7R、NLRP3和caspase-1的蛋白表达水平分别为0.85±0.18,、0.93±0.16和1.02±0.06,模型组分别是1.55±0.22、2.00±0.35和2.23±0.56,二组比较,均有差异。OxATP组分别为1.02±0.26、1.01±0.09和0.95±0.04,BBG组分别为0.97±0.17、0.96±0.14和2.07±0.33,与模型组相比,无论是OxATP组还是BBG组,P2X7R、NLRP3和caspase-1在胰腺组织中的表达均显著降低(P<0.05)。病理结果显示,模型组出现了明显的胰腺纤维化,而OxATP组和BBG组的慢性胰腺炎和纤维化指标明显改善。结论:OxATP和BBG能够降低慢性胰腺炎模型的慢性炎症和纤维化程度,其机制与抑制P2X7R-NLRP3-caspase1信号通路的活化有关。

核苷酸结合的寡聚结构域2激动剂与Toll样受体激动剂协同诱导血管平滑肌细胞合成促炎症细胞因子

目的研究细胞内模式识别受体核苷酸结合的寡聚结构域(NOD)2受体在血管平滑肌细胞中的表达及其诱导血管平滑肌细胞产生促炎症细胞因子过程中的作用,并探讨它与Toll样受体(TLR)2、4在此过程中的相互关系。方法体外培养人冠状动脉血管平滑肌细胞,用NOD2激动剂胞壁酰二肽(MDP)、TLR2激动剂(PAM3)和TLR4激动剂脂多糖(LPS)单独或联合进行刺激,用实时定量逆转录聚合酶链反应检测血管平滑肌细胞中NOD2和成纤维生长因子2mRNA的表达,用酶联免疫吸附法测定细胞培养物上清液中白介素8和肿瘤坏死因子α的浓度,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测血管平滑肌细胞增殖活性。结果MDP能使血管平滑肌细胞中NOD2mRNA的表达呈时间依赖性上调[0h:(0.028±0.001);3h:(0.045±0.002);6h:(0.053±0.002);24h:(0.162±0.013)],并能引起血管平滑肌细胞中成纤维生长因子2mRNA的表达增加[MDP组:(9.3±0.4)vs对照组:(7.4±0.2);P<0.05],细胞培养物上清液中白介素8[MDP组:(2.4±0.2)μg/Lvs对照组:(1.0±0.1)μg/L;P<0.05]和肿瘤坏死因子α[MDP组:(51.9±4.7)ng/Lvs对照组:(29.4±3.7)ng/L;P<0.05]的分泌增多和细胞增殖活性增加[(0.90±0.05vs对照组:0.72±0.02;P<0.05]。MDP还能协同LPS、PAM3诱导血管平滑肌细胞增殖活性增加,细胞培养物上清液中白介素8和肿瘤坏死因子α的分泌增加。结论NOD2使血管平滑肌细胞增殖活性增加,诱导其分泌促炎症细胞因子。NOD2与TLR2、4在促进血管平滑肌细胞增殖活性增加,诱导血管平滑肌细胞分泌促炎症细胞因子的过程中具有协同作用。

血清脂蛋白相关磷脂酶A2、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3与老年冠心病Syntax积分的相关性

目的探讨血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA_(2))与老年冠心病患者Syntax积分的相关性。方法选取2018年1月至2020年4月濮阳市人民医院收治的114例冠心病患者作为观察组,再选取同期在濮阳市人民医院接受体检的108例健康者作为对照组。比较两组血清NLRP3、Lp-PLA_(2)水平,比较Syntax积分及主要不良心血管事件(MACE)发生情况,比较不同Syntax积分及不同MACE发生情况患者的血清NLRP3、Lp-PLA_(2)水平,分析血清NLRP3、Lp-PLA_(2)水平与Syntax积分的相关性以及血清NLRP3、Lp-PLA_(2)联合检测对发生MACE的预测价值。结果观察组血清NLRP3、Lp-PLA_(2)水平高于对照组(P<0.05)。随着Syntax积分升高,血清NLRP3、Lp-PLA_(2)水平逐渐升高(P<0.05);血清NLRP3、Lp-PLA_(2)水平与Syntax积分呈正相关(P<0.05);发生MACE患者血清NLRP3、Lp-PLA_(2)水平高于对照组(P<0.05);ROC曲线显示血清NLRP3、Lp-PLA_(2)水平联合检测的AUC值大于任意单一检测(P<0.05)。结论冠心病患者血清NLRP3、Lp-PLA_(2)水平升高,其水平与病变严重程度密切相关。通过检测NLRP3、Lp-PLA_(2)水平可预测冠心病患者MACE的发生风险。

内毒素耐受对核苷酸结合寡聚化结构域2信号通路的影响

为研究内毒素耐受对核苷酸结合寡聚化结构域2(nucleotide-binding oligomerization domain containing 2,NOD2)信号通路的影响,将小鼠单核-巨噬细胞RAW264.7分为两组,分别给予小剂量脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(100ng/mL)或磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)预处理20h,建立内毒素耐受组和对照组。每组细胞分别给予大剂量LPS(1 000ng/mL)或热灭活烟曲霉孢子刺激,于刺激后0、2、6、12、24h采用定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测细胞NOD2、受体相互作用蛋白2(receptor-interacting protein 2,RIP2)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)mRNA表达;采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞上清液中白细胞介素8(interleukin 8,IL-8)和TNF-α浓度。结果显示,内毒素耐受组无论是大剂量LPS还是热灭活烟曲霉孢子刺激均不能增加NOD2、RIP2和TNF-αmRNA表达及细胞上清液中IL-8、TNF-α浓度;而对照组大剂量LPS和热灭活烟曲霉孢子刺激均可提高NOD2、RIP2和TNF-αmRNA表达及细胞上清液中IL-8、TNF-α浓度,尤以刺激后12h增加显著,与刺激前(0h)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结果提示,内毒素耐受可能对NOD2信号通路有抑制作用。

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性体在2型糖尿病并发冠心病过程中的作用

目的探究核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)炎性体在2型糖尿病并发冠心病过程中的作用。方法选取第三军医大学新桥医院心血管内科的住院患者共130例,分为单纯冠心病组(n=40)、单纯2型糖尿病组(n=20)、2型糖尿病并发冠心病组(n=40)及正常对照组(n=30)。分离外周血单个核细胞及血浆。采用RT-q PCR、Western blot分别检测各组外周血单个核细胞中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosisassociated speck-like protein,ASC)、半胱天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)mRNA及蛋白表达情况,ELISA法检测各组血浆中IL-1β含量。结果单纯冠心病组、单纯2型糖尿病组及2型糖尿病并发冠心病组外周血单个核细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA及蛋白表达水平均较正常对照组显著增高(P<0.05),其中,2型糖尿病并发冠心病组ASC、Caspase-1 mRNA在外周血单个核细胞中的表达显著高于单纯冠心病组及单纯2型糖尿病组(P<0.05),而2型糖尿病并发冠心病组NLRP3蛋白在外周血单个核细胞中的表达显著高于单纯冠心病组及单纯2型糖尿病组(P<0.05)。同时,测得单纯冠心病组、单纯2型糖尿病组及2型糖尿病并发冠心病组血浆中IL-1β含量分别为(24.05±1.00)、(22.86±1.66)、(26.85±1.45)ng/L,较正常对照组(12.53±2.79)ng/L均显著升高(P<0.05),其中,2型糖尿病并发冠心病组血浆中IL-1β含量显著高于单纯冠心病组及单纯2型糖尿病组(P<0.05)。结论 NLRP3炎性体的异常激活可促进2型糖尿病并发冠心病病理过程的发生、发展,其可能成为防治2型糖尿病并发冠心病的新靶点。

吸入性肺炎患者肺泡灌洗液中核苷酸结合寡聚化结构域2、核因子-κB的表达及其临床意义

目的研究核苷酸结合寡聚化结构域2(NOD2)和核因子-κB(NF-κB)在吸入性肺炎(AP)患者肺泡灌洗液(BALF)中的表达水平及其临床意义。方法选择2018年1月~2019年10月在我院住院的肺炎患者90例,其中吸入性肺炎组(AP组)患者40例,非吸入性肺炎组(非AP组)患者50例。采用RT-PCR法检测住院患者BALF中NOD2 mRNA和NF-κB mRNA表达水平;采用ELISA法检测BALF中hs-CRP和IL-6水平;采用ROC曲线分析NOD2、NF-κB用于诊断AP的敏感度和特异度。结果 (1) AP组NOD2 mRNA、NF-κB mRNA表达水平(7.46±1.82、39.12±9.53)高于非AP组(3.38±0.65、12.13±3.76),差异有统计学意义(P<0.05)。(2)AP组IL-6、hs-CRP水平[(23.72±6.54)ng/ml、(17.38±4.42)mg/L]高于非AP组[(14.37±4.67)ng/ml、(7.35±2.86)mg/L],差异有统计学意义(P<0.05)。(3) NOD2和NF-κB诊断AP的ROC曲线下面积分别为0.734、0.789,二者对AP均具有诊断价值(P<0.05)。结论 AP患者NOD2 mRNA和NF-κB mRNA表达水平和炎症因子水平明显升高,NOD2和NF-κB可能参与AP致炎过程。

基于NOD2介导的AMPK/mTOR信号通路探讨宫颈癌细胞恶性行为的机制

目的 基于核苷酸结合寡聚化结构域受体2(NOD2)介导的AMP活化蛋白激酶(AMPK)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路探讨宫颈癌(CC)细胞恶性行为的机制。方法 生物信息学分析确定NOD2在CC组织中的表达。将靶向NOD2(shNOD2)、shRNAs阴性对照(shNC)以及NOD2过表达(NOD2)质粒和载体(Vec)转染CC细胞。通过CCK-8测定、集落形成和Transwell细胞侵袭测定来确定NOD2对CC细胞生长的影响。通过高通量RNA测序(RNA-Seq)进行转录组分析。Western blot试验检测细胞系中NOD2、AMPK/mTOR信号通路和自噬蛋白的表达。24只雌性BALB/c裸鼠随机分为4组,每组6只:载体组(Vec组)、NOD2过表达组(NOD2组)、shNC组和shNOD2组。构建小鼠远处转移模型,监测肺转移的荧光强度,计数肺转移结节的数量。结果 在线数据库分析显示,NOD2在CC组织中表达明显高于正常组织,并且不同分期的CC中NOD2的mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05)。此外,NOD2的高表达与较差的总生存期和无病生存期相关(P<0.05)。NOD2过表达对CC细胞增殖、集落形成、迁移和侵袭具有促进作用,而NOD2敲低则相反。与体外结果一致,在转移的小鼠尾静脉注射模型中,NOD2组CC细胞的肺定殖、肺转移灶较Vec组增加(P<0.05),而shNOD2组CC细胞的肺定殖、肺转移灶较shNC组减少(P<0.05)。RNA-Seq结果显示NOD2表达与AMPK信号激活、mTOR信号抑制、自噬调节途径激活和自噬体形成显著相关。与shNC组相比,shNOD2组磷酸化AMPK、LC3蛋白表达水平减少(P<0.05),磷酸化mTOR、p62蛋白表达水平增加(P<0.05);与Vec组相比,NOD2组LC3、AMPK蛋白表达水平增加(P<0.05),磷酸化mTOR、p62蛋白表达水平减少(P<0.05)。与shNC组相比,shNOD2组GFP-mRFP-LC3的点积累减少(P<0.05);与Vec组相比,GFP-mRFP-LC3的点积累增加(P<0.05)。结论 NOD2可能通过AMPK/mTOR信号促进CC增殖、迁移和侵袭,其作用机制部分涉及自噬激活。

ghrelin对脓毒血症大鼠肺脏炎症及核苷酸结合寡聚域2和受体相互作用蛋白2 mRNA表达的影响

目的研究ghrelin对脓毒血症大鼠肺脏中性粒细胞浸润、炎性细胞因子[肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6]及核苷酸结合寡聚域2(NOD2)和受体相互作用蛋白2(RIP2)mRNA表达的影响。方法 24只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、假手术+ghrelin组(Sham+ghrelin组)、脓毒血症组(CLP组)和脓毒血症+ghrelin组(CLP+ghrelin组)。采用盲肠结扎穿孔(CLP)的方法建立脓毒血症大鼠模型。Sham+ghrelin组和CLP+ghrelin组分别于假手术或CLP后即刻经尾静脉注射10 nmol/kgghrelin,Sham组和CLP组于相应时间点尾静脉注射等量0.9%氯化钠溶液,给药速率为0.2 mL/min。于假手术或CLP后6 h麻醉下处死大鼠,取肺组织,光学显微镜下观察肺组织病理学变化,并测定髓过氧化物酶(MPO)活性、TNF-α和IL-6水平以及NOD2和RIP2 mRNA的表达。结果与Sham组和Sham+ghrelin组比较,CLP组和CLP+ghrelin组肺组织MPO活性、TNF-α和IL-6水平、NOD2和RIP2 mRNA的表达均显著升高(P值均<0.05);CLP+ghrelin组肺组织MPO活性、TNFα-和IL-6水平、NOD2和RIP2 mRNA的表达均显著低于CLP组(P值均<0.05)。结论 ghrelin可改善脓毒血症大鼠肺脏中性粒细胞的浸润、下调肺组织炎性细胞因子(TNF-α和IL-6)的表达,其作用可能与抑制NOD2/RIP2信号通路有关。

沙门氏菌感染后鸡血液中核苷酸结合寡聚化结构域1基因的表达量变化分析

为了探讨核苷酸结合寡聚化结构域1（nucleotide-binding oligomerization domain containing 1,NOD1）在抗沙门氏菌感染过程中的作用,本试验采用实时荧光定量PCR的方法检测了血液中NOD1基因在转录水平的表达量变化。试验分为3组,鸡白痢沙门氏菌组、肠炎沙门氏菌组和对照组,分别在感染后1、3、5、7d检测NOD1mRNA的表达水平。结果显示,感染后的1~7d,鸡白痢沙门氏菌和肠炎沙门氏菌感染后的表达量变化趋势不同,其中,鸡白痢沙门氏菌感染后表达量呈先上升再下降然后再上升的波浪形变化,而肠炎沙门氏菌感染后的表达量呈逐渐上升趋势。与对照组相比,血液中NOD1mRNA的水平,在鸡白痢沙门氏菌感染后的3和7d的表达量显著高于对照组（P〈0.05）,在肠炎沙门氏菌感染后的5、7d的表达量显著高于对照组（P〈0.05）。提示,鸡白痢沙门氏菌和肠炎沙门氏菌感染后均可促进鸡血液中NOD1基因的表达,NOD1基因可能参与了机体抗沙门氏菌感染过程。

棕榈酰转移酶修饰的NOD2在小鼠心肺复苏后脑损伤中的作用

目的探讨棕榈酰转移酶(ZDHHC5)和核苷酸结合寡聚化结构域2(NOD2)在小鼠心肺复苏(CPR)后脑损伤中的作用。方法24只C57BL/6J雄性小鼠分为空白组、对照组、ZDHHC5-si组和NOD2-si组,每组6只。空白组无需任何处理,其余3组进行CPR造模。CPR造模前ZDHHC5-si组和NOD2-si组小鼠分别通过尾静脉注射ZDHHC5 siRNA和NOD2 siRNA。改良神经功能缺损量表(mNSS)评估各组造模后24 h、48 h和72 h的神经功能。72 h后采集血液标本和脑组织。实时荧光定量PCR(qPCR)检测脑组织ZDHHC5和NOD2 mRNA表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-6;比色法及硫代巴比妥酸(TBA)法分别检测脑组织丙二醛(MDA)和髓过氧化物酶(MPO)。Western blot检测脑组织Cleaved Caspase-3、ZDHHC5及NOD2的蛋白表达。光镜下观察脑组织苏木素伊红(HE)染色病理切片。荧光显微镜下观察脑组织TUNEL染色病理切片。结果与空白组比较,其他3组mNSS评分,IL-1β、TNF-α、IL-6、MDA和MPO的表达水平,Cleaved Caspase-3、ZDHHC5和NOD2的蛋白表达量升高(P<0.05),脑组织损伤和细胞凋亡加重。与对照组比较,ZDHHC5-si组和NOD2-si组上述指标降低(P<0.05),脑组织损伤和细胞凋亡减轻。与NOD2-si组比较,ZDHHC5-si组上述指标降低(P<0.05),脑组织损伤和细胞凋亡进一步减轻。结论在小鼠CPR模型中,NOD2受ZDHHC5的调控后可产生棕榈酰化修饰的NOD2,进而促使炎性因子释放并引起神经细胞凋亡,损伤脑组织并影响神经功能。

α-硫辛酸对2型糖尿病胰岛素抵抗的机制研究

目的观察α-硫辛酸调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体对2型糖尿病(T2DM)胰岛素抵抗的机制。方法选取南京中医药大学附属南京医院(南京市第二医院)2021年6月至2023年6月就诊的102例T2DM患者研究,在组间基线特征可比的原则上,以随机数字表法将其分为基础组和观察组,各51例。基础组给予基础降糖治疗,观察组在基础组基础上给予α-硫辛酸治疗,比较两组患者血糖指标、血脂指标、血清NLRP3及下游炎性因子、胰岛素抵抗指标。结果观察组患者治疗后糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FPG)、餐后2h血糖(2hPG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血清NLRP3、白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-1β(IL-1β)、稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)均低于基础组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者治疗后高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和稳态模型胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)高于基础组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论α-硫辛酸通过下调T2DM患者NLRP3及下游炎性因子,可改善胰岛素抵抗,降低血糖、血脂,效果显著。

利拉鲁肽通过抑制高糖环境下NOD样受体家族核苷酸结合寡聚化结构域样受体3炎性体活化保护人髓核细胞的研究

目的探讨利拉鲁肽(Lir)通过抑制高糖环境NOD样受体家族核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)炎性体活化保护人髓核细胞(NPCs)的作用及机制。方法培养人髓核细胞株,第三代髓核细胞随机分为对照组(Con组)、高糖组(HG组)、Lir干预组(Lir组),培养48 h。ELISA法检测IL-1β,流式细胞术检测活性氧簇(ROS),Western blot法检测NLRP3、半胱天冬氨酸酶-1前体(Pro-caspase-1)、半胱天冬氨酸酶-1(Caspase-1)蛋白表达。结果与Con组比较,HG、Lir组IL-1β、ROS、NLRP3、Pro-caspase-1、Caspase-1蛋白表达、细胞凋亡率升高(P<0.05)。与HG组比较,Lir组IL-1β、ROS、NLRP3、Pro-caspase-1、Caspase-1蛋白表达、细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论Lir通过抑制NLRP3炎性体活化,降低IL-1β分泌,抑制细胞凋亡,保护人NPCs。

敲低NOD2通过调控(p)NF-κB/STAT3改善肝细胞癌细胞炎症反应

目的 探讨核苷酸结合寡聚化结构域蛋白2(NOD2)对肝细胞癌(HCC)细胞炎症反应的影响和机制。方法 培养HCC细胞。Western blot检测NOD2在HCC细胞和正常肝细胞中的表达水平。利用小干扰RNA(siRNA)建立NOD2的敲低RNA(siNOD2组)用来抑制NOD2的表达,阴性对照为siNC组,使用这二者处理HCC细胞。CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率。Western blot检测NF-κB P65、STAT3、NOD2的表达,并检测磷酸化的(p-)NF-κB P65以及磷酸化的(p-)STAT3的表达水平。ELISA法测定培养HCC细胞培养物上清液中TNF-α、IL-12、IL-6、IFN-γ质量浓度的变化。在siNOD2处理HCC细胞的基础上,用NF-κB/STAT3的激活剂重组人Lipocalin-2(rhLipocalin-2)蛋白进行处理(siNOD2+rhLipocalin-2组),检测细胞增殖率、凋亡率和炎症因子水平。结果 与正常肝细胞相比,HCC细胞中NOD2的表达水平显著上调(P<0.05)。与siNC组相比,siNOD2组的NOD2、p-NF-κB P65及p-STAT3的表达水平均显著下调、细胞增殖率降低,细胞凋亡率增高,且细胞培养物上清液中TNF-α、IL-12、IL-6、IFN-γ水平均下调(均P<0.05)。而与siNOD2组相比,siNOD2+rhLipocalin-2组的p-NF-κB P65及p-STAT3的表达水平均显著上调,细胞增殖率增高,细胞凋亡率降低,且细胞培养物上清液中TNF-α、IL-12、IL-6、IFN-γ水平均上调(均P<0.05)。结论 敲低NOD2通过调控NF-κB/STAT3通路抑制HCC细胞的炎症反应,该结果为HCC治疗提供了一个新的潜在靶点。

NOD2致高同型半胱氨酸血症小鼠心室重构的作用及其机制

目的探讨细胞内模式识别受体——核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)蛋白家族中NOD2蛋白在高同型半胱氨酸血症(hHcys)心肌组织的表达及致心室重构的作用。方法选取野生雄性(WT)小鼠、胱硫醚β合酶(CBS)^+/-鼠(CBS敲基因鼠)、NOD2^-/-鼠(NOD2敲基因鼠)各20只,分别再分为正常饮食、无叶酸饮食各10只,无叶酸饮食建立hHcys小鼠模型。实时荧光定量PCR检测正常饮食、无叶酸饮食小鼠心肌组织NOD2mRNA表达水平,Westernblotting测定心肌组织NOD2蛋白及MMP-9蛋白表达水平,小动物超声心动图测定心室重构指标并判断心功能。结果与正常饮食组相比,NOD2在无叶酸饮食的WT小鼠和CBS^+/-小鼠心肌组织中mRNA水平和蛋白表达水平明显升高(P均<0.05);超声心动图发现NOD2基因缺失hHcys小鼠左室肥大和室壁变薄减轻,心功能也得到不同程度的改善(P均<0.05);NOD2基因缺失小鼠心肌组织MMP-9蛋白表达降低(P<0.05)。结论NOD2在hHcys小鼠心肌组织中高表达,NOD2通过调控MMP-9的表达参与hHcys所致心室重构过程。

2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝患者经吡格列酮治疗后核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3的变化

目的探讨吡格列酮治疗2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)水平的改变。方法收集上海健康医学院附属周浦医院内分泌科2021年1月到2022年10月就诊的T2DM合并NAFLD患者80例,随机分为对照组及吡格列酮治疗组,随访4周。分析两组研究对象基线及随访时血糖、血脂、肌酐、谷丙转氨酶等生化指标;运用ELISA双抗体夹心法检测外周血NLRP3水平。结果最终吡格列酮组35例、对照组36例完成全部试验。吡格列酮组基线血清NLRP3为(5.4±1.1)μg/L,随访时为(4.8±0.8)μg/L,有明显下降;而对照组基线血清NLRP3为(5.2±1.0)μg/L,随访时为(5.2±0.8)μg/L,无明显改变,并且随访时吡格列酮组血清NLRP3水平低于对照组。除随访时吡格列酮组TC水平高于对照组外,两组间血糖、血脂、肝肾功能均无明显差异。结论T2DM合并NAFLD患者使用吡格列酮治疗后在改善糖脂代谢的同时,也可以降低血清NLRP3水平。

活动性肺结核患者血清NOD2、ATG16L1水平与病情及预后的关系研究

目的探究活动性肺结核患者血清核苷酸结合寡聚化结构域蛋白2(nucleotide-binding oligomerization domain 2,NOD2)、自噬相关蛋白16样蛋白1(autophagy related protein 16 like protein 1,ATG16L1)水平与病情、预后的关系。方法选择2020年1月—2022年1月在陕西省结核病防治院治疗的110例活动性肺结核患者作为活动性肺结核组,同一时间在本院进行健康体检的60名健康人作为健康对照组。ELISA法检测血清NOD2、ATG16L1水平。将活动性肺结核组分为轻度组、中度组和重度组,通过标准化治疗后根据疗效分为预后良好组和预后不良组,分析NOD2、ATG16L1水平与病情及预后的关系。分析活动性肺结核患者血清NOD2与ATG16L1水平的相关性。用ROC曲线评估NOD2、ATG16L1对活动性肺结核患者预后的评估价值,Cox回归分析活动性肺结核患者预后的影响因素。结果活动性肺结核组血清NOD2、ATG16L1水平明显高于健康对照组(P<0.05),且随着病情的加重,NOD2、ATG16L1水平呈上升趋势(P<0.05)。活动性肺结核患者血清NOD2与ATG16L1水平呈正相关(r=0.360)。与预后良好组比较,预后不良组血清NOD2、ATG16L1水平明显升高(P<0.05)。ROC曲线显示,NOD2、ATG16L1水平预测活动性肺结核患者预后的曲线下面积分别为0.878(95%CI:0.814~0.941)和0.815(95%CI:0.731~0.900)。患者病情、血清NOD2、ATG16L1水平均是活动性肺结核患者预后不良的危险因素(P<0.05)。结论活动性肺结核患者血清NOD2、ATG16L1水平高表达,与病情发展密切相关,可在一定程度上预测患者的预后。