酒精性肝病患者肝组织NLRP3炎症复合体基因水平检测及其意义

目的探讨核苷酸结合性寡聚区蛋白样受体(NLR)P3炎症复合体在酒精性肝病(ALD)发病中的作用。方法本研究获得酒精性肝炎(AH)12例、酒精性肝硬化(ALC)4例和健康人(HC)12例肝组织,采用RT-PCR法检测肝组织NLRP3、Caspase-1和IL-1βm RNA水平。采集ALD患者84例【AH20例、ALC48例(Child-Pugh A级19例、B级22例和C级7例)和重症酒精性肝炎(SAH)16例】和健康人40例血浆,采用ELISA法检测血浆IL-1β水平,采用Spearman秩相关分析血浆IL-1β水平与临床检验指标的相关性。结果 AH和ALC患者肝组织NLRP3 m RNA水平分别为(28.1±2.8)和(28.4±3.1),均显著高于HC组【(8.8±1.8),P<0.001】,Caspase-1m RNA水平分别为(18.8±1.2)和(24.6±1.8),均显著高于HC组【(15.1±1.0),P<0.05】,IL-1βm RNA水平分别为(17.0±2.9)和(16.3±4.4),均显著高于HC组【(7.0±1.1),P<0.01】;肝组织NLRP3 m RNA水平分别与IL-1βm RNA或Caspase-1 m RNA水平呈正相关(P<0.05);AH、ALC和SAH患者血浆IL-1β水平分别为(36.1±1.8)pg/m L、(28.0±1.6)pg/m L和(32.5±2.4)pg/m L,均显著高于HC组【(14.7±0.8)pg/m L,P<0.01】;不同Child-Pugh分级ALC患者IL-1β水平无显著性差异(P>0.05);ALD患者血浆IL-1β水平与ALT和AST/ALT比值呈正相关。结论 NLRP3炎症复合体主要组分及促炎细胞因子IL-1β在ALD患者肝组织和血浆水平升高,可能参与了ALD发病的炎症反应过程。

肺炎克雷伯菌肺炎对小鼠NLRP3炎症通路的影响

目的建立肺炎克雷伯菌肺炎小鼠模型,并探究肺炎克雷伯菌感染对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症通路的影响。方法给小鼠气管内接种肺炎克雷伯菌,观察小鼠死亡率;接种肺炎克雷伯菌48 h后,取小鼠肺部匀浆涂板检查菌落数;取小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)离心,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测无细胞上清中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF-α)、IL-6、趋化因子配体1(KC)的水平,迈格林华-姬姆萨染色计数细胞沉淀中的中性粒细胞数;取肺部病理切片并进行苏木精-伊红(HE)染色观察肺部病变;提取肺部总蛋白,蛋白质印迹法检测NLRP3、核因子(NF)-κB p65、凋亡相关微粒蛋白(ASC)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶(caspase-1)、人白介素-1β前体(pro-IL-1β)表达水平。结果成功建立肺炎克雷伯菌肺炎小鼠模型,小鼠在144 h内死亡率达到百分之百,肺部有大量细菌负载,肺部中性粒细胞浸润增加,支气管肺泡灌洗液中IL-1β、TNF-α、IL-6、KC分泌升高,肺组织IL-1β、p-p65表达升高。结论通过将肺炎克雷伯菌液接种到小鼠肺部的方法所建立的肺炎小鼠模型稳定性高、可重复性好,肺部NLRP3炎症通路反应强烈。

高温高湿条件下劳力性热射病致病特点与肝损伤机制

目的探讨高温高湿条件下劳力性热射病(EHS)致病特点与肝损伤机制。方法 40只SD大鼠随机分为高温高湿EHS组(n=24,再分为建模后0、12、24 h共3个亚组,每个亚组8只)、常温常湿EHS组(n=8)和正常对照组(n=8)三组。高温高湿EHS组和常温常湿EHS组通过计算机控制大鼠转轮式跑步机分别于高温高湿[舱温(35±2)℃,湿度(80±10)%]和常温常湿[舱温(25±2)℃,湿度(50±10)%]条件下进行跑步运动,建立EHS模型。参照肛温达到42℃为EHS标准,记录两组达到EHS时的跑步时间,计算建模过程中肛温上升速率、热负荷指标。建模成功后采集心尖血分离血清,采用全自动生化仪检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,酶联免疫吸附法测定白介素(IL)-1β和IL-18水平。光镜下观察肝脏组织病理学变化,Western blot测定肝脏组织中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)炎症复合体表达水平。结果高温高湿EHS组大鼠肛温达到42℃时的运动时间显著少于常温常湿EHS组[(15.8±1.3)min vs(57.2±6.4)min,P<0.05],肛温上升速率显著高于常温常湿EHS组[(42.5±3.3)%vs(11.9±1.2)%,P<0.05],热负荷显著低于常温常湿EHS组[(8.3±0.9)℃·min vs(29.5±8.3)℃·min,P<0.05]。高温高湿EHS组建模成功后0、12 h血清ALT、AST、IL-1β和IL-18水平均高于正常对照组(P均<0.05),24 h时AST和IL-18水平显著高于正常对照组(P均<0.05)。光镜下,高温高湿EHS组肝脏组织病理学改变较常温常湿EHS组更加明显。高温高湿EHS组和常温常湿EHS组肝组织中HMGB1蛋白表达水平均高于正常对照组(P<0.05),高温高湿EHS组建模后12、24 h肝组织中NLRP3炎症复合体蛋白表达水平显著高于正常对照组及常温常湿EHS组(P<0.05)。结论高温高湿条件下大鼠运动耐力下降、核心体温上升速率加快、肝损伤加重。HMGB1蛋白和NLRP3炎症复合体可能在高温高湿条件下劳力性热射病相关肝损伤致病中发挥作用。