农垦58s育性转换期间叶片核蛋白因子与LRE结合研究

运用人工合成的ＬＲＥ序列，采用Ｂａｎｄｓｈｉｆｔａｓｓａｙ方法分析了农垦５８ｓ和农垦５８品种叶片中核蛋白因子与ＬＲＥ的结合反应．研究结果表明：在农垦５８Ｓ的育性转换敏感期叶片中存在与ＬＲＥ结合的核蛋白因子，这种核蛋白因子受磷酸化的调节；认为在长日照下农垦５８ｓ叶片中的核蛋白因子以磷酸化的形式与ＬＲＥ结合，磷酸化促进了核蛋白二聚化过程．同时比较了农垦５８ｓ和农垦５８品种叶片中核蛋白因子与ＬＲＥ结合反应的差别，二者的叶片中的核蛋白不仅与ＬＲＥ的结合活性存在差异，而且其调节方式明显不同．

核蛋白因子与水稻蜡质基因5′端上游顺序的结合

近来,植物基因转录调控的研究借鉴了动物和酵母系统中采用的方法取得了一定进展。如依赖光表达的豌豆rbcS-3A基因,大豆种子发育特异的β-副球蛋白基因和水稻对脱落酸反应的rab基因。

剪接因子U2AF65相关蛋白的研究进展

U2核糖核蛋白小体辅助因子(U2AF)65是参与前体mRNA剪接的重要辅助因子,前体RNA生成之初,U1核糖核蛋白小体(snRNP)结合到内含子的5'剪接位点,U2AF65和U2AF35分别结合到多聚嘧啶序列和3'剪接位点,剪接因子1(SF1)结合到分支位点是剪接体形成的第一步。U2AF的存在又辅助U2snRNP代替SF1结合到分支位点,使剪接反应顺利进行。最近几年,发现基因组中存在一些U2AF65的旁系同源基因序列。这些旁系同源基因由祖先基因经连续复制而横向形成,复制出的基因副本经历了各自的进化途径,最终它们在结构和功能上有相似之处,又各有独特之处。我们简要讨论了U2AF65、PUF60、CAPERα和CAPERβ这4种同源蛋白的发现过程、结构特征、自身的多样性、基因的进化和生物学功能。

核因子-κB与恶性肿瘤

核因子-kB(NF-kB)是一种重要的转录调控因子，可与多种基因启动子部位的出位点发生特异性结合而促进转录表达，它是由Sen和Baltimore在1986年首先从成熟B淋巴细胞中抽提出的可与免疫球蛋白重链和κ轻链基因增强子序列(GGGACTTTC)特异结合的核蛋白因子，是一种调控基因表达的DNA结合因子。此后，逐步发现它是一种普遍存在的转录因子，存在于许多类型的细胞中，

转录因子红系核蛋白的特异转录因子1参与脓毒症小鼠血小板生成减少的调控

目的观察骨髓巨核细胞成熟障碍是否参与脓毒症血小板减少及转录因子红系核蛋白的特异转录因子1（GATA1）对巨核细胞生成血小板的调控作用。方法将60只BALB／c雄性小鼠随机分为阴性对照（C组）、脓毒症组[大肠杆菌脂多糖（LPS）组]、LPS±地塞米松治疗组（Dex组）。每天检测血小板计数；LPS注射1d细胞涂片染色观察巨核细胞形态，流式细胞术检测巨核细胞表面标记分子CIM1、CD61表达；LPS注射1、3d检测炎性因子白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子-α（TNF—α）表达水平，反转录一聚合酶链反应（RT-PCR）检测转录因子GATA1、FOG1 mRNA表达。结果（1）LPS注射1～3dLPS组血小板计数[（334．0±125．7）×10^9／L、（217．0±80．2）×10^9／L、（293．0±27．8）×10^9／L]较C组[（1148．0±56．6）×10^9／L、（1020．0±55．9）×10^9／L、（1158．0±43．8）×10^9／L]明显降低（P〈0．05）；LPS注射1dDex组[（316．0±99．8）×10^9／L]血小板较C组降低（P〈0．05），3d[（401．0±106．1）×10^9／L]较LPS组明显升高（P〈0．05）。（2）LPS注射1d时LPS组、Dex组巨核细胞数较C组升高[07．6±5．7）、（16．9±3．6）、（7．8±2．9）个]，3d时LPS、Dex组巨核细胞数较1d时下降[（12．8±6．4）、（10．5±7．1）个]，但仍高于C组[（8．3±2．0）个，P〈0．05]。LPS组、Dex组巨核细胞胞质体积较C组明显增大，但产血小板型巨核细胞较C组减少（P〈0．05），两组巨核细胞成熟障碍、血小板释放减少；（3）LPS注射1dLPS组与Dex组GATA1、FOG1表达较C组降低（LPS：0．27±0．02、0．61±0．05；Dex：0．22±0．02、0．10±0．01，P〈0．05），LPS组与Dex组GATA1表达差异无统计学意义（P〉0．05），LPS组GATA1与FOG1比较降低更明显（P〈0．05）；LPS注射3d时Dex组GATA1、FOG1表达水平高于LPS组（Dex：0．38±0．02、0．22±0．01；LPS：0．21±0．01、0．20±0．01），两组仍明显低于C组表达（P〈0．05）；（4）LPS注射1d时LPS、Dex组TNF—α、IL-6水平[LPS：（489．3±32．8）、（623．2±25．9）pg／ml；Dex：（468．1±34。9）、（635．1±37．7）pg／m1]较C组[（66．2±23．7）、（78．0±18．6）pg／m]]显著升高，P〈0．01]；3d时各组TNF．or．水平差异无统计学意义（P〉0．05）；LPS组IL-6较C、D组升高[LPS：（222．6±52．3）pg／ml，C组：（81．2±14．5）pg／ml，D组：（98．0±42．5）pg／m]；P〈0．05]，Dex组与C组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论骨髓巨核细胞成熟障碍是脓毒症时血小板减少的重要原因；LPS可能通过抑制转录因子GATA1表达、抑制巨核细胞成熟而影响血小板生成。Dex通过上调GATA1表达促进巨核细胞成熟、脓毒症时血小板数量。

lncRNA THRIL在ICU脓毒症患者血清中的表达水平及临床价值

目的探讨血清长链非编码RNA-肿瘤坏死因子相关异种核糖核蛋白(lncRNA THRIL)水平与重症监护室(ICU)脓毒症患者病情严重程度的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测该院ICU脓毒症患者与健康志愿者血清lncRNA THRIL的表达差异;并比较不同临床病理参数脓毒症患者血清lncRNA THRIL的表达差异,分析lncRNA THRIL表达水平与脓毒症严重程度关系;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估lncRNA THRIL对脓毒症患者预后的预测价值。结果脓毒症患者血清lncRNA THRIL的相对表达量明显高于健康志愿者(t=-13.627,P<0.05)。lncRNA THRIL在不同脓毒症严重程度患者及不同急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ判断的不同严重程度患者中表达差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA THRIL预测脓毒症预后的曲线下面积为0.839,灵敏度、特异度分别为87.8%、81.4%。结论lncRNA THRIL在脓毒症患者血清高表达,并与脓毒症的严重程度有一定关系,可作为脓毒症预后的预测因子。

视网膜缺血再灌注损伤后HSP70、NF-κB的表达和细胞凋亡的关系

目的探讨大鼠视网膜缺血再灌注损伤后热休克蛋白70(HSP70)、核蛋白因子-κB(NF-κB)表达和损伤神经细胞凋亡的关系。方法前房加压法制作大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型,28只大鼠随机分为正常组和缺血再灌注组,后者又按照再灌注后不同时间段分为1、6、12、24、48、72h组。应用末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记(TUNEL)法检测视网膜神经细胞凋亡指数(AI),过氧化物酶标记的链酶卵白素(SP)免疫组织化学法检测视网膜组织中HSP70、NF-κB的表达。结果视网膜神经细胞的凋亡出现于再灌注后6h,并逐渐递增,24h达到高峰,48h开始下降,72h不明显。HSP70在再灌注后1h即有表达,随时间段延长表达逐渐增加,至再灌注后24h达到高峰,之后渐下降。NF-κB的表达变化与凋亡细胞变化的规律基本一致。结论视网膜缺血再灌注损伤导致神经节细胞的凋亡;HSP70和NF-κB在视网膜缺血再灌注损伤中表达升高,对神经细胞的凋亡起着重要的调节作用。

PDTC干预对左向右分流大鼠模型肺动脉压力的影响

目的探讨核蛋白因子κB(NF-κB)在左向右分流大鼠模型肺动脉内皮细胞的活性及应用阻断剂(PDTC)干预后肺动脉压力的变化。方法 50只4周龄Wistar雄性大鼠随机分为4组:手术分流组(Tn组)15只,手术+PDTC阻断组(Ti组)15只,假手术对照组(Co组)10只,阴性对照组(Cn组)10只。将Tn组和Ti组30只大鼠通过颈总动脉-颈外静脉吻合术建立左向右分流型肺动脉高压模型,其中Ti组15只大鼠于术前1 h开始腹腔注射PDTC,剂量为120 mg.kg-1.d-1,持续2周,Co组大鼠除了不进行颈总动脉-颈外静脉吻合外,其余手术程序与实验组完全相同。连续饲养12周后,采用心导管术测量右心室收缩压(RVSP);分离大鼠肺动脉内皮细胞,通过凝胶迁移率实验(EMSA)测定各组内皮细胞NF-κB与特定基因识别序列相结合的活性。结果 Tn组NF-κB活性明显高于Cn组(P<0.01),Ti组NF-κB活性低于Cn组(P<0.01),而Co组与Cn组相比无统计学差异。Tn组大鼠肺血管MT%与Cn组相比明显升高(P<0.01);而Ti组与Cn组相比无统计学差异(P>0.05);Co组与Cn组相比较无统计学差异(P>0.05)。结论高肺血流所致的大鼠肺血管收缩和结构重建与NF-κB的活性增强有关,阻断剂PDTC可以通过阻断高血流所致的NF-κB信号通路从而干预肺血管重建。

HBV肝细胞内靶向转录调控研究进展

本文就近年有关反式调控

NR2E1促神经母细胞瘤细胞分裂增殖的效应研究

目的:探讨核蛋白样转录因子核受体亚家族2组E成员1(nuclear receptor subfamily 2 group E member 1,NR2E1)对儿童神经母细胞瘤细胞株IMR-32生长、分裂、增殖的影响。方法:应用LipofectamineTM2000将构建的针对核蛋白样转录因子NR2E1的shiRNA质粒载体转染神经母细胞瘤细胞株IMR32,并通过细胞计数法观察细胞生长抑制效应,采用细胞免疫荧光染色检测神经母细胞瘤细胞株IMR32细胞分裂蛋白的表达。结果:核蛋白样转录因子NR2E1的shiRNA质粒转染神经母细胞瘤细胞株IMR32 48 h后,该细胞株生长缓慢;相关细胞核分裂蛋白表达受到明显的抑制。结论:核蛋白样转录因子NR2E1的shiRNA干扰质粒转染神经母细胞瘤细胞株IMR32后,抑制了神经母细胞瘤细胞IMR32的分裂和增殖。

模拟微重力影响EPO诱导K562细胞向红系分化的机制研究

目的:航天飞行性贫血现象的机制尚不清楚。本实验利用第4代细胞旋转培养系统(RCCS-4)模拟微重力,研究其对促红细胞生成素(EPO)诱导培养K562细胞向红系分化的影响及其机制。方法:实验分为地面培养组(Control组)、EPO诱导组(EPO组)、模拟微重力组(MG组)和模拟微重力+EPO组(MG+EPO组),利用RCCS-4模拟微重力,分别在地面和模拟微重力环境下,采用EPO诱导培养K562细胞。采用联苯胺染色法观察各组K562细胞向红系分化情况;流式细胞术检测K562细胞CD71抗原表达水平,Western-blotting方法检测K562细胞丝氨酸/苏氨酸蛋白(AKT)及红系特异核蛋白转录因子-1(GATA-1)表达水平,流式细胞术检测K562细胞凋亡情况。结果:联苯胺染色阳性率比较,MG组和MG+EPO组明显低于EPO组(P<0.01);CD71抗原表达水平为MG+EPO组明显低于EPO组(P<0.01);AKT/GATA-1蛋白表达量MG组低于Control组,MG+EPO组低于EPO组(P<0.01);各组K562细胞凋亡率检测发现MG组和MG+EPO组(70.25±0.17%)较Control组和EPO组明显增加(P<0.01)。结论:模拟微重力可以通过下调红系分化相关蛋白AKT及GATA-1表达和诱导细胞凋亡来抑制EPO诱导K562细胞向红系分化。

lncRNA THRIL和miR-300在新生儿败血症患者中的临床意义

目的 探究长链非编码RNA-肿瘤坏死因子相关异种核蛋白L(lncRNA THRIL)和微小RNA-300(miR-300)在新生儿败血症患中的表达水平及临床意义。方法 选择2016年6月至2021年9月青岛市市立医院收治的132例新生儿败血症患儿为试验组,同期住院的77例非败血症一般感染新生儿为对照组,采用受试者工作特征(ROC)曲线及曲线下面积(AUC)评估lncRNA THRTL、miR-300对新生儿败血症的早期诊断及预后预测价值;采用Spearman相关性分析检测lncRNA THRTL、miR-300与白细胞计数(WBC)、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的相关性。结果 试验组lncRNA THRIL、miR-300表达量均高于对照组,差异有统计学意义(t值分别为-8.283、-7.596,P<0.001);lncRNA THRIL、miR-300、PCT早期联合诊断败血症患儿AUC最高,为0.975;lncRNA THRIL、miR-300与PCT、CRP、IL-6、TNF-α均呈正相关关系(r值介于0.269~0.441之间,P<0.05);lncRNA THRIL和miR-300联合评估败血症患儿预后的AUC最高,为0.867。结论 lncRNA THRIL和miR-300在新生儿败血症患儿血清中高表达,并且对新生儿败血症的早期诊断和预后有一定的预测价值。

NF-κB/IκB及其与乳腺癌细胞生物学特性的关系

核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)是B淋巴细胞核中发现的一种核蛋白质因子,它们位于编码免疫球蛋白的κ轻链基因的增强子中,具有和某些基因上启动子区中的固定核苷酸序列结合而启动基因转录的功能.并在免疫应答、细胞的生长发育等过程中发挥重要作用.

晚期糖基化终末产物对胰岛素受体顺式调控元件和反式作用因子相互作用的影响

目的探讨晚期糖基化终末产物（AGE）对肝细胞胰岛素受体基因表达过程中核因子与其启动子相互作用的影响。方法人工合成具有人胰岛素受体基因启动子活性的寡核苷酸-1441～-1400片段（US1，42bp）和-638～-493片段（146bp）以及US1五个鸟嘌呤核苷酸变异处理的寡核苷酸片段US1m5（42bp）。在US1和大鼠肝细胞核蛋白提取物（HNE）上形成AGE后进行凝胶阻滞电泳分析。结果竞争性凝胶阻滞电泳分析结果表明，US1-AGEs和US1m5能使^32P—US1探针与HNE的结合显著减少[1，5，10 ng US1-AGEs：（41．08±2．86）％，（27．64±2．92）％，（15．35±1．81％）vs（52．05±1．79）％1．5，10ng US1m5：（5．20±1．03）％，（1．81±0．21）％vs（52．05±1．79）％]，但仅部分影响电泳条带。HNE上AGEs的形成可增加HNE与探针的非特异性结合。结论AGE对肝细胞胰岛素受体基因表达的影响可能与其作用于顺式调控元件和反式作用因子有关。

Nesfatin-1/NUCB2在幽门螺杆菌感染相关早期胃癌患者中的表达及临床意义

目的探讨食欲抑制因子-1/前体核蛋白2(Nesfatin-1/NUCB2)在幽门螺杆菌(H.pylori)感染相关早期胃癌患者中的表达以及临床意义。方法选取2017年1月至2018年2月在安庆市第一人民医院消化内科就诊的80例H.pylori感染相关早期胃癌患者作为研究对象,比较患者不同组织中Nesfatin-1/NUCB2表达水平,按胃癌组织Nesfatin-1/NUCB2表达状态将所有纳入患者分为Nesfatin-1/NUCB2阳性组和Nesfatin-1/NUCB2阴性组,分析H.pylori感染相关早期胃癌患者Nesfatin-1/NUCB2与临床病理特征的关系,多因素Cox回归分析获得影响H.pylori感染相关早期胃癌患者术后肿瘤复发转移和死亡的独立预测因素,重点分析Nesfatin-1/NUCB2与H.pylori感染相关早期胃癌患者术后肿瘤复发转移和死亡的相关性,绘制预测Hp感染相关早期胃癌患者术后肿瘤复发转移和死亡的ROC曲线,Kaplan-Meier生存分析比较2组患者术后无病生存率和总生存率。结果H.pylori感染相关早期胃癌患者肿瘤组织中Nesfatin-1/NUCB2 mRNA的相对表达量为0.53±0.12,高于癌旁组织中的0.12±0.03,差异具有统计学意义(P<0.05);Nesfatin-1/NUCB2阳性组患者CEA、低未分化所占比例、黏膜下层所占比例、淋巴结转移以及神经血管侵犯所占比例明显高于Nesfatin-1/NUCB2阴性组(P<0.05);多因素Cox回归分析结果显示,神经血管侵犯、浸润深度、淋巴结转移以及Nesfatin-1/NUCB2为影响H.pylori感染相关早期胃癌患者术后肿瘤复发转移和死亡的独立预测因素(P<0.05);ROC分析结果显示,神经血管侵犯、浸润深度、淋巴结转移以及Nesfatin-1/NUCB2四者联合预测H.pylori感染相关早期胃癌患者术后肿瘤复发转移和死亡的曲线下面积(AUC)分别为0.923(95%CI:0.901~0.967)以及0.918(95%CI:0.895~0.959);Kaplan-Meier生存分析结果显示,Nesfatin-1/NUCB2阴性组患者术后1年、3年、5年无病生存率和总生存率明显高于Nesfatin-1/NUCB2阳性组(P<0.05)。结论Nesfatin-1/NUCB2阳性H.pylori感染相关早期胃癌患者,术后肿瘤复发转移风险高,无病生存率和总生存率低。

人参皂苷Rg1调节N2a/APP695细胞β分泌酶活性的可能机制

目的 观察人参皂苷Rg1能否通过核蛋白因子κB（NF-κB）影响N2a/APP695细胞β淀粉样肽（Aβ）的生成和代谢,从源头上缓解和（或）减轻阿尔茨海默病（AD）病人的神经病理改变.方法 利用稳定表达突变型APP695的N2a细胞（N2a/APP695）,通过RT-PCR、蛋白免疫印迹、激光共聚焦显微镜等方法检测人参皂苷Rg1对β分泌酶活性及上游转录因子NF-κB活性的影响.结果 2.5 mol/L人参皂苷Rg1作用6～12 h后,N2a/APP695细胞外液Aβ1-40和Aβ1-42水平较Rg1作用前均有不同程度的下降[最低值分别为（13.3±4.3 ）ng/ml及（12.0±5.4） ng/ml]；BACE1的蛋白表达水平下降（BACE1/β-肌动蛋白比值为0.26±0.05）；NF-κB p65蛋白表达水平明显增加（磷酸化p65/总p65比值为0.93±0.02）并诱导促进NF-κB的核转位；NFκB的抑制剂quinazoline预处理后可见人参皂苷Rg1对BACE1 mRNA和蛋白表达的抑制作用明显减弱.结论 人参皂苷Rg1能激活NF-κB,促进NF-κB的核转位,增加与BACE1启动子相应位点的结合,导致β分泌酶的活性减少.