深圳地区麻疹病毒核蛋白N基因序列分析

目的 探讨深圳市麻疹病毒的基因型别和特征。方法 采用B95a细胞分离培养麻疹病毒 ,通过RT -PCR方法扩增麻疹病毒核蛋白N基因C末端 4 5 0bp片段并测序 ,分析和基因库Genebank中麻疹病毒的各基因型代表株序列的同源性。结果 分离到 1株麻疹病毒 ,与H1基因型代表株相比同源性为 98 4 %。

深圳地区麻疹病毒流行株血凝素蛋白H基因及核蛋白N基因序列分析

目的探讨深圳地区目前流行的麻疹病毒的基因型别和特征。方法采用B95a细胞分离培养麻疹病毒,通过RT-PCR方法扩增麻疹病毒核蛋白基因C末端450bp片段和血凝素H基因全序列并测序,其序列与Genebank中国内外流行的麻疹病毒8个基因组的代表毒株的序列进行同源性分析。结果分离到1株麻疹病毒,N基因与H1基因型代表毒株相比同源性为98.4%,H基因与H1基因型代表毒株相比同源性为99.5%。结论深圳市麻疹流行毒株属于H1基因型。

2006年吉林省野生型麻疹病毒分离鉴定及核蛋白基因序列分析

目的:研究吉林省麻疹病毒的基因型别及核蛋白(N)基因序列特征,探讨控制麻疹发生的措施。方法:采用B95 a和Vero/SLAM细胞分离培养麻疹病毒,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法从分离的麻疹病毒中扩增核蛋白(N)基因羧基端450个核苷酸(bp)片段,进行核苷酸测序分析并与基因库GenBank中麻疹病毒的各代表株基因序列的同源性比较。结果:分离到8株麻疹病毒,N基因与H1基因型代表株[1]相比同源性为98.8%。结论:吉林省麻疹流行株属于H1基因型。

猪源狂犬病病毒N和G基因的序列分析

通过对新分离的猪源狂犬病病毒GD-SH01株N基因和G基因进行序列分析,解析它们与其他狂犬病病毒N和G基因的差异.提取猪源狂犬病病毒GD-SH01株的总RNA,采用RT-PCR的方法扩增N基因和G基因,并与T载体连接,克隆至大肠埃希菌DH5α.测序后与国内外部分毒株的N基因和G基因进行核苷酸序列和氨基酸序列比对.与其他毒株相比,N基因核苷酸相似性为84.3%～98.0%;氨基酸相似性为92.5%～99.3%.G基因核苷酸相似性为80.4%～98.2%;氨基酸相似性为87.8%～99.6%.

云南省2006-2010年狂犬病病毒N和G基因分子结构特征分析

目的了解云南省狂犬病毒的流行情况以及街毒株N、G基因结构特征,为有效控制狂犬病疫情提供初步科学依据。方法对云南省2006-2010年10株狂犬病街毒株N、G基因进行全基因克隆、测序,并与已知国内外代表毒株核苷酸及推导氨基酸进行序列比对及系统发育分析。结果序列分析表明所研究的10个云南毒株与Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ型代表毒株N、G基因核苷酸序列同源性分别为72.1%～78.5%、58.4%～71.0%,与基因Ⅰ型毒株序列同源性为85.2%～90.1%、82.7～99.6%,云南毒株之间核苷酸序列同源性为89.3%～99.2%、86.0～99.6%。云南10个毒株均为基因Ⅰ型和血清1型毒株,分为2个进化分支,除YNTC06与GXN119和HM88单独属于分支Ⅲ外,其余云南毒株均分布在分支Ⅰ上,且进一步分为3个小亚分支。遗传进化分析表明,各毒株氨基酸位点均存在不同程度的变异,其中YNTC06在360、369、375等多个NP抗原位点存在变异;云南毒株在GP330、333位毒力决定位点未发生变异,均为强毒株。结论云南狂犬病毒属于基因Ⅰ型,存在2个分支;云南狂犬病毒NP和GP存在特异性氨基酸变异位点,其基因结构及变异、亚组群划分与地理位置无相关性。

云南4株狂犬病毒N和G基因的克隆及测序

目的：认识云南狂犬病毒株N基因和G基因的结构特征及其与已知毒株的遗传相关性。方法：对2006-2007年云南曲靖（YNQJ07）、昭通（YNZT07）、楚雄（YNMD06）、保山（YNTC06）狂犬病毒株N基因和G基因进行RT-PCR扩增，克隆至pPICZαA载体进行测序，并与已知代表性毒株进行比对及系统发育分析。结果：云南狂犬病毒株均属于基因Ⅰ型毒株，YNQJ07、YNZT07、YNMD06以及近年部分广西、浙江、江苏、湖北、安徽、江西省毒株N基因和G基因核酸序列同源性分别介于97.0%-99.3%、97.4%-99.3%，与其它基因I型毒株同源性分别介于86.3%-90.2%、82.9%-93.0%。YNTC06与泰国和部分广西毒株同源性介于95.0%-95.8%，与其它基因Ⅰ型毒株同源性介于82.9%-92.9%。结论：YNQJ07、YNZT07、YNMD06属于亚组群Ⅱ毒株，YNTC06毒株属于亚组群Ⅲ毒株，云南狂犬病毒核蛋白和糖蛋白存在特异性氨基酸变异位点。

Construction and Identification of siRNA Expression Vector Targeting Nucleocapsid Protein N gene of PRRSV

[ Objective] The aim of this study was to investigate the construction and identification of siRNA expression vector targeting nucleocapsid protein N gone of PRRSV. [Method] Three siRNA oligonucleotides targeting nucleocapsid protein N gone sequence of PRRSV were designed or synthesized, and then inserted into CMV promoter downstream to clone into pSilencer 4,1 -CMV eukaryotic expression vector. The recombinant expression vector was identified by enzyme digestion and DNA sequencing. [ Result] The results showed that the siRNA interference recombinant plasmid vector pSilencer-N targeting nucleocapsid protein gone expression had been successfully constructed. [ Conclusion] This study lays a foundation for studies on the controlling PRRSV by RNA interference technique .