重组汉坦病毒核蛋白抗原用于免疫滴金技术检测肾综合征出血热抗体的研究

目的 探索应用重组汉坦病毒核蛋白 (rNP)的免疫滴金法 (CGIDA)对肾综合征出血热 (hemorrhagicfeverrenalsyndrome ,HFRS)的诊断价值。 方法 制备纯化汉坦病毒核蛋白抗原 ,构建了HTN型汉坦病毒的核心区域 (334个碱基 ) ,克隆至原核表达载体 pGEX 4T 1中进行原核表达及纯化。在相同的CGIDA系统中 ,比较研究rNP与天然汉坦病毒核蛋白 (NP)的抗原功能。并与酶联免疫吸附试验 (ELISA)和间接免疫荧光法 (IFA)对比检测。结果 用rNP和天然NP平行检测HFRSIgM符合率达 89.7% ,HFRSIgG符合率达92 .3% ;CGIDA法检测HFRSIgM的敏感性为 75 .0 % ,特异性为 10 0 % ;CGIDA法检测HFRSIgG的敏感性为 83.1% ,特异性为10 0 %。结论 重组核蛋白的CGIDA对HFRS的早期诊断具有较好的应用价值。

1株H5N1亚型高致病力禽流感病毒人工感染鸭的抗原定位观察

通过对鸭静脉接种或眼-鼻-口腔-泄殖腔接种禽流感病毒A/duck/Guangdong/220/2004(H5N1)后,采用免疫组织化学方法检查病毒核蛋白抗原,探讨了该病毒在组织器官中的定位与分布。结果表明,病毒核蛋白抗原主要存在于鸭的心肌细胞、肝细胞、枯否氏细胞、胰腺泡上皮细胞、肾小管上皮细胞、血管内皮细胞和血液吞噬性白细胞;在气管和支气管黏膜上皮,脑组织,肠黏膜上皮,胸腺、法氏囊、脾脏和肺脏的巨噬细胞或组织细胞以及坏死的细胞碎片中也可检查到少量病毒核蛋白抗原;而在食管、胃、睾丸、卵巢、甲状腺、肾上腺、哈德氏腺、骨骼肌等未检查到该抗原。

毕赤酵母对不同细菌抗原的差异性表达

利用毕赤酵母研究真核细胞对不同的原核细菌可溶性蛋白抗原的差异性表达。用PCR技术扩增3种不同的结核杆菌抗原基因Ag85a、ESAT6、以及rdESAT6和1种肺炎链球菌抗原基因PsaA。将它们分别连接到pPic9k载体中,在毕赤酵母中进行表达。然后采用离子交换柱或镍柱(Ni-NTA)分别纯化这4种可溶性蛋白抗原。在这些表达的原核可溶性抗原中,肺炎球菌的PsaA蛋白抗原表达量最高,约200 mg/L;然而,3种结核杆菌抗原的表达量差异性不大,rdESAT6约2 mg/L,Ag85a约1 mg/L,而ESAT6低于0.5 mg/L且不稳定。另外,ESAT6和rdESAT6蛋白分别有不同程度的糖基化现象。在相似的条件下,不同的原核抗原在毕赤酵母系统中的表达在难易程度与产量等方面存在很大的差异姓。

应用汉坦病毒核蛋白做为蛋白印迹试验的诊断抗原的开发

作者利用汉坦病毒核蛋白(NP)做为蛋白印迹试验的标准抗原,检测鼠血清的HFRS抗体,结果表明,该法要比间接免疫荧光法(IFAT)敏感、特异性又高,对多株的出血热病毒株免疫血清都能起反应,可于血清监测和临床诊断。

大鼠肝、胰十二指肠联合切除对残肝再生的影响

目的∶用实验动物模型同时切除肝脏、胰腺或十二指肠 ,以探讨残肝再生反应。方法 :6 0只SD大鼠被随机分为 4组 :①6 8%肝叶切除组 ;② 6 8%肝叶切除加 5 0 %胰腺切除组 ;③ 6 8%肝叶切除加近端十二指肠切除组 ;④ 6 8%肝叶切除加 5 0 %胰腺切除加近端十二指肠切除组。每组中 3只大鼠分别于术后 12、2 4、48、72和 16 8h处死并采集血液和肝脏样本。计算肝再生率以及免疫组化证实肝细胞增殖细胞核蛋白抗原 (PCNA)的表达。结果 :肝、胰切除和肝、胰十二指肠切除可显著减少残肝细胞DNA峰值期的合成 ,其延迟性肝再生反应延迟至术后 16 8h。结论 :起源于胰腺和十二指肠外分泌腺的多种因子对触发肝细胞的增殖可能起显著作用。

消化道肿瘤P53和Ki-67表达的相关性及临床意义

目的探讨P53和Ki-67在消化道肿瘤组织中的表达及其相互之间的关系,为消化道肿瘤的诊断、治疗和预后提供可靠的依据。方法收集2013年3月—2015年3月期间,来该院就诊的87例消化道肿瘤患者,采用免疫组化方法检测消化道肿瘤组织中P53和Ki-67的表达情况,并分析二者的相关性。结果 87例消化道肿瘤肿块其P53和Ki-67的阳性表达率分别为51.7%、42.5%。P53和Ki-67间有一定的关联性,P53与Ki-67表达呈正相关(P<0.05)。结论 P53和Ki-67在消化道肿瘤中的表达既相互独立又相互关联,通过多项指标联合检测,会更准确地判断消化道肿瘤的预后,同时可以为靶向药物的个体化治疗提供参考依据。

乳腺癌P53和Ki-67表达的相关性及临床意义

目的探讨突变型P53和核蛋白抗原Ki-67在乳腺癌组织中的表达及其相互之间的关系,为乳腺癌的诊断、治疗和预后提供可靠的依据。方法随机收集2012年3月—2015年8月期间于包头医学院第一附属医院就诊的100例女性原发性乳腺癌患者,术后行病理及免疫组化检测乳腺癌组织中P53和Ki-67的表达。结果 100例乳腺癌肿块其P53和Ki-67的阳性表达率分别为56.0%、41.0%。P53和Ki-67间有一定的关联性,P53与Ki-67表达呈正相关(P<0.05)。结论P53和Ki-67在乳腺癌中的表达既相互独立又相互关联,通过多项指标联合检测,会更准确地判断乳腺癌的预后,同时可以为靶向药物的个体化治疗提供参考依据。

大脑皮质发育不良大鼠脑皮质和海马中的NeuN和GFAP表达研究

目的：探讨大脑皮质发育不良（DCD）大鼠大脑半球、海马的免疫组化病理学特点及其所致难治性癫痫（IE）的发生机制。方法：建立X-射线照射诱导的皮质下异位结节大鼠DCD模型，采用SP免疫组织化学方法检测神经元特异核蛋白抗原（NeuN）和星形胶质细胞特异抗原（GFAP）在大鼠脑皮质下和海马中异位结节的表达，阳性细胞计数，用SPSS10．0软件统计。结果：DCD组与正常对照或母鼠组白质比较，皮质下异位结节内NeuN免疫阳性神经元和GFAP免疫阳性细胞数密度分别增加30倍和16倍，差异有统计学意义（P〈0．05）。同龄而不同部位DCD病变组间脑皮质Ⅰ～Ⅲ层异位结节、皮质下异位结节和CA1区异位结节中NeuN、GFAP免疫阳性细胞数密度或阳性平均光密度值比较，差异无统计学意义。结论：DCD鼠脑NeuN及GFAP的分布证实了皮质下异位结节的内在属性，异位结节是灰质，主要是由神经元和星形胶质细胞构成。

大鼠80%门静脉结扎残肝组织中CyclinD1和PCNA的表达与肝再生的关系分析

目的探究大鼠80%门静脉结扎残肝组织中周期蛋白D1(CyclinD1)和增殖细胞核蛋白抗原(PCNA)的表达与肝再生的关系。方法选取雄性SD大鼠144只(72只做生存率分析,72只做剩余实验),体重(220±20)g,随机分成3组PVL组、PH组、Sham组,每组24只。PVL组:行80%肝门静脉结扎;PH组:行80%肝切除;Sham组:仅翻动肝脏各分叶。比较各组大鼠术后生存率;分别于术后24h、48h、72h、120h每组各处死6只大鼠,检测其肝重量;检测各组血清ALT、AST含量水平;蛋白质印记法检测各组CyclinD1表达情况;免疫组化染色检测各组PCNA阳性率。结果生存率实验结果显示PVL组大鼠120h生存率为87.50%显著高于PH组62.50%,差异有统计学意义(P<0.05);术后24h,相比PVL组,PH组大鼠肝脏指数升高(P<0.05),48h、72h、120h肝脏指数均显著降低(P<0.05),相比PH组Sham组各时间段肝脏指数均显著降低(P<0.05);24h、48h、72h时,相比PVL组,PH组大鼠ALT和AST含量水平均显著升高(P<0.05),Sham组上述时间段均显著降低(P<0.05),相比PH组Sham组上述时间段ALT和AST含量水平均显著降低(P<0.05);120h时各组大鼠ALT和AST含量水平均无显著差异(P>0.05);术后24h,相比PVL组,PH组大鼠CyclinD1蛋白相对表达水平显著升高(P<0.05),48h、72h、120h时,相比PVL组,PH组大鼠CyclinD1蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05);免疫组化结果显示,相比PH,PVL组大鼠PCNA蛋白阳性率显著升高(P<0.05)。结论大鼠80%肝脏门静脉结扎不仅可提高生存率同时还会促进相关增殖因子CyclinD1和PCNA的表达促进残余肝脏的再生。

谈“禽”色变???

”银羊辞旧岁.金猴迎春来”,大街上红红绿绿、好不热闹.过节的喜庆气氛随处可见。但是在今天“快乐组合”的第一次聚会上.成员们却一个个愁眉不展。“你们看今天的新闻了吗?”还是爱说话的樱子率先打破了沉默,”最近.我国部分地区又发现了禽流感疑似病例。这次,浙江的永康市、湖北的宜昌市、云南的呈贡县、河南以及新疆地区各发生了一起疑似高致病性禽流感疫情,都在强制扑杀呢!”

脑瘫模型的制作与鉴定

目的:制作新生小鼠脑瘫模型,并通过行为学、形态学检测模型的稳定性,为脑瘫的基础研究提供较为理想的动物模型。方法:将30只新生7天的昆明小鼠随机分为模型组和假手术组,模型组采用结扎一侧颈总动脉并缺氧来制作脑瘫模型。假手术组仅切开颈部皮肤,分离出单侧颈总动脉,不结扎,不剪断,然后缝合伤口,未置于缺氧环境。各组小鼠于模型完成后第28天,通过跳台实验观察行为变化、尼氏染色和神经元特异核抗原(Neuron specific nuclear protein,NeuN)的免疫组化染色结果。结果:被动回避性跳台实验中,模型组小鼠较假手术组小鼠学习记忆时间明显延长(P<0.05);尼氏染色结果显示,损伤侧海马各区细胞排列紊乱,尼氏小体数量减少,且CA3区神经元损伤情况最为严重;NeuN免疫组化染色显示模型组小鼠损伤侧海马阳性表达较假手术组同侧明显降低(P<0.05)。结论:应用一侧颈总动脉结扎联合缺氧的方法制作脑瘫模型稳定、可靠。