年龄和性别对正常人外周血淋巴细胞核质桥自发率的影响

目的:探索年龄、性别因素对我国健康人群外周血淋巴细胞核质桥自发率的影响,为核质桥的影响因素研究提供科学依据。方法:选取98例健康成人,其中男性52例,女性46例,年龄范围为20~68岁,平均年龄为(40.7±12.6)岁。按年龄分为20~29岁组(22人)、30~39岁组(23人)、40~49岁组(25人)和50岁以上组(28人)。抽取研究对象外周血2 mL,采用胞质分裂阻滞法培养细胞40 h后,加入松胞素B(终浓度为10μg/mL),继续培养至68 h收获细胞。每个受试者观察1000个双核细胞,分析核质桥、微核及核芽的数量。结果:核质桥总体自发率为每个细胞0.56‰,男性略高于女性,但差异无统计学意义(P>0.05)。男性在不同年龄组间,核质桥自发率差异无统计学意义(P>0.05)。女性40~49岁年龄组核质桥自发率最高,显著高于20~29岁组(U=2.31,P<0.05)。微核自发率女性高于男性(U=4.40,P<0.05),男性和女性受试者40~49岁组微核自发率均为最高。核芽自发率在不同性别间的差异无统计学意义(P>0.05),在不同年龄组间无明显变化规律。结论:健康人群中的核质桥自发率较低,不受性别因素影响,在20~49岁范围内具有随年龄增加而升高的趋势。

双核细胞中核质桥和核芽形成影响因素的及其

胞质分裂阻滞法(cytokinesis-block micronucleus,CBMN)主要用来分析双核细胞中的微核,研究发现该方法还可以分析其他指标,如核质桥和核芽等。目前核质桥(nucleoplasmic bridge,NPB)及核芽(nuclear bud,NBD)分析是细胞组学分析的重要组成部分。NPB和NBD的形成受到许多因素的影响,而且有望成为新的辐射损伤生物标志物。本文将对NPB和NBD的定义、形态特征、形成机制及影响因素等方面进行综述。

多环芳烃暴露与外周血淋巴细胞核质桥和核芽的关系研究

目的寻找评价多环芳烃致外周血淋巴细胞遗传物质损伤的新的效应性生物标志物。方法采集158名焦炉工和69名非多环芳烃暴露者肘静脉血1ml，应用外周血淋巴细胞胞质分裂阻滞微核法制备涂片，计数核质桥和核芽发生率，评价外周血淋巴细胞的染色体损伤水平；收集研究对象的职业史、年龄、性别、吸烟和饮酒等信息。结果焦炉工外周血淋巴细胞核质桥率为（9．41±3．73）‰，高于对照组的（1．88±1．49）％。，差异有统计学意义（t=-16．2，P〈0．01）；其核芽率为（7．13±4．01）％。，与对照组[（2．20±1．73）％。]相比差异有统计学意义（t=-9．79，P〈0．001）。发现核质桥和核芽率与多环芳烃暴露等级具有剂量一效应关系。与男性焦炉工相比，女性焦炉工具有较少的核质桥[（7．14±3．04）％。比（9．63±3．73）‰，t=-2．62，P=0．01]和核芽[（4．71±2．73）‰比（7．36±4．05）％。，t=-2．33，P=0．02]发生率。未发现年龄、吸烟和饮酒等对焦炉工的核质桥和核芽率的影响。结论多环芳烃可致暴露工人染色体损伤增加，核质桥和核芽可以作为焦炉工染色体损伤的效应性生物标志物。

放射工作人员外周血淋巴细胞核质桥水平及其影响因素分析

目的初步探讨放射工作人员的性别、年龄、工龄、工种和年有效剂量等因素对其外周血淋巴细胞核质桥(NPB)的影响。方法收集100例河南省放射工作人员外周血,利用细胞分裂阻滞实验(CBMN法)制备人外周血淋巴细胞NPB标本,分析NPB率和NPB细胞率及各类因素对NPB的影响。结果放射工作人员NPB率高于正常健康人群(Z=-8.123,P<0.01)。性别对NPB的影响差异无统计学意义(P>0.05),年龄、工龄、工种和年有效剂量均对NPB有影响(χ^2=7.202~45.571,P<0.05)。结论NPB能反映出长期小剂量慢性照射对职业受照人群健康的影响。

焦炉工尿1-羟基芘水平与核质桥和核芽的关系研究

目的研究焦炉工尿中1-羟基芘水平与外周血淋巴细胞核质桥和核芽发生率之间的关系。方法分别选取110名焦炉工和50名非接触者,使用调查表收集职业暴露史、年龄、性别、吸烟和饮酒状况等信息。碱水解-高效液相色谱法测定尿中1-羟基芘浓度作为个体多环芳烃暴露内剂量;应用外周血淋巴细胞胞质分裂阻滞微核法制备涂片,计数核质桥和核芽发生率,评价外周血淋巴细胞的染色体损伤水平。结果调整了年龄、性别、吸烟和饮酒状况后,尿中1-羟基芘浓度与外周血淋巴细胞核质桥和核芽率均存在良好的相关关系。进一步按尿中1-羟基芘水平将研究对象分成4组,分别为0.13～1.07组(40人)、1.16～6.77组(41人)、6.87～16.26组(39人)和16.47～72.48μmol/mol肌酐组(40人),应用协方差分析校正了不同内剂量组个体的年龄、性别、吸烟和饮酒状况后,发现尿中1-羟基芘水平与核质桥和核芽率具有较好的剂量-效应关系。结论外周血淋巴细胞核质桥和核芽均能较好反映职业多环芳烃暴露所致的遗传损伤效应。

松胞素B对辐射诱导淋巴细胞核质桥水平影响的研究

目的 探索胞质分裂阻滞分析中，松胞素B终浓度和加入时间对辐射诱导淋巴细胞核质桥水平的影响。方法 本研究按照不同松胞素B终浓度分为2、4、6、8、10 μg/ml 5个终浓度组，此外，按照不同松胞素B加入时间分为0、28、40、44 h组4个加入时间组。用2 Gy（吸收剂量率为1 Gy/min）60Co γ射线照射正常人离体外周血（设0 Gy对照组），采用胞质分裂阻滞分析法，进行细胞培养、收获、制片、染色。在光学显微镜下分析单核细胞、双核细胞、多核细胞的比例，以及双核细胞中核质桥率及微核率。结果 各终浓度组和加入时间组（0 h组除外）的核分裂指数、双核细胞比例均随松胞素B终浓度的升高而升高，随松胞素B加入时间的推迟而降低。2 Gy射线照射后，各终浓度组和加入时间组（0 h组除外）核质桥率差异无统计学意义（P〉0.05）；5个终浓度组间微核率具有随松胞素B终浓度的增加而下降的趋势，4个加入时间组间微核率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 不同松胞素B终浓度和加入时间可使辐射诱导的核质桥率在一定范围内变化，但差异无统计学意义。适当增加松胞素B终浓度、提前加入时间可使双核细胞比例升高，有助于提高分析效率。

^60Coγ射线诱导人外周血淋巴细胞核质桥的剂量一效应关系研究

目的确定核质桥判定标准，建立^60Coγ射线诱导正常人外周血淋巴细胞中核质桥（NPB）的剂量一效应曲线。方法用^60Coγ射线照射3名健康男性离体外周血，照射剂量分别为0、1、2、3、4、5和6Gy，剂量率为1Gy／min，采用胞质分裂阻滞微核（CBMN）法进行细胞培养、收获、制片、染色。在光学显微镜下分析双核细胞中NPB及微核（MN）。结果在0～6Gy^60Coγ射线照射后，人外周血双核淋巴细胞中的NPB符合泊松分布，且NPB频率随吸收剂量增加而增加（H=19．51，P〈0．01），拟合回归方程为线性平方模式Y=（1．39×10-3）x2＋（4．94×10-3）x（R2=0．981，P〈0．01）。结论成功建立0～6Gy^60Coγ射线诱导正常人外周血淋巴细胞中NPB的剂量一效应曲线。

优化胞质分裂阻滞实验方案用于核质桥分析的可行性

目的探索优化胞质分裂阻滞实验方案用于辐射诱导核质桥分析的可行性,为以核质桥为指标进行生物剂量估算提供科学依据。方法用2 Gy ^(60)Coγ射线(剂量率为1 Gy/min)照射人离体外周血(设0 Gy对照),照射后28 h在细胞样品中加入终浓度为6μg/ml的松胞素B,培养48、56、68和72 h后收获;或照射后加入终浓度为0.6、1、2、6、10μg/ml的松胞素B,培养68 h后收获。应用胞质分裂阻滞法进行标本制备,分析单核细胞、双核细胞、多核细胞的比例,以及辐射诱导核质桥率及微核率。结果对不同细胞培养时间,随细胞培养时间的增加,0和2 Gy核分裂指数和双核细胞比例具有升高的趋势;2 Gy核质桥率无明显变化规律(0.0230~0.0330/细胞),差异无统计学意义(P>0.05),微核率差异亦无统计学意义(P>0.05)。对不同浓度松胞素B处理组,随松胞素B浓度的增加,0和2 Gy时核分裂指数和双核细胞比例有所升高;2 Gy核质桥率无明显变化规律(0.0230~0.0470/细胞),差异无统计学意义(P>0.05);与6μg/ml组相比,10μg/ml组微核率显著降低(U=2.74,P<0.01)。结论不同细胞培养时间组和不同松胞素B浓度组的辐射诱导核质桥率差异无统计学意义。适当缩短细胞培养时间可提前得到核质桥分析结果;培养开始加入松胞素B可简化实验步骤,但可供分析的细胞数过少,用于剂量估算的可行性尚需进一步研究。

低剂量60Coγ射线诱导人淋巴细胞核质桥适应性反应的研究

目的 以核质桥（NPB）为主要指标,探索低剂量60Co γ射线是否能诱导人外周血淋巴细胞的适应性反应及诱导剂量范围。方法 用60Co γ射线照射健康成年男子离体外周血,照射剂量分别为0、20、50、75、100、150和200 mGy（吸收剂量率为25 mGy/min）,照射后间隔6 h后再给予2 Gy照射（吸收剂量率为1 Gy/min）。采用胞质分裂阻滞法（CBMN）进行细胞培养,观察NPB及微核（MN）的发生情况。结果 0~200 mGy剂量范围内,NPB和MN数目随吸收剂量的增加而增多,并拟合出NPB的线性平方模型y=（1.5×10-4）x2-（5.67×10-3）x＋0.598 （R2=0.893 8）。提前给予75~100 mGy照射比直接受到2 Gy照射产生的NPB及MN数目均有所减少（U=2.66、2.97、3.96、5.89,P〈0.05）,在100 mGy照射后NPB减少最多（43.2%）。结论 低剂量60Co γ射线可以诱导人外周血淋巴细胞的适应性反应,诱导剂量范围为75~100 mGy。

胞质分裂阻滞微核细胞组学试验法的研究进展

胞质分裂阻滞微核试验法(cytokinesis block micronucleus test,cBMNT)是一种常见的微核试验法,近年来发展成为检测DNA损伤和错误修复、染色体不稳定、有丝分裂异常、细胞死亡和生长抑制的一种有效的细胞组学(cytome)检测方法。本文就CBMNT近年来的方法学及应用进展作一综述。

胞质分裂阻滞法分析细胞组学研究指标在公共卫生领域的应用现状

近年来利用胞质分裂阻滞法分析微核、核质桥、核芽、核分裂指数、细胞凋亡和细胞坏死等细胞组学指标,成为公共卫生领域探讨不同人群结构、环境、职业暴露等因素对基因组不稳定性、染色体断裂、丢失和细胞增殖能力的影响的常用方法。现将利用胞质分裂阻滞法分析多种细胞组学指标在公共卫生领域的应用现状做以综述。

纳米与微米尺度氧化锌体外遗传毒作用特征的比较研究

为揭示纳米氧化锌(ZnO)遗传毒作用特征,以便为纳米材料的安全性评价提供科学依据,利用胞质分裂阻滞微核细胞组学实验和碱性彗星实验比较了纳米和微米尺度ZnO的遗传毒性。结果显示:①微米尺度ZnO在0.02～2.5μg·mL-1剂量下对微核、核质桥、核芽和核分裂指数(nucleus divided index,NDI)均无显著诱导作用(P>0.05);而纳米尺度ZnO在>0.5μg·mL-1剂量时可显著诱导细胞产生总微核、Ⅰ型微核和核芽(P<0.05),且均存在一定的剂量-效应关系,剂量为2.5μg·mL-1时,细胞的Ⅱ型微核数、核质桥数和NDI与对照组相比,也呈现出显著差异(P<0.05)。②剂量为2.5μg·mL-1时,处理9、18和24h后,与对照组相比,微米ZnO处理组中细胞各项指标的差异均无统计学意义(P>0.05),而纳米ZnO处理组中总微核数、Ⅰ型微核数和核质桥数具有时间-效应关系。③纳米ZnO在0.5μg·mL-1剂量时可诱导DNA损伤,而微米ZnO在2.5μg·mL-1剂量时才产生损伤效应。研究表明,纳米和微米尺度ZnO在遗传毒作用性质和毒性强弱方面均存在明显差异,纳米ZnO会诱导Ⅰ型、Ⅱ型微核、核芽和核质桥的产生以及DNA损伤,而微米ZnO仅在高剂量时会诱导DNA损伤。

中子、^(137)Csγ射线及混合辐射对淋巴细胞微核的影响

目的:比较中子、^(137)Csγ射线及中子/γ射线混合照射对人淋巴细胞微核、核质桥和核芽的影响。方法:将两名志愿者的外周血淋巴细胞随机分为对照组、中子、^(137)Csγ射线和中子/γ射线混合照射组,用胞质分裂阻滞法分析不同处理组人淋巴细胞微核率、核质桥率以及核芽率的差异;结果:外周血淋巴细胞经中子、^(137)Csγ射线和混合照射后的CB微核率高于对照组,经中子和混合照射后的CB微核率高于^(137)Csγ射线照射组,中子/γ射线混合照射后的人淋巴细胞微核率高于中子照射组,差异具有统计学意义(P<0.01);中子/γ射线混合照射诱导的核质桥率和核芽率高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:以微核率为生物终点,中子/γ射线混合照射对人淋巴细胞引起的损伤严重,说明混合照射可能存在一定的协同作用。

南京“5．7”^192Ir源放射事故患者的生物剂量估算

目的 用3种方法估算南京＂5.7＂ 192Ir源放射事故患者的生物剂量,为核与辐射事故受照者的临床救治提供剂量资料。方法 受照后第5天采集患者外周血,分别进行外周血淋巴细胞染色体＂双着丝粒＋环＂（＂dic＋r＂）畸变分析、胞质分裂阻滞微核（CBMN）分析、核质桥（NPB ＋FHC）分析,并估算生物剂量。用双着丝粒畸变在细胞间的泊松分布情况检验照射的均匀性。结果3种方法估算的该患者受到的一次全身等效剂量分别为＂dic＋r＂畸变分析1.51 Gy （95% CI 1.40-1.61）,CBMN 分析1.47 Gy （95% CI 1.36-1.60）,NPB＋FHC分析1.30 Gy（95% CI 1.00-1.60）。泊松分布检验结果显示,该患者＂dic＋r＂畸变偏离泊松分布,受到了不均匀照射。结论 外周血淋巴细胞染色体＂dic＋r＂畸变分析、CBMN分析、NPB＋FHC分析均是有效的生物剂量估算手段,对本例急性局部不均匀照射患者估算的一次全身等效剂量与临床诊断结果相符。

南京“5．7”^192Ir放射事故患者三种生物剂量估算指标的衰变规律探讨

目的 观察南京＂5.7＂ 192Ir放射事故患者受照后不同采血时间对生物剂量估算的影响,探讨3种生物剂量估算指标在体内的自然衰减规律。方法 事故后5、40和280 d,采集患者的外周血,分别进行外周血淋巴细胞染色体＂双着丝粒＋环＂（＂dic＋r＂）畸变分析、胞质分裂阻滞微核（CBMN）分析、核质桥＋融合＋马蹄形＋环（NPB ＋FHC）分析。观察受照后不同时间染色体＂dic＋r＂畸变、微核、NPB ＋FHC衰变情况及对生物剂量估算结果的影响。结果 与事故后5 d的估算剂量相比,在40和280 d,染色体＂dic＋r＂畸变分析估算的剂量分别下降34%和49%, CBMN的估算结果分别下降48%和79%,NPB ＋FHC的估算结果分别下降48%和75%。结论 本例事故患者受照后3种生物剂量估算指标在体内呈进行性下降,染色体＂dic＋r＂/细胞的半衰期为40 d,3个指标在40 d时剂量估算结果与5 d时比较,相对偏差 〉 20%。

胆碱与叶酸组合对人成淋巴细胞株DNA损伤效应

目的探讨叶酸充足时胆碱缺乏对人成淋巴细胞株的遗传损伤效应。方法在甲硫氨酸(Met)浓度为50μmol/L条件下,设置0～21.5μmol/L的胆碱与30、60、120、240nmol/L的叶酸(folic acid,FA)组成不同浓度组合,培养人成淋巴细胞株9d后,利用胞质阻断微核细胞组分析(CBMNCyt),评价上述组分缺乏诱发的微核化双核细胞(MNedBNC)、核质桥(NPB)及核芽(NBUD)千分率。结果各叶酸浓度下,低浓度胆碱组(0、3、6μmol/L)与高浓度胆碱组(12、18、21.5μmol/L)之间的MNedBNC及NBUD千分率差异有统计学意义(P<0.001);低叶酸情况下(30、60nmol/L),12μmol/L胆碱以上的NPB千分率显著降低(P<0.001),而高叶酸情况下(120、240nmol/L)各胆碱浓度之间的NPB率无显著差异。胆碱和叶酸对MNedBNC、NPB及NBUD变异的贡献率均达到了极显著(P<0.001)。结论胆碱不足对人成淋巴细胞株造成遗传损伤,该细胞株基因组的稳定需要叶酸和胆碱浓度分别维持在120nmol/L和12μmol/L以上。