核转录共抑制因子、转化生长因子β1、Smad4在重度宫腔粘连内膜组织中表达及临床意义

目的探讨核转录共抑制因子(ski-related novel protein N,SnoN)在宫腔粘连(intrauterine adhesions,IUA)发病中的作用,及其与转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad4关系。方法收集重度宫腔粘连(sIUA组)和宫腔无病变的子宫纵隔患者(对照组)宫内膜组织各20例,通过免疫组化、Western blot、RT-qPCR检测子宫内膜组织中SnoN、TGF-β1、Smad4的表达水平,并应用Spearman等级相关分析SnoN、TGF-β1、Smad4之间的相关性,探讨其与宫腔粘连发病的关系。结果sIUA组患者宫内膜组织中TGF-β1、Smad4表达水平明显高于对照组(P<0.01),而SnoN表达水平明显低于对照组(P<0.01)。在重度宫腔粘连宫内膜组织中,TGF-β1与Smad4的蛋白表达水平呈正相关(r=0.4689,P<0.05),而TGF-β1与SnoN的蛋白水平呈负相关(r=-0.4835,P<0.05)。结论SnoN可能通过TGF-β1/Smad4信号通路参与宫腔粘连的发病。

硫辛酰胺对高糖条件下肾小管上皮细胞氧化应激及转化生长因子β激活酶1和核转录共抑制因子蛋白表达的影响

目的通过观察高糖环境下给予硫辛酰胺(dl alpha lipoamide,ALM)干预后对细胞氧化应激水平、转化生长因子β激活激酶1(TAK1)及核转录共抑制因子(SnoN)蛋白表达的影响,探讨ALM减轻高糖诱导诱导的肾小管纤维化病变的可能机制。方法将体外培养的肾小管上皮细胞(NRK 52E)分为3组:正常糖培养组(NG)、高糖组培养组(HG)、高糖培养条件下加入ALM刺激组(ALM);采用细胞免疫荧光及Western Blot技术,进行细胞鉴定;氧化应激试剂盒检测体外培养的各组肾小管上皮细胞(NRK 52E cells)氧化应激水平;Western Blot技术检测高糖环境下NRK 52E细胞中,硫辛酰胺对TAK1、SnoN蛋白表达的影响;流式细胞技术和Western Blot技术检测ALM对大鼠肾小管上皮细胞纤维化过程的抑制作用。结果所培养细胞为肾小管上皮细胞并对高糖刺激敏感;高糖条件下给予ALM干预后,T SOD活性增强,MDA水平减少,且TAK1、p TAK1(Thr184/187)及CollagenⅢ蛋白表达水平减少,SnoN及钙黏蛋白(E cadherin)蛋白水平的表达上调。结论高糖环境下给予ALM干预后,肾小管上皮细胞的氧化应激水平降低,伴随TAK1的表达减少和SnoN蛋白表达增加,从而抑制肾小管上皮细胞向间质细胞转分化的发生及细胞外基质沉积,最终延缓肾小管上皮细胞纤维化的发生发展。

淡豆豉异黄酮调控TGF-β1/SnoN通路对糖尿病肾病小鼠肾组织的保护作用研究

[目的]观察淡豆豉异黄酮对糖尿病肾病(DKD)小鼠肾组织的保护作用,并探讨其对转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad核转录共抑制因子(SnoN)通路的调控作用。[方法]50只清洁级db/db小鼠和10只清洁级db/m小鼠,前者验证DKD建模成功后随机分5组,后者记为对照组。依那普利组予以依那普利10 mg/kg溶于0.1 mL/kg生理盐水中灌胃,淡豆豉异黄酮低、中、高剂量组分别予以12.5、25、50 mg/kg淡豆豉异黄酮溶于生理盐水中灌胃,其余组均予以生理盐水灌胃,均每日1次,共干预8周。己糖激酶法检测各组干预前、4周后、干预后空腹血糖(FBG),蛋白质定量(BCA)法检测24 h尿蛋白;检测血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、TGF-β1水平;干预后处死小鼠并取肾组织,观察肾组织病理;实时-逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组肾组织TGF-β1、Smad2/3、Smad7、SnoN信使核糖核酸(mRNA)表达;检测肾组织TGF-β1、Smad2/3、Smad7、SnoN蛋白表达及磷酸化-Smad2/3(p-Smad2/3)。[结果]模型组4周后、干预后FBG、24 h尿蛋白、Scr、BUN、TGF-β1水平均高于正常组(P<0.05),依那普利组24 h尿蛋白、Scr、BUN、TGF-β1水平和淡豆豉异黄酮低、中、高剂量组FBG、24 h尿蛋白、Scr、BUN、TGF-β1水平均低于模型组(P<0.05);模型组肾组织呈显著病理改变,依那普利组和淡豆豉异黄酮低、中、高剂量组病理改变和胶原纤维沉积均减轻;模型组肾组织TGF-β1 mRNA与蛋白表达、Smad2/3 mRNA表达与p-Smad2/3升高(P<0.05),依那普利组和淡豆豉异黄酮低、中、高剂量组均低于模型组(P<0.05);模型组肾组织Smad7、SnoN表达降低(P<0.05),依那普利组和淡豆豉异黄酮低、中、高剂量组均高于模型组(P<0.05)。淡豆豉异黄酮组的作用呈剂量依赖性,除FBG外淡豆豉异黄酮中剂量组上述定量指标与依那普利组差异均无统计学意义(P>0.05)。[结论]淡豆豉异黄酮可降低DKD小鼠血糖,减少24 h尿蛋白,保护肾功能,降低血清TGF-β1水平,减轻肾病变,下调TGF-β1、Smad2/3表达,降低p-Smad2/3水平,上调Smad7、SnoN表达。

芪归方有效组分治疗特发性肺纤维化的实验研究

目的:基于Smurf2串话TGF-β1/Smad信号通路研究芪归方有效组分对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5的影响及机制。方法:体外予以10 ng/mL TGF-β1培养MRC-5细胞,PCR仪检测α-SMA的mRNA水平判断模型是否成功。设立正常对照组、模型组(10 ng/mL TGF-β1处理)、泼尼松处理组、芪归方有效组分高剂量组、中剂量组、低剂量组,采用CCK-8法检测MRC-5的增殖情况,Western blot检测各组细胞Smad7、SnoN蛋白的表达水平,RT-PCR检测各组细胞Smurf2的mRNA水平。结果:与正常对照组比较,48 h模型组细胞增殖明显,α-SMA的mRNA水平增加(P<0.01),造模成功。经10 ng/mL TGF-β1处理细胞MRC-5,与正常对照组比较,Smad7、SnoN蛋白水平显著降低,Smurf2蛋白mRNA水平升高(P<0.01或P<0.05)。不同浓度芪归方有效成分处理组细胞增殖降低,可逆转以上各指标的改变,呈一定的量效关系。结论:芪归方有效组分能抑制MRC-5细胞增殖,可通过减少MRC-5细胞中Smurf2所介导的Smad7、SnoN的泛素化,恢复Smad7、SnoN蛋白的表达,从而调节肺纤维化的发生发展。

血府逐瘀胶囊对单侧输尿管梗阻大鼠SnoN和Ski表达的影响

目的:探讨血府逐瘀胶囊对单侧输尿管梗阻所致大鼠肾间质纤维化的作用及其机制。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、血府逐瘀胶囊治疗组,采用单侧输尿管结扎术(UUO)建立大鼠肾间质纤维化模型。术后21d取各组大鼠肾组织HE染色及六胺银染色(PASM),观察肾组织病理变化;检测大鼠血肌酐和尿素氮含量,观察肾功能变化;放射免疫法检测肾组织中Ⅲ型前胶原含量,观察肾纤维化程度;Western blot检测肾组织中核转录共抑制因子SnoN与Ski蛋白表达水平,观察TGF-β1/Smad信号转导通路中逆向调控信号分子表达水平的变化。结果:与假手术组比较,模型组大鼠肾小管基底膜明显增厚,部分肾小管上皮细胞变性,肾小管萎缩,管腔显著扩张,肾间质明显增宽;血肌酐与尿素氮含量以及肾组织中Ⅲ型前胶原含量显著增加;SnoN、Ski蛋白表达显著减少。血府逐瘀胶囊治疗组大鼠梗阻侧肾组织的病理变化明显改善,血肌酐与尿素氮水平以及肾组织中Ⅲ型前胶原含量明显降低,SnoN蛋白表达水平显著增加,而Ski蛋白表达没有改变。结论:血府逐瘀胶囊可通过恢复SnoN蛋白表达水平,抑制TGF-β1靶基因的活化,从而改善UUO大鼠的肾功能和肾间质纤维化程度。

胃癌组织中SnoN、Egr3和SFRP1的表达情况及临床意义

目的探讨核转录共抑制因子Sno N、早期生长反应基因3(Egr3)和分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)在胃癌组织中的表达水平,分析三者与胃癌临床病理特征的关系。方法收集75例胃癌组织及62例癌旁组织标本,采用免疫组化Elivision法检测以上组织石蜡切片中Sno N、Egr3及SFRP1的表达情况,分析3种蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系。结果胃癌组织中Sno N、SFRP1的高表达率为45.3%(34/75)和38.7%(29/75),均低于癌旁组织的62.9%(39/62)和58.1%(36/62);而Egr3的高表达率为69.3%(52/75),高于癌旁组织的38.7%(24/62)。以上差异均有统计学意义(P<0.05)。Sno N、Egr3和SFRP1的表达均与临床分期、分化程度有关,Sno N表达还与年龄、浸润深度及淋巴结转移有关,SFRP1表达与年龄、肿瘤大小及浸润深度有关。Sno N、SFRP1与Egr3的表达均呈负相关,相关系数依次为r=-0.324、-0.244(P均<0.05);Sno N与SFRP1的表达呈正相关(r=0.487,P<0.001)。结论胃癌组织中Sno N、SFRP1呈低表达,而Egr3呈高表达,三者表达均与临床分期、分化程度有关,提示三者在胃癌发生、发展中有重要意义,可用于辅助胃癌的诊断和病情评估。

SnoN蛋白在肝纤维化大鼠肝组织中的表达及其意义

目的观察SnoN蛋白在大鼠肝纤维化进展过程中的动态表达变化及其意义。方法 SD大鼠分两组:正常对照组6只,模型组24只,二甲基亚硝胺(DMN)腹腔注射制备大鼠肝纤维化模型。造模后分别在第2周、4周、6周、8周取大鼠血及肝脏标本,HE和Masson染色并光镜下观察各组大鼠肝组织病理变化;RT-PCR检测SnoN、Smurf 2、TGF-β1及Ⅰ型胶原纤维(COL-1)在造模过程中的动态变化。结果模型组第4周、6周肝纤维化明显;模型组血清ALT、AST升高,第4周时达高峰;Alb逐步下降,6周时最低,各时间点与对照组比较均有统计学差异(P<0.005)。造模后,SnoN表达进行性降低,第8周达到最低,Smurf 2表达量逐渐增加,在第6周达最高峰,且明显高于对照组,各模型组与对照组相比均具有显著差别(P<0.05或0.01);TGF-β1表达水平逐步增高,于第4周时达高峰,各模型组与对照组相比均具有统计学差异(P<0.01)。结论 SnoN蛋白表达的降低可能是肝纤维化中的一个重要环节,值得进一步深入研究。

氧化苦参碱对糖尿病大鼠肾组织纤维化的作用及可能机制研究

目的探讨氧化苦参碱(OM)对糖尿病(DM)大鼠肾组织纤维化的作用及可能机制。方法 SD大鼠随机分为正常对照(NC)组、糖尿病(DM)组、氧化苦参碱治疗(OM)组大鼠,尾静脉注射STZ复制DM模型,于成模13周起,DMA组大鼠采用OM个体化治疗,以血糖控制在4~7mmol/L,尿糖阴性为准,分别于24周处死各组大鼠。生化方法测血糖、血肌酐和24h尿蛋白;HE和Masson染色观察大鼠肾组织结构改变;免疫组化检测各组大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、E-钙黏附素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接蛋白(FN)蛋白的表达变化;免疫荧光检测大鼠肾组织中Arkadia和核转录共抑制因子(SnoN)蛋白的表达。结果与NC组相比,DM组大鼠血糖,血肌酐,24h尿蛋白明显增多(P<0.05),并出现肾组织形态学异常改变;而OM组大鼠血糖、血肌酐、24h尿蛋白均显著低于DM组(P<0.05),肾纤维化病变明显改善;DM组TGF-β1、α-SMA和FN蛋白表达显著增加(P<0.05)、E-cadherin蛋白表达显著减少(P<0.05);与DM组相比,OM组TGF-β1、α-SMA和FN蛋白表达显著减少(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著增加(P<0.05);免疫荧光显示Arkadia与SnoN蛋白的表达趋势相反。结论 OM具有抑制DM大鼠肾组织纤维化的作用,其机制可能与通过抑制TGF-β1表达和抑制Arkadia泛素化降解SnoN蛋白有关。

丹芪合剂对糖尿病大鼠肾组织Smurf 2信号通路的调节作用研究

目的:观察丹芪合剂对糖尿病(DM)大鼠肾组织Smad泛素化调节因子2(Smurf 2)表达的影响,初步探讨丹芪合剂抑制糖尿病肾病(DN)的分子机制。方法:链脲佐菌素诱导1型DM大鼠模型,分为正常组、DM组和丹芪合剂1.8 g·kg-1治疗组;12周处死各组大鼠,HE染色观察胰腺和肾组织病理学改变;免疫组化和Western blot测肾组织Smurf 2、核转录共抑制因子(SnoN)、转化生长因子β1(TGF-β1)、磷酸化Smad 2和Smad 3表达。结果:与正常组相比,DM组肾组织Smurf 2蛋白显著增加,SnoN蛋白表达下调,TGF-β1、磷酸化Smad 2和磷酸化Smad 3蛋白上调;与DM组相比,丹芪合剂治疗组Smurf 2蛋白显著减少,SnoN蛋白上调,TGF-β1和磷酸化Smad 2蛋白下调,磷酸化Smad 3无显著差异。结论:丹芪合剂作用机制可能与减少Smurf 2蛋白表达、进而抑制SnoN蛋白泛素化降解有关。