补骨脂素对成骨细胞核因子-κB受体激活配体和骨保护素表达的影响

目的研究补骨脂素(psoralen,PSO)对体外培养的小鼠成骨细胞(OB)分化及核因子-κB受体激活配体(receptor activator of nuclearfactor-κB ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响。方法取第1代BALB/c小鼠颅盖骨成骨细胞,将PSO以0.1、1、10μmol/L3种浓度分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,MTT法观察各组药物对成骨细胞的增殖作用并绘制细胞生长曲线;用PNPP法测定成骨细胞内碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;RT-PCR法检测成骨细胞OPG和RANKL的转录水平。结果细胞生长曲线显示各组成骨细胞数量均随时间延长而增加,中、高浓度PSO能显著提高成骨细胞的ALP活性,促进OPG、RANKL的表达(P<0.05),OPG/RANKL升高(P<0.05)。结论低浓度PSO(0.1μmol/L)对骨更新作用不明显,而中、高浓度PSO(1、10μmol/L)能通过上调OPG、RANKL mRNA表达及OPG/RANKL比例,促进成骨细胞的生成功能,增强骨更新。

巴戟天多糖对去卵巢大鼠核因子-κB受体激活因子配体和骨保护素表达的影响

目的观察巴戟天多糖对去卵巢大鼠骨组织核因子-κB受体激活因子配体(RANKL)和骨保护素(OPG)mRNA表达的影响。方法成年雌性SD大鼠30只,随机分为假手术组、模型组、巴戟天多糖组,采用摘取双侧卵巢法建立骨质疏松模型,造模2 w后开始给药,给药3个月后观察各组大鼠骨密度(BMD),骨钙、骨磷含量,RANKL、OPG mRNA的表达水平。结果给药3个月后巴戟天多糖组能显著提高去卵巢大鼠的BMD和骨钙、磷的含量,上调OPG mRNA表达,下调RANKL mRNA表达,使RANKL/OPG值下降。结论巴戟天多糖对去卵巢所致的大鼠骨质疏松具有良好的防治作用,其机制可能与调控RANKL和OPG mRNA的表达,降低RANKL/OPG值有关。

抗风湿颗粒对胶原诱导关节炎大鼠骨保护素、核因子-κB受体激活因子配体和巨噬细胞集落刺激因子表达的影响

目的:观察抗风湿颗粒(Kangfengshi Granules,KFSG)对胶原诱导关节炎大鼠骨组织中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子-κB受体激活因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)mRNA表达的影响,探讨KFSG治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的作用机制。方法:40只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、环孢菌素A(cyclosporine A,CsA)治疗组和KFSG治疗组。除正常对照组外,其余各组大鼠予以皮下注射Ⅱ型胶原诱导关节炎模型。治疗4周后,采用实时定量PCR技术检测各组大鼠骨组织中OPG、RANKL和M-CSF mRNA的表达水平。结果:造模大鼠90%出现关节炎症状。治疗4周后,模型组、CsA治疗组和KFSG治疗组与正常对照组比较,RANKL mRNA和M-CSF mRNA的表达增高,OPGmRNA的表达降低,RANKL mRNA/OPG mRNA比值亦增高,差异均有统计学意义。KFSG治疗组与模型组比较,OPG mRNA的表达水平上调,M-CSF mRNA的表达水平下调,RANKL mRNA/OPG mRNA比值下降,差异均有统计学意义。结论:KFSG治疗RA骨质破坏的分子机制可能与其上调OPG mRNA的表达、下调M-CSF mRNA的表达及降低RANKL mRNA/OPG mRNA比值有关。

p38MAPK抑制对成骨细胞核因子-κB受体激活配体和骨保护素表达的影响

目的观察p38MAPK信号转导通路在成骨细胞分化及核因子-κB受体激活配体(receptor activator of nuclear factor-κBligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达中的作用。方法取第1继代BALB/c小鼠颅盖骨成骨细胞,药物刺激组分别加入10-8mol/L 17β-雌二醇和10-7mol/L雷洛昔芬;含阻断剂组预先添加5μmol/L SB202190阻断p38MAPK通路后,再加17β-雌二醇或雷洛昔芬。72 h后用PNPP法测定成骨细胞内碱性磷酸酶(alkaliphosphatase,ALP)活性;RT-PCR法检测成骨细胞ALP、OPG和RANKL的转录水平。结果17β-雌二醇和雷洛昔芬能够促进成骨细胞分化,促进OPG、RANKL的表达(P<0.05),OPG/RANKL无明显变化(P>0.05);阻断p38MAPK信号转导通路后,成骨细胞分化受抑,OPG、RANKL的表达和OPG/RANKL降低(P<0.05)。结论p38MAPK抑制可干扰体外培养成骨细胞分化,抑制RANKL和OPG的过度表达。

过氧化物酶体增殖物激活受体-γ激动剂对急性胰腺炎大鼠核转录因子-κB/Toll样受体4通路的调节及肾损伤的保护

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-γ激动剂对急性胰腺炎大鼠核转录因子-κB/Toll样受体4通路的调节以及肾损伤的保护作用。方法选择72只SD大鼠随机分为假手术组(SO组)、模型组(SAP组)和罗格列酮组(ROSI组),各组再随机分为术后6 h、12 h、24 h组,每组8只。SAP组采用两次腹腔注射L-精氨酸制备SAP模型,ROSI组30 min后股静脉注射10%罗格列酮溶液6 mg/kg,SO组腹腔注射等体积生理盐水。观察大鼠肾脏病理改变,测定肾脏TLR4、NF-κB蛋白表达水平,检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6、BUN、Cr含量。结果 ROSI组大鼠肾小管细胞病理损害较SAP组减轻;与SAP组比较,肾组织内NF-κB、TLR4蛋白明显下降(P<0.05);ROSI组外周血IL-1β、IL-6、TNF-α和BUN、Cr含量与SAP组比较明显下降(P<0.05)。结论 PPAR-γ激动剂罗格列酮能减轻急性胰腺炎大鼠肾小管上皮细胞的损伤,同时抑制NF-κB、TLR4蛋白表达,降低促炎细胞因子水平,推测PPAR-γ激动剂对NF-κB/TLR4通路的调节可能是胰腺炎的保护机制之一。

核转录因子-κB受体活化因子及其配体和骨保护蛋白系统在骨构建与骨改建中的作用

核转录因子-κB受体活化因子配体(RANKL)-核转录因子-κB受体活化因子(RANK)-骨保护蛋白(OPG)系统是近年发现的调节骨吸收的关键信号通路。RANKL与RANK结合在正常骨构建与骨改建中调节破骨细胞生成、活化和存留,在多种病理状况下增加骨吸收。OPG与RANK竞争性地结合RANKL,以防止骨组织的过度吸收。笔者分别就RANKL、RANK和OPG及其在骨构建与骨改建中的作用作一综述。

佐剂性关节炎大鼠骨密度及血清骨保护素和核因子-κB受体激活因子配体的变化

目的:观察佐剂性关节炎大鼠的骨密度、血清骨保护素(OPG)及核因子-κB受体激活因子配体(RANKL)的表达。方法:将30只SD大鼠随机均分为正常对照组、模型1组、模型2组,除正常对照组外,其余大鼠均制成佐剂性关节炎模型。造模后第21天处死模型1组,第28天处死正常对照组和模型2组。以双能X线吸收测定法测量整体右侧胫骨和距胫骨远端约1cm兴趣区检测骨密度;ELISA方法检测血清OPG、RANKL的表达。结果:模型1组大鼠兴趣区的骨密度明显低于正常对照组(P<0.01);模型2组大鼠兴趣区的骨密度均较模型1组和正常对照组显著降低(P<0.01);3组大鼠整体右侧胫骨骨密度值差异无统计学意义(P>0.05)。模型1组、模型2组血清OPG、RANKL表达及OPG/RANKL比值与正常对照组差异均有统计学意义(P<0.01)。同时模型1组与模型2组血清OPG、RANKL表达及OPG/RANKL比值差异亦均有统计学意义(P<0.01)。结论:佐剂性关节炎大鼠胫骨远端骨丢失的发生在整体胫骨之前。造模后第21天和第28天的OPG表达降低,RANKL表达升高,OPG/RANKL比值降低。

核因子-κB受体激活剂配体-核因子-κB受体激活剂信号传导通路在骨髓瘤骨病中的研究进展

多发性骨髓瘤是一种恶性克隆性浆细胞疾病,目前仍无法治愈,约90%多发性骨髓瘤患者在疾病的进程中出现骨髓瘤骨病,严重影响了患者的生活质量和疾病预后。骨髓瘤骨病的传统治疗包括双膦酸盐、放疗、手术治疗等。近年来随着研究证实核因子-κB受体激活剂配体(RANKL)-核因子-κB受体激活剂(RANK)信号传导通路在骨髓瘤骨病中发挥重要作用,为治疗骨髓瘤骨病提供了新靶点。本文就RANKL-RANK信号传导通路在骨髓瘤骨病中的发病机制及靶向治疗新进展进行综述。

川芎嗪对溃疡性结肠炎肠粘膜过氧化物酶体增殖物激活受体γ及核因子κB的影响

目的:通过观测经川芎嗪治疗前后过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、核因子κB(NF-κB)和肿瘤坏死因子(TNF)-α的变化,探讨川芎嗪治疗溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法:以噁唑酮诱导小鼠UC模型,并随机分为实验对照组(CN)、模型组(OXZ)、川芎嗪治疗组(TMP)和0.9%氯化钠治疗对照组(NS)。观察UC炎症评价指标(DAI,大体、组织学损伤评分,MPO值);采用荧光定量PCR法检测各组肠粘膜PPARγ、NF-κBp65、TNF-αmRNA的表达量;免疫组化法检测PPARγ、NF-κBp65蛋白的表达。结果:与CN组比较,OXZ组的炎症评价指标均明显增高(P<0.01),PPARγ表达量明显下降(P<0.01)、NF-κBp65及TNF-α表达量均显著升高(P<0.01)。应用川芎嗪后,UC的炎症评价指标均较NS组明显降低(P<0.01),PPARγ表达量明显升高(P<0.01)、NF-κBp6及TNF-α表达量均下降(P<0.01)。结论:川芎嗪对UC的结肠粘膜有保护作用,其机制可能与PPARγ的激活,NF-κB的抑制,TNF-α等炎症因子表达的减低有关。

聚甲基丙烯酸甲酯颗粒对人滑膜细胞核因子κB受体激动剂配体/骨保护蛋白表达的影响

背景:多种因子可以影响骨保护蛋白/核因子κB受体激动剂配体/核因子κB受体激动剂(Osteoprotegerin/receptor activator of nuclear factor-kappaB/ligand of receptor-activator of nuclear factor-kappaB,OPG/RANKL/RANK)系统的表达影响骨代谢,那么松动假体周围的骨水泥颗粒是否也通过影响其代谢参与假体松动过程?目的:观察聚甲基丙烯酸甲酯颗粒对人滑膜细胞RANKL/OPG表达的影响。方法:体外培养人滑膜细胞,在滑膜细胞培养体系中分别加入质量浓度为0(空白对照),0.2,1,10g/L的聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥颗粒,采用荧光定量PCR检测上述各浓度PMMA颗粒作用不同时间后滑膜细胞内RANKL、OPG的表达量及其比值。结果与结论:与空白对照组相比,各实验组滑膜细胞内RANKL、OPG的表达量均有下降;随着与聚甲基丙烯酸甲酯颗粒共培养时间延长,各实验组滑膜细胞内RANKL、OPG表达均有下降趋势,而RANKL/OPG表达比值无明显变化。说明聚甲基丙烯酸甲酯颗粒在对滑膜细胞产生生物学反应时并不干扰假体周围骨代谢的动态平衡,并未直接参与人工关节假体的无菌性松动。

膀胱癌细胞中锌指蛋白A20对核转录因子κB抑制的机制探讨

目的 为了探讨锌指蛋白A2 0在膀胱癌细胞中抑制核转录因子κB(NuclearTranscriptionFactorKappaB ,NF κB)作用的可能机制。方法 转染绿色荧光蛋白融合的A2 0质粒 (GreenFluorescentProteinfusedA2 0 ,GFP A2 0 )和A2 0显性失活突变体质粒 [GFP A2 0 (1- 36 8) ]入膀胱癌细胞T2 4 ,荧光显微镜观察质粒在细胞中表达情况 ,RT PCR检测肿瘤坏死因子受体I(Tu morNecrosisFactorReceptorⅠ ,TNFRⅠ )、核转录因子κB受体激活子配体 (ReceptorActivatorofNF κBLigand ,RANKL)、NF κB抑制蛋白ⅠκBα的mRNA表达变化。结果 转染 2 4h后 ,质粒在细胞中稳定表达 ,4 8h后表达继续增加。转染A2 0质粒或A2 0显性失活突变体质粒 2 4h及 4 8h后 ,TNFRⅠ和RANKLmRNA表达无明显变化 (P >0 .0 5 )。而在这两个时间点处 ,A2 0质粒转染可明显抑制细胞内ⅠκBαmRNA的表达 ;A2 0质粒处理组与未处理组之间、A2 0质粒转染组与显性失活突变体质粒转染组之间差异均有显著性 (P <0 .0 1)。结论 A2 0作用于TNFR的下游对NF κB起抑制作用 ,ⅠκBαmRNA可能作为NF κB报告基因受A2 0抑制。

NF-κB在蛋白酶激活受体介导的信号通路中的作用研究进展

蛋白酶激活受体（protease activated receptors,PARs）是一组7次跨膜、与G蛋白耦联的受体超家族。该家族有4个成员：PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4[1]。PARs广泛分布于各种组织细胞中,在血管内皮细胞、平滑肌细胞、神经细胞、神经胶质细胞、胃肠道细胞及皮肤角质化细胞中均有表达,被激活后参与多种生理、病理过程,如调节血管增生、

基于NF-κB信号通路探讨类风湿性关节炎炎性反应的研究进展

核转录因子κB(NF-κB)信号通路是典型的促炎信号通路,通过在炎性反应中诱导促炎细胞因子表达以发挥促炎作用。过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)是炎性反应的重要调节因子,可通过直接或间接的竞争性抑制作用,抑制NF-κB的信号通路,从而抑制促炎细胞因子产生。类风湿性关节炎(RA)是一种慢性炎症性疾病,炎性反应是其发病的核心环节。该文基于NF-κB信号通路探讨RA炎性反应机制。

α7烟碱型乙酰胆碱受体激动剂抑制骨水泥微粒刺激小鼠外周血单核细胞分泌炎性因子

目的探讨α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7n AChR)激动剂PNU282987对骨水泥微粒刺激小鼠外周血单核细胞分泌炎性反应因子的影响及其分子机制。方法分离培养小鼠外周血单核细胞,使用聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)微粒刺激后,ELISA检测培养上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量;RT-PCR检测细胞TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达;Western blot检测p-p65、p65、p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3及β-actin的表达;ELISA检测NF-κB DNA结合活力。结果单核细胞经PMMA微粒刺激后,上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量明显增高(P<0.05);细胞TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达明显增高(P<0.05);p65、JAK2和STAT3磷酸化明显增强(P<0.05);NF-κB DNA结合活力明显增高(P<0.05)。不同浓度PNU282987作用后,上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量呈浓度依耐性下降(P<0.05);细胞TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达呈浓度依耐性下降(P<0.05);总p65、JAK2和STAT3的表达不变;p-p65、p-JAK2和p-STAT3的表达呈浓度依耐性下降(P<0.05);NF-κB DNA结合活力也呈浓度依耐性下降(P<0.05)。结论α7n AChR激动剂PNU282987能显著抑制PMMA骨水泥微粒所诱导的小鼠血单核细胞炎性反应因子的分泌。

中药调控核因子-κB(NF-κB)信号通路治疗银屑病的研究进展

银屑病是一种慢性自身免疫性皮肤病,其核心是免疫反应失调和角质形成细胞增殖异常。核因子-κB(NF-κB)在银屑病中是一种关键的调节信号通路,通过抑制NF-κB信号途径或下游转录因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)或白细胞介素-17(IL-17)/白细胞介素-23(IL-23)成为未来银屑病治疗的一个新方向。中药针对NF-κB信号通路在银屑病治疗中具有疗效确切、手段多样、不良反应小等优势。总结了中药调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/NF-κB、NF-κB/信号传导和转录激活因子3(STAT3)、Toll样受体4(TLR4)/NF-κB信号通路治疗银屑病的研究进展,以期为中药治疗银屑病提供更新策略。

过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ对实验性胰腺炎大鼠核转录因子-κB表达的影响

近年来，随着对急性胰腺炎（AP）发病机制认识的不断深入，与细胞因子表达直接相关的核转录因子-κB（NF—κB）在AP发病机制中的作用日益引起人们的重视。研究发现，过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ（PPAR-γ）是一个细胞增殖和炎症反应的调节剂，可调节炎症相关基因的表达，参与机体的炎症反应过程，可能通过抑制NF-κB的活化表达发挥其抗炎作用。

原花青素对高脂饮食大鼠胸主动脉壁过氧化物酶增殖激活受体γ及核转录因子-κB途径的影响

目的观察葡萄籽提取物原花青素(GSPE)对高脂饮食大鼠胸主动脉壁过氧化物酶增殖激活受体γ(PPARγ)mRNA表达及核转录因子-κB(NF-κB)活性的影响。方法雄性SD大鼠32只,随机分为4组:对照组、高脂组、吡格列酮组、原花青素组。每组8只,其中吡格列酮组为阳性对照组。对照组饲基础饲料,其他3组饲高脂饲料。各组在饲喂饲料的同时,灌胃给相应的干预剂,吡格列酮和原花青素灌胃量分别是10mg/(kg.d)、100mg/(kg.d),吡格列酮组和高脂组灌蒸馏水。在0周、3周、6周空腹尾静脉采血,测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量。实验期末,取大鼠胸主动脉组织,保存于-70℃。运用RT-PCR检测PPARγ的mRNA表达水平,EMSA检测NF-κB活性。结果(1)高脂组较对照组大鼠血清TC、TG水平含量明显升高(P<0.05)。原花青素组和吡格列酮较高脂组血清TG、TC的含量显著降低(P<0.05),原花青素组与吡格列酮组、对照组间差异无显著性。(2)高脂组与对照组相比,PPARγmRNA表达显著降低(P<0.05),胸主动脉壁NF-κB活性明显升高。(3)吡格列酮组与高脂组比较,胸主动脉壁PPARγmRNA表达水平升高(P<0.05)。(4)原花青素组与高脂组比较,胸主动脉壁PPARγmRNA表达水平明显升高(P<0.05),NF-κB活性显著降低。结论原花青素具有预防血清TG、TC升高的作用;原花青素能通过预防高脂状态下大鼠胸主动脉壁PPARγmRNA表达下调,抑制NF-κB的激活。

过氧化物酶体增殖物激活受体-γ激动剂对急性胰腺炎大鼠肺损伤的保护机制研究

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-γ激动剂对胰腺炎大鼠肺损伤的保护作用及调节机制。方法 72只大鼠随机分为假手术组、模型组和罗格列酮组,各组再分为术后6 h、12 h、24 h组。模型组采用两次腹腔注射L-精氨酸制备SAP模型,罗格列酮组术后30 min静脉注射10%罗格列酮6 mg/kg,假手术组腹腔注射等体积生理盐水。观察大鼠肺病理改变,测定肺TLR4、NF-κB、肺髓过氧化物酶活性、肺干/湿重比、血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量。使用重复测量方差分析,SNK-q检验比较差异。结果 ROSI组大鼠肺组织病理损害较SAP组减轻;与SAP组比较,肺内NF-κB、TLR4蛋白下降(P<0.05),髓过氧化物酶活性及肺干/湿重比降低(P<0.05);ROSI组外周血IL-1β、IL-6、TNF-α含量与SAP组比较明显下降(P<0.05)。结论 PPAR-γ激动剂能减轻急性胰腺炎大鼠肺组织的损伤,抑制NF-κB、TLR4表达,降低促炎细胞因子水平,推测PPAR-γ激动剂对NF-κB/TLR4通路的调节可能是胰腺炎的保护机制之一。

AP1与NF-κB对PPARδ基因的转录调控作用

目的研究在过氧化物酶体增长因子活化受体δ(PPARδ)表达中的相关调控因子。方法用RT-PCR扩增人类PPARδ启动子序列,通过Deletion及观测各重组体转染活性,通过电泳迁移率变更分析(EMSA)、突变等方法确定核转录因子激活蛋白1(AP1)及NF-κB对PPARδ表达的作用。结果 Deletion及重组转染后发现AP1及NF-κB因子各自结合位点突变后转染活性明显降低,同时突变其转染活性无明显变化。结论 AP1及NF-κB均可以增强PPARδ的表达活性。

核转录因子-κB对过氧化物酶增殖体激活受体γ调控作用的体外研究

目的观察脂多糖（LPS）作用下小鼠巨噬细胞（Ana-1）过氧化物酶增殖体激活受体γ（PPAR-γ）的表达，并通过调控核转录因子-κB（NF-κB）表达观察PPAR7相应的变化情况。方法将体外培养的Ana-1细胞按随机数字表法分为对照组，0．1mg／LLPS作用1、2、4、8h组，50mg／LSN50作用4h组（SNS0组），NF-κB高表达质粒转染组。用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测PPARγ、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的mRNA表达，用酶联免疫吸附法（EuSA）检测TNF-α蛋白表达。构建NF-κB高表达质粒，利用脂质体转染巨噬细胞并通过G418筛选出稳定表达株，用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测LPS、SN50作用后及质粒转染后细胞核内PPARY表达和NF-κBp65亚基核移位情况。结果在致炎因子LPS作用下，PPARγ的mRNA和蛋白表达均下降，这一变化伴随p65核移位增加和炎症因子TNF-α的升高（P均〈0．05）。成功构建了NF-κBp65亚基高表达质粒并将其转染到巨噬细胞中实现了p65高表达。LPS刺激和NF-κBp65亚基高表达质粒转染Ana-1细胞造成p65表达升高时，核内PPAR7表达减少（r=-0．913，P〈O．05）；而使用NF-κB抑制剂SN50作用Ana-1细胞抑制p65表达后，核内PPARY表达升高（r=-0．959，P〈0．05），二者具有良好的负相关性。结论在LPS作用下，Ana-1细胞内PPARγ表达降低，而这一变化与NF—xB活化相关，调节NF-κBp65亚基表达，PPARγ会向p65改变的相反方向变化。