慢病毒介导核转录因子-κB诱导激酶和IκB激酶连接蛋白基因沉默对人结肠癌细胞上皮-间质转化的影响

目的探讨慢病毒介导的核转录因子-κB诱导激酶和IκB激酶连接蛋白(NIBP)基因沉默后对人结肠癌HCT116细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。方法通过DNA重组技术,进行设计并构建人NIBP基因的慢病毒载体以及无关序列的Lenti-EGFP慢病毒载体,感染HCT116细胞后分别为转染组(NIBP-RNAi组)和阴性对照组(NC组),而未予转染处理的HCT116细胞则为空白对照组(CON组)。将实验分为非肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组和TNF-α组:非TNF-α组包括NIBP-RNAi组、NC组、CON组,TNF-α组包括NIBP-RNAi+TNF-α组(NIBP-RNAi+组)、NC+TNF-α组(NC+组)、CON+TNF-α组(CON+组),其中TNF-α组均予TNF-α进行干预。检测非TNF-α组NIBP mRNA及蛋白的表达情况,以及各组上皮性钙黏附分子(E-cadherin)和神经性钙黏附分子(N-cadherin)mRNA及蛋白的表达;采用倒置相差显微镜观察各组细胞形态的变化。结果 NIBP-RNAi组NIBP的mRNA及蛋白表达均显著低于NC组及CON组(P<0.05);与CON组比较,CON+组、NC+组的细胞发生明显的EMT,E-cadherin的mRNA和蛋白的表达均明显降低、N-cadherin的mRNA和蛋白的表达均明显上升(P<0.05),NIBP-RNAi组及NIBP-RNAi+组的细胞由间质细胞形态转变为上皮细胞形态,E-cadherin的mRNA和蛋白的表达均明显上升、N-cadherin的mRNA和蛋白的表达均明显降低(P<0.05);而CON组和NC组比较,以及CON+组和NC+组E-cadherin及N-cadherin的mRNA和蛋白表达比较,差异均无统计意义(P>0.05)。结论靶向下调NIBP基因表达可抑制人结肠癌HCT116细胞EMT的发生。

细胞外信号调节蛋白激酶/核转录因子-κB调控胆红素诱导的海马神经细胞凋亡

目的探讨细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,ERK)1/2和核转录因子-κB(NF-κB)在胆红素诱导的海马神经细胞凋亡过程中的作用。方法将体外培养的海马神经细胞分为处理组(胆红素处理神经元)、抑制组(胆红素+ERK1/2抑制剂PD98059)以及对照组(DMSO)。采用改良噻唑蓝比色法(MTT法)和Hoechst33342DNA染色法,观察各组细胞存活率及形态学特征;免疫细胞化学检测NF-κB蛋白的表达。结果处理组细胞存活率(85.418±1.406)%明显低于对照组(99.990±2.782)%(P<0.01),而高于抑制组(63.951±1.148)%(P<0.01);对照组和抑制组NF-κB蛋白光密度值、阳性细胞率[分别为(0.157±0.037)、(0.986±0.795)%和(0.249±0.059)、(2.622±1.552)%]均明显低于处理组[分别为(0.306±0.072)、(6.882±2.626)%,P<0.01]。结论胆红素可激活原代培养的海马神经细胞ERK/NF-κB信号转导通路;抑制ERK1/2通路可抑制NF-κB活性而加剧胆红素的神经细胞毒性。

羊栖菜多酚通过核转录因子-κB/丝裂原活化蛋白激酶通路缓解脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应

目的:研究羊栖菜多酚对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7细胞炎症反应的影响。方法:噻唑蓝法测定细胞活力;Griess法测定一氧化氮(NO)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应测定白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的基因相对表达量;流式细胞术测定细胞吞噬能力;蛋白免疫印迹法测定信号通路丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)和核转录因子(nuclearfactor,NF)-κB信号通路关键蛋白表达水平。结果:羊栖菜多酚对RAW264.7细胞的安全质量浓度范围为0~160μg/mL。与LPS组相比,羊栖菜多酚剂量依赖性降低巨噬细胞吞噬能力并抑制NO的生成。同时,羊栖菜多酚下调促炎细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)和炎症诱导酶(iNOS、COX-2)的mRNA水平,且作用效果与给药剂量及LPS刺激时间相关。这些炎性介质的表达与羊栖菜多酚抑制p38 MAPK和NF-κB p65的激活有关。结论:羊栖菜多酚可通过减弱p38 MAPK和NF-κB p65信号通路的激活水平,抑制下游炎症介质的转录表达,从而缓解LPS诱导的巨噬细胞炎症反应。

电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马内白介素-1β及转录核因子κB抑制蛋白激酶的影响

目的研究分析电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马内白介素-1β和转录核因子κB抑制蛋白激酶的影响。方法将210只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,分别为60例、75例和75例,灌注后每组根据12h、24h和48h再分为三组。对比各组IL-1β含量和IKKβ的蛋白表达水平。结果模型组各组海马中IL-1β含量均显著高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05);电针各组海马中IL-1β含量均显著低于模型各组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型各组IKKβ蛋白水平均显著高于假手术各组,差异有统计学意义(P<0.05);电针各组IKKβ蛋白水平均显低于模型各组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后会出现炎性反应,给予电针干预后可显著降低IL-1β含量和IKKβ的蛋白表达,进而减轻炎症反应。

核转录因子-κB、细胞外信号调节激酶1/2、转移相关蛋白-3在乳腺肿瘤组织中的表达研究

目的分析核转录因子-κB(NF-κB)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、转移相关蛋白-3(MTA-3)在乳腺肿瘤中的表达。方法选取我院2017年8月至2019年3月收治的60例乳腺肿瘤患者作为观察组,另取30例同期乳腺增生患者作为对照组。比较两组患者组织样本NF-κB、ERK1/2和MTA-3水平。结果观察组NF-κB、ERK1/2阳性检出率高于对照组;MTA-3阳性检出率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);临床分期越高者、肿瘤直径越大者,NF-κB、ERK1/2阳性检出率越高,MTA-3阳性检出率低越低,差异有统计学意义(P<0.05)。Luminal A型、Luminal B型及HER2阳性分子分型患者NF-κB、ERK1/2阳性检出率高于三阴型,MTA-3阳性检出率低于三阴型,差异有统计学意义(P<0.05)。淋巴结转移患者NF-κB、ERK1/2阳性检出率高于对照组,MTA-3阳性检出率低于无转移患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在乳腺肿瘤组织中存在NF-κB和ERK1/2的高阳性表达和MTA-3和低表达,并且与乳腺增生患者病理组织表达有明显差异,结合三者指标分析对鉴别诊断乳腺肿瘤、改善乳腺肿瘤干预时机有重要意义。

缺氧诱导因子-1α通过调控蛋白激酶B/核因子-κB信号通路促进肝癌细胞干细胞标志物CD133的表达

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)诱导肝癌细胞中干细胞标志物CD133表达的分子机制及意义。方法将HepG2细胞随机分为空白对照组、对照组和实验组,空白对照组HepG2细胞不做转染,对照组和实验组HepG2细胞分别转染空载体慢病毒pHBLV-ZsGreen-Puro和HIF-1α高表达慢病毒pHBLV-HIF1A-3flag-ZsGreen-Puro。使用荧光显微镜观察对照组和实验组细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达,并计算转染效率;采用Western blot法检测3组细胞中HIF-1α蛋白及蛋白激酶B(Akt)/核因子-κB(NF-κB)信号通路蛋白磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Akt、p-p65、p65蛋白的相对表达量,流式细胞术检测对照组和实验组CD133阳性细胞率。另取实验组细胞随机分为HepG2-HIF-1α组、Akt激酶抑制剂组和NF-κB信号通路抑制剂组,Akt激酶抑制剂组和NF-κB信号通路抑制剂组细胞分别给予终浓度为0.4、0.8、1.6、3.2、6.3、12.5、25.0μmol·L^(-1) Akt激酶抑制剂及终浓度为3.0、6.0、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0、400.0μmol·L^(-1) NF-κB信号通路抑制剂干预;采用四甲基偶氮唑盐法检测Akt激酶抑制剂组和NF-κB信号通路抑制剂组细胞活力,流式细胞术检测HepG2-HIF-1α组、Akt激酶抑制剂组和NF-κB信号通路抑制剂组CD133阳性细胞率的变化。结果对照组和实验组GFP阳性细胞比例显著高于空白对照组(P<0.05);对照组与实验组GFP阳性细胞比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。实验组细胞中HIF-1α相对表达量显著高于空白对照组及对照组(P<0.05);空白对照组与对照组细胞中HIF-1α相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组和实验组CD133阳性细胞率分别为(4.42±0.29)%、(15.43±0.41)%,实验组CD133阳性细胞率显著高于对照组(t=22.160,P<0.05)。实验组细胞中p-Akt/Akt、p-p65/p65显著高于对照组(P<0.05)。0.4、0.8、1.6、3.2、6.3、12.5、25.0μmol·L^(-1) Akt激酶抑制剂组细胞活力比较差异无统计学意义(F=1.301,P>0.05);3.0、6.0、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0、400.0μmol·L^(-1) NF-κB信号通路抑制剂组细胞活力比较差异无统计学意义(F=2.300,P>0.05)。Akt激酶抑制剂组和NF-κB信号通路抑制剂组CD133阳性细胞率低于HepG2-HIF-1α组(t=10.170、8.932,P<0.05);Akt激酶抑制剂组与NF-κB信号通路抑制剂组CD133阳性细胞率比较差异无统计学意义(t=1.745,P>0.05)。结论HIF-1α可通过Akt/NF-κB信号通路促进肝癌细胞中干细胞标志物CD133的表达,增加肝癌细胞的干细胞特性。

表皮生长因子介导的核转录因子-κB活化促进胰腺癌细胞尿激酶型纤溶酶原激活物表达及侵袭和转移

目的:观察表皮生长因子(EGF)对胰腺癌细胞KP4增殖、黏附及侵袭力和核转录因子(NF-κB)、尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)表达的影响．方法:通过细胞侵袭、增殖及黏附实验观察在EGF影响下肿瘤细胞侵袭、增殖及黏附能力变化．Western blot,RT-PCR及EMSA实验检测胰腺癌细胞的NF-κB活性和uPA表达并观察在NF-κB抑制物PDTC抑制下EGF诱导的NF-κB活性和uPA表达及肿瘤细胞侵袭力变化．结果:EGF能够明显促进胰腺癌细胞的侵袭能力,具有明显的剂量依赖性(50,25,5μg/L vs 0μg/L:116±13,97±10,83±7 vs 72±5;t= 3．552,3．018,2．373;P=0．006,0．015,0．042),然而对增殖及黏附力无明显影响．随着EGF浓度的增加,NF-κB活性明显增强．EGF上调uPA蛋白及mRNA表达,具有浓度依赖性．PDTC显著抑制EGF诱导的NF-κB活性、uPA表达及胰腺癌细胞的侵袭力．结论:EGF通过激活NF-κB而诱导uPA表达,促进胰腺癌细胞的侵袭和转移．

基于TLR4/PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨热毒宁注射液抑制脂多糖刺激的BEAS-2B细胞炎症因子表达的作用机制

目的:基于Toll样受体4(TLR4)/磷脂肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探究热毒宁注射液(RDN)对脂多糖(LPS)刺激的人支气管上皮细胞BEAS-2B炎症因子表达的影响及机制。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)测定RDN冻干粉中栀子苷和绿原酸含量;采用分子对接技术评估栀子苷和绿原酸与TLR4的结合能力。通过体外实验构建LPS(1μg·mL^(–1))刺激的BEAS-2B细胞气道炎症模型;采用噻唑蓝(MTT)法检测LPS诱导的BEAS-2B细胞活力;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测LPS诱导的BEAS-2B细胞炎症因子mRNA的表达;通过免疫印迹法(WB)检测LPS诱导的BEAS-2B细胞TLR4/PI3K/Akt/NF-κB信号通路相关蛋白质的表达;采用免疫荧光法(IF)检测转录因子c-Jun和p65的入核情况。结果:RDN冻干粉中栀子苷和绿原酸的质量分数分别为127.00、70.26 mg·g^(–1);栀子苷和绿原酸均能与TLR4结合,结合能分别为–7.0、–7.9 kcal·mol^(–1)。质量浓度为12.5~400.0μg·mL^(–1)时,RDN对LPS刺激的BEAS-2B细胞活力无显著的抑制作用;质量浓度为200.0~400.0μg·mL^(–1)时,RDN能明显下调白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、趋化因子CXC配体2(CXCL2)、CXCL5、趋化因子配体5(CCL5)、CCL20 mRNA的表达。此外,RDN能降低TLR4/PI3K/Akt/NF-κB信号通路相关蛋白质PI3K、Akt、TANK结合激酶1(TBK1)、IκB激酶(IKK)α/β、NF-κB抑制因子α(IκBα)、p65、p38、c-Jun N-末端激酶(JNK)、胞外信号调节激酶(ERK)和c-Jun的磷酸化水平,同时抑制LPS激活的BEAS-2B细胞p65和c-Jun的入核。结论:RDN能下调LPS诱导的BEAS-2B细胞炎症因子mRNA的表达,其机制与RDN阻断TLR4/PI3K/Akt/NF-κB信号通路有关。

脾脏酪氨酸激酶和核因子-κB对新城疫病毒-血凝素-神经氨酸酶上调自然杀伤细胞TRAIL蛋白表达的影响

目的探讨脾脏酪氨酸激酶(Syk)和核因子-κB(NF-κB)对新城疫病毒(NDV)-血凝素-神经氨酸酶(HN)上调自然杀伤(NK)细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白表达的影响。方法将干扰素γ(IFN-γ)受体缺失的NK细胞株(IFNR-/-NK)分为小干扰RNA(siRNA)-Syk1组、siRNA-Syk2组、siRNA-Syk3组、siRNA-p65-1组、siRNA-p65-2组、siRNA-p65-3组、未处理组、脂质体组、siRNA-NC组,未处理组加入磷酸缓冲盐溶液(PBS),脂质体组加入由脂质体3000和Opti-MEM培养基组成的转染复合物,siRNA-NC组加入含非特异性siRNA的转染复合物,其他组加入含相应siRNA的转染复合物。(1)转染36h后,检测各组细胞Syk和(或)p65的mRNA及蛋白的表达水平。(2)转染16h后,将细胞分为siRNA-Syk1+HN组、siRNA-Syk2+HN组、siRNA-Syk3+HN组、siRNA-p65-1+HN组、siRNA-p65-2+HN组、siRNA-p65-3+HN组、脂质体+HN组和siRNA-NC+HN组、未处理组,未处理组细胞加入PBS,其余各组细胞加入NDV-HN。检测各组细胞膜型及分泌型TRAIL蛋白的表达水平,并检测siRNA-Syk1+HN组、siRNA-Syk2+HN组、siRNA-Syk3+HN组、脂质体+HN组、siRNA-NC+HN组和未处理组磷酸化IκBα蛋白的表达水平。结果(1)瞬时转染36h后,与脂质体组比较,siRNA-Syk1、siRNA-Syk2、siRNA-Syk3组的SykmRNA及蛋白表达水平降低,siRNA-p65-1组、siRNA-p65-2组、siRNA-p65-3组p65mRNA及蛋白表达水平亦降低(均P<0.05)。(2)未处理组的膜型TRAIL蛋白及分泌型TRAIL蛋白表达水平均低于其他组,siRNA-Syk1+HN组、siRNA-Syk2+HN组、siRNA-Syk3+HN组及siRNA-p65-1+HN组、siRNA-p65-2+HN组、siRNA-p65-3+HN组的膜型TRAIL蛋白及分泌型TRAIL蛋白表达水平均低于脂质体+HN组(均P<0.05)。未处理组磷酸化IκBα蛋白表达水平均低于其他组,siRNA-Syk1+HN组、siRNA-Syk2+HN组、siRNA-Syk3+HN组磷酸化IκBα蛋白表达水平均低于脂质体+HN组(均P<0.05)。结论敲低Syk或p65可以削弱NDV-HN上调NK细胞TRAIL蛋白的表达。Syk和NF-κB信号通路可能介导NDV-HN直接活化NK细胞表达TRAIL的过程。

重症急性胰腺炎大鼠心肌核因子-κB激活及重组葡激酶和益活清胰汤的干预作用

目的:研究重症急性胰腺炎(SAP)心肌功能损害时心肌NF-κB的活化及葡激酶的干预作用。方法:63只SD大鼠随机分为假手术组(n=9)、对照组(n=27)、葡激酶合用益活清胰汤治疗组(n=27),SAP模型采用5%的牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射方法建立。ELISA法测定6 h、12 h、24 h各时点血TNF-α、IL-6含量,RT-PCR检测心肌NF-κBmRNA的表达,免疫组化法检测心肌NF-κB蛋白的表达,HE染色光镜下观察胰腺及心肌组织的病理变化。结果:术后6h大鼠心肌NF-κBmRNA及NF-κB蛋白表达异常增高,TNF-α、IL-6呈进行性升高,治疗组用药后心肌NF-κBmRNA及蛋白表达下调,与对照组相比(P<0.05),血TNF-α、IL-6明显下降,与对照组相比(P<0.05),治疗组胰腺及心肌组织的病理变化减轻。结论:SAP大鼠的心肌损伤可能与循环中TNF-α、IL-6水平升高导致的心肌NF-κB活化有关,益活清胰汤合用葡激酶对SAP并发的心肌损伤具有防治作用。

大黄素通过抑制核转录因子-κB信号途径对脂多糖诱导的ARDS小鼠发挥肺保护作用

目的探讨大黄素对脂多糖(LPS)诱导的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠肺保护作用的可能机制.方法选择72只健康雄性C57BL/6小鼠,按随机数字表法分为对照组、模型组和大黄素高、中、低剂量组及p65信号通路上游分子核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂激酶β(IKKβ)活化抑制剂BAY65-1942(BAY)组,每组12只.采用经气道雾化吸入LPS 40μL的方法复制ARDS小鼠模型;对照组雾化吸入等量磷酸盐缓冲液(PBS).大黄素低、中、高剂量组于制模前1 h通过腹腔注射5、10、20 mg/kg大黄素预处理;BAY组腹腔注射BAY 5 mg/kg预处理;对照组与模型组给予等量生理盐水.制模后48 h处死动物,取支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织,光镜下观察各组小鼠肺组织病理学改变,用蛋白质免疫印迹试验检测肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-8、IL-1β)、p65及p65/磷酸化p65(p-p65)、IKKβ、磷酸化IKKβ(p-IKKβ)的蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF中髓过氧化物酶(MPO)水平及NF-κBp65与DNA的结合力,流式细胞术检测BALF中表面分子CD11b+Gr-1+中性粒细胞(PMN)的比例.结果与对照组比较,模型组肺泡结构破坏明显、肺泡间隔明显增宽、炎症细胞浸润明显增多;肺损伤评分明显升高;BALF中MPO水平、CD11b+Gr-1+PMN比例均明显升高;同时组肺组织IL-8、TNF-α、IL-1β、p65、p-p65、IKKβ以及p-IKKβ的蛋白表达水平均明显增加,NF-κBp65与DNA的结合力也明显增强.与模型组比较,不同剂量大黄素组小鼠肺泡结构破坏减少,肺泡间隔增宽程度减轻,肺组织炎症细胞浸润减少,肺损伤评分明显下降;BALF中MPO水平、CD11b+Gr-1+PMN比例明显降低,NF-κBp65与DNA的结合力也明显减弱;肺组织TNF-α、IL-8、IL-1β、p65、p-p65、IKKβ与p-IKKβ的蛋白表达水平下降,且以大黄素高剂量组的作用比低、中剂量组更明显〔肺损伤评分(分):2.10±0.48比3.03±0.49、2.83±0.53,MPO(ng/L):486.04±35.74比683.07±79.12、585.06±87.35,CD11b+Gr-1+PMN百分比:(6.61±1.52)%比(20.68±4.17)%、(11.54±2.39)%,NF-κB p65与DNA的结合力(A值):1.64±0.23比2.41±0.16、2.10±0.12,TNF-α/GAPDH:0.81±0.09比1.07±0.11、0.83±0.16,IL-8/GAPDH:0.64±0.05比1.17±0.03、0.98±0.02,IL-1β/GAPDH:0.73±0.06比1.07±0.09、0.89±0.08,p65/GAPDH:0.82±0.11比0.97±0.06、0.86±0.05,p-p65/GAPDH:0.50±0.06比0.61±0.03、0.53±0.04,IKKβ/GAPDH:0.69±0.10比0.95±0.05、0.76±0.06,p-IKKβ/GAPDH:0.63±0.07比1.00±0.03、0.77±0.08;均P<0.05〕.BAY组的作用与大黄素高剂量组相当.结论大黄素能剂量依赖性抑制LPS诱导的ARDS小鼠肺组织炎症,减轻肺损伤,该作用机制可能与抑制NF-κB的信号通路活化有关.

复方黄柏液调节NF-κB/MAPK信号通路对皮肤溃疡大鼠炎症反应的影响

目的从核转录因子(NF)-κB/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路,探究复方黄柏液对皮肤溃疡大鼠皮肤炎症反应的影响。方法建立大鼠皮肤溃疡模型并分为:假手术组、模型组、复方黄柏液组、NF-κB阻断剂组、MAPK阻断剂组、复方黄柏液+MAPK阻断剂组,每组15只。检测皮肤溃疡面积、愈合率;苏木素-伊红(HE)染色观察创面肉芽组织及毛细血管生长变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-8表达;免疫组化法检测创面组织NF-κB磷酸化蛋白(p-NF-κB)、MAPK磷酸化蛋白(p-MAPK)阳性表达;Western印迹检测NF-κB及p-MAPK、丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶(MKP)-1、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)、转化生长因子(TGF)-β表达。结果与假手术组相比,模型组溃疡面积升高,创面愈合率降低,创面肉芽组织、毛细血管网及胶原纤维形成明显较少,p-NF-κB及炎症因子表达明显升高,p-MAPK及生长因子VEGF、bFGF、TGF-β表达明显降低,MAPK去磷酸化调节因子MKP-1表达明显升高(P<0.05)。与模型组相比,复方黄柏液组及NF-κB阻断剂组溃疡面积明显减小,创面愈合率明显增高,创面肉芽组织、毛细血管网及胶原纤维形成增多,p-NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-8、p-NF-κB/NF-κB、MKP-1蛋白表达明显降低,p-MAPK阳性、p-MAPK/MAPK、VEGF、bFGF、TGF-β蛋白表达明显升高(P<0.05);MAPK阻断剂组溃疡面积明显升高,创面愈合率明显降低,创面肉芽组织、毛细血管网及胶原纤维形成明显减少,p-MAPK、p-MAPK/MAPK、VEGF、bFGF、TGF-β表达明显降低,p-NF-κB、MKP-1、TNF-α、IL-1β、IL-8表达明显升高(P<0.05)。与复方黄柏液组相比,复方黄柏液+MAPK阻断剂组溃疡面积升高,创面愈合率降低,创面肉芽组织、毛细血管网及胶原纤维形成较少,p-NF-κB、THF-α、IL-1β、IL-8表达升高,p-MAPK、p-MAPK/MAPK、VEGF、bFGF、TGF-β表达降低,p-NF-κB/NF-κB、MKP-1表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论复方黄柏液可能通过抑制NF-κB介导的炎症反应活化,促进MAPK磷酸化活化介导的生长因子表达,来促进皮肤溃疡愈合,发挥抗溃疡作用。

大鼠心肌缺血缺氧损伤核转录因子-κB与细胞间粘附分子-1的表达

目的 研究异丙肾上腺素致大鼠心肌损伤对心肌核转录因子 κB(NF κB)以及细胞间粘附分子 1(ICAM 1)表达的影响。方法 大鼠皮下注射异丙肾上腺素造成心肌坏死模型,测定血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CK)活力和丙二醛(MDA)含量,观察心肌坏死程度,免疫组化检测心肌NF κBp65蛋白的表达,Western蛋白质印迹杂交检测IκBα的蛋白质表达,半定量RT PCR检测ICAM 1mRNA含量。观察腹腔注射地塞米松后上述指标的变化。结果 大鼠给予异丙肾上腺素后,血清LDH、CK和MDA含量升高,心肌坏死,NF κBp65蛋白大量表达,IκBα蛋白质表达减弱,ICAM 1mRNA表达上升。地塞米松使升高的LDH、CK和MDA明显下降,减轻心肌坏死程度,显著抑制NF κBp65蛋白和ICAM 1mRNA表达,IκBα蛋白质表达增强。结论 儿茶酚胺大量释放引起的心肌缺血缺氧损伤中,NF κB和ICAM 1mRNA表达增加,表明抑制NF κB激活,减少ICAM 1mRNA的表达及炎性细胞因子产生是减少心肌缺血缺氧损伤的关键点之一。

MAPK通过调控TLR4/Myd88/NF-κB通路对妊娠期肠梗阻胃肠功能的影响

目的 分析MAPK通过调控TLR4/MyD88/NF-κB通路对妊娠期肠梗阻胃肠功能的影响。方法 选取105只SPF级Wistar大鼠,雌性、雄性分别为70、35只,将所有大鼠同笼放置后,共有33只雌性大鼠妊娠成功,将妊娠成功的8只作为空白组,剩余25只雌性大鼠建立肠梗阻模型,最终建模成功24只,将其分为模型组、上调组、下调组各8只。结果 与模型组相比,上调组MAPK表达量、VIP、GAS、TNF-α、IL-6水平、TLR4、Myd88、NF-κB mRNA表达量及相对表达量上升,MOT、IL-4、IL-10水平下降,下调组MAPK表达量、VIP、GAS、TNF-α、IL-6水平、TLR4、Myd88、NF-κB mRNA表达量及相对表达量下降,MOT、IL-4、IL-10水平上升(P <0.05)。结论 妊娠期肠梗阻大鼠经下调MAPK干预后胃肠功能改善,炎性反应减轻,其机制可能与TLR4/Myd88/NF-κB通路得到抑制有关。

黄芩素通过抑制NF-κB/STAT3/ERK信号通路改善过敏性鼻炎小鼠的炎症反应

目的探究黄芩素是否通过调控核转录因子(NF)-κB、信号传导与转录激活因子(STAT)3、细胞外调节蛋白激酶(ERK),参与影响过敏性鼻炎小鼠的炎症反应,探究NF-κB/STAT3/ERK信号通路作为黄芩素作用靶点的可能性。方法选取72只BALB/c小鼠随机分为健康对照组、过敏性鼻炎组、氯雷他定组、黄芩素处理组、黄芩素+ERK激活组、黄芩素+NF-κB激活组,每组12只。构建过敏性鼻炎小鼠模型,过敏性鼻炎症状评分评估各组的构模情况;苏木素-伊红(HE)染色观察各组鼻黏膜组织的病理学变化;血球计数法检测各组鼻腔灌洗液中各类细胞数量;酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测各组鼻腔灌洗液中白细胞介素(IL)-12、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6水平及血清中OVA特异性免疫球蛋白(Ig)E、IgG1水平;Western印迹法检测鼻黏膜组织中NF-κB/STAT3/ERK信号通路蛋白表达水平。结果健康对照组鼻黏膜组织完整;与健康对照组相比,过敏性鼻炎组鼻黏膜组织具有明显病理学变化,过敏性鼻炎症状评分、鼻腔灌洗液中IL-12、TNF-α、IL-6含量和血清中IgE、IgG1含量显著升高,嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞数量和NF-κB p65、STAT3、ERK蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.05);与过敏性鼻炎组相比,氯雷他定组、黄芩素处理组黏膜组织逐渐恢复,过敏性鼻炎症状评分、鼻腔灌洗液中IL-12、TNF-α、IL-6含量和血清中IgE、IgG1含量显著降低,嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞数量和NF-κB p65、STAT3、ERK的蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05);与黄芩素处理组相比,分别激活ERK、NF-κB通路后,小鼠鼻黏膜组织恢复缓慢,过敏性鼻炎症状评分、鼻腔灌洗液中IL-12、TNF-α、IL-6含量和血清中IgE、IgG1含量显著升高,嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞数量显著升高(P<0.05);氯雷他定组和黄芩素处理组相比,各项指标无显著差异(P>0.05)。结论黄芩素通过调控NF-κB/STAT3/ERK信号通路,抑制NF-κB p65、STAT3、ERK蛋白磷酸化,减少炎症细胞聚集,减轻炎症反应,缓解小鼠过敏性鼻炎。

实验性脊髓空洞前状态蛋白激酶C活性变化对NF-κB、IκB表达的影响

目的探讨蛋白激酶C（PKC）和核转录因子-κB（NF—κB）之间的关系及其在脊髓空洞前状态发病中的作用。方法用新西兰兔56只制作模型，术后1、3、7、14、21d用光镜观察上颈髓病理学演变；应用底物磷酸化法测定胞膜、胞浆PKC活性；应用免疫组化法测定NF—κB和IκB表达变化。结果高岭土组动物于术后第3d上颈髓轻度水肿，7—14d水肿达到高峰期，21d略有缓解；胞膜PKC活性术后1d出现增加（5．67±0．26pmol／mg／min），7—14d达到最高水平（13．27±3．15pmol／mg／min），21d开始回落（8．85±1．56pmol／mg／min），胞浆的PKC活性则呈相反趋势；NF—κB则于术后第1d明显升高（26．08％±2．36％），第7d达高峰（41．37％±3．22％），到两周时开始下降（37．56％±5．11％），IκB与NF-κB表达呈相反变化趋势。结论脊髓空洞前状态形成中出现PKC移位激活，可能通过激活NF—κB即PKC—NF—κB信号转导途径参与了脊髓空洞前状态的一系列病理过程。

山姜素调控PI3K/Akt/NF-κB信号通路对冠心病大鼠心肌损伤的影响

目的:探讨山姜素调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对冠心病(CHD)大鼠心肌损伤的影响。方法:选取健康成年SPF级SD雄性大鼠60只,随机分为空白组、模型组、山姜素小剂量组、山姜素中剂量组、山姜素高剂量组各12只,采用Western blot法检测大鼠PI3K/Akt/NF-κB信号通路蛋白表达,采用ELISA法检测大鼠炎症因子指标[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-18(IL-18)]和氧化应激指标[活性氧(ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)],观察并记录大鼠心肌损伤情况。结果:与空白组比较,模型组的心肌缺血和心肌梗死面积更大(P<0.05),与模型组比较,山姜素小、中、高剂量组的心肌缺血和心肌梗死面积均缩小(P<0.05),且高剂量组的心肌缺血和心肌梗死面积小于山姜素中、小剂量组,中剂量组心肌缺血和心肌梗死面积小于山姜素小剂量组(P<0.05)。与空白组比较,模型组的PI3K、Akt、NF-κB更高(P<0.05),与模型组比较,山姜素小、中、高剂量组的PI3K、Akt、NF-κB均升高(P<0.05),且高剂量组的PI3K、Akt、NF-κB高于山姜素中、小剂量组,中剂量组PI3K、Akt、NF-κB高于山姜素小剂量组(P<0.05)。与空白组比较,模型组的TNF-α、IL-1β、IL-18更高(P<0.05),与模型组比较,山姜素小、中、高剂量组的TNF-α、IL-1β、IL-18均降低(P<0.05),且山姜素高剂量组的TNF-α、IL-1β、IL-18低于中、小剂量组,山姜素中剂量组的TNF-α、IL-1β、IL-18低于山姜素小剂量组(P<0.05)。与空白组比较,模型组的ROS、GSH-Px、MDA更高(P<0.05),与模型组比较,山姜素小、中、高剂量组的ROS、GSH-Px、MDA均降低(P<0.05),且山姜素高剂量组ROS、GSH-Px、MDA低于山姜素中、小剂量组,山姜素中剂量组的ROS、GSH-Px、MDA低于山姜素小剂量组(P<0.05)。结论:山姜素可通过调控PI3K/Akt/NF-κB信号通路改善CHD大鼠心肌炎症和氧化应激状况,进而发挥心肌保护作用。

当归芍药散调控IKK/IκBα/NF-κB通路对老年性聋小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的影响

目的探究当归芍药散调控核转录因子-κB抑制蛋白激酶(IKK)/核因子κB抑制蛋白(IκBα)/核因子-κB(NF-κB)通路对老年性聋小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的影响。方法将48只C57BL/6J小鼠随机分为老年性聋模型组(Model组)、低剂量当归芍药散组(中药-L组,3.2 g/kg生药)、高剂量当归芍药散组(中药-H组,6.4 g/kg生药)和高剂量当归芍药散+IKK/IκBα/NF-κB信号通路激活剂白藜芦醇(RES)组(中药-H+RES组,6.4 g/kg生药+43.33 mg/kg RES),每组12只小鼠;取12只2月龄的C57BL/6J小鼠作为对照组(Control组)。采用听性脑干反应(ABR)检测各组小鼠听阈值;HE染色观察小鼠耳蜗螺旋神经节的病理变化,并对小鼠耳蜗中回与底回的螺旋神经节细胞的数量进行计数;TUNEL染色法检测小鼠耳蜗螺旋神经节细胞的凋亡。ELISA法检测小鼠耳蜗组织中丙二醛(MDA)与超氧化物歧化酶(SOD)水平。qRT-PCR法检测小鼠耳蜗组织中IL-1β、IL-6与TNF-αmRNA水平。Western blot法检测小鼠耳蜗组织IKK/IκBα/NF-κB通路与凋亡相关蛋白的表达。结果Model组小鼠较Control组小鼠8 kHz、16 kHz、24 kH、32 kHz听阈值、耳蜗螺旋神经节组织TUNEL阳性细胞数、耳蜗组织MDA及IL-1β、IL-6与TNF-αmRNA水平、p-IκBα、凋亡蛋白(Bax、cleaved-Caspase-3)表达水平、IKK、NF-κB p65磷酸化水平均显著升高(均P<0.05),耳蜗螺旋神经节细胞数量、SOD水平、IκBα蛋白表达水平显著降低(均P<0.05),耳蜗螺旋神经节细胞的形态异常、排列疏松紊乱,发生空泡化,出现病理学损伤。中药-L组、中药-H组小鼠较Model组相应指标变化程度较轻(均P<0.05)。RES减弱了当归芍药散对老年性聋小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的抑制作用。结论当归芍药散可能通过下调IKK/IκBα/NF-κB通路抑制老年性聋小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡。

花黄色素调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对冠心病大鼠心肌损伤的影响

目的:探讨花黄色素(SY)调控腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/核转录因子-κB(NF-κB)对冠心病(CHD)大鼠心肌损伤的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为正常对照组(NC组,生理盐水)、模型组(Model组,生理盐水)、SY组(100 mg/kg SY)、EX-527组(47 mg/kg EX-527)、SY+EX-527组(100 mg/kg SY+47 mg/kg EX-527),每组12只,持续4周给予相应药物。试剂盒检测血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平和心肌白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;苏木素-伊红(HE)染色法进行心肌组织病理学观察;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测心肌组织AMPK/SIRT1/NF-κB通路相关蛋白表达。结果:与NC组相比,Model组大鼠心肌细胞数量少且排列杂乱,细胞核皱缩,TC、TG、LDL-C、氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)、IL-6、TNF-α水平、心肌细胞凋亡率及NF-κB蛋白水平明显上升(P<0.05),SOD、GSH-Px水平及磷酸化-AMPK(p-AMPK)/AMPK、SIRT1蛋白水平明显下降(P<0.05)。与Model组比较,SY组大鼠心肌细胞数量增多且排列整齐有序,TC、TG、LDL-C、ox-LDL、IL-6、TNF-α水平、心肌细胞凋亡率及NF-κB蛋白水平明显下降(P<0.05),SOD、GSH-Px水平及p-AMPK/AMPK、SIRT1蛋白水平明显上升(P<0.05);而EX-527组以上指标呈现相反趋势。与SY组相比,SY+EX-527组大鼠心肌损伤加重,TC、TG、LDL-C、ox-LDL、IL-6、TNF-α水平、心肌细胞凋亡率及NF-κB蛋白水平明显上升(P<0.05),SOD、GSH-Px水平及p-AMPK/AMPK、SIRT1蛋白水平明显下降(P<0.05)。结论:SY可能通过调控AMPK/SIRT1/NF-κB通路降低氧化应激,减轻炎症反应,对冠心病大鼠心肌损伤起到一定改善作用。

核因子-κB是癌症治疗的好靶点吗?希望和缺陷

核因子κB(NF-κB)转录因子在许多生理过程中,如固有及获得性免疫应答、细胞增殖、细胞死亡和炎症,都起重要作用。目前已很清楚,NF-κB和控制其活性的信号通路的调节异常与癌症的发生发展以及患者对化疗和放疗产生耐受性有关。本文综述了NF-κB与癌症的关系、以NF-κB为靶点的癌症治疗潜能和益处以及这种治疗可能引发的并发症和缺陷。