RNAi沉默p53基因对HeLa细胞核转录因子3表达及其对细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:探讨RNAi沉默p53基因对宫颈癌HeLa细胞核转录因子3(STAT3)的表达,及对HeLa细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:构建3种靶向p53基因的shRNA1~3序列,并转染HeLa细胞,采用逆转录PCR和Western blot检测细胞p53 mRNA和蛋白的表达,以筛选有效沉默p53的shRNA序列。将筛选的序列转染HeLa细胞后,采用逆转录PCR和Western blot检测STAT3 mRNA和蛋白的表达;采用四甲基噻唑蓝法(MTT)检测细胞增殖;采用Transwell检测细胞侵袭能力。结果:构建的3种p53-shRNA均可沉默宫颈癌HeLa细胞p53的表达,尤以shRNA3的沉默效果最好,转染shRNA3后,HeLa细胞p53 mRNA和蛋白的表达量分别为0.23±0.05和0.41±0.11,显著低于未转染组、空质粒组、p53-shRNA1组和p53-shRNA2组(P均<0.05),故后续试验均以shRNA3转染HeLa细胞。将shRNA3序列转染HeLa细胞沉默p53基因后,p53-shRNA3组STAT3mRNA和蛋白表达量分别为1.09±0.21和1.46±0.25,显著高于未转染组(0.53±0.10和10.74±0.14)及空质粒组(0.55±0.11和0.73±0.15)(P均<0.05)。MTT法分析结果显示,在孵育74、36、48和72h时,p53-shRNA3组HeLa细胞增殖能力均显著大于未转染组和空质粒组(P均<0.05)。Transwell法分析结果显示,转染12 h后p53-shRNA3组穿膜细胞数目(59.36±5.33)显著高于未转染组(15.73±1.29)和空质粒组(16.01±1.34)(P均<0.05)。结论:RNAi沉默p53基因能够上调宫颈癌HeLa细胞STAT3的表达,并促进细胞的增殖及侵袭能力。

GRIM-19基因表达及沉默对宫颈癌细胞株SiHa细胞中核转录因子STAT3表达的影响

目的:构建pEGFP-C2-GRIM-19真核表达载体并设计GRIM-19siRNA干扰序列,以探讨GRIM-19表达水平的变化对SiHa细胞中核转录因子STAT3表达的影响。方法:用RT-PCR法从SiHa细胞中扩增出带HindⅢ、BamHI酶切位点的GRIM-19基因片段,将GRIM-19基因片段克隆到增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因真核表达载体pEGFP-C2上。分别将pEGFP-C2-GRIM-19及GRIM-19siRNA通过脂质体转染入SiHa细胞48h后,通过Western-blot检测GRIM-19、STAT3的表达。结果:成功构建pEGFP-C2-GRIM-19真核表达载体,转染后可见GFP表达及STAT3表达降低,转染GRIM-19siRNA后可见GRIM-19表达降低及STAT3表达升高。结论:在宫颈癌细胞株中GRIM-19具有调控STAT3表达水平的作用。

原癌基因Pokemon及核转录因子E2F3在喉鳞癌中的表达及其临床意义

目的探讨POK红系髓性致癌因子(POK erythroid myeloid ontogenic factor,Pokemon)及核转录因子E2F3(E2Ftranscrip tion factor 3)在喉鳞癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化Max Vision二步法观察61例喉鳞癌组织及46例癌旁正常喉黏膜组织中Pokemon及E2F3的表达,并结合患者年龄、性别、原发部位、TNM分期、临床分期及预后之间的关系进行分析。结果 Pokemon及E2F3在喉鳞癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常喉黏膜组织中的阳性表达率(P<0.001);颈淋巴结转移(N+)、中低分化、临床晚期(Ⅲ+Ⅳ)喉鳞癌患者中Pokemon及E2F3表达强度增强(P<0.05);Pokemon及E2F3阳性表达患者的5年累积生存率较阴性表达患者低(P<0.05)。结论 Pokemon与E2F3在喉鳞癌组织中高表达,并与其预后不良相关。两者可能在喉鳞癌发生及恶性进展过程中发挥重要作用,有望成为喉鳞癌发病机制及分子靶向治疗的新指标。

隐丹参酮调节TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路对高糖诱导的心肌细胞焦亡的影响

目的:探讨隐丹参酮调节Toll样受体4/核转录因子κB/NOD样受体蛋白3(TLR4/NF-κB/NLRP3)信号通路对高糖诱导的心肌细胞焦亡的影响。方法:将H9c2细胞分为对照组(正常葡萄糖5.5 mmol/L)、高糖组(葡萄糖33 mmol/L)、2.5μmol/L隐丹参酮组(葡萄糖33 mmol/L+2.5μmol/L隐丹参酮)、5μmol/L隐丹参酮组(葡萄糖33 mmol/L+5μmol/L隐丹参酮)和脂多糖(LPS)组(葡萄糖33 mmol/L+5μmol/L隐丹参酮+1μg/mL TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路激活剂LPS),各组细胞培养在相应的培养基中48 h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率;2′,7′-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)法检测细胞活性氧(ROS)水平;半胱氨酸天冬氨酸酶-1抑制剂(FLICA)-半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1)/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞焦亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞GSDMD蛋白N端片段(GSDMD-N)、TLR4、NLRP3、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、NF-κB p65、Cleaved Caspase-1、Caspase-1蛋白表达。结果:与对照组比较,高糖组H9c2细胞存活率下降(P<0.05),细胞ROS水平、焦亡细胞比例、细胞上清IL-1β和IL-18水平及细胞TLR4、NLRP3、p-NF-κB p65/NF-κB p65、GSDMD-N、Cleaved Caspase-1/Caspase-1蛋白表达升高(P<0.05);与高糖组比较,2.5μmol/L隐丹参酮组、5μmol/L隐丹参酮组H9c2细胞存活率升高(P<0.05),细胞ROS水平、焦亡细胞比例、细胞上清IL-1β和IL-18水平及细胞TLR4、NLRP3、p-NF-κB p65/NF-κB p65、GSDMD-N、Cleaved Caspase-1/Caspase-1蛋白表达降低(P<0.05)。TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路激活剂LPS可逆转隐丹参酮对高糖诱导细胞增殖和焦亡的抑制作用。结论:隐丹参酮可抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路减轻高糖诱导的心肌细胞焦亡。

苦参碱调节IL-6/STAT3/NF-κB信号通路对炎症性肠病大鼠Th17/Treg平衡的影响

目的探讨苦参碱(MT)调节白细胞介素-6(IL-6)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)/核转录因子κB(NF-κB)通路对炎症性肠病大鼠辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的影响。方法按照随机数字表法将SD大鼠分为空白对照组(CK组)、Model组,低、中、高剂量MT组(MT-L组,50 mg/kg;MT-M组,100 mg/kg;MT-H组,200 mg/kg),美沙拉嗪组(MSLM组,0.42 g/kg)、MT-H+rIL-6(IL-6激活剂)组(200 mg/kg+0.05 mg/kg),每组18只。除CK组外,其余组大鼠均采用50 g/L三硝基苯磺酸(20 mg/kg)缓冲液与500 mL/L乙醇按照1∶1比例混匀后灌肠以构建炎症性肠病大鼠模型,建模成功后,分别进行给药处理,每天1次,持续7周。分别在给药1、3、5、7周时对大鼠进行体质量的测量;比较各组大鼠结肠长度的变化;HE染色检测大鼠结肠组织病理损伤;ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-17(IL-17)、IL-10水平;流式细胞术检测大鼠外周血中Th17、Treg细胞比例;Western blotting检测大鼠结肠组织中维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)、叉头框蛋白P3(Foxp3)、IL-6、p-STAT3、p-NF-κB p65蛋白表达。结果与CK组比较,Model组大鼠结肠组织病理损伤严重,体质量(3、5、7周时)、IL-10水平、Treg细胞比例、Foxp3蛋白表达降低,结肠变短,TNF-α、IL-17水平、Th17细胞比例、Th17/Treg比值、RORγt、IL-6、p-STAT3、p-NF-κB p65蛋白表达增高(P<0.05);与Model组比较,MT-L组、MT-M组、MT-H组、MSLM组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);rIL-6减弱了高剂量MT对炎症性肠病大鼠Th17/Treg平衡的促进作用。结论MT可能通过抑制IL-6/STAT3/NF-κB信号通路,促进炎症性肠病大鼠Th17/Treg平衡。

敲低NOD2通过调控(p)NF-κB/STAT3改善肝细胞癌细胞炎症反应

目的 探讨核苷酸结合寡聚化结构域蛋白2(NOD2)对肝细胞癌(HCC)细胞炎症反应的影响和机制。方法 培养HCC细胞。Western blot检测NOD2在HCC细胞和正常肝细胞中的表达水平。利用小干扰RNA(siRNA)建立NOD2的敲低RNA(siNOD2组)用来抑制NOD2的表达,阴性对照为siNC组,使用这二者处理HCC细胞。CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率。Western blot检测NF-κB P65、STAT3、NOD2的表达,并检测磷酸化的(p-)NF-κB P65以及磷酸化的(p-)STAT3的表达水平。ELISA法测定培养HCC细胞培养物上清液中TNF-α、IL-12、IL-6、IFN-γ质量浓度的变化。在siNOD2处理HCC细胞的基础上,用NF-κB/STAT3的激活剂重组人Lipocalin-2(rhLipocalin-2)蛋白进行处理(siNOD2+rhLipocalin-2组),检测细胞增殖率、凋亡率和炎症因子水平。结果 与正常肝细胞相比,HCC细胞中NOD2的表达水平显著上调(P<0.05)。与siNC组相比,siNOD2组的NOD2、p-NF-κB P65及p-STAT3的表达水平均显著下调、细胞增殖率降低,细胞凋亡率增高,且细胞培养物上清液中TNF-α、IL-12、IL-6、IFN-γ水平均下调(均P<0.05)。而与siNOD2组相比,siNOD2+rhLipocalin-2组的p-NF-κB P65及p-STAT3的表达水平均显著上调,细胞增殖率增高,细胞凋亡率降低,且细胞培养物上清液中TNF-α、IL-12、IL-6、IFN-γ水平均上调(均P<0.05)。结论 敲低NOD2通过调控NF-κB/STAT3通路抑制HCC细胞的炎症反应,该结果为HCC治疗提供了一个新的潜在靶点。

基于TLR3/NF-κB信号通路探讨RSV诱导COPD急性加重的分子机制

目的基于Toll样受体(TLR)3/核转录因子(NF)-κB信号通路探讨呼吸道合胞病毒(RSV)诱导慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重的分子机制。方法将SD大鼠分为3组,每组6只。正常组和COPD组用烟熏法建立COPD大鼠模型后,用10%水合氯醛按0.3 ml/100 g体质量经腹腔注射麻醉,每一个鼻孔内滴入0.4μl/g的无病毒培养基;RSV+COPD组用10%水合氯醛按0.3 ml/100 g体质量经腹腔注射麻醉,在每一个鼻孔内滴入0.4μl/g滴度为5×104TCID50/0.1 ml的RSV悬液。以上操作每周重复1次。第8周取肺组织苏木素-伊红(HE)染色观察病理改变;免疫组织化染色检测TLR3在肺组织中的表达,Western印迹检测TLR3、NF-κB p65在肺组织中的蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素(IL)-6和IL-32蛋白水平。结果RSV+COPD组体质量增长比COPD组明显减慢(P<0.05),肺部病理学切片提示炎症明显加重。RSV+COPD组肺组织TLR3的免疫阳性信号较COPD组显著增高,RSV+COPD组肺组织中TLR3、NF-κB p65、IL-6及IL-32蛋白表达较COPD组显著增高(P<0.05)。结论RSV诱发COPD急性加重的机制可能是通过上调TLR3并激活NF-κB信号通路。

欣力康提取物调控STAT3/NF-κB信号通路对膀胱癌细胞增殖、迁移的影响

目的 探讨欣力康提取物调控信号转导和转录激活因子(STAT)3/核因子(NF)-κB信号通路对膀胱癌细胞增殖、迁移的影响。方法 体外培养膀胱癌细胞,设空白对照组和不同浓度的欣力康组。采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测欣力康提取物对细胞增殖能力的影响,采用Transwell检测细胞的侵袭能力,采用划痕实验检测细胞的迁移能力,采用Western印迹检测细胞侵袭、迁移相关蛋白的影响;采用荧光酶报告基因法检测欣力康提取物对信号通路活性抑制率的影响。结果 与对照组相比,不同浓度的欣力康提取物组对膀胱癌细胞均有明显增殖抑制作用,且呈剂量依赖性(P<0.05);与对照组相比,不同浓度欣力康组侵袭细胞数明显较低(P<0.05);与对照组相比,不同浓度欣力康组细胞迁移率明显较低(P<0.05);与对照组相比,欣力康提取物作用细胞后,侵袭和迁移相关蛋白表达明显较低(P<0.05);与对照组相比,不同浓度的欣力康组STAT3/NF-κB信号通路活性抑制率明显较高(P<0.05)。结论 欣力康提取物可以通过抑制STAT3/NF-κB信号通路来抑制膀胱癌增殖和迁移。

Pgp1和FoxP3在结直肠癌中的表达及其与预后的关系

目的探讨P-糖蛋白1(Pgp1)和核转录因子蛋白3(FoxP3)在结直肠癌中的表达及其与预后的关系。方法选取2012年2月至2015年2月我院保存的结直肠癌标本106例,同时选取癌旁组织标本64例作为对照,采用免疫组化染色法检测Pgp1和FoxP3表达,同时根据Pgp1和FoxP3表达情况将患者分为Pgp1和FoxP3双阴性表达(A组),Pgp1单阳性表达(B组)、FoxP3单阳性表达(C组),Pgp1和FoxP3双阳性表达(D组)。结果结直肠癌组织Pgp1和FoxP3蛋白阳性表达率分别为63.21%和43.40%,明显高于癌旁组织(P<0.05);结肠癌Pgp1蛋白阳性表达率为78.95%,明显高于直肠癌(P<0.05);FoxP3表达与患者临床病理特征以及治疗方案无明显关系(P>0.05);B组中位总体生存时间为52个月(95%CI:40.01～63.99),明显高于A组、D组和C组(P<0.05);A组和D组中位总体生存时间为40个月(95%CI:31.20～48.80)和34个月(95%CI:30.74～37.26),明显高于C组的24个月(95%CI:18.56～29.44),比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Pgp1和FoxP3表达与结直肠癌临床病理特征关系较弱,其中仅Pgp1表达与肿瘤位置有一定相关性;Pgp1和FoxP3表达与结直肠癌患者预后有一定关系,其中Pgp1阳性表达,FoxP3阴性表达者预后较好。

幽门螺杆菌感染所致人脐静脉内皮细胞功能异常及炎性反应的作用机制研究

目的探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)通过激活转录激活因子3(STAT3)/核转录因子κB(NF-κB)通路对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)增殖、迁移、凋亡及炎性反应的影响。方法将HUVEC分为对照组(未感染Hp)和Hp感染组(Hp感染复数=25),通过倒置显微镜观察感染Hp的HUVEC形态变化;细胞计数试剂盒8细胞增殖实验和平板克隆实验检测2组HUVEC增殖能力,Transwell实验和划痕愈合实验检测HUVEC的迁移能力,流式细胞术检测HUVEC的凋亡率,实时荧光定量聚合酶链反应检测2组HUVEC中Hp细胞毒素相关基因A、白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)信使核糖核酸表达情况;Western blot检测HUVEC细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、原癌基因(C-Myc)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、B淋巴细胞瘤2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)、STAT3/NF-κB信号通路蛋白表达情况。结果与对照组比较,Hp组细胞增殖、纵向、横向迁移能力明显降低,CyclinD1、PCNA、C-Myc、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达量降低,Bax、磷酸化STAT3/STAT3、磷酸化NF-κB P65/NF-κB-P65蛋白表达量和HUVEC凋亡率升高(P<0.05,P<0.01),炎性因子IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-αmRNA水平升高(2.71±0.05 vs 1.06±0.41,1.42±0.02 vs 0.92±0.11,2.50±0.29 vs 1.00±0.10,5.34±0.57 vs 1.00±0.16,P<0.01)。结论Hp通过激活STAT3/NF-κB通路抑制HUVEC增殖、迁移,并诱导其凋亡和炎性反应的发生。

包虫囊液干预的肝细胞Foxp3与IFITM3表达变化及其与干扰素刺激蛋白相关性分析

目的观察包虫囊液干预的肝细胞核转录因子Foxp3、干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)表达变化并分析其与干扰素刺激蛋白IFITM1、IFITM2、IFIT3、ISG15的相关性。方法从包虫病羊肝脏包囊中抽取囊液,将人肝癌细胞HepG2分为高浓度组、中浓度组、低浓度组及对照组,分别加入1∶10、1∶100和1∶1000浓度比例的囊液及不加囊液,采用Western blotting法及荧光定量PCR法检测各组干预后及低浓度组在干预后0、12、24、36、48、60、72 h细胞中的Foxp3、IFITM3及相关干扰素刺激蛋白IFITM1、IFITM2、IFIT3、ISG15蛋白及mRNA表达,采用Spearman分析Foxp3、IFITM3与IFITM1、IFITM2、IFIT3、ISG15的相关性。结果不同囊液浓度干预下,IFITM1、IFITM2、IFITM3、Foxp3、ISG15蛋白及mRNA表达随着干预囊液浓度降低逐渐升高,IFIT3蛋白表达中浓度组>低浓度组、高浓度组(P均<0.05),IFIT3 mRNA高、中、低浓度组差异无统计学意义。低囊液浓度干预下各时点IFITM1、IFITM2、IFIT3蛋白表达随囊液干预时间延长而降低,IFITM3、ISG15蛋白表达随囊液干预时间延长先升高后降低,Foxp3蛋白表达随囊液干预时间延长而升高;IFITM2、IFIT3、ISG15 mRNA表达随囊液干预时间延长而降低,IFITM3、IFITM1 mRNA表达随囊液干预时间延长先升高后降低,Foxp3 mRNA表达随囊液干预时间延长而升高。Spearman相关分析结果显示,不同囊液浓度干预下Foxp3表达与IFITM3表达呈正相关(P=0.004);Foxp3 mRNA、IFITM3蛋白及mRNA表达与IFITM1、IFITM2、ISG15 mRNA表达均呈正相关(P均<0.05),与IFIT3 mRNA表达无相关性;Foxp3蛋白表达与IFITM1、ISG15蛋白表达呈正相关(P均<0.05),与IFITM2和IFIT3蛋白表达无相关性。低囊液浓度干预下各时点Foxp3表达与IFITM3表达呈负相关(P均<0.05);Foxp3表达与IFITM1、IFITM2、IFIT3、ISG15表达呈负相关;IFITM3表达与IFITM1、IFITM2、IFIT3、ISG15表达呈正相关(P均<0.05)。结论在低浓度包虫囊液干预下,HepG2细胞IFITM1、IFITM2、IFITM3、Foxp3及ISG15表达升高,且Foxp3表达与IFITM3表达呈正相关;随着囊液干预时间的延长,HepG2细胞IFITM1、IFITM2、IFITM3、IFIT3、ISG15表达降低、Foxp3的表达升高,且Foxp3表达与IFITM3表达呈负相关。

栀子苷抑制TLR4/RIP3/NF-κB信号通路对急性胰腺炎大鼠肠损伤的影响

目的研究栀子苷抑制Toll样受体4(TLR4)/受体相互作用蛋白3(RIP3)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对急性胰腺炎(AP)大鼠肠损伤的影响。方法以胰管逆行注射牛磺胆酸钠溶液的方法建立AP大鼠模型,随机分为模型组、栀子苷低剂量(40 mg/kg)组、栀子苷高剂量(80 mg/kg)组、栀子苷(80 mg/kg)+脂多糖(LPS,TLR4激活剂,0.4 mg/kg)组4组(每组12只),另取12只大鼠开腹后仅翻转胰腺,不做其他处理,设为假手术组。以栀子苷、LPS分组对大鼠进行干预处理后,检测大鼠疾病活动指数(DAI)和结肠大体形态损伤评分;检测大鼠肠道通透性,比较荧光素异硫氰酸酯(FITC)葡聚糖浓度;HE染色检测大鼠结肠黏膜组织病理损伤,并进行Chiu评分;酶标仪检测大鼠血清D-乳酸、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、二胺氧化酶(DAO)、白细胞介素(IL)-17、IL-1β与IL-6水平;蛋白免疫印迹实验检测大鼠肠黏膜组织TLR4/RIP3/NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠肠黏膜组织出现病理损伤严重,DAI、结肠大体形态损伤评分、Chiu评分、FITC葡聚糖浓度、血清D-乳酸、ICAM-1、DAO、IL-17、IL-1β与IL-6水平、肠黏膜组织p-NF-κB p65/NF-κB p65及TLR4、RIP3蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,栀子苷低、高剂量组大鼠肠黏膜组织出现病理损伤均减轻,DAI、结肠大体形态损伤评分、Chiu评分、FITC葡聚糖浓度、血清D-乳酸、ICAM-1、DAO、IL-17、IL-1β与IL-6水平、肠黏膜组织p-NF-κB p65/NF-κB p65及TLR4、RIP3蛋白表达水平均降低(P<0.05),高剂量栀子苷对以上指标的改善效果更明显;与栀子苷高剂量组相比,栀子苷+LPS组大鼠肠黏膜组织出现病理损伤加重,DAI、结肠大体形态损伤评分、Chiu评分、FITC葡聚糖浓度、血清D-乳酸、ICAM-1、DAO、IL-17、IL-1β与IL-6水平、肠黏膜组织p-NF-κB p65/NF-κB p65及TLR4、RIP3蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论栀子苷可通过抑制TLR4/RIP3/NF-κB信号而减轻AP大鼠体内炎症,缓解大鼠结肠黏膜病理损伤,修复肠道屏障功能。

老年子宫内膜癌患者组织中环氧合酶2、NF-κB、STAT3表达及意义

目的探讨老年子宫内膜癌患者组织中环氧合酶2、核转录因子(NF)-κB、转录活化因子(STAT)3表达特点及意义。方法选取老年子宫内膜癌患者160例,因子宫良性肿瘤切除子宫80例,收集子宫内膜癌和正常子宫内膜组织标本。免疫组化检测环氧合酶2、NF-κB、STAT3阳性表达情况;RT-PCR和Western印迹检测环氧合酶2、NF-κB、STAT3 mRNA和蛋白表达水平。对子宫内膜癌患者进行为期5年的随访,记录生存情况;入组时收集子宫内膜癌患者的分化程度、国际妇产科联合会(FIGO)分期、淋巴结转移情况、肌层浸润情况。结果子宫内膜癌组织中环氧合酶2、NF-κB、STAT3阳性表达率明显高于正常子宫内膜组织(P<0.01)。子宫内膜癌组织中环氧合酶2、NF-κB、STAT3 mRNA和蛋白表达水平明显高于正常子宫内膜组织(P<0.01)。环氧合酶2、NF-κB、STAT3表达水平在不同分化程度、FIGO分期、淋巴结转移、肌层浸润比较差异有统计学意义(P<0.01);其中中低分化、FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、肌层浸润≥1/2的环氧合酶2、NF-κB、STAT3表达水平明显偏高。环氧合酶2、NF-κB、STAT3阳性表达生存时间明显短于阴性表达者(P<0.01)。多因素Cox回归分析显示,FIGO分期、淋巴结转移、肌层浸润、环氧合酶2、NF-κB、STAT3是老年子宫内膜癌患者预后的独立影响因素。结论老年子宫内膜癌组织中环氧合酶2、NF-κB、STAT3高表达,与病情严重程度和预后水平密切相关。

包虫囊液对干扰素信号TRIF/IFITM3通路的影响

目的 探索包虫囊液干预人源肝细胞(L02)过程中TRIF/IFITM3通路相关蛋白的变化。方法 从感染细粒棘球蚴病的羊肝中获取囊液,用不同比例囊液浓度(1∶10、1∶100和1∶1000)干预肝细胞并设置阴性对照组(未加囊液干预)。采用囊液浓度(1∶1000)干预肝细胞后分别在0、24、48和72 h收集细胞。实时荧光定量PCR检测TRIF/IFITM3通路相关mRNA的表达,Western blot检测TRIF、IRF3、IFITM3、Foxp3的蛋白表达变化。免疫荧光检测IFITM3、Foxp3的表达和定位。Spearman分析TRIF、IFITM3及Foxp3的相关性。结果 Western blot显示囊液浓度(1∶1000)促进TRIF、IRF3、IFITM3蛋白表达,TRIF的相对表达量分别是(0.45±0.09)、(0.54±0.05)、(1.08±0.24)、(1.75±0.31);IFITM3的相对表达量分别是(1.02±0.41)、(1.00±0.16)、(1.24±0.12)、(1.84±0.20)。囊液浓度(1∶1000)刺激肝细胞0、24、48和72 h后,Western blot显示TRIF、IRF3、IFITM3蛋白表达量逐渐下降,而Foxp3表达量增高。TRIF的相对表达量分别是(1.00±0.31)、(1.08±0.19)、(0.90±0.13)、(0.57±0.05);IFITM3的相对表达量分别是(0.80±0.26)、(0.94±0.09)、(0.82±0.19)、(0.54±0.18)。Foxp3的相对表达量分别是(0.70±0.11)、(0.80±0.02)、(0.83±0.03)、(1.08±0.04)。免疫荧光显示,在泡球蚴感染60 d时,小鼠肝脏IFITM3和Foxp3发生共定位。Spearman分析TRIF与IFITM3存在正相关性(r=0.704,P<0.01),TRIF与Foxp3存在负相关性(r=-0.859,P<0.01),IFITM3与Foxp3存在负相关性(r=-0.686,P<0.01)。结论 较低浓度的包虫囊液刺激TRIF/IFITM3通路相关分子表达,进而激活天然免疫的抗病原体功能;随着囊液干预时间增加TRIF/IFITM3受抑制,而Foxp3高表达,促进包虫在宿主体内慢性寄生。

新橙皮苷对非酒精性脂肪性肝炎小鼠NLRP3/NF-κB信号通路的影响

目的探讨新橙皮苷(Neohesperidin,NHP)对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠的治疗作用及其机制。方法24只SPF级C57BL6雄性小鼠随机分为正常组、模型组和NHP组(40mg/kg)。通过喂饲高脂高胆固醇饲料(HFHC)制备NASH小鼠模型,造模同时给予相应药物治疗,12周后进行葡萄糖耐量试验、胰岛素耐量试验,计算小鼠的体重、肝重、肝指数,采集血清和肝组织标本,检测血清中胆固醇(TC),甘油三酯(TG),丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST);蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏中炎症小体3(NLRP3)的蛋白表达及磷酸化核转录因子-κB(NF-κB)的蛋白表达情况;苏木素-伊红(HE)染色和油红O染色观察肝脏病理形态学变化。结果与正常组比较,模型组小鼠血清中TC、TG、ALT、AST含量、肝脏中NLRP3和NF-κB的mRNA和蛋白表达及p-NF-κB的蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,NHP组小鼠血清中TC、TG、ALT、AST含量、肝脏中NLRP3和NF-κB的mRNA和蛋白表达及p-NF-κB的蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。HE染色和油红O染色结果提示其能明显减轻肝脏脂肪变性程度。结论NHP可能通过抑制NLRP3/NF-κB信号通路,减轻炎症反应来治疗NASH。

叉状头/翅膀状螺旋转录因子在食管癌细胞中的表达及临床意义

目的 探讨叉状头/翅膀状螺旋转录因子（Foxp3）在食管癌细胞中的表达及临床意义.方法 采用免疫组织化学法检测103例食管癌患者肿瘤组织中Foxp3蛋白的表达,同时选用5例癌旁组织作为对照.通过对食管癌肿瘤细胞中Foxp3蛋白的表达水平进行H-score评分,并分析其临床意义.结果 免疫组织化学检测结果显示Foxp3蛋白在肿瘤浸润淋巴细胞及肿瘤细胞中主要表达在胞核,在癌旁组织中不表达;统计学分析显示,肿瘤细胞中Foxp3高表达（H-score≥70分）的患者中,肿瘤直径≥3.5 cm患者所占比率显著高于肿瘤细胞中Foxp3低表达（H-score＜ 70分）的患者,差异有统计学意义（x2 =4.267,P ＜0.05）,而肿瘤细胞中Foxp3表达水平与患者其他临床参数无相关（P＞0.05）.结论 核转录因子Foxp3在食管癌组织中表达主要分布在浸润淋巴细胞及肿瘤细胞,肿瘤细胞表达Foxp3在肿瘤进展中有重要意义.

基于NLRP3/NF-κB信号通路探讨针刺孔最配内关治疗急性发作期哮喘的作用

目的 探讨针刺孔最配内关治疗急性发作期哮喘的作用。方法 将SD大鼠随机分为正常组、模型组、沙丁胺醇组、针刺组。观察引喘潜伏期、肺组织病理改变,检测血清IL-1β含量与肺组织核转录因子-κB(NF-κB)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)的mRNA表达。结果 与正常组比较,模型组引喘潜伏期缩短(P<0.01);与模型组比较,沙丁胺醇组与针刺组引喘潜伏期均延长(P<0.01)。与正常组比较,模型组肺组织呈重度异常,肺泡结构欠清晰,支气管管腔狭窄程度严重,见大量炎症细胞浸润;沙丁胺醇组和针刺组肺组织呈中度异常,两组肺泡结构较清晰,支气管管腔狭窄程度较轻,炎症细胞浸润程度较低。与正常组比较,模型组血清IL-1β含量升高(P<0.01);与模型组比较,沙丁胺醇组与针刺组的含量降低(P<0.01,P<0.05)。与正常组比较,模型组NLRP3、NF-κB mRNA表达升高(P<0.01);与模型组比较,沙丁胺醇组与针刺组的表达降低(P<0.05)。结论 针刺孔最配内关能通过调控NLRP3/NF-κB信号通路抑制IL-1β表达,从而减轻气道炎性反应,舒张气道平滑肌痉挛,控制哮喘急性发作。

祛痰活血汤干预大鼠非酒精性脂肪肝及其作用机制研究

目的：通过观察祛痰活血汤对非酒精性脂肪肝模型大鼠肝功、血脂等血液生化指标、肝组织病理形态学改变以及肝细胞核转录因子KB（NF—v,B）表达的影响，探讨其对非酒精性脂肪肝（nonalcoholicfattyliverdisease，NAFLD）的干预及作用机制。方法：取健康sD大鼠60只，雄性，适应性喂养1周，随机分为2组，正常对照组（A组）及造模组，其中正常组10只，普通饲料喂养；造模组50只，高脂饲料喂养。造模组经过高脂饲料喂养2周后，将其再次分组并开始按大鼠的体重进行灌胃给药。造模组50只大鼠分为模型对照组（B组）、祛痰活血汤低剂量治疗组（L组）、祛痰活血汤中剂量治疗组（M组）、祛痰活血汤高剂量治疗组（H组）、阳性对照组（凯西莱组）共5组，每组10只。B组、A组不用任何药物，灌胃10ml／kg的生理盐水。各组实验动物自由进食，每2周称重，并根据情况调整药品干预剂量。造模组在分组灌胃给药的第8、9、10周周末，随机抽取1～2只大鼠处死，抽血观察生化指标（天门冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）等）以及肝组织病理学变化。第10周末处死所有大鼠，检测肝功能、血脂等，并取肝脏组织制备石蜡切片，观察肝组织病理学变化以及检测肝细胞NF—I（B表达的情况。结果：与正常对照组比较，模型对照组大鼠血清肝功能和血脂指标，肝脏病理炎症活动度、肝细胞NF—td3的表达水平均有显著的升高、加重，差异具有统计学意义（P〈0．01）；祛痰活血汤三个剂量组、阳性对照组与模型对照组比，各项指标均有不同程度的减轻或者降低，结果具有统计学意义（P〈O．05）。结论：祛痰活血汤能有效逆转非酒精性脂肪肝大鼠肝组织脂肪变性程度，改善肝功能、血脂等血液生化指标，具有调节脂质代谢紊乱，降低肝组织NF-Id~表达的作用，这可能是其防治NAFLD的作用机制之一。

脑脉通对老龄大鼠脑缺血再灌注海马齿状回细胞增殖分化的影响及量效作用

目的:从海马齿状回(dentate gyrus,DG)细胞增殖和分化的变化揭示脑脉通抗老年脑缺血再灌注损伤的保护机制及其量效关系。方法:采用MCAO方法制作脑缺血(缺血3h再灌注12d)动物模型,观察脑脉通(大、中、小剂量)对脑缺血再灌注大鼠神经症状积分、脑组织含水量、病理变化、海马齿状回细胞增殖、分化及其变化的影响。结果:老龄模型组脑组织含水量、神经症状积分、Brdu阳性细胞、BrdU/NeuN双标阳性细胞、BrdU/GFAP双标阳性细胞数目均高于假手术组;脑脉通组(大、中、小剂量)、尼莫地平组脑组织含水量、神经症状积分均低于模型组,脉通组(大、中、小剂量)、尼莫地平组Brdu阳性细胞、BrdU/Ne-uN双标阳性细胞数目高于模型组,BrdU/GFAP双标阳性细胞数目低于模型组;脑脉通中剂量组神经症状积分、Brdu阳性细胞数目高于尼莫地平组;脑脉通中剂量组大鼠神经症状积分、脑组织含水量、病理变化、均低于脑脉通小剂量组,Brdu阳性细胞、BrdU/NeuN双标阳性细胞数目高于脑脉通小剂量组。结论:脑缺血可激活大鼠DG神经干细胞增殖;脑脉通拮抗脑缺血再灌注损伤机制与其促进DG区神经干细胞增殖和分化有关,且以脑脉通中剂量效果最全面。

包虫囊液干预下宿主限制性因子IFITM3和Foxp3之间的关联研究

目的探究在包虫囊液干预过程中IFITM3与Foxp3之间的相互影响。方法小鼠细粒棘球蚴病造模后收集肝脏组织,通过HE染色、免疫组织化学方法检测肝脏组织中IFITM3和Foxp3的表达状况。采用Western blot和荧光定量PCR(Real-time PCR)测定未加囊液浓度(阴性组)、1∶10、1∶100和1∶1000共4组不同囊液浓度比例干预HEK293T细胞后IFITM3和Foxp3的蛋白表达量和mRNA相对表达量。用Spearman进行IFITM3和Foxp3相关性分析。结果HE染色后,可见CE肝脏组织的病灶;免疫组化结果显示随着细粒棘球蚴感染时间的延长,IFITM3在肝脏的表达量逐渐降低,Foxp3的表达量逐渐升高。在感染第2 d IFITM3的表达最高而Foxp3的表达量最低高,感染300 d IFITM3的表达量最低,Foxp3的表达量最高。Western blot显示,在4组囊液浓度比例干预下,IFITM3的灰度值分别是(1.421±0.162)、(0.798±0.091)、(0.936±0.118)、(1.269±0.101);Foxp3的灰度值分别是(0.614±0.034)、(0.761±0.020)、(0.919±0.019)、(1.115±0.177),说明IFITM3和Foxp3随着囊液干预浓度的降低表达量逐渐升高。Real-time PCR结果显示,在4组囊液浓度比例干预后IFITM3 mRNA相对表达水平分别是(1.00±0.322)、(0.605±0.321)、(0.736±0.113)、(2.384±0.049);Foxp3 mRNA相对表达水平分别是(1.000±0.153)、(1.321±0.316)、(1.675±0.376)、(3.848±1.645),说明随着囊液干预浓度的降低,IFITM3和Foxp3mRNA的相对表达量逐渐升高。Spearman相关分析结果显示,不同浓度囊液干预后,细胞中的IFITM3与Foxp3在mRNA相对表达和蛋白表达均成正相关。结论在细粒棘球蚴感染过程中,低浓度的囊液刺激会使IFITM3和Foxp3的表达量增高,并且IFITM3与Foxp3呈正相关性,说明宿主限制性因子IFITM3通过与核转录因子Foxp3存在关联,从而与获得性免疫发生联系。