核转录因子NFAT5对LPS致伤小鼠肾集合管细胞iMCD3的影响

目的研究核转录因子激活T细胞核因子(NFAT5)在脓毒症并发急性肾损害调节炎症瀑布效应的作用。方法体外培养小鼠肾集合管细胞iMCD3,用LPS(10 ng/ml)刺激细胞,同时加入NFAT5 siRNA,12 h后,qRT-PCR和ELISA检测炎症因子TNFα和MCP-1的基因水平和蛋白水平,Western blot检测细胞核内NFAT5蛋白表达水平,并用染色质免疫共沉淀(ChIP)分别检测NFAT5和TNFα及MCP-1启动子片段结合的富集倍数。结果LPS(10 ng/ml)刺激肾集合管细胞导致炎症因子TNFɑ和MCP-1的转录合成显著升高(P<0.05),利用siRNA沉默NFAT5后,TNFα和MCP-1的转录及合成均下降。虽然使用Western blot未能检测到LPS刺激iMCD3其核内NFAT5蛋白表达水平增加,但是使用ChIP探测到NFAT5可以分别与TNFɑ和MCP-1启动子片段结合,开启炎症因子转录及蛋白合成。结论核转录因子NFAT5参与调节脓毒症并发肾损害的炎症瀑布效应,通过直接结合肾小管细胞中炎症因子TNFα和MCP-1的启动子发挥独特作用。

2型糖尿病合并骨质疏松患者血清miR-9-5p和NFAT5的表达及其与骨折的关系

目的:2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)是一种多病因代谢性疾病,骨质疏松(osteoporosis,OP)和骨折是其常见并发症。本研究旨在探讨T2DM合并OP患者血清中微RNA(microRNA,miR)-9-5p和核转录因子5(nuclear factor of activated T-cells 5,NFAT5)的表达水平,以及其与骨折的关系。方法:收集郑州市第七人民医院就诊的T2DM合并OP患者184例(OP组),另纳入同时间段单纯T2DM患者184例(T2DM组)。实时聚合酶链反应检测血清miR-9-5p、NFAT5表达水平。随访2年,根据新发骨折情况,将T2DM合并OP患者分为骨折组(43例)与无骨折组(141例)。Pearson法分析血清miR-9-5p、NFAT5分别与空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、I型前胶原N末端前肽(procollagen I N-terminal propeptide,PINP)、空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)、胰岛素抵抗指数(insulin resistance index,HOMA-IR)、骨密度T值、I型胶原羧基端β降解产物(type I collagen hydroxy terminal peptideβdegradation products,β-CTX)相关性,以及miR-9-5p与NFAT5的相关性;采用受试者操作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线评估血清miR-9-5p、NFAT5对T2DM合并OP患者骨折的预测价值,多因素logistic回归分析T2DM合并OP患者骨折的影响因素。结果:OP组血清miR-9-5p水平高于T2DM组,NFAT5水平低于T2DM组(均P<0.05)。与无骨折组相比,骨折组患者糖尿病病程、FPG、HOMA-IR、β-CTX、miR-9-5p水平均升高,而PINP、NFAT5水平均降低(均P<0.05)。骨折患者血清miR-9-5p与NFAT5水平呈负相关(r=−0.716,P<0.05);miR-9-5p水平与FPG、HOMA-IR、β-CTX均呈正相关,与PINP呈负相关(均P<0.05),而血清NFAT5水平与FPG、HOMA-IR、β-CTX均呈负相关,与PINP呈正相关(均P<0.05)。血清miR-9-5p、NFAT5单一预测T2DM合并OP患者骨折风险的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.878和0.868,联合预测的AUC为0.933。β-CTX、miR-9-5p为T2DM合并OP患者骨折的危险因素,PINP、NFAT5为T2DM合并OP患者骨折的保护因素(均P<0.05)。结论:T2DM合并OP患者血清miR-9-5p表达水平升高,NFAT5表达水平降低,两者与骨折发生均有一定关系,miR-9-5p联合NFAT5对骨折预测价值更高。

核转录因子-5在海水淹溺性肺水肿中的作用及机制

目的探讨核转录因子-5(NFAT5)在海水淹溺性肺水肿中表达的变化及作用。方法40只180～200 g SD大鼠随机分为五组:对照组(NG),海水灌注1 h,2 h,3 h,4 h组,每组8只大鼠。灌注组经气管插管灌注4 ml/kg海水。不同时间点将大鼠处死,并将肺组织取出。计算肺湿干比(W/D)、伊文思蓝法检测肺通透指数(LPI)、逆转录-聚合酶链(RT-PCR)检测肺组织中NFAT-5及相关渗透压基因表达变化,同时进行病理形态学检查。结果肺组织病理形态学显示,海水灌注组肺组织出血,水肿,肺泡间隔明显增厚;灌注1 h组的W/D值较对照组W/D值显著增高(P<0.01);灌注组肺通透指数显著高于对照组(P<0.01),W/D值,LPI随时间的增加而逐渐减轻。RT-PCR结果表明,海水淹溺后NFAT5及渗透压保护相关基因的mRNA表达迅速增高,4 h后达到最高峰。结论在海水淹溺发生后,NFAT5表达显著增高,可进一步刺激有机渗透物质的增加,通过在高渗条件下维持细胞内外渗透压的平衡,减轻肺水肿,可能是治疗肺水肿的有效新途径。