高体积分数氧暴露下新生早产大鼠肺组织长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1和核转录相关因子-2表达变化的意义

目的观察高体积分数氧（高氧）暴露下新生早产大鼠肺组织的长链非编码RNA（lncRNA）转移相关肺腺癌转录本1（MALAT1）和核转录相关因子－2（Nrf2）的动态表达，探讨MALAT1和Nrf2的表达变化在高氧肺损伤中的作用。方法孕21 d SD大鼠行剖宫产，80只早产大鼠喂养24 h后按随机数字表法分为空气组和高氧组。空气组早产大鼠置于室内空气中饲养[吸入氧体积分数（FiO2）＝210 mL/L]，高氧组早产大鼠置于常压氧箱（FiO2〉850 mL/L）中饲养，2组新生早产大鼠分别于空气或高氧暴露后第1、4、7、10、14天处死并收集肺组织标本。采用苏木精－伊红染色法观察新生早产大鼠肺组织病理变化；采用实时定量聚合酶链反应（qPCR）及Western blot技术分别检测MALAT1、Nrf2的RNA和蛋白表达水平。结果与空气组比较，高氧组新生早产大鼠肺组织肺泡化程度降低，辐射状肺泡计数（RAC）在第1天减少，但差异无统计学意义（P〉0.05），第4天[（3.14±0.23）个]、第7天[（5.25±0.38）个]、第10天[（4.41±0.44）个]、第14天[（3.41±0.13）个]均显著减少，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。与空气组比较，高氧组新生早产大鼠肺组织中MALAT1的RNA相对表达量在第1天（0.527±0.124）显著减弱，第4天（0.538±0.128）、第7天（0.748±0.071）均显著增强，第10天（0.519±0.081）显著减弱，差异均有统计学意义（均P〈0.05），第14天时减弱，但差异无统计学意义（P〉0.05）。与空气组比较，高氧组新生早产大鼠肺组织中Nrf2 mRNA的表达在第1天（0.791±0.031）显著减弱，第4天（0.977±0.189）、第7天（1.369±0.100）、第10天（1.094±0.104）均显著增强，差异均有统计学意义（均P〈0.05），第14天表达减弱，但差异无统计学意义（P〉0.05）。与空气组比较，高氧组新生早产大鼠肺组织中游离态Nrf2蛋白在各时间点表达均增强，Nrf2－Keap1结合型蛋白在各时间点表达均减弱。高氧作用下，MALAT1表达与RAC、Nrf2均呈正相关（r＝0.517、0.533，均P〈0.001）。结论肺组织损伤程度随高氧暴露时间延长逐渐加重，MALAT1表达与肺损伤程度及Nrf2水平具有相关性，提示MALAT1与Nrf2相关信号通路可能共同参与新生早产大鼠高氧肺损伤的发病过程。

高氧暴露和小分子干扰RNA对A549细胞核转录相关因子-2与NAD(P)H:醌氧化还原酶1表达的影响及其与细胞凋亡的关系

目的研究高氧暴露和小分子干扰RNA(siRNA)对A549细胞中细胞核转录相关因子2(Nrf2)、NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)表达的影响,探讨其在高氧肺损伤中的作用及其与细胞凋亡的关系。方法将体外培养A549细胞随机分为4组:Ⅰ组为无干扰空气组;Ⅱ组为无干扰高氧组;Ⅲ组为Nrf2 siRNA转染空气组;Ⅳ组为Nrf2 siRNA转染高氧组;将Ⅱ组、Ⅳ组持续暴露于常压高浓度氧(950 mL/L O2,50 mL/L CO2)中;Ⅰ组、Ⅲ组仍置于50 mL/L CO2培养箱中。通过预实验从目的基因靶点siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3(分别加入对应脂质体复合物)中筛选出抑制Nrf2效率最高的Nrf2 siRNA,应用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、Western blot分别检测4组Nrf2、NQO1的mRNA及蛋白表达水平,应用免疫荧光和激光共聚焦显微镜分析干扰Nrf2后A549细胞中Nrf2、kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)、抗氧化物反应元件蛋白的分布,观察各组细胞凋亡情况。结果1.Nrf2 siRNA可抑制Nrf2表达,siRNA-1组、siRNA-2组、siRNA-3组Nrf2 mRNA表达均被抑制,其中siRNA-1组的抑制效率最高(80.57%)。2.Ⅱ组Nrf2、NQO1 mRNA的相对表达量分别为4.553±0.498和5.866±0.582,与Ⅰ组相比,mRNA及蛋白表达量显著增高,细胞凋亡率[(21.67±0.75)%]增加,差异均有统计学意义(均P<0.01)。3.Ⅳ组Nrf2、NQO1 mRNA的相对表达量分别为0.937±0.057和0.789±0.058,与Ⅱ组相比,mRNA及蛋白表达显著减弱,细胞凋亡率[(35.83±0.42)%]进一步增高,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论高氧暴露和siRNA导致A549细胞中Nrf2和NQO1表达异常,提示Nrf2和NQO1参与高氧肺损伤的发病过程;Nrf2、NQO1可能在高氧所致肺损伤及细胞凋亡中发挥保护作用。

核转录相关因子2—抗氧化反应元件信号通路在认知障碍相关疾病中的作用

核转录相关因子2-抗氧化反应元件(Nrf2-ARE)信号通路是机体内最重要的抗氧化应激通路之一。近年来研究发现,在血管性痴呆、阿尔兹海默病、帕金森病等认知障碍相关的疾病中,机体可以通过激活Nrf2-ARE信号通路来增加内源性的抗氧化能力,最终使认知功能得到改善。因此,本文旨在对Nrf2-ARE信号通路的组成、调节及其与认知障碍相关疾病的关系作一综述。

核转录因子红细胞系相关因子-2干扰质粒构建及鉴定

目的设计及构建小鼠核转录因子红细胞系相关因子-2(Nrf2)基因的干扰质粒,并筛选出效果最好的干扰质粒。方法设计3组针对Nrf2基因的核糖核酸干扰(RNAi)序列,应用基因重组技术克隆入载体中构建短发夹RNA(shRNA),分别为shRNA1、shRNA2及shRNA3,通过基因测序鉴定,经Lipofectamine2000转染至BV2细胞,实时PCR检测Nrf2 mRNA的表达,Western Blot法检测Nrf2蛋白的表达。结果测序表明,克隆入载体中的Nrf2干扰序列及读码框完全正确,实时PCR及Western Blot显示shRNA3干扰效果最强。结论成功构建小鼠Nrf2的有效干扰质粒,为Nrf2信号通路在脑卒中领域的功能研究奠定了基础。

miR-370、Bmi-1、Nrf2在肺癌中的表达及其与临床病理特征的相关性

目的分析微小核糖核酸-370(miR-370)、B细胞特异性莫洛氏鼠白血病病毒插入位点1(Bmi-1)、核转录相关因子-2(Nrf2)在肺癌中的表达及其与患者临床病理特征的关系。方法选择我院收治的73例肺癌患者的癌组织标本,并保留同期38例肺癌患者距肿瘤边缘5 cm的癌旁组织标本。比较miR-370、Bmi-1、Nrf2在肺癌组织及癌旁组织中的表达情况,分析miR-370、Bmi-1、Nrf2表达与肺癌临床病理特征及预后的关系。结果肺癌组织miR-370高表达率低于癌旁组织,Bmi-1、Nrf2阳性表达率高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-370、Bmi-1、Nrf2表达在不同性别、年龄、肿瘤大小及细胞分型中的差异无统计学意义(P>0.05),在淋巴结转移、TNM分期中的差异有统计学意义(P<0.05)。miR-370高表达患者生存率明显高于低表达患者,Bmi-1、Nrf2阳性表达患者生存率明显低于阴性表达患者(P<0.05)。COX回归模型分析显示,淋巴结转移、TNM分期、Bmi-1及Nrf2是影响预后的危险因素,miR-370是保护因素。结论 miR-370、Bmi-1、Nrf2表达与肺癌患者临床病理特征相关,能够反映肿瘤的恶性生物学行为,可作为肺癌患者预后评估的参考指标。

基于Nrf2/HO-1通路探究虎杖苷对妊娠期糖尿病大鼠的治疗效果及作用机制

[目的]探究虎杖苷(PD)对妊娠期糖尿病(GDM)大鼠的治疗效果及作用机制。[方法]高脂高糖喂养雌性SD大鼠8周,雌雄同笼制备孕鼠84只,随机分为7组(12只/组):空白组、模型组、PD低、中、高剂量组(30、75、150 mg/kg的PD)、阳性对照组(200 mg/kg盐酸二甲双胍)、抑制剂组[150 mg/kg的PD+30 mg/kg的核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)通路抑制剂ML385],除空白组外,其余各组在妊娠5 d后,腹腔注射链脲佐菌素(35 mg/kg)复制GDM大鼠模型。测量各组孕鼠体质量及空腹血糖(FBG);酶联免疫吸附(ELISA)法测定大鼠空腹胰岛素(FINS)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)、胰岛素敏感指数(ISI);全自动生化分析仪分析大鼠血清中血脂水平;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠胰腺组织损伤;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测各组大鼠胰腺组织中Nrf2/HO-1信号通路蛋白表达。[结果]与空白组比较,模型组大鼠体质量、FBG、FINS、HOMA-IR、IL-6、IL-1β、TNF-α水平、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、游离脂肪酸(FFA)含量升高,ISI、HOMA-β、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量、胰岛数量、Nrf2、HO-1蛋白表达水平降低(P<0.05);与模型组比较,PD低、中、高剂量组大鼠体质量、FBG、FINS、HOMA-IR、IL-6、IL-1β、TNF-α水平、TC、TG、LDL-C、FFA含量降低,ISI、HOMA-β、HDL-C含量、胰岛数量、Nrf2、HO-1蛋白表达水平升高(P<0.05);与阳性对照组比较,PD高剂量组大鼠上述指标差异均无统计学意义(P>0.05),提示与阳性对照药物疗效相当;Nrf2/HO-1通路抑制剂ML385可以逆转高剂量PD对GDM大鼠的保护作用(P<0.05)。[结论]PD通过降低血糖、血脂和炎症反应来改善GDM,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。

黄酮类中药单体干预Nrf2/HO-1通路治疗糖尿病微血管并发症研究进展

糖尿病微血管并发症是糖尿病最主要的慢性并发症。研究表明,核转录因子红系2相关因子2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)信号通路是治疗糖尿病微血管并发症的重要靶点。黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、异黄酮、二氢异黄酮、查耳酮、黄烷醇、花青素等黄酮类中药单体可以通过调控Nrf2/HO-1信号通路发挥缓解氧化应激、减少炎症反应、抑制细胞凋亡、减轻纤维化、改善血流动力学等作用,从而达到治疗糖尿病视网膜病变、糖尿病心肌病、糖尿病肾病、糖尿病周围神经病变等多种糖尿病微血管并发症的目的。

血清Nrf2、HO-1与帕金森病患者氧化应激损伤、睡眠障碍的相关性

目的研究血清核转录因子红细胞系相关因子-2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)与帕金森病患者氧化应激损伤、睡眠障碍的相关性。方法采用前瞻性研究方法,以该院2019年9月至2022年8月诊断并进行治疗的帕金森病患者120例作为观察组,按严重程度分为早期组患者46例,中期组患者41例,晚期组患者33例。根据匹兹堡睡眠质量指数分析,睡眠障碍患者55例。另选取同期进行健康体检的志愿者120例作为对照组,比较观察组以及对照组、不同严重程度患者、不同睡眠质量患者的Nrf2、HO-1、标丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)水平进行比较。结果观察组患者的Nrf2(t=5.185,P<0.001)、MDA(t=10.858,P<0.001)显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),HO-1(t=8.119,P<0.001)、GSH-Px(t=229.560,P<0.001)、SOD(t=94.466,P<0.001)显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);不同严重程度帕金森病患者的Nrf2、HO-1、MDA、GSH-Px、SOD水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),通过两两比较,患者的Nrf2、MDA从高到低依次为晚期组、中期组及早期组,HO-1、GSH-Px、SOD水平从高到低依次为早期组、中期组及晚期组(P<0.05);睡眠障碍组患者的Nrf2(t=2.442,P=0.016)、MDA(t=2.612,P<0.001)显著高于对照组,HO-1(t=8.094,P<0.001)、GSH-Px(t=62.301,P<0.001)、SOD(t=57.735,P<0.001)显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);相关性分析显示,血清Nrf2与睡眠障碍、MDA呈正相关(P<0.001),与血清GSH-Px、SOD呈负相关(P<0.001),血清HO-1与睡眠障碍、MDA呈负相关(P<0.001),与血清GSH-Px、SOD呈正相关(P<0.001)。结论血清Nrf2、HO-1与帕金森病患者氧化应激损伤、睡眠障碍显著相关,可作为帕金森病疾病进展的重要参考。

Nrf2-ARE通路与肿瘤耐药的研究进展

化疗是肿瘤临床治疗的主要手段,但在治疗过程中,肿瘤细胞易对化疗药物产生耐药性。肿瘤细胞耐药性已成为临床治疗的瓶颈。肿瘤耐药机制涉及多个方面,与药物转运相关蛋白、代谢酶系统的异常表达,DNA损伤的异常修复,肿瘤细胞自噬及凋亡异常等因素有关,其中调控细胞氧化应激反应的核转录相关因子2-抗氧化反应元件(Nrf2-ARE)通路在肿瘤耐药性的产生中发挥关键作用。Nrf2-ARE通路与肿瘤耐药的研究对肿瘤耐药性逆转和肿瘤的治疗有重要指导作用,是未来抗肿瘤分子靶向药物研究的重要发展方向。

砷对人永生化角质形成细胞核转录因子红细胞系-2p45相关因子-2和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1基因表达的影响

目的探讨不同剂量亚砷酸钠对人永生化角质形成细胞(human keratinocytes cell,Ha Ca T)Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)和核转录因了红细胞系-2 p45相关因子-2(Nrf2)基因表达的影响。方法将Ha Ca T细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、1.30、3.25、6.50μmol/L的亚砷酸钠培养基中培养24、48、72 h。采用流式细胞仪检测Ha Ca T细胞凋亡率,采用实时荧光定量(real-time quantitative PCR)检测Ha Ca T细胞中Nrf2、Keap1 m RNA的表达水平。结果与对照组相比,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒24 h后Ha Ca T细胞的凋亡率降低,而3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒48、72 h后Ha Ca T细胞的凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05);且随着亚砷酸钠染毒时间的延长和染毒剂量的升高,Ha Ca T细胞的凋亡率均呈上升趋势。与对照组相比,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒24、48、72 h和3.25μmol/L亚砷酸钠染毒24 h后Ha Ca T细胞中Nrf2 m RNA的表达水平均增高,而3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒72 h后Ha Ca T细胞中Nrf2 m RNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05);且随着亚砷酸钠染毒时间的延长和染毒剂量的升高,Ha Ca T细胞Nrf2 m RNA的表达水平均呈下降趋势。与对照组相比,1.30、3.25μmol/L亚砷酸钠染毒72 h和3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒48 h后Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平均增高,差异有统计学意义(P<0.05)。随着亚砷酸钠染毒时间的延长,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈波动性上升,3.25μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈逐渐上升趋势,6.50μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈先上升后下降;随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,24、72 h时Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈下降趋势,而48 h时Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈上升趋势。结论亚砷酸钠可抑制Ha Ca T细胞的生长,诱导凋亡和角化的发生,其机制可能与Nrf2和Keap1基因的表达有关。

针刺对急性脑缺血大鼠沉默信息调节因子2相关酶1和核转录因子-κB蛋白的影响

目的:观察针刺对急性脑缺血大鼠缺血脑组织沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT 1)和核转录因子-κB(NF-κB)的影响,探讨针刺治疗脑缺血的可能机制。方法:SD大鼠100只,随机均分为正常组、假手术组、模型组、非穴位组、穴位组,每组20只。采用开颅电凝大脑中动脉法复制急性脑缺血模型,穴位组针刺"百会"和"水沟"穴,非穴位组针刺"百会"和"水沟"穴旁开5mm处,每次30min,共治疗2次。TTC染色法测定大脑梗死面积,放射免疫法检测血清及缺血脑组织中白介素(IL)-1β、IL-6和IL-8含量,免疫印迹法检测缺血脑组织SIRT 1和NF-κB p 65蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠脑梗死范围明显,血清及缺血脑组织IL-1β、IL-6和IL-8含量显著升高,缺血脑组织SIRT 1蛋白表达减少,NF-κB p 65蛋白表达增加,差异具有统计学意义(均P<0.01)。与模型组相比,穴位组大鼠梗死区域变小,血清及缺血脑组织IL-1β、IL-6和IL-8含量降低,缺血脑组织SIRT 1蛋白表达升高,NF-κB p 65蛋白表达降低,差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论:针刺能有效调节急性脑缺血大鼠炎性损伤,显著降低血清及缺血脑组织IL-1β、IL-6和IL-8含量,可能与调节SIRT 1/NF-κB通路有关。

Nrf2/HO-1通路在氧化应激和炎性反应中的作用

氧化应激是指体内氧化与抗氧化作用失衡,倾向于氧化,导致中性粒细胞炎性浸润、蛋白酶分泌增加、产生高活性分子,如活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)和活性氮自由基(reactive nitrogen species,RNS)以及大量氧化中间产物,如白三烯、血栓素A 2等促炎介质,从而引起细胞凋亡和炎性反应。近年来研究表明,核转录因子红系2相关因子2/血红素加氧酶-1(nuclear factor erythroid-2-related factor 2/heme oxygenase 1,Nrf2/HO-1)通路可以通过抗炎、抗氧化等作用抵抗氧化应激损伤。因此,有效调控Nrf2/HO-1通路可成为治疗氧化应激性疾病和炎性疾病的重要靶点。

中药有效成分基于Nrf2/HO-1信号通路改善糖尿病视网膜病变的研究进展

糖尿病视网膜病变(DR)是指由长期高血糖引起的视网膜局部微血管病理改变,是威胁成人视力健康的重要原因。DR的发生机制多样,其中氧化应激贯穿全过程。核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)是协调编码抗氧化和解毒酶基因表达的关键转录因子,血红素加氧酶-1(HO-1)是其诱导的一种重要的抗氧化酶,因此Nrf2/HO-1通路是氧化应激的关键环节。该通路被激活后可通过发挥抗炎、抗氧化等作用延缓DR的进展,是治疗DR的潜在靶点,但其具体作用机制未来仍需深入研究。

基于Keap1/Nrf2/ARE通路的中医药干预骨关节炎研究进展

骨关节炎是临床上常见的一种慢性筋骨疾病,其病程缠绵,反复发作,发病机制复杂,与氧化应激反应相关。Keap1/Nrf2/ARE信号通路是细胞氧化应激反应中的关键通路,其调控的下游抗氧化蛋白/酶在细胞防御保护中发挥重要作用。骨关节炎的病程中Nrf2、NQO1、HO-1等关键蛋白表达受到抑制,组织抗氧化及抗炎能力减弱,软骨细胞损伤,软骨结构破坏。目前西医的治疗侧重于缓解症状,但不能逆转骨关节炎的进展,急需有效的非手术策略来延缓骨关节炎的病理过程。近年来,大量基础及临床试验表明Keap1/Nrf2/ARE通路是中医药治疗骨关节炎的潜在靶点之一。基于骨关节炎本虚标实的病机,中医药以补虚、化瘀、解毒等法调控Keap1/Nrf2/ARE信号通路,在发挥抗氧化及抗炎作用同时,还能调节软骨细胞外基质的稳态,发挥对骨关节炎的治疗作用。本文总结了中医药靶向干预Keap1/Nrf2/ARE信号通路防治骨关节炎的作用机制,旨在为中医药更合理的运用临床防治骨关节炎提供理论基础。

血必净注射液对硫化氢急性中毒大鼠肺组织氧化应激及Nrf2基因表达的干预作用

目的探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)急性中毒大鼠肺组织氧化应激水平及核转录因子红系相关因子-2(nu-clear factor E2-related factor 2,Nrf2)的改变及血必净注射液(XBJ)对其的影响。方法将清洁级SD大鼠96只随机分为正常对照组(n=8),XBJ对照组(n=8),H2S染毒组(n=40)和XBJ干预组(n=40)。化学比色法检测肺组织中丙二醛(MDA)浓度、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-Px)活力及谷胱甘肽(GSH)含量,RT-PCR法检测Nrf2的基因表达,观察肺组织病理学改变。结果与正常对照组比较,H2S染毒组大鼠肺组织在2、6、12h SOD、CAT活力和GSH含量及在2、6、12、24h GSH-Px活力明显降低(P<0.01或P<0.05),在2、6、12、24h MDA含量明显升高(P<0.01)。与H2S染毒组比,XBJ干预组大鼠肺组织在2、6、12h CAT活力和GSH含量及在2、6、12、24h SOD和GSH-Px活力明显升高(P<0.01或P<0.05),在2、6、12h的MDA含量明显降低(P<0.01或P<0.05)。H2S染毒组肺组织大鼠肺组织在2、6、12h Nrf2 mRNA表达(0.240±0.012,0.167±0.011,0.146±0.010)明显高于正常对照组(0.130±0.009)(P<0.01或P<0.05);与H2S染毒组比,XBJ干预组大鼠肺组织在6、12、24、48h Nrf2 mRNA表达(0.244±0.008,0.279±0.013,0.349±0.012,0.257±0.008)明显升高(P<0.01)。光镜下,H2S染毒组在24 h肺组织损害明显,XBJ干预组肺损伤较H2S染毒组有所减轻。结论氧化应激损伤是H2S中毒急性肺损伤主要机制之一,XBJ可上调Nrf2的基因表达,抑制氧自由基产生,纠正氧化还原失衡,对肺脏起保护作用。

人参皂苷Rd通过下调Nrf2表达调控H460细胞的增殖和凋亡

核转录因子红细胞系-2p45相关因子-2(nuclear factor erythroid-2p45-related factor 2,Nrf2)是细胞应对外界应激的主要调控因子,通过调控一系列细胞保护酶,维持细胞稳态。然而,在许多肿瘤细胞中Nrf2过度激活,导致肿瘤细胞获得增殖优势并产生化疗耐药,因此,靶向抑制Nrf2是肿瘤增敏治疗的一种新思路。人参皂苷Rd是人参皂苷中的重要活性成分,具有显著的抗肿瘤作用。本研究以不同浓度的人参皂苷Rd处理人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)H460细胞,利用CCK-8法检测细胞活力;倒置显微镜观察H460细胞的形态变化;流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;RT-qPCR和Western印迹检测的Nrf2及其下游调控基因的表达情况;此外通过转染Nrf2-siRNA下调H460细胞中Nrf2的表达,观察其对人参皂苷Rd增敏的影响。结果显示,与对照组相比,人参皂苷Rd能够抑制H460细胞增殖活力,诱导细胞G0/G1期阻滞,促进细胞凋亡,具有剂量依赖性(P<0.05);此外,人参皂苷Rd能够下调Nrf2,醌氧化还原酶1[NAD(P)H:quinoneoxidoreductase,NQO1],谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基(glutamate--cysteine ligase catalytic subunit,GCLC)和调节亚基(glutamate--cysteine ligase regulatory subunit,GCLM)的mRNA和蛋白质水平,同时增强H460细胞对化疗药的敏感性(P<0.05),而转染Nrf2-siRNA后,人参皂苷Rd的增敏作用减弱。表明人参皂苷Rd可以抑制非小细胞肺癌H460细胞活性并增敏化疗,其机制可能是通过抑制Nrf2信号通路来实现。

中药活性成分调控Nrf2/HO-1信号通路防治糖尿病肾病的研究现状

糖尿病肾病(DKD)是由糖尿病(DM)引起的一种高发的微血管并发症,持续的高糖使机体产生氧化应激反应,核转录因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)能够通过抑制肾小球系膜细胞外基质的积累、抑制肾小管上皮细胞发生上皮-间充质转化、抑制铁凋亡等途径发挥抗炎抗氧化作用,改善肾功能的损伤,延缓DKD的进程。本文从Nrf2/HO-1通路及其相关因子着手,对Nrf2/HO-1通路与DKD的关系以及中药活性成分通过Nrf2/HO-1信号通路对DKD的影响作一综述,以期为新药的开发提供依据。

补阳还五汤对糖尿病肾病小鼠Nrf2/HO-1通路的作用及机制研究

目的:探讨补阳还五汤是否通过调控核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)通路抑制糖尿病肾病(DKD)小鼠氧化应激,从而发挥减轻肾组织损伤,延缓肾脏纤维化的作用。方法:将73只C57BL/6小鼠随机分为造模组63只和正常对照组10只,造模组小鼠高糖高脂饲料喂养6 w后,连续5 d以50 mg/kg腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病模型后继续高糖高脂饲料喂养8 w,当小鼠出现尿蛋白阳性则DKD模型制备成功。随机将DKD小鼠分为模型对照组、罗格列酮7.05×10^(-4)g/kg组、补阳还五汤3.21、6.41、12.82 g/kg组,各组灌胃相应药物或生理盐水,1次/d,连续8 w。药物干预期间监测小鼠体质量、血糖、尿量、24 h尿蛋白定量(24 h-UTP),给药结束后采用马松(Masson)染色及高碘酸希夫(PAS)染色观察小鼠肾组织病理学改变;测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力;荧光探针标记法检测小鼠肾组织活性氧簇(ROS)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Nrf2、HO-1蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组小鼠体质量下降,血糖升高,尿量、24 h-UTP增加,肾小球囊壁增厚,有明显的胶原纤维增生,肾小球内系膜增生,肾小球周围可见糖原颗粒沉积,SOD、CAT活力降低,ROS水平增加,Nrf2、HO-1蛋白表达下调,TGF-β1、α-SMA、FN、CollagenⅠ蛋白表达上调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,补阳还五汤各组及罗格列酮7.05×10^(-4)g/kg组小鼠体质量增加,尿量、24 h-UTP降低,肾组织病理学损伤可见不同程度改善,SOD、CAT活力明显增加,ROS水平明显降低,Nrf2、HO-1表达明显上调,TGF-β1、α-SMA、FN、CollagenⅠ表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论:补阳还五汤可通过激活Nrf2/HO-1通路抑制氧化应激,缓解DKD小鼠肾纤维化,减轻小鼠病理损伤。

岩藻黄素对小鼠非酒精性脂肪性肝病的修复作用

目的:探究岩藻黄素对高脂饮食诱导的C57BL/6小鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的修复作用及其机制。方法:将52只C57BL/6小鼠随机分成4组,正常组14只,其余为实验组,实验组给予8周的高脂饮食喂养之后,再分为模型组、岩藻黄素低剂量和高剂量组,给予灌胃6周,每日1次。每周记录小鼠的体质量,第14周结束时小鼠禁食12 h后全部处死。后续分别测定各组小鼠血清中谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)活力,总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(lowdensitylipoproteincholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(highdensitylipoproteincholesterol,HDL-C)、游离脂肪酸、脂联素和瘦素含量;检测肝脏组织匀浆液中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH-Px)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、白细胞介素-1β、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子α含量;透射电镜下观察肝脏的组织病理学变化并采用蛋白免疫印迹法检测肝脏中5’-单磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine 5’-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)、核因子红系2相关因子2(nuclear factor erythroid2-related factor 2,Nrf2)和Toll样受体4(toll-like receptors 4,TLR4)信号通路蛋白表达情况。结果:与模型组相比,岩藻黄素组中的TC、TG、LDL-C、ALT、AST显著降低(P<0.05),HDL-C显著升高(P<0.05),且降低了瘦素水平,增加了脂联素分泌,GSH-Px、SOD、CAT升高(P<0.05),MDA降低(P<0.05),且炎症因子的水平降低。苏木精-伊红染色、油红O染色、糖原染色和透射电镜结果显示岩藻黄素组肝脏组织学结构好转,趋近于正常组。蛋白免疫印迹法结果显示岩藻黄素治疗可上调AMPK信号通路中磷酸化5’-单磷酸腺苷活化蛋白激酶和过氧化物酶体增殖物激活受体α、磷酸化乙酰辅酶A羧化酶、肉碱脂酰转移酶1,下调固醇调节元件结合蛋白-1c、脂肪酸合酶表达;抑制Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1/Nrf2信号通路中Keap-1的水平,提高Nrf2及其下游抗氧化蛋白血红素氧合酶1、NAD(P)H-醌氧化还原酶1和谷氨酸-半胱氨酸连接酶的表达水平;下调TLR4信号通路中TLR4蛋白的表达,抑制髓样分化因子88、磷酸化人核因子κB抑制蛋白α和磷酸化核因子κB蛋白(p65)的表达。结论:岩藻黄素可通过调节脂质代谢、减少氧化应激和调节炎症等途径修复高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病。

EGCG通过Nrf2/ARE信号通路改善鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的研究

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的作用并探讨可能的机制。方法将SH-SH5Y细胞分为对照组(正常培养细胞)、模型组(鱼藤酮诱导的氧化损伤模型)和低、中、高剂量实验组(分别给予10、20、40μmol·L^(-1)EGCG)。用小干扰RNA(siRNA)干扰细胞核转录因子红细胞系-2p45相关因子2(Nrf2)表达,将干扰后细胞分为si-对照组(细胞正常培养)、si-模型组(鱼藤酮诱导的氧化损伤模型)、si-低剂量实验组、si-中剂量实验组(分别给予10、20μmol·L^(-1)EGCG)。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞存活率;用乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤情况;用还原型辅酶Ⅱ法检测总谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性;用硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)活性;用荧光探针法检测活性氧(ROS)水平;用蛋白质印迹法检测Nrf2、酪氨酸羧化酶(TH)蛋白表达水平。结果对照组、模型组和低、中、高剂量实验组细胞存活率分别为(100.00±1.86)%、(45.33±4.25)%、(74.21±4.54)%、(80.30±3.62)%和(70.12±4.61)%;LDH水平分别为(100.00±3.67)、(222.56±11.46)、(125.57±20.52)、(129.60±6.29)和(149.51±11.99)U·L^(-1);ROS相对荧光强度分别为1.00±0.00、1.78±0.16、1.48±0.15、1.13±0.09和1.11±0.13;MDA活性分别为(2.11±0.34)、(6.39±0.55)、(4.84±0.36)、(3.96±0.46)和(4.43±0.43)nmol·mg^(-1);GPx活性分别为(668.80±32.79)、(533.03±57.72)、(718.30±73.78)、(735.03±87.25)和(797.98±66.76)mU·mg^(-1);TH蛋白相对表达水平分别为0.33±0.04、0.21±0.03、0.30±0.01、0.31±0.03和0.27±0.01;模型组上述指标与对照组比较,高剂量实验组上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。对照组、模型组和低、中、高剂量实验组Nrf2蛋白表达水平分别为0.26±0.07、0.28±0.02、0.39±0.05、0.54±0.09和0.53±0.02,低、中、高剂量实验组与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。si-对照组、si-模型组和si-低剂量实验组、si-中剂量实验组的细胞存活率分别为(100.00±5.73)%、(50.69±5.48)%、(61.95±8.15)%和(60.59±9.07)%;ROS相对荧光强度分别为1.00±0.05、1.48±0.10、1.30±0.15和1.28±0.22。si-模型组与si-对照组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论EGCG可能通过Nrf2/ARE信号通路对鱼藤酮所致SH-SY5Y细胞氧化损伤发挥保护作用。