核转运蛋白α2和细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C在肝细胞癌组织中的表达及相关性

目的研究核转运蛋白α2(KPNA2)和细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(CDC25C)在肝细胞癌组织中的表达及相关性。方法回顾性收集山西省人民医院2012年9月至2015年10月手术切除的肝细胞癌石蜡包埋组织标本100例,另选取20例癌旁组织石蜡包埋标本。采用免疫组织化学染色检测肝细胞癌和癌旁组织中KPNA2和CDC25C的表达情况,采用Pearson相关性方法分析KPNA2和CDC25C表达的相关性,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线。结果肝细胞癌组织中KPNA2、CDC25C高表达率均高于癌旁组织(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,KPNA2与CDC25C的表达呈正相关(r=0.317,P=0.002)。将患者分为KPNA2高表达组(53例)和低表达组(47例),CDC25C高表达组(65例)和低表达组(35例)。KPNA2高表达组和CDC25C高表达组甲胎蛋白>400μg/L、肿瘤直径>5 cm比例均高于相应的低表达组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,KPNA2高表达组和CDC25C高表达组总生存率均低于相应的低表达组(Log-rankχ^(2)=3.887、10.339,P=0.049、0.001)。结论肝细胞癌组织中KPNA2、CDC25C表达增加,且二者表达呈正相关。KPNA2、CDC25C高表达患者总生存率较低。

宫颈癌样本中核转运蛋白IPO7表达及其在患者预后评估中的作用

目的探讨核转运蛋白(IPO7)在宫颈癌中的表达及其作为患者预后分子标志物的临床价值。方法收集2017年3月至2019年3月间于该院接受根治性子宫切除和盆腔淋巴结清扫的114例FIGOⅠB-ⅡA期宫颈癌患者的手术标本。通过免疫组织化学染色对宫颈癌组织中核转运蛋白IPO7表达进行分析,并根据表达水平将患者分为高、低表达组。评估IPO7表达与宫颈癌临床病理特征及总体生存(OS)的关系。采用单、多变量Cox回归模型进一步明确IPO7表达对宫颈癌患者OS的独立预测价值。结果核转运蛋白IPO7主要表达于细胞核或细胞膜,在114例宫颈癌组织中的阳性表达率为51.8%(59/114)。IPO7高表达组患者盆腔淋巴结转移(37.1%vs.17.3%,χ^(2)=5.485,P=0.019)和淋巴血管间隙侵犯(21.0%vs.7.7%,χ^(2)=3.928,P=0.047)比例较低表达组更加频繁,FIGOⅡA期的比例明显更高(54.8%vs.23.1%,χ^(2)=11.853,P=0.001)。生存分析结果表明,IPO7高表达患者5年OS率低于低表达患者(χ^(2)=6.206,P=0.013)。此外,单、多变量Cox回归分析发现,IPO7高表达和FIGO分期是ⅠB-ⅡA期宫颈癌患者预后不佳的独立预测因素,其风险比分别是2.814(95%CI:1.044~7.588,P=0.041)和2.660(95%CI:1.081~6.548,P=0.033)。结论核转运蛋白IPO7在宫颈癌中的高表达与侵袭性肿瘤特征及患者不良预后相关,有望成为宫颈癌预后评估与治疗的潜在分子标志。

出核转运抑制剂的抗肿瘤临床转化研究进展

真核生物由于双层核膜的存在,蛋白及大分子物质需依赖核质转运受体进行跨核膜转运。核输出蛋白1(exportin1,XPO1)是最重要的出核转运受体之一,负责多种蛋白和RNAs的出核转运。XPO1往往在肿瘤细胞中过量表达,导致多种抑癌基因蛋白及生长调节蛋白亚细胞定位及功能的紊乱,从而促进了肿瘤的发生发展。XPO1不仅可作为肿瘤患者预后判断的指标,还是抗肿瘤治疗的潜在靶标。近年来,一系列XPO1小分子抑制剂的研发,尤其是高效低毒的SINE系列抑制剂的抗肿瘤临床研究,揭示了XPO1抑制剂在治疗难治性、耐药性、转移复发性血液恶性肿瘤及实体肿瘤的独特疗效,并引起广泛关注。本文就出核转运抑制剂的临床转化研究进展进行综述。

核转运蛋白α2基因沉默对黑色素瘤细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 基于肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库探讨核转运蛋白α2(KPNA2)在黑色素瘤中的表达及KPNA2基因沉默后对黑色素瘤细胞增殖、侵袭的影响。方法 通过TCGA数据库检索黑色素瘤组织中KPNA2 mRNA表达水平及其与患者预后的关系,分析黑色素瘤中KPNA2的共表达基因并对基因进行基因本体论(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。检测黑色素瘤细胞系中KPNA2表达水平,选择KPNA2高表达细胞系A375,瞬时转染小干扰RNA敲低KPNA2的表达。采用CCK-8法、Transwell实验和蛋白印迹法(Western blot)分析KPNA2基因沉默对黑色素瘤细胞系A375增殖、侵袭能力和磷酸化P53(p-P53)蛋白表达水平的影响。结果 黑色素瘤组织中KPNA2 mRNA相对表达水平为6.439(5.800, 6.958),高于正常组织的4.035(1.726, 3.538),差异有统计学意义(P<0.001)。KPNA2高表达患者中位生存时间为63.9个月,短于KPNA2低表达患者的104.6个月,差异有统计学意义(P=0.011)。GO、KEGG富集分析显示,黑色素瘤中KPNA2共表达基因涉及的信号通路主要包括P53信号通路、细胞循环等,涉及的细胞组分包括细胞间桥等,生物学过程包括细胞循环周期等,分子功能包括DNA复制起点结合等。KPNA2在黑色素瘤细胞系A375、A875和SK-MEL-28中均有表达,且在A375细胞系中表达量更高,故选用A375细胞进行后续研究。CCK-8法检测结果显示,培养72、96 h后,KPNA2基因沉默后的A375细胞增殖能力低于空白对照细胞和空载细胞,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell实验结果显示,KPNA2基因沉默后的A375细胞侵袭能力低于空白对照细胞和空载细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。Western bolt结果显示,KPNA2基因沉默后的A375细胞中p-P53蛋白表达水平高于空白对照细胞和空载细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 KPNA2 mRNA在黑色素瘤中显著高表达,且与患者的不良预后有关。KPNA2基因沉默可促进抑癌基因P53的磷酸化,从而调控P53信号通路参与黑色素瘤细胞的增殖和侵袭。

细胞因子和生长因子信号转导途径中信号蛋白分子的核转运机制

信号蛋白分子的入核及出核转运是细胞因子和生长因子信号转导途径中的重要环节 .核定位序列 (NLS)是信号蛋白分子上与入核转运相关的氨基酸序列 .核孔复合物 (NPC)、核转运蛋白importin和能量供应体Ran TC4在入核转运过程中也发挥了重要作用 .另外 ,很多细胞因子和生长因子或其受体上所含有的NLS序列也具有核定位功能 ,并可能通过“伴侣机制”参与其他信号蛋白分子的入核转运 .

核转运蛋白基因2在乳腺癌发生发展中的作用

核质转运参与多种细胞生物学进程,如基因表达、细胞周期进展、细胞凋亡以及信号转导等。分子量大于40000的蛋白质通过核孔复合体主要依靠核转运蛋白。核转运蛋白基因2(KPNA2)是核胞质转运蛋白α家族的七个成员之一,在大分子的核转运中起至关重要的作用。大分子物质的核转运通过促进肿瘤细胞进展和恶性细胞转化而改变细胞表型。KPNA2在乳腺癌肿瘤组织中的表达上调,且KPNA2的异常表达与患者的预后差相关,提示KPNA2在肿瘤形成和进展过程中扮演重要角色。

心肌肥大时细胞核被膜核苷三磷酸酶活性及mRNA出核转运的变化

目的：探讨心肌肥大时心肌细胞ｍ ＲＮＡ 出核转运率及核被膜核苷三磷酸酶（ ＮＴＰａｓｅ） 活性的变化。方法：采用腹主动脉缩窄法复制大鼠心肌肥大模型，密度梯度离心法制备心肌细胞核被膜，观察心肌肥大时对心肌ＮＴＰａｓｅ 活性和成熟ｍ ＲＮＡ 出核转运速率的影响。结果：早、晚期肥大组心肌细胞核被膜ＮＴＰａｓｅ 最大反应速率以ＡＴＰ 为底物时较对照组增加２５ ％ ～６２ ％ （ Ｐ＜ ０ ．０１） ，以ＧＴＰ 为底物时增加８ ％ ～４４ ％ （ Ｐ＜ ０ ．０１） ，其中晚期肥大组ＮＴＰａｓｅ 最大反应速率增加幅度低于早期组。早期肥大组细胞核被膜ＮＴＰａｓｅ Ｋｍ 值不变，晚期组ＮＴＰａｓｅ Ｋｍ 值下降，以ＡＴＰ 和ＧＴＰ 为底物时晚期肥大组Ｋｍ 值分别下降２２ ％ 和８６ ％ 。早期肥大组１０ ｍｉｎ 心肌细胞核ｍ ＲＮＡ 出核转运率以ＡＴＰ 或ＧＴＰ 启动反应时分别较对照组增加６８ ％ （ Ｐ＜ ０－０１） 或７８ ％ （ Ｐ＜ ０ ．０１） ，晚期肥大组增加幅度不如早期组大，仅增加２７ ％ 和２１－７ ％ （ Ｐ＜ ０－０１） 。结论：大鼠心肌肥大组细胞核被膜ｍ ＲＮＡ 出核转运率的增加可能是心肌肥大时蛋白质合成增加的一个重要原因，而这种ｍＲＮＡ

原花青素二聚体B_2对大鼠滑膜细胞NF-κB核转运及炎症因子表达的影响

目的通过观察原花青素二聚体B2(procyanidins di-mer B2,PCB2)对大鼠滑膜细胞NF-κB核转运及相关炎症因子表达的影响,探讨其抗炎的分子机制。方法免疫荧光法观察NF-κB/p65在细胞中的定位,RT-PCR检测PCB2对诱导细胞的COX-2 mRNA表达,Western blot分析COX-2蛋白含量变化,ELISA测定各处理组细胞上清液中IL-1β、VEGF的含量变化。结果 TNF-α(10μg.L-1)诱导RSC-364细胞NF-κB从细胞质转运至细胞核,50μmol.L-1 PCB2明显抑制NF-κB/P65核转运;PCB2剂量依赖性抑制COX-2基因和蛋白的表达;PCB2下调了TNF-α诱导的IL-1β、VEGF的水平。结论 PCB2能有效抑制COX-2、IL-1β及VEGF的表达,其机制可能与抑制TNF-α诱导的NF-κB核转运,抑制NF-κB活化有关。

CDK2蛋白质分子结构与其入核转运过程关系的初步分析(英文)

应用重组技术构建野生型及缺失型CDK2基因的真核表达载体 ,分别使野生型及缺失型CDK2蛋白与增强型绿色荧光蛋白 (Enhanced greenFluorescentProtein ,EGFP)形成融合蛋白。通过脂质体介导的方法将载体转染人宫颈癌细胞系HeLa和中华仓鼠卵巢细胞系CHO ,经过细胞周期同步化处理后于荧光显微镜下观察EGFP的亚细胞定位以示踪野生型及缺失型CDK2基因的表达。结果表明 ,野生型CDK2基因的表达产物定位于细胞核 ,而两种缺失型CDK2基因分别编码的CDK2蛋白N 端 1～ 2 0 1及 98～ 2 98多肽均主要定位于细胞质。以上结果提示 ,CDK2蛋白序列中不含有与核定位直接相关的信号 ,其入核过程可能是由其N 端 1～ 97及 2 0 2～ 2 98多肽范围内的部分氨基酸共同形成高级结构 ,并依赖此高级结构与其他含有入核信号的蛋白形成复合物 ,从而被带动进入细胞核的。

大鼠心肌细胞核钙调素入核转运与核钙调节关系的探讨

最近发现,钙调素作为细胞内钙受体,除了调节胞浆的多种功能之外,可能还参与胞浆信号向核内快速传递。本研究观察大鼠心肌细胞核对钙调素的入核转运与钙浓度的关系,并初步探讨其调节机制。大鼠心肌细胞核采用差速离心和密度梯度离心分离提纯。用荧光分光光度计测定荧光标记钙调素向细胞核转入量发现,大鼠心肌细胞核对核外的CaM向核孔转运量具有[Ca^(2+)]浓度依赖性,随核外[Ca^(2+)]浓度的增加而增加(P<0.001),在[Ca^(2+)]浓度为10^(-3)mol/L时,ryanodine受体的拮抗剂rutheniumred和cADP ribose受体拮抗剂8-Br cADP ribose显著抑制CaM的细胞核孔转运(分别降低20％和18％,P<0.05),而IP_3受体拮抗剂heparin和Ca^(2+)-ATPase抑制剂thapsigargin抑制CaM的细胞核孔转运更显著(分别降低90％和89％,P<0.001)。上述结果表明心肌细胞核对CaM的向核转运,受核外[Ca^(2+)]和核钙摄取、释放所调节。

缺血/再灌注损伤对心肌细胞核膜NTPase活性和mRNA出核转运的影响

目的 :观察家免心肌缺血 /再灌注 (I/R)损伤时心肌细胞核膜核苷三磷酸酶 (NTPase)动力学及mRNA出核转运的变化。方法 :制备家兔离体心脏I/R模型 ,密度梯度离心法制备心肌细胞核膜 ,按Tiffany等的方法测定NT Pase活性及mRNA的转运率。结果 :心肌细胞核膜NTPase在以ATP或GTP为底物时 ,与对照组比较 ,I/R组最大反应速率 (Vmax)分别降低 2 6 %及 2 2 % (P <0 .0 1)。Km值分别升高 5 4%及 72 % (P <0 .0 1) ;而缺血组Vmax及Km值较对照组无明显差异。以ATP或GTP启动反应时I/R组 10min内心肌细胞核mRNA转出率分别较对照组降低 2 7%及 32 % (P <0 .0 1) ;而缺血组与对照组相比并无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :心肌缺血 /再灌注损伤时 ,心肌细胞核膜受损 ,核膜上NTPase活性降低 ,导致细胞核膜mRNA出核受阻 ,从而可能影响蛋白质的合成表达。

芳香烃受体及其核转运蛋白融合表达载体的构建与序列鉴定

目的:为用基因工程的方法人工表达芳香烃受体(AhR)及芳香烃受体核转运蛋白(ARNT),构建了融合蛋白的表达载体。方法:抽提C57BL/6J小鼠肝脏总RNA后采用RT-PCR的方法扩增得到芳香烃受体及其核转运蛋白的全长序列。在DNA测序确定其正确性之后,连入表达载体并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经氨苄青霉素筛选阳性克隆,提取质粒进行酶切分析。结果:成功构建了芳香烃受体及其核转运蛋白的重组表达载体。结论:载体构建成功是基因工程制备芳香烃受体及其核转运蛋白的前提,并为进行二恶英毒性机制及生物学检测方法的研究奠定了基础。

体内转录的多聚腺苷酸加速外源基因mRNA的出核转运

目的:探索体内转录的短多聚腺苷酸[poly(A)]对外源基因mRNA的表达及出核转运的影响。方法:构建依赖于H1启动子体内转录的poly(A)载体,用脂质体转染方法将其与外源绿色荧光蛋白(GFP)基因表达质粒导入MCF-7细胞,采用qPCR和Western印迹分别检测GFP在mRNA和蛋白水平的表达情况,并通过体外实验检测体内转录的poly(A)对GFP mRNA的加尾影响;采用qPCR法考察16种内源基因的mRNA水平;将其与p53表达质粒共转染MCF-7细胞后,采用MTT法检测细胞增殖情况。结果:在MCF-7细胞中,依赖于H1启动子转录的poly(A)能够加速外源GFP mRNA的poly(A)加尾,促进其从细胞核向细胞质输出,从而提高12 h内GFP的表达量,对内源基因mRNA水平没有影响;它还能加速外源p53基因的表达。结论:建立了通过体内转录poly(A)从而加速外源基因表达的策略,可能对基因治疗或快速研究某个特异基因的功能具有重要的应用价值。

胞核中核转运受体蛋白Karyo-pherin alpha 2水平与胃癌预后的关系研究

目的探讨核转运受体蛋白Karyopherin alpha 2(KPNA2)水平与胃癌患者各临床病理参数及预后的关系。方法选取2010年1月至2014年11月浙江省台州医院行手术切除的胃癌患者肿瘤石蜡包埋标本103例,制成组织芯片,使用免疫组化法检测胃癌及癌旁组织与正常组织中KPNA2与p53的表达情况。分析KPNA2表达与胃癌患者各项临床病理参数及预后的关系,分析KPNA2与p53表达的关系。结果胃癌组织细胞核中KPNA2阳性率高于癌旁组织、正常组织。KPNA2表达与患者年龄、肿瘤大小、神经侵犯、脉管内癌栓、肿瘤的浸润深度、淋巴结有无远处转移、TNM分期等均相关(均P<0.05),与患者性别、组织学分级、组织学分类、淋巴结转移、切缘情况、Lauren分型等均无关(均P>0.05)。KPNA2核表达阳性组患者的生存时间低于阴性组(P<0.05)。此外KPNA2核表达与p53在蛋白水平和mRNA水平上相关(均P<0.05)。结论KPNA2核表达与胃癌临床病理参数及预后较差相关,与p53表达相关,提示KPNA2可能是胃癌患者的其中一个预后分子标志物以及潜在治疗靶点。

肿瘤相关蛋白分子核转运机制研究进展

信号分子的核转运是多种信号传导通路的基础。肿瘤的发生和发展常与多种信号蛋白异常的亚细胞定位相关,因此阐明肿瘤相关蛋白的核转运机制对于研究肿瘤的发病机制和开发新的疗法至关重要。本文介绍了核转运系统的基本组成,并对多种重要的肿瘤相关蛋白的核转运机制进行综述。

基于癌症基因组图谱数据库分析芳香烃受体核转运体样2在肺腺癌中的表达及其预后意义

目的研究芳香烃受体核转运体样2(ARNTL2)在肺腺癌及其癌旁组织中的表达及临床意义。方法从癌症基因组图谱数据库下载337例肺腺癌组织(肺腺癌组)与59例癌旁组织(癌旁对照组)RNA seq数据及对应的肺腺癌患者临床数据。通过单因素分析,比较ARNTL2表达与肺腺癌患者预后的关系,并通过Cox比例风险模型进行多因素分析,判断影响肺腺癌患者预后的独立危险因素。结果ARNTL2在肺腺癌组中的表达高于癌旁对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析结果显示,肺腺癌患者的年龄、Stage分期和N分期是影响ARNTL2表达的相关因素(P<0.05)。生存预后分析结果显示,ARNTL2表达与肺腺癌患者总生存期存在相关性(P=0.001)。单因素分析结果显示,Stage分期和ARNTL2表达是影响肺腺癌患者总生存期的相关因素(P<0.05)。Cox比例风险模型结果显示,Stage分期和ARNTL2表达是肺腺癌患者总生存期的独立危险因素(P<0.05)。结论ARNTL2可能通过多种途径促进肺腺癌的发生发展,进而影响肺腺癌患者的预后生存。因此,ARNTL2可作为肺腺癌患者的预后标志物或潜在治疗靶点。

流感病毒感染中NP蛋白的核转运

流感病毒ＮＰ蛋白在流感病毒感染中起到重要的作用，ＮＰ是ｖＲＮＰ（ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＲＮＰ．核糖核蛋白颗粒）的骨架结构，参与ＲＮＡ的转录。它在细胞浆中合成，被转运到细胞核中组装成ｖＲＮＰ，然后被转运出细胞核进入细胞浆进行病毒颗粒的组装。本文就ＮＰ蛋白的核转运机制作一综述。

Nrf2出核转运机制及意义的研究进展

核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2-related factor 2,Nrf2)是C'n'C转录因子家族成员之一,在各种组织细胞中广泛表达,是细胞调节抗氧化应激反应的重要转录因子。近年来研究发现Nrf2完成抗氧化应激基因诱导后快速降解与其转录激活同样重要,而Nrf2的出核转运是在细胞质中快速降解的前提。文中就目前Nrf2出核转运机制的研究进展作一综述。

植物细胞质介导GFP-NLS蛋白入核转运的HeLa细胞系统的建立

细胞核作为细胞中重要的遗传物质存储、复制和转录的结构,涉及大量信息和物质的传输活动,尤其是蛋白质的入核转运一直以来都是研究的热点问题之一。本研究证明,植物细胞质可以有效应用于动物细胞体系研究蛋白质入核转运。本文利用病毒SV40抗原蛋白中的核定位信号(nuclear localization signal,NLS)标记绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP),通过拟南芥细胞质的介导,利用He La细胞核建立研究蛋白质入核转运的半细胞体系。结果显示,植物细胞质结合NLS片段能改变GFP在He La细胞核内外的分布,实现对目标蛋白入核过程的介导,使GFP-NLS最后定位于细胞核内。这也意味着通过He La细胞建立起的半细胞体系能为蛋白质入核转运研究提供一个有效的研究体系。