核转运蛋白α2和细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C在肝细胞癌组织中的表达及相关性

目的研究核转运蛋白α2(KPNA2)和细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(CDC25C)在肝细胞癌组织中的表达及相关性。方法回顾性收集山西省人民医院2012年9月至2015年10月手术切除的肝细胞癌石蜡包埋组织标本100例,另选取20例癌旁组织石蜡包埋标本。采用免疫组织化学染色检测肝细胞癌和癌旁组织中KPNA2和CDC25C的表达情况,采用Pearson相关性方法分析KPNA2和CDC25C表达的相关性,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线。结果肝细胞癌组织中KPNA2、CDC25C高表达率均高于癌旁组织(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,KPNA2与CDC25C的表达呈正相关(r=0.317,P=0.002)。将患者分为KPNA2高表达组(53例)和低表达组(47例),CDC25C高表达组(65例)和低表达组(35例)。KPNA2高表达组和CDC25C高表达组甲胎蛋白>400μg/L、肿瘤直径>5 cm比例均高于相应的低表达组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,KPNA2高表达组和CDC25C高表达组总生存率均低于相应的低表达组(Log-rankχ^(2)=3.887、10.339,P=0.049、0.001)。结论肝细胞癌组织中KPNA2、CDC25C表达增加,且二者表达呈正相关。KPNA2、CDC25C高表达患者总生存率较低。

宫颈癌样本中核转运蛋白IPO7表达及其在患者预后评估中的作用

目的探讨核转运蛋白(IPO7)在宫颈癌中的表达及其作为患者预后分子标志物的临床价值。方法收集2017年3月至2019年3月间于该院接受根治性子宫切除和盆腔淋巴结清扫的114例FIGOⅠB-ⅡA期宫颈癌患者的手术标本。通过免疫组织化学染色对宫颈癌组织中核转运蛋白IPO7表达进行分析,并根据表达水平将患者分为高、低表达组。评估IPO7表达与宫颈癌临床病理特征及总体生存(OS)的关系。采用单、多变量Cox回归模型进一步明确IPO7表达对宫颈癌患者OS的独立预测价值。结果核转运蛋白IPO7主要表达于细胞核或细胞膜,在114例宫颈癌组织中的阳性表达率为51.8%(59/114)。IPO7高表达组患者盆腔淋巴结转移(37.1%vs.17.3%,χ^(2)=5.485,P=0.019)和淋巴血管间隙侵犯(21.0%vs.7.7%,χ^(2)=3.928,P=0.047)比例较低表达组更加频繁,FIGOⅡA期的比例明显更高(54.8%vs.23.1%,χ^(2)=11.853,P=0.001)。生存分析结果表明,IPO7高表达患者5年OS率低于低表达患者(χ^(2)=6.206,P=0.013)。此外,单、多变量Cox回归分析发现,IPO7高表达和FIGO分期是ⅠB-ⅡA期宫颈癌患者预后不佳的独立预测因素,其风险比分别是2.814(95%CI:1.044~7.588,P=0.041)和2.660(95%CI:1.081~6.548,P=0.033)。结论核转运蛋白IPO7在宫颈癌中的高表达与侵袭性肿瘤特征及患者不良预后相关,有望成为宫颈癌预后评估与治疗的潜在分子标志。

核转运蛋白α2基因沉默对黑色素瘤细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 基于肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库探讨核转运蛋白α2(KPNA2)在黑色素瘤中的表达及KPNA2基因沉默后对黑色素瘤细胞增殖、侵袭的影响。方法 通过TCGA数据库检索黑色素瘤组织中KPNA2 mRNA表达水平及其与患者预后的关系,分析黑色素瘤中KPNA2的共表达基因并对基因进行基因本体论(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。检测黑色素瘤细胞系中KPNA2表达水平,选择KPNA2高表达细胞系A375,瞬时转染小干扰RNA敲低KPNA2的表达。采用CCK-8法、Transwell实验和蛋白印迹法(Western blot)分析KPNA2基因沉默对黑色素瘤细胞系A375增殖、侵袭能力和磷酸化P53(p-P53)蛋白表达水平的影响。结果 黑色素瘤组织中KPNA2 mRNA相对表达水平为6.439(5.800, 6.958),高于正常组织的4.035(1.726, 3.538),差异有统计学意义(P<0.001)。KPNA2高表达患者中位生存时间为63.9个月,短于KPNA2低表达患者的104.6个月,差异有统计学意义(P=0.011)。GO、KEGG富集分析显示,黑色素瘤中KPNA2共表达基因涉及的信号通路主要包括P53信号通路、细胞循环等,涉及的细胞组分包括细胞间桥等,生物学过程包括细胞循环周期等,分子功能包括DNA复制起点结合等。KPNA2在黑色素瘤细胞系A375、A875和SK-MEL-28中均有表达,且在A375细胞系中表达量更高,故选用A375细胞进行后续研究。CCK-8法检测结果显示,培养72、96 h后,KPNA2基因沉默后的A375细胞增殖能力低于空白对照细胞和空载细胞,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell实验结果显示,KPNA2基因沉默后的A375细胞侵袭能力低于空白对照细胞和空载细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。Western bolt结果显示,KPNA2基因沉默后的A375细胞中p-P53蛋白表达水平高于空白对照细胞和空载细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 KPNA2 mRNA在黑色素瘤中显著高表达,且与患者的不良预后有关。KPNA2基因沉默可促进抑癌基因P53的磷酸化,从而调控P53信号通路参与黑色素瘤细胞的增殖和侵袭。

芳香烃受体及其核转运蛋白融合表达载体的构建与序列鉴定

目的:为用基因工程的方法人工表达芳香烃受体(AhR)及芳香烃受体核转运蛋白(ARNT),构建了融合蛋白的表达载体。方法:抽提C57BL/6J小鼠肝脏总RNA后采用RT-PCR的方法扩增得到芳香烃受体及其核转运蛋白的全长序列。在DNA测序确定其正确性之后,连入表达载体并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经氨苄青霉素筛选阳性克隆,提取质粒进行酶切分析。结果:成功构建了芳香烃受体及其核转运蛋白的重组表达载体。结论:载体构建成功是基因工程制备芳香烃受体及其核转运蛋白的前提,并为进行二恶英毒性机制及生物学检测方法的研究奠定了基础。

敲低核转运蛋白对人骨肉瘤细胞增殖和血管生成的体内影响

目的探讨核转运蛋白2(karyopherina 2,KPNA2)对人骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞增殖和血管生成的影响,并从分子层面分析其可能的作用机制。方法构建Sh-KPNA2慢病毒载体(Sh-KPNA2组)及空载体Sh-Control(Sh-Control组)转染骨肉瘤细胞Saos-2,观察敲低KPNA2后对Saos-2细胞增殖的影响;利用转染Sh-KPNA2和空载体Sh-Control的Saos-2细胞分别构建OS动物模型,小动物活体荧光分子断层成像系统(fluorescence molecular tomography,FMT)验证KPNA2对瘤体血管生成的影响;qRT-PCR和Western blot验证瘤体内KPNA2和睾丸决定因子Y染色体性别决定区基因(SRY related HMG box-2,Sox2)的mRNA和蛋白表达水平。结果 Sh-KPNA2组细胞增殖能力较Sh-Control组明显降低(P<0.05);Sh-KPNA2组荷瘤小鼠瘤体积显著小于Sh-Control组(P<0.05);免疫组化和FMT扫描结果显示,Sh-Control组的血管生成能力显著高于Sh-KPNA2组(P<0.05);瘤体qRT-PCR和Western blot检测结果均显示Sox2在Sh-Control组中表达显著高于Sh-KPNA2组(P<0.05)。结论敲低KPNA2可抑制OS增殖和血管生成,其机制可能与KPNA2影响Sox2的表达有关。

核转运蛋白基因2在乳腺癌发生发展中的作用

核质转运参与多种细胞生物学进程,如基因表达、细胞周期进展、细胞凋亡以及信号转导等。分子量大于40000的蛋白质通过核孔复合体主要依靠核转运蛋白。核转运蛋白基因2(KPNA2)是核胞质转运蛋白α家族的七个成员之一,在大分子的核转运中起至关重要的作用。大分子物质的核转运通过促进肿瘤细胞进展和恶性细胞转化而改变细胞表型。KPNA2在乳腺癌肿瘤组织中的表达上调,且KPNA2的异常表达与患者的预后差相关,提示KPNA2在肿瘤形成和进展过程中扮演重要角色。

核转运蛋白的结构及功能

核转运蛋白Imp家族是在真核细胞中广泛存在的一类重要的蛋白质 ,其成员数目众多 ,在酿酒酵母菌中有一种Impα ,而在脊椎动物中现已发现 8种不同的Impα。在酵母中有 14种Impβ ,而在哺乳动物细胞中有超过 2 0种不同的Impβ。并且有新成员正在不断地被发现。Impα是由 10个ARM重复序列形成的一个α超螺旋结构。Impβ与不同底物结合时 ,呈现出不同的构象 ,它也是由 2或 3个螺旋所组成的延伸的超螺旋结构。Imp家族成员通过Impβ的单独作用或Impα与Impβ1的协作结合其作用底物 ,在Ran的调节下 ,完成对大分子蛋白质的穿越核膜的转运 ,并且以这一作用为基础 ,参与了细胞的信号转导 ,细胞分裂及生长发育 ,细胞调亡等重要生命活动。在细胞分裂时 。

三阴性乳腺癌组织亲嗜性病毒整合位点1和核转运蛋白基因2的表达及与临床病理特征和预后的关系

目的探讨亲嗜性病毒整合位点1(EVI1)、核转运蛋白基因2(KPNA2)在三阴性乳腺癌(TNBC)的表达,分析EVI1、KPNA2表达与临床病理特征及预后的关系。方法选取2012年1月—2015年1月中国人民解放军联勤保障部队第983医院收集的73例TNBC患者手术切除的癌组织、癌旁组织及70例正常乳腺组织(对照组)的石蜡标本,采用免疫组织化学法检测EVI1、KPNA2的阳性表达。收集相关临床病理资料,分析EVI1、KPNA2表达与TNBC患者临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同EVI1、KPNA2表达下TNBC患者无进展生存时间(PFS)及总生存时间(OS)差异。结果癌组织、癌旁组织和对照组EVI1、KPNA2阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05),TNBC癌组织中EVI1、KPNA2阳性表达率高于癌旁组织和对照组(P<0.05),癌旁组织和对照组EVI-1、KPNA2阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。不同组织学分级、淋巴结、Ki-67表达、脉管内癌栓TNBC患者的EVI1阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05),淋巴结是否转移的TNBC患者的KPNA2阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示EVI1阳性表达、KPNA2阳性表达患者PFS、OS生存率均低于EVI1阴性表达、KPNA2阴性表达患者(P<0.05)。结论EVI1、KPNA2阳性表达与TNBC患者肿瘤恶性侵袭行为和预后不良有关,评价EVI1、KPNA2表达可为TNBC患者预后预测提供一定的依据。

核转运蛋白α2(KPNA2)通过激活Snail 1信号通路促进胃癌细胞增殖和侵袭及迁移

目的研究核转运蛋白α2(KPNA2)在胃癌细胞中的表达、生物学作用及机制。方法采用基因表达谱相互作用分析(GEPIA)数据库分析胃癌患者肿瘤组织中KPNA2蛋白相对表达量。将KPNA2短发夹RNA转入至高表达KPNA2的MKN45胃癌细胞,将KPNA2质粒转入至MKN45胃癌细胞,在敲低和过表达KPNA2细胞中,采用CCK-8法检测细胞增殖,TranswellTM小室实验、创伤愈合实验检测细胞侵袭和迁移;实时定量PCR检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、CD133、CD44、性别决定区Y框蛋白2(SOX2)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9的mRNA水平,Western blot法检测KPNA2、cyclinD1、PCNA、CD133、CD44、SOX2及Snail 1蛋白水平。结果KPNA2在胃癌组织高表达,过表达KPNA2能够促进MKN45胃癌细胞增殖、侵袭和迁移。同时促进胃癌细胞的cyclin D1、PCNA、CD133、CD44、SOX2、E-cadherin、N-cadherin、vimentin、MMP2、MMP9以及Snail 1的表达。结论KPNA2通过刺激上皮间质转化促进胃癌细胞的侵袭和迁移。

组织桥接整合因子1、Ⅰ型胶原蛋白基因、核转运蛋白基因2与三阴性乳腺癌术后复发关系

目的探究组织桥接整合因子1(BIN1)、Ⅰ型胶原蛋白基因(COL1A1)、核转运蛋白基因2(KPNA2)表达与三阴性乳腺癌(TNBC)术后复发关系及联合检测意义。方法选取2019年5月至2020年5月上海市第八人民医院行手术治疗的TNBC病人80例,根据术后2年是否复发分为复发组、未复发组,比较两组临床资料、组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达,复发的相关影响因素采用单因素与多因素logistic回归分析,组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达预测术后复发的价值采用受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析,组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达与复发时间关系采用Pearson分析,比较不同组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达病人无复发生存期(RFS)。结果复发组T分期、N分期与未复发组比较,差异有统计学意义(P<0.05);复发组组织BIN1mRNA表达为0.24±0.07,低于未复发组的0.35±0.10(P<0.05),复发组组织COL1A1mRNA、KPNA2mRNA表达分别为2.07±0.62、2.91±0.84,高于未复发组的1.48±0.43、1.85±0.60(P<0.05);T分期、N分期、COL1A1 mRNA、KPNA2 mRNA均是复发相关独立危险因素,BIN1 mRNA是复发相关独立保护因素(P<0.05);BIN1 mRNA、COL1A1 mRNA、KPNA2 mRNA的AUC分别为0.76、0.80、0.78,三者联合的AUC为0.94;BIN1mRNA与复发时间呈负相关(r=-0.79,P<0.001),COL1A1mRNA、KPNA2mRNA与复发时间呈正相关(r=0.77、0.78,均P<0.001);BIN1mRNA高水平病人RFS长于低水平病人,COL1A1mRNA、KPNA2mRNA高水平病人RFS短于低水平病人(P<0.05)。结论BIN1mRNA、COL1A1mRNA、KPNA2mRNA与TNBC术后复发风险、复发时间有关,联合检测可作为早期预测术后复发的一个可靠方案,为临床治疗提供重要的参考信息。

Krüppel样因子4、核转运蛋白a2在骨肉瘤组织的表达及其临床意义

目的:检测骨软骨瘤组织、骨肉瘤组织中Krüppel样因子4(KLF4)和核转运蛋白a2(KPNA2)的表达,探讨KLF4和KPNA2与骨肉瘤患者临床特征的关系。方法:选取2019年3月至2022年10月长江大学附属荆州医院和襄阳市中心医院病理确诊的36例骨软骨瘤组织和98例骨肉瘤组织标本作为研究对象,采用免疫组织化学法检测上述组织中KLF4和KPNA2的表达,结合临床资料,采用χ^(2)检验进行统计学分析。结果:骨肉瘤组织中KLF4阳性表达率54.08%(53/98),明显高于骨软骨瘤组织中KLF4阳性表达率16.67%(6/36),差异有统计学意义(χ^(2)=14.956,P<0.01)。骨肉瘤组织中KPNA2阳性表达率63.27%(62/98),明显高于骨软骨瘤组织中KPNA2阳性表达率27.78%(10/36),差异有统计学意义(χ^(2)=13.337,P<0.01)。KLF4表达水平与骨肉瘤患者恩内金分期(Eneeking分期)、肺转移、软组织浸润明显相关(χ^(2)=5.408、4.688、4.322,P<0.05),KLF4表达水平与骨肉瘤患者病变部位、性别、组织类型、ALP水平、年龄无明显相关(χ^(2)=0.001、0.115、0.164、0.027、0.023,P>0.05)。KPNA2表达水平与骨肉瘤患者Eneeking分期、肺转移明显相关(χ^(2)=5.157、5.284,P<0.05),KPNA2表达水平与骨肉瘤患者软组织浸润、病变部位、性别、组织类型、年龄、ALP水平无明显相关(χ^(2)=0.004、0.001、0.084、0.047、0.872、0.088,P>0.05)。结论:骨肉瘤组织中KLF4和KPNA2呈高表达,骨肉瘤组织KLF4和KPNA2高水平表达与预后不良相关,联合检测KLF4和KPNA2有助于判断骨肉瘤患者预后。

核转运蛋白a2和锌指转录因子Snail在结直肠癌组织中表达的临床价值

目的探讨核转运蛋白a2(KPNA2)和锌指转录因子Snail在结直肠癌组织中的表达其临床价值。方法选择广东医科大学附属医院2020年5月至2023年5月病理学确诊的123例结直肠癌组织标本及其癌旁组织标本,应用免疫组织化学法检测上述组织中KPNA2和Snail的表达,采用χ^(2)检验分析两者表达与结直肠癌临床病理因素的关系。结果结直肠癌组织中KPNA2表达率为69.11%(85/123),明显高于癌旁组织中KPNA2表达率22.76%(28/123),差异有统计学意义(χ^(2)=53.181,P<0.01)。KPNA2表达水平与结直肠癌患者淋巴结转移、组织学分化程度、TNM分期明显相关(χ^(2)=5.198、6.096、6.691,P<0.05),KPNA2表达水平与结直肠癌患者性别、年龄、肿瘤部位、浸润深度无明显相关(χ^(2)=0.152、0.033、0.028、0.003,P>0.05)。结直肠癌组织中Snail表达率为64.23%(79/123),明显高于癌旁组织中Snail表达率17.89%(22/123),差异有统计学意义(χ^(2)=54.575,P<0.01)。Snail表达水平与结直肠癌患者浸润深度、淋巴结转移、TNM分期明显相关(χ^(2)=4.513、5.192、5.811,P<0.05),Snail表达水平与结直肠癌患者组织学分化程度、性别、年龄、肿瘤部位无明显相关(χ^(2)=0.015、0.030、0.226、0.022,P>0.05)。结论结直肠癌组织中KPNA2和Snail的表达均升高,进行KPNA2和Snail检测可判断结直肠癌患者病情及预测结直肠癌患者的预后。

核转运蛋白α2在胶质瘤中的表达及对其生物学行为的影响

目的探讨核转运蛋白α2(KPNA2)在胶质瘤中的表达与临床意义以及KPNA2对胶质瘤细胞生物学活性的影响。方法收集脑星形胶质细胞瘤Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级各30例,癌周相对正常脑组织15例,qRT-PCR及免疫组化分析KPNA2的表达;制备KPNA2干扰质粒,并以慢病毒为载体转染进入胶质瘤细胞系U87、U251,CCK8、Ed U法检测KPNA2敲除后对细胞增殖的影响,Transwell小室法检测KPNA2对胶质瘤细胞迁移和侵袭的影响。结果KPAN2在胶质瘤中表达升高,表达量与胶质瘤WHO分级呈正相关(rs=0.559,P<0.001),与患者预后呈负相关(总生存率:χ~2=21.39,P<0.001;无进展生存率:χ~2=8.057,P=0.004)。KPNA2敲除后胶质瘤细胞系的增殖、迁移和侵袭能力均明显减弱。结论 KPNA2在胶质瘤的发生发展中具有重要作用,可能成为新的临床诊治的标记物和治疗靶点。

细胞因子和生长因子信号转导途径中信号蛋白分子的核转运机制

信号蛋白分子的入核及出核转运是细胞因子和生长因子信号转导途径中的重要环节 .核定位序列 (NLS)是信号蛋白分子上与入核转运相关的氨基酸序列 .核孔复合物 (NPC)、核转运蛋白importin和能量供应体Ran TC4在入核转运过程中也发挥了重要作用 .另外 ,很多细胞因子和生长因子或其受体上所含有的NLS序列也具有核定位功能 ,并可能通过“伴侣机制”参与其他信号蛋白分子的入核转运 .

结直肠腺癌芳香烃受体核转运蛋白的表达

目的 探讨芳香烃受体核转运蛋白（ARNT）在结直肠腺癌和正常大肠黏膜中的表达及临床病理特征.方法 分别应用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）、Western blot和免疫组织化学技术检测44例结直肠腺癌患者的手术标本（肿瘤组织、大肠组织）中ARNT的表达情况,并结合性别、年龄、肿瘤病理特征等进行相关性分析.结果 与正常大肠组织比较,结直肠腺癌组织中ARNT mRNA（33/44）和蛋白水平（28/44）呈低表达状态.免疫组织化学检测结果显示大肠黏膜ARNT高表达37例（84.1％）远高于肿瘤组织的22例（50.0％）,相关性分析提示ARNT高表达与肿瘤分化呈正相关、TNM分期呈负相关.结论 ARNT基因在结直肠腺癌组织为低表达状态.

核转运蛋白a2和抑制转录共激活因子TAZ在胃癌组织的表达

目的检测核转运蛋白a2（KPNA2）基因KPNA2和抑制转录共激活因子TAZ在胃痛组织中的表达，分析两者的临床意义。方法应用免疫组织化学法检测66例胃癌组织和癌旁组织中KPNA2和TAZ表达水平，并结合临床资料进行分析。结果KPNA2在胃癌组织的表达率为62．12％（41／66），明显高于癌旁组织表达率22．73％（15／66），两者差异有统计学意义（t=20．966、P=0．000），KPNA2表达水平与胃癌TNM分期、淋巴结转移明最相关（分别为t=6．340、P=0．012，t=8．285、P=0．004）；TAZ在胃癌组织的表达率为75．76％（50／66），明显高于癌旁组织表达率19．70％（13／66），两者差异有统计学意义（t=41．571、P=0．000），TAZ表达水平与胃癌组织学分化程度、TNM分期、淋巴结转移明屁相关（分别为t=6．398、P=0．011，t=9．718、P=0．002，t=4．846、P=0．028）。结论KPNA2和TAZ的表达水平可能与胃癌的发生发展有关。

二噁英对人皮脂腺芳香烃受体及芳香烃受体核转运蛋白表达的影响

目的观察环境污染物2,3,7,8-四氯二苯-p-二英(TCDD)对人皮脂腺(SZ95)细胞芳香烃受体(AhR)及芳香烃核转运蛋白(ARNT)表达的影响,探讨二英影响人皮脂腺异常分化的信号分子途径。方法将SZ95细胞和人面部皮肤组织分别暴露于0(溶剂对照)、10 nmol/L的TCDD溶液中培养3 d。采用免疫组化法和蛋白印迹法检测SZ95细胞AhR、ARNT的表达情况,采用免疫组化法检测人面部皮肤组织AhR、ARNT的表达情况。结果与溶剂对照组比较,TCDD染毒SZ95细胞中AhR蛋白的表达明显降低,ARNT蛋白的表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);AhR、ARNT在人面部皮肤组织中的皮脂腺内存在表达,TCDD染毒后人皮脂腺内AhR蛋白表达下降,ARNT蛋白表达升高。结论 AhR/ARNT途径可能是二英影响人皮脂腺细胞异常分化的信号途径之一。

重症肌无力患者胸腺组织核胞浆转运蛋白α-5的表达研究

目的探讨核胞浆转运蛋白α-5(karyopherin alpha-5,KPNA5)在重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者胸腺组织中的表达情况。方法分别利用荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)和免疫组化染色方法,检测MG组20例患者与对照组10名受试者胸腺组织中KPNA 5 mRNA和蛋白分子的表达。结果MG组和对照组胸腺组织中,KPNA 5 mRNA的表达水平分别为(0.71±0.08)和(0.57±0.02),两者之间的差异有统计学意义(P<0.05);KPNA 5蛋白阳性细胞均数分别为(8.99±0.49)和(5.88±0.69),差异有统计学意义(P<0.05)。结论KPNA 5分子在MG胸腺组织中表达增高,可能参与了MG的发生,是MG相关基因。

核心生物钟基因脑和肌肉组织芳香烃受体核转运蛋白的类似蛋白1与血压调控

高血压是最常见的心血管病之一。随着经济社会的发展,越来越多的人受到生活作息不规律、睡眠质量不佳等昼夜节律紊乱的困扰[1]。近年来,许多研究证实了生物钟基因与血压节律异常以及高血压发生发展的关系。脑和肌肉组织芳香烃受体核转运蛋白的类似蛋白1(brain and muscle aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator-like-1,BMAL1)。

核转运蛋白2慢病毒RNA干扰载体的构建及鉴定

目的探索构建针对人类核转运蛋白2(KPNA2)基因的重组慢病毒干扰RNA(sh RNA)载体的方法,研究其对人骨肉瘤细胞株MG63的沉默效率。方法针对KPNA2基因设计小片段干扰序列。加入AgeⅠ酶和Eco RⅠ酶酶切位点,根据设计好的序列合成单链DNA oligo并退火合成双链DNA oligo。将合成好的双链DNA oligo与GV115载体重组,形成GV115-sh RNA慢病毒载体。聚合酶链式反应(PCR)法鉴定筛选出阳性重组子,经测序后包装慢病毒载体。荧光法测定病毒滴度,重组慢病毒感染骨肉瘤细胞株MG63,通过显微镜观察细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达来计算其转染效率。RT-PCR法检测重组慢病毒RNA干扰载体对人骨肉瘤细胞株MG63中KPNA2表达的沉默效率。实验结果数据以均数±标准差(sx±)表示,应用SPSS 13.0统计软件分析,两组均数间的比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计意义。结果经PCR分析和测序证实,成功构建KPNA2基因重组慢病毒RNA干扰载体;荧光法测定病毒滴度为4×108 TU/ml;荧光显微镜下观察GFP,显示细胞感染效率达到80%以上;RT-PCR检测对照组及实验组KPNA2 m RNA表达分别为0.991±0.087 vs.0.216±0.012,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 KPNA2基因重组慢病毒RNA干扰载体构建成功,并有效干扰人骨肉瘤细胞株MG63中KPNA2 m RNA的表达。