核酸免疫可特异地诱发小鼠对乙型肝炎病毒表面抗原S+PreS1免疫反应

运用改造后的乙型肝炎病毒表面抗原Ｓ＋ＰｒｅＳ１融合基因（将ＰｒｅＳ１区肝细胞受体结合位点（２１－４７ａａ）编码基因融合到Ｓ蛋白Ｃ端２２３位残基下游），构建了一系列真核表达载体，并在ＣＨＯ细胞上有效表达了分泌型的、具有Ｓ＋ＰｒｅＳ１双重抗原性的融合蛋白颗粒。用上述质粒ＤＮＡ肌肉免疫Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠，成功地检测到了抗－ＨＢｓ和抗－ＰｒｅＳ１抗体，加强免疫能显著改善免疫效果。本研究还建立了检测抗－ＰｒｅＳ１的竞争抑制法和羊抗人ＨＢｓＡｇ封闭法，两种方法符合率达９６％，但后者更为敏感。用羊抗人ＨＢｓＡｇ封闭法测得抗－ＰｒｅＳ１滴度最高可达１：１２８０以上。

丙型肝炎病毒DNA核酸免疫的初步探讨

目的：探索ＨＣＶＤＮＡ核酸免疫效应。方法：将构建的重组体ｐＣＤＨＣＶｓ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，用ＥＬＩＳＡ和３ＨＴｄＲ掺入法检测了免疫鼠血清抗体、脾细胞和ＰＢＭＣ对ＨＣＶ抗原的增殖反应。结果：重组体ｐＣＤＨＣＶ１、ｐＣＤＨＣＶ２和ｐＣＤＨＣＶ３均可诱导小鼠（ｎ＝６）产生抗体（０．６６５～０．７０７，ＯＤ值）和脾细胞对ＨＣＶ抗原增殖反应（ｎ＝６，ＳＩ为３．８９～４．４７），但各重组体间的免疫效应无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；免疫鼠（ｎ＝１２）血清经４０倍和３２０倍稀释后，抗体阳性率分别为１００．０％和１６．６％；重组体还可诱导鼠ＰＢＭＣ对ＨＣＶ抗原的增殖反应（３．６９～４．０７，ＳＩ）。结论：ｐＣＤＨＣＶｓ重组体可诱导小鼠产生免疫反应，该结果对进一步开展ＨＣＶＤＮＡ疫苗研制将具有重要意义。

猪轮状病毒与传染性胃肠炎病毒核酸免疫研究

将昆明鼠随机分为A,B,C,D4组,各组分别采用含有猪轮状病毒(RV)JL94株VP7基因的重组真核表达质粒pcDNA-VP7,含有猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)TH98株N基因的重组真核表达质粒pcDNA-N,pcD-NA-VP7和pcDNA-N、真核表达载体pcDNA3.1(+),肌肉注射3次,每次间隔2周。首次注射前后定期采血,检测血清抗体和外周血淋巴细胞中CD4+,CD8+T细胞数量的变化。A,C组小鼠血清在首免后第14天即可检出针对RVVP7的阳性抗体(P/N≥2.0)。B组小鼠血清在首免后第39天检出针对TGEVN蛋白的阳性抗体(P/N≥2.0)。A,B,C组小鼠在首免后外周血CD4+、CD8+T细胞数量与D组小鼠相比,在不同时间有显著差异(P<0.05),并明显高于D组小鼠。说明猪轮状病毒与传染性胃肠炎病毒核酸免疫后能诱发机体免疫反应。

猪传染性胃肠炎病毒核酸免疫昆明鼠的抗体应答

以猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)TH98株N基因的重组质粒 pHN为模板 ,Li 15和Li 2为上、下游引物扩增出TGEVTH98/N基因。将N基因与真核表达载体pcDNA3.1(+)分别用BamHⅠ、XhoⅠ双酶切后连接 ,构建了重组真核表达载体 pcDNA N。将昆明鼠随机分为 2组 ,分别肌肉注射 pcDNA N和pcDNA3.1(+) ,每只鼠 10 0 μg ,共免疫 3次 ,每次间隔 2周。首次免疫后第 0、14、2 1、2 8、35、39、4 7和 5 4d采血分离血清 ,采用ELISA检测抗体动态变化。注射pcDNA N组小鼠在首次免疫后第 39d检测到针对TGEVN蛋白的阳性抗体。

核酸免疫及其在寄生虫学领域中的应用

核酸免疫是一项新的疫苗研究技术，动物实验研究结果表明，它能全面诱导机体的体液和细胞免疫应答，显示出引人注目的应用前景。本文对核酸免疫的产生、在寄生虫病和传染病免疫预防中的应用研究近况及其优点等作简单介绍。现代免疫学研究证明，抗原进入机体引起免疫反应有...

汉坦病毒包膜糖蛋白基因核酸免疫的初步研究

目的将克隆有汉坦病毒包膜糖蛋白基因M片段及G1、G2基因的重组质粒免疫动物，了解上述目的基因在核酸疫苗中的应用价值。方法大量制备已构建好的pcDNA3．1-M、pcDNA3．1-G1、pcDNA3．1-G2重组质粒DNA及对照空质粒pcDNA3．1。然后用这四组质粒DNA通过肌肉注射的方法免疫6～8周龄的BALB／c小鼠（每组5只），每4周免疫一次，共免疫3次，每次免疫前及最后一次免疫后2周断尾取血，用免疫荧光的方法检测基因免疫的体液免疫应答效果。结果重组质粒pcDNA3．1-G1免疫小鼠有4只血清抗汉坦病毒抗体为阳性，重组质粒pcDNA3．1-G2以及重组质粒pcDNA3．1-M免疫小鼠各有1只血清抗汉坦病毒抗体为阳性。结论汉坦病毒糖蛋白基因核酸免疫动物后可刺激机体产生特异性的体液免疫应答。

昆明鼠对猪轮状病毒核酸免疫的抗体应答

将昆明鼠随机分为A、B两组,分别肌肉注射含有猪轮状病毒(RV)JL94株VP7基因的重组真核表达质粒pcDNA-VP7和真核表达载体pcDNA3.1(+),每只鼠100μg·(100μL)-1,共免疫3次,每次间隔2周。首次免疫第0,14,21,28,35,39,47,54天采血分离血清用ELISA法检测抗体动态变化。A组小鼠血清在首免后第14天即可检出阳性抗体(P/N≥2.0)。

猪轮状病毒核酸免疫的研究

将昆明鼠随机分为A、B两组,分别肌肉注射含有猪轮状病毒(RV)JL94株VP7基因的重组真核表达质粒pcDNA＿VP7和真核表达载体pcDNA3 1(+),每只鼠100μg/100μL,共免疫3次,每次间隔2周。首次免疫第0、14、21、28、35、39、47、54d采血,检测血清抗体和外周血淋巴细胞中CD4+、CD8+T细胞的数量变化。A组小鼠血清在首免后第14d即可检出阳性抗体(P/N≥2 0)。A组与B组小鼠外周血CD4+、CD8+T细胞数量在首免后第14d开始有显著差异(P<0 05)。

脂质体介导鸡新城疫病毒核酸免疫研究

用天然磷脂脂质体包裹鸡新城疫病毒血凝素神经胺酸酶 (HN)基因的真核表达质粒pcHNMDNA ,免疫 5周龄雏鸡 ,1周后免疫鸡血清中的特异性HI抗体开始升高 ,至第 6周空白对照组抗体为 2 .3 0log2 ,裸DNA免疫组为 4.0 9log2 ,脂质体DNA免疫组为 4.75log2 ;用新城疫强毒F48E9攻击后 ,未免疫组鸡的存活率为 2 7.2 8%,裸DNA免疫组存活率为 81.82 %,脂质体DNA免疫组存活率为 90 .0 0 %,表明该质粒DNA被脂质体包裹后 。

核酸免疫——免疫防龋研究的新方向

核酸免疫是近几年发展起来的一种诱导免疫反应的新方法,它具有重组亚单位疫苗的安全性,又具有减毒活疫苗诱导体液和细胞免疫应答的高效力。在已有的致龋变形链球菌毒力因子基因和蛋白质研究基础上,研究核酸免疫防龋,将给免疫防龋研究带来新的变革。

用核酸免疫技术制备抗丙肝病毒C区单克隆抗体

用丙肝病毒Ｃ＋Ｅ１区真核表达质粒ｐｃＤＮＡ－ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１按４００ｕｇ／只剂量免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，１４周后同一剂量再加强免疫一次。加强免疫后２周，在５０％ＰＥＧ１４５０介导下将脾细胞与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞（５１）融合。实验结果融合率达５４．３％（３１３／５７６）。阳性率为５．４％（１７”３１３）。克隆化后得到６株稳定分泌抗丙肝病毒Ｃ区单克隆抗体杂交瘤细胞株。这６株杂交瘤均产生ＩｇＭ抗体，接种ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠后产生腹水的效价为１６４－１３２０（ＥＬＩＳＡ）。

免疫新领域──核酸免疫

本文综述了近年来核酸免疫的发展史、应用研究现状、机理及影响因素，并分析了目前存在的主要问题。

丙肝核酸免疫效果初步观察

目的 观察丙肝核酸疫苗的免疫效果。方法 用丙肝病毒C +E1区基因的真核表达重组质粒pSVL HCV/C +E1免疫蛇毒预处理的BALB/C和C57BL小鼠 ,两周后采用ELISA法开始检测抗体滴度。结果真核表达重组质粒pSVL HCV/C +E1免疫能诱导小鼠免疫应答 ,产生高水平的特异抗体。特别是C57BL小鼠抗体反应最好 ,初次免疫就能产生高水平的特异抗体 ,加强后能持续数周 ,最高滴度OD值达 1 4 5。结论 说明丙肝核酸免疫能够诱导高水平的体液免疫。

囊虫病的核酸免疫研究进展

囊虫病是一种常见的人兽共患寄生虫病,对人类健康危害极大.目前,尚无可用于人体的有效疫苗.以往的疫苗多为粗抗原疫苗,免疫效果不理想.核酸免疫技术的开展为囊虫病疫苗研制提供了一条新思路.核酸免疫(nuclear acid immunization)又称基因免疫(genetic immunization),是将含有编码目的抗原的质粒直接注入体内,通过宿主细胞的转译系统表达目的抗原,并诱导机体产生免疫应答的一种新技术.目前WHO已将此法正式命名为核酸免疫法(nuclear acidvaccination).

CTAB脂质体介导鸡新城疫病毒核酸免疫研究

用 CTAB/ DOPE脂质体包裹新城疫病毒血凝素神经氨酸酶 ( HN)基因的真核表达质粒 pc HNM免疫 5周龄仔鸡 ,1周后免疫鸡血清中的特异性 HI抗体开始升高 ,至第 6周空白对照组抗体 2 .0 6 ,裸 DNA免疫鸡 4.0 9,脂质体 DNA免疫组为 5 .2 0 ;此时用新城疫强毒 F48E9攻击 ,未免疫组鸡的存活率为 2 7.2 8% ,裸 DNA免疫组 81 .82 % ,CTAB脂质体 DNA免疫组 1 0 0 .0 0 % ,表明该质粒 DNA被脂质体包裹后 ,不仅增加了动物的特异性抗体产生能力 。