核酸共提取试剂盒应用于柑橘危险性病害检测的效率评价

柑橘易受到不同遗传类型病原的复合感染,传统病原检测方法需单一核酸提取,使得检测步骤繁琐,影响检测效率。以普通单一核酸提取试剂盒为对照,采用核酸共提取试剂盒,通过分析核酸完整性和浓度以及病原检测效率,以期探讨核酸共提取试剂盒应用于柑橘危险性病害检测的可行性,从而简化柑橘病原检测方法的核酸提取步骤。结果表明,相比普通RNA提取试剂盒,核酸共提取试剂盒提取RNA的完整性、纯度、浓度以及柑橘衰退病毒病原检测效率均无显著差异,可达到相同检测效果。相比普通DNA提取试剂盒,核酸共提取试剂盒提取DNA的完整性、纯度均无显著性差异,但其浓度显著降低,使得柑橘黄龙病和柑橘溃疡病病原检测效率也显著降低;通过增加PCR反应的起始模板量,核酸共提取试剂盒检测柑橘黄龙病和柑橘溃疡病病原的效率与普通DNA试剂盒无显著差异,可达到相同检测效果。综上所述,核酸共提取试剂盒可应用于柑橘危险性病害检测,将有助于提高病原复合感染样品的检测效率。

不同液化处理及核酸共提取方法对痰样本中病毒核酸的提取效果比较

目的比较不同痰液液化方法及不同核酸提取方法共提取痰液中病毒RNA和DNA的效果，并比较其优劣。方法将痰液样本分为二硫苏糖醇（DTT）、氢氧化钠（NaOH）液化痰液组，以生理盐水为对照，分别使用TIANampVirusDNA／RNAKit（方法1）、KBW酶法（方法2）、KBW通用法（方法3）和单一核酸提取试剂盒（方法4）提取核酸，微量核酸分析仪检测核酸纯度，多重定量PCR方法检测核酸的浓度。结果核酸纯度测定结果：生理盐水组中方法2和方法3，DTT处理组中方法1和方法2，NaOH处理组中方法3所提DNA纯度略大于1．8；各组中采用方法l所提RNA纯度均明显超过2，方法4及NaOH处理组中方法3所提R-A纯度均低于1．8，其余纯度均在正常范围内。PCR浓度测定结果：腺病毒（DNA）Ct值：生理盐水组〈NaOH处理组（q=35．09，P〈0．05），生理盐水组和DTT处理组间差异无统计学意义（q=2．54，P〉0．05）；提取方法1〈方法3（q=12．68，P〈0．05），方法1、方法2与方法4之间差异无统计学意义（q=0．84、1．69、2．53，P〉0．05）；呼吸道合胞病毒（RNA）Ct值：生理盐水组〈DIT组〈NaOH组（F=152．76，P〈0．01）；提取方法l〈方法2〈方法3（q=6．98、3．75，P〈0．05），方法2与方法4之间差异无统计学意义（q=1．28，P〉0．05）。结论痰液液化前处理会影响病毒RNA和DNA的共提取，TIANampVirusDNA／RNAKit和KBW酶法对痰样本中病毒核酸共提取效果较好。