大黄素对大鼠肝癌细胞凋亡诱导因子及核酸内切酶G mRNA表达的影响

目的研究大黄素(emodin,EM)对大鼠肝癌细胞CBRH-7919细胞凋亡及凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)和核酸内切酶G(endonuclease G,EndoG)mRNA表达的影响,探讨大黄素的抗癌机制。方法实验分空白对照组、Caspase抑制剂Z-VAD-FMK干预组、大黄素组、大黄素+Z-VAD-FMK组共4组,采用四氮唑盐(MTT)还原法筛选大黄素的干预条件,根据结果选择44.8μmol/L的大黄素干预48h作为干预条件;以原位末端标记法(Tunel)检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,QT-PCR)法检测AIF、EndoGmRNA。结果大黄素能抑制肝癌CBRH-7919细胞株的增殖,诱导其凋亡,与空白组相比差异具有显著性(P<0.01);QT-PCR检测显示,大黄素及大黄素+Z-VAD-FMK组细胞AIF、EndoG mRNA表达上调,与空白组比较,差异具有显著性(P<0.01)。结论大黄素可上调CBRH-7919细胞AIF、EndoG表达,通过启动非Caspase依赖通路而发挥促凋亡的作用。

丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠脑组织TRPM2和核酸内切酶G的影响

目的:研究丁基苯酞(NBP)对老龄大鼠慢性脑缺血脑组织瞬时感受器电位M2型(TRPM2)及核酸内切酶G(EndoG)表达的影响。方法:80只老龄Wistar大鼠随机分为4组,每组20只,分别为假手术组、模型组、NBP低剂量治疗组和NBP高剂量治疗组。采用双侧颈总动脉永久结扎建立慢性脑缺血模型。3个月后,HE染色观察脑组织形态学变化,免疫组化SP法染色检测TRPM2和EndoG的表达变化。结果:各组大鼠脑皮层与海马区组织TRPM2和EndoG表达比较,差异有统计学意义(F=310.046、127.115、49.959和80.292,P均<0.05)。模型组皮质和海马TRPM2、EndoG表达较假手术组增多(P<0.05),而NBP低剂量和高剂量治疗组较模型组减少(P<0.05),NBP高剂量组较低剂量治疗组降低更加明显(P<0.05)。结论:NBP可能通过下调TRPM2和EndoG的表达,抑制细胞损伤和死亡,发挥对慢性缺血性脑组织的神经保护作用。

核酸内切酶G在帕金森病大鼠脑组织中的表达及意义

目的:探讨核酸内切酶G(Endo-G)介导的非Caspase依赖性细胞凋亡在帕金森病(PD)发生发展中的作用和分子机制。方法:30只SPF级雄性SD大鼠均分为PD模型组(PD组)和对照组(Ctrl组),PD组大鼠右侧纹状体注射6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导建立单侧损毁的PD大鼠模型,Ctrl组大鼠注射生理盐水;采用免疫组化实验观察大鼠黑质内酪氨酸羟化酶(TH)的变化以及核酸内切酶G(Endo-G)在黑质中的分布,计算Endo-G核转移细胞率;采用蛋白印迹实验(Western Bolt)检测Endo-G在黑质线粒体和细胞核中的表达量。结果:Ctrl组TH染色阳性神经元结构完整,PD模型组大鼠损毁侧黑质部位TH染色阳性细胞很难见完整的神经元结构;与Ctrl组比较,PD大鼠模型组损毁侧(右侧)黑质线粒体中Endo-G表达量明显降低(P<0.05),而细胞核中Endo-G表达量明显升高(P<0.05);Ctrl组大鼠Endo-G核转移细胞率低于PD组(P<0.05)。结论:在6-OHDA诱导的PD大鼠模型中,Endo-G自线粒体转位至细胞核,提示非Caspase依赖性细胞凋亡通路可能介导PD大鼠黑质多巴胺能神经元的变形和丢失。

核酸内切酶G在慢性氟中毒大鼠脑组织中的表达及其意义

目的 了解核酸内切酶G（endonuclease G，Endo G）介导的非Caspase依赖性细胞凋亡通路参与慢性氟中毒大鼠大脑神经细胞凋亡的可能机制。方法 清洁级SD大鼠60只，体重100 ~ 120 g，按体重采用随机数字表法分成对照组和染氟组，每组30只，雌雄各半，均饲以标准营养动物饲料（含氟量 〈 0.5 mg／kg）。复制慢性氟中毒大鼠模型，对照组自由饮用自来水（含氟量 〈 0.5 mg／L）；染氟组自由饮用含氟化钠蒸馏水（氟含量为50.0 mg／L）。饲养10个月，处死大鼠，取脑组织备用。采用流式细胞术检测脑组织细胞凋亡率；免疫组织化学法检测EndoG在大鼠脑组织皮质及海马区的细胞分布；蛋白免疫印迹（Western blot）法检测Endo G在大鼠脑组织线粒体和细胞核中的蛋白表达。结果 细胞凋亡结果：染氟组大鼠海马、皮质神经细胞凋亡率［（2.6 ± 0.6）%、（3.1 ± 0.7）%］与对照组［（1.3 ± 0.6）%、（1.9 ± 0.3）%］比较明显升高，差异均有统计学意义（t = 3.1、3.4，P均 〈 0.05）。免疫组织化学结果：海马CA1、CA2、CA3、CA4区染氟组Endo G评分［（11.1 ± 2.2）、（10.2 ± 1.9）、（9.8 ± 3.1）、（9.9 ± 1.6）分］与对照组［（5.8 ± 1.8）、（6.7 ± 2.6）、（5.2 ± 2.4）、（7.2 ± 2.1）分］比较明显升高，差异有统计学意义（t = 2.9、2.5、2.4、2.3，P 〈 0.01或 〈 0.05）；额叶上层、额叶下层、顶叶上层染氟组Endo G评分［（10.6 ± 2.9）、（8.2 ± 2.4）、（11.1 ± 2.8）分］与对照组［（7.7 ± 2.6）、（6.1 ± 1.9）、（8.1 ± 2.6）分］比较明显升高，差异有统计学意义（t = 2.2、2.5、2.3，P均〈0.05）。Western blot结果：在海马以及皮质的线粒体中，染氟组EndoG 的蛋白表达［（86.4 ±7.2）%、（83.9 ± 6.8）%］与对照组［（100.0 ± 6.1）%、（100.0 ± 5.5）%］比较明显降低，差异有统计学意义（t = 2.6、2.3，P均 〈 0.05）；在海马和皮质的细胞核中，染氟组Endo G的蛋白表达［（117.5 ± 6.4）%、（115.2 ± 6.2）%］与对照组［（100.0 ± 5.2）%、（100.0 ± 5.5）%］比较明显升高，差异有统计学意义（t = 2.5、2.2， P均 〈 0.05）。结论 Endo G的高表达以及核转移与慢性氟中毒大鼠脑组织神经细胞凋亡有关，是慢性氟中毒引起脑损伤的发生机制之一。

人参皂苷Rd预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠NR2B受体和核酸内切酶G表达的影响

目的：观察人参皂苷Rd预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠基底节区N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体亚单位NR2B蛋白和核酸内切酶G（EndoG）表达变化的影响，探讨人参皂苷Rd治疗缺血性卒中的可能机制。方法：栓线法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型，免疫组织化学染色和图像分析法检测局灶性脑缺血1h再灌注1、6、24、72h后基底节区NR2B和FaxtoG表达，评价人参皂苷Rd对NR2B和EndoG表达和脑梗死体积的影响。结果：缺血再灌注组缺血侧基底节区NR2B阳性表达显著增加，EndoG在细胞核内表达显著；再灌注不同时间点人参皂苷Rd处理组NR2B和EndoG阳性表达均显著降低（P〈0．05或P〈0．01），脑梗死体积显著缩小（P〈0．01）。结论：脑缺血再灌注后NMDA受体亚单位NR2B和凋亡诱导因子EndoG表达显著增加；人参皂苷Rd预处理能显著降低NR2B和EndoG表达，通过抑制兴奋性神经毒性和阻断神经细胞凋亡，缩小脑梗死体积，从而起神经保护作用。

噪声损伤引起耳蜗外毛细胞凋亡时细胞核内单链DNA的产生及EndoG的转移

目的观察噪声损伤后耳蜗外毛细胞内单链DNA和EndoG的变化,探讨耳蜗外毛细胞的死亡机制。方法豚鼠随机分为噪声暴露组、MNNG耳蜗灌流组和对照组(每组各12只);小鼠随机分为噪声暴露组和对照组(每组12只)。分离解剖耳蜗后,用碘化丙啶(PI)染色细胞核、Pholloidin染色F-actin,免疫荧光抗体分别染色单链DNA(ssDNA)、核酸内切酶G(Endonuclease G EndoG)和凋亡诱导因子(Apoptosis inducing factors,AIF),制备耳蜗铺片,激光共聚焦显微镜下观察凋亡和坏死毛细胞内的荧光信号变化。结果(1)暴露于120dBSPL的白噪声环境中每天4小时,连续2天后引起豚鼠和小鼠耳蜗外毛细胞凋亡时,其细胞核内产生ssDNA,而在正常细胞内没有三ssDNA;(2)在正常情况下,EndoG分布于耳蜗毛细胞的细胞核外,在暴露于上述噪声后发生凋亡和坏死的豚鼠耳蜗外毛细胞中,EndoG从细胞核外转移到细胞核内,细胞核中的EndoG显著增加;(3)豚鼠耳蜗外淋巴灌流烷化剂MNNG后发生耳蜗外毛细胞凋亡和坏死,在凋亡和坏死的耳蜗外毛细胞中,AIF自线粒体转移到细胞核,其变化与噪声损伤引起耳蜗外毛细胞凋亡和坏死时一致。结论噪声刺激或烷化剂MNNG灌流后,造成耳蜗外毛细胞DNA损伤,产生ssDNA,引起AIF和EndoG自线粒体释放,激活Caspase-3,AIF和EndoG进一步向细胞核转移,最终使细胞核内的DNA降解,导致耳蜗毛细胞的死亡。

线粒体与缺氧缺血性脑细胞凋亡

凋亡是一种受到严格调控的细胞死亡形式。近年来的研究认为,线粒体在调控细胞凋亡中起关键作用:一方面,多种促细胞凋亡级联转导信号整合于由线粒体通透性转变激活的通路;另一方面,线粒体膜间隙内存储着大量的促凋亡分子,如细胞色素c、凋亡诱导因子和各种半胱天冬酶原等,它们在凋亡发生时释放到胞质中,引起凋亡级联反应。此外,线粒体功能障碍导致的能量产量变化可直接诱导神经元凋亡或坏死。

大黄素通过非Caspase依赖通路抑制人膀胱癌裸鼠移植瘤生长机制研究

目的探讨大黄素对人膀胱癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用,并探讨其作用机制。方法建立人膀胱癌细胞株BIU87裸鼠移植瘤模型,并随机分为4组[对照组、大黄素组、Caspase抑制剂(Z-VAD-FMK)组及大黄素+Z-VAD-FMK组]。观察各组裸鼠移植瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线,4周后处死全部裸鼠,取出肿瘤组织,称瘤质量;HE染色观察肿瘤细胞形态,RT-PCR检测各组肿瘤组织中线粒体蛋白凋亡诱导因子(AIF)和核酸内切酶G(Endo G)的mRNA的表达,Western blot检测各组肿瘤组织中AIF和Endo G蛋白的表达。结果大黄素组肿瘤生长速度明显慢于其他3组,大黄素组和大黄素+Z-VAD-FMK组肿瘤较其他2组轻,差异均有统计学意义(均<0.01),大黄素组与大黄素+Z-VAD-FMK组差异也有统计学意义(<0.01)。大黄素+Z-VAD-FMK组中AIF和Endo G的表达水平显著上调,与其他各组比较,差异均有统计学意义(均<0.01)。结论大黄素能够明显抑制人膀胱癌裸鼠移植瘤的生长,其机制可能部分与大黄素可上调膀胱癌细胞BIU87中AIF和Endo G的表达,通过启动非Caspase依赖途径诱导细胞凋亡有关。

AIF对人宫颈癌Hela细胞体外生物学活性的影响及机制研究

目的探讨凋亡诱导因子(AIF)对人宫颈癌Hela细胞体外生物学活性的影响及其作用机制。方法通过脂质体转染pcDNA3空载体质粒及pcDNA3-AIF质粒于人宫颈癌Hela细胞,采用免疫荧光反应,Real time PCR及Western blot法检测细胞中AIF的表达。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,Annexin V-PI流式双染及Hoechst染色检测细胞凋亡情况,Realtime PCR及Western blot法检测细胞中腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)及核酸内切酶G(EndoG)蛋白及mRNA的表达。结果与pcDNA3组比较,pcDNA3-AIF组细胞中AIF主要定位于细胞核中,且细胞核中AIF蛋白及mRNA表达量皆显著提高(P<0.01),同时细胞活力下降,细胞凋亡率提高(P<0.01),细胞中PARP-1、EndoG蛋白及mRNA表达量显著提高(P<0.01)。结论 AIF具有促进宫颈癌Hela细胞凋亡的作用,可能与PARP-1/AIF/EndoG信号通路有关。

大黄素对人肝癌HepG2细胞AIF和EndoG蛋白表达的影响

目的:观察大黄素干预后,体外培养的人肝癌HepG2细胞株胞浆和胞核内AIF和EndoG的表达情况,探讨大黄素对非Cas-pase依赖细胞凋亡的影响。方法:将体外培养的HepG2细胞分为四组:空白对照组、Caspase抑制剂组、大黄素干预组、大黄素+Caspase抑制剂组;取对数生长期的细胞进行实验,药物作用48小时后提取各组细胞胞浆及胞核蛋白;采用Western Blotting法分别检测各组细胞胞浆和胞核内AIF与EndoG的表达,并进行统计学分析。结果:AIF和EndoG在大黄素干预组、大黄素+Cas-pase抑制剂组细胞胞浆和胞核的表达均高于空白对照组及Caspase抑制剂组(p<0.01),其中以大黄素+Caspase抑制剂组的表达最高(p<0.01)。结论:大黄素能促进体外培养的人肝癌HepG2细胞AIF和EndoG的表达和核转位,可以通过非Caspase依赖途径诱导细胞凋亡。

莪术醇对胃癌SGC7901细胞凋亡及AIF、Endo G表达的影响

[目的]观察莪术醇对胃癌细胞株SGC7901细胞凋亡及凋亡诱导因子(AIF)和核酸内切酶G(Endo G)表达的影响,探讨其作用机制。[方法]对体外培养的SGC7901细胞,分别加入不同浓度的莪术醇处理,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot方法检测AIF、Endo G蛋白的表达水平。利用Caspase-3抑制剂ZVAD-FMK进一步确定AIF和Endo G在莪术醇抑制胃癌SGC7901细胞凋亡的机制。[结果 ]莪术醇能显著抑制SGC7901细胞增殖;与对照组比较,莪术醇组细胞凋亡率明显升高(P<0.01),AIF、Endo G蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与对照组比较,同时给予莪术醇和ZVAD-FMK组细胞凋亡率明显升高(P<0.01),AIF、Endo G蛋白表达明显升高(P<0.01);但与莪术醇组比较无显著差异。[结论]莪术醇可上调AIF、Endo G表达,通过非Caspase依赖通路诱导胃癌SGC7901细胞凋亡。

大黄素通过非半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶依赖途径诱导前列腺癌细胞凋亡的研究

目的 观察大黄素对前列腺癌细胞凋亡及凋亡诱导因子（AIF）和核酸内切酶G（Endo G）表达的影响,探讨大黄素的非半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）依赖细胞凋亡途径.方法 实验分空白对照组、大黄素组、Caspase抑制剂干预组、大黄素＋Caspase抑制剂组,噻唑蓝（MTT）法筛选大黄素的干预条件;流式细胞术检测干预后前列腺癌细胞凋亡率;实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）及Western blot法检测AIF、Endo G mRNA及蛋白表达.结果 EM浓度在20 μmol/L以上能显著抑制前列腺癌细胞株的增殖,其作用呈剂量与时间依赖性.当EM浓度为160 μmol/L时,48、96 h细胞抑制率分别为（59.76 ±3.90）％和（71.77±3.50）％.EM能显著增加前列腺癌细胞凋亡率,与对照组相比差异有统计学意义[（22.54±2.32）％比（4.54±1.26）％,P＜0.05];与EM单独干预比较,EM＋ Caspase-3抑制剂干预后凋亡率虽然有所下降,但仍显著高于空白对照组[（15.65±1.84）％比（4.54±1.26）％,P＜0.05].Real-time PCR及Western blot检测结果显示,与空白对照组比较,EM及EM＋ Caspase抑制剂均可显著增加AIF、EndoG mRNA及蛋白表达（P＜0.05）.结论 大黄素可上调前列腺癌细胞AIF、Endo G表达,通过非Caspase依赖通路而发挥促凋亡的作用.

Endo G基因过表达对镉诱导HEK-293细胞凋亡影响

目的观察细胞凋亡因子核酸内切酶G(endonuclease G,Endo G)基因过表达在镉诱导人胚胎肾细胞HEK-293凋亡中的影响。方法从人肝癌细胞系(human hepatocarcinoma cells,HepG 2)中提取RNA,经逆转录获取互补DNA cDNA),通过聚合酶链反应(PCR)扩增Endo G基因,与pcDNA 3.0相连,构建pcDNA 3.0-Endo G真核表达载体,转染HEK-293细胞,并结合不同浓度氯化镉处理细胞;通过蛋白印迹实验(Western blot)验证基因过表达,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)双染法及流式细胞术(FCM)检测Endo G基因过表达对镉诱导HEK-293细胞凋亡的影响,噻唑蓝法(MTT)检测细胞存活率。结果成功构建pcDNA 3.0-EndoG真核表达载体,Endo G基因扩增片段大小约1 100 bp;该载体转染细胞后,Endo G成功过表达,使HEK-293细胞凋亡率>37%,且随氯化镉浓度增加,Endo G表达量先上升后下降。结论 Endo G以诱导细胞早期凋亡和晚期凋亡为主要形式。

大黄素抑制人肝癌裸鼠移植瘤生长机制探讨

目的研究大黄素对人肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤细胞凋亡及凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)、核酸内切酶G(endonuclease G,Endo G)表达的影响,探讨大黄素体内抗癌机制。方法复制裸鼠人肝癌移植瘤模型,带瘤模型裸鼠腹腔注射大黄素。实验随机分为对照组(生理盐水+1%DMSO)、大黄素低剂量组〔25mg/(kg·d)〕、中剂量组〔50mg/(kg·d)〕和高剂量组〔100mg/(kg·d)〕,每组各8只。观察裸鼠一般生长情况和肿瘤体积变化,计算肿瘤生长抑制率以及肿瘤生长延迟时间。治疗结束次日处死裸鼠,取病变组织后,TUNEL检测肿瘤组织的凋亡指数,免疫组化检测各组AIF和EndoG表达情况。结果 32只裸鼠均成功建立模型。试验过程中裸鼠一般情况正常,实验结束后各组之间裸鼠体质量差异无统计学意义,P=0.79。治疗结束后,与对照组相比,大黄素低、中、高剂量组均有抑制肿瘤生长作用,大黄素各剂量组的肿瘤生长抑制率呈剂量效应正相关。低剂量组肿瘤生长抑制率为(37.2±1.09)%,中剂量组为(57.7±1.15)%,高剂量组为(72.3±1.21)%,高剂量组显著高于中剂量组,P<0.01;中剂量组显著高于低剂量组,P=0.019。低剂量组肿瘤生长延迟时间为(1.9±0.6)d,中剂量组为(3.4±0.9)d,高剂量组为(4.6±1.1)d。TUNEL结果显示,对照组肿瘤细胞凋亡指数为(8.23±1.65)%,低剂量组为(34.38±8.73)%,中剂量组为(48.14±9.57)%,高剂量组为(68.71±10.56)%。低剂量组较对照组明显升高,P=0.003;中剂量组较低剂量组明显升高,P=0.023;高剂量组较中剂量组明显升高,P=0.009。免疫组化结果显示,随着大黄素剂量的不断增加,肿瘤组织中AIF和EndoG蛋白表达逐渐增强,低剂量组高于对照组,P值均为0.001;中剂量组高于低剂量组,P值分别为0.015和0.004;高剂量组高于中剂量组,P值分别为0.021和0.013。免疫荧光结果显示,不同剂量大黄素组肿瘤组织中AIF及EndoG的表达位置发生了明显变化,出现由胞质向胞核移位的现象;对照组肿瘤组织中AIF、EndoG的表达位置变化不明显。结论大黄素可以明显抑制人肝癌SMMC-7721细胞在裸鼠体内的生长;经AIF和EndoG介导的非Caspase依赖线粒体通路诱导细胞凋亡,是大黄素抑制人肝癌SMMC-7721细胞移植瘤生长的机制之一。

大黄素通过非Caspase依赖通路诱导膀胱癌细胞BIU87凋亡的机制

目的 研究大黄素对人膀胱癌细胞BIU87凋亡及凋亡诱导因子（apoptosisinducingfactor，AIF）和核酸内切酶G（EndonucleaseG，EndoG）的mRNA和蛋白表达的影响，探讨大黄素的抗癌机制。方法取对数生长期的人膀胱癌细胞株BIU87，分别加入大黄素和Caspase抑制剂z—VAD—FMK共同培养。实验分为4组：空白对照组、Z—VAD—FMK组、大黄素组、大黄素＋Z—VAD—FMK组。采用甲基噻唑（MTT）比色法测定不同浓度大黄素在不同作用时间内对体外培养的BIU87细胞增殖的影响，应用流式细胞仪检测细胞凋亡，RT—PCR检测各组细胞AIF和EndoGmRNA的表达，蛋白质印迹法检测各组细胞AIF和EndoG蛋白的表达。结果MTT检测显示，大黄素的浓度越高、作用时间越长，对肿瘤细胞生长的抑制作用越强。根据Ic50值，选择80μmol／L的大黄素干预72h作为干预条件。大黄素组细胞凋亡率为（44．57±1．52）％，大黄素＋Z—VAD—FMK组为（35．58±1．61）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。RT—PCR和蛋白质印迹结果显示，大黄素＋Z—VAD—FMK组中AIFmRNA和蛋白为1．74±0．11、2．59±0．13，大黄素组为1．36±0．08、1．89．4-0．14，空白对照组为0．374-0．02、0．53±0．11，Z—VAD—FMK组为0．42．4-0．06、0．444-0．07，大黄素＋Z—VAD—FMK组与其他各组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；大黄素＋Z—VAD—FMK组中EndoGmRNA和蛋白为2．28±0．15、3．31±0．36，大黄素组为1．85±0．13、2．15±0．27，空白对照组为0．53±0．07、0．71±0．16，Z—VAD—FMK组为0．61±0．04、0．67±0．22，大黄素＋Z—VAD—FMK组与其他各组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论大黄素可上调膀胱癌细胞BIU87中AIF和EndoG的表达，通过启动非Caspase依赖途径诱导细胞凋亡。

基于神经细胞凋亡信号通路探讨针刺延长脑梗死的溶栓时间窗效应

目的:观察针刺对脑梗死急性期大鼠大脑皮层梗死体积及相关蛋白的影响,探讨针刺延长脑梗死的溶栓时间窗效应及其可能的机制。方法:将48只大鼠随机分为假手术组、模型组、溶栓4.5 h组、溶栓6 h组、溶栓9 h组、针刺+溶栓4.5 h组、针刺+溶栓6 h组、针刺+溶栓9 h组,每组6只。以改良自体血栓栓塞法建立大鼠脑梗死模型。各溶栓组仅在相应时间通过尾静脉注射重组人组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA,10 mg/kg)进行溶栓;造模成功后2 h,各针刺溶栓组给予针刺"水沟"及双侧"内关",留针30 min,并在相应时间进行和各溶栓组相同的干预处理;假手术组和模型组仅给予相同的固定。分别对各组大鼠在造模成功后2 h和24 h进行神经行为学评分。各组均在造模后24 h神经行为学评分完成后处死大鼠并取材,用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法比较各组大鼠脑梗死体积百分比,Western blot法检测各组大鼠大脑皮层多聚ADP核糖聚合酶-1(PARP1)、凋亡诱导因子(AIF)和核酸内切酶G(Endo-G)的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经行为学评分、脑梗死体积百分比、PARP1、AIF和Endo-G蛋白表达水平均明显升高(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,溶栓4.5 h组、针刺+溶栓4.5 h组、针刺+溶栓6 h组神经行为学评分、脑梗死体积百分比、AIF和Endo-G表达水平均明显降低(P<0.05),溶栓4.5 h组、针刺+溶栓4.5 h组的PARP1蛋白表达明显降低(P<0.05)。与溶栓4.5 h组比较,针刺+溶栓4.5 h组的神经行为学评分、脑梗死体积百分比及AIF、PARP1、Endo-G蛋白表达均明显降低(P<0.05)。与溶栓6 h组比较,针刺+溶栓6 h组神经行为学评分、脑梗死体积百分比及AIF蛋白表达均明显降低(P<0.05)。与溶栓9 h组比较,针刺+溶栓9 h组Endo-G的表达显著下调(P<0.05)。结论:针刺+溶栓干预可减少脑梗死体积,改善溶栓后大鼠神经功能损伤,延长溶栓时间窗。针刺延长脑梗死溶栓时间窗的效应可能与抑制脑梗死大鼠缺血脑组织中AIF、PARP1、Endo-G的蛋白表达有关。