电镜核酸分子原位杂交技术的探索

显微水平的核酸分子原位杂交技术已广泛地应用于基因在染色体上的定位,发育过程中的基因表达等方面,但电镜水平的原位杂交技术却仍在探索之中,主要因为剧烈的核酸分子杂交条件与样品精细结构的保存之间存在着矛盾,为此,我们分别在分级抽提的整装细胞,L-K_4包埋或Epon812包埋的超薄切片样品以及DGD包埋-去包埋样品中对进行电镜分子原位杂交研究的可行性和杂交条件进行了一些探索,目前在整装细胞样品中已取得初步的结果。

白细胞核酸分子原位杂交技术的建立

近年来,国内外不少学者利用斑点杂交和墨迹杂交法证实白细胞内存在HBV-DNA,用原位杂交技术研究白细胞内HBV-DNA存在状态尚未见报道。我们近二年来开展了此项研究,获得了初步结果。现报告如下: 材料慢性HBV感染经斑点杂交证实白细胞HBV-DNA阳性的患者。

原位核酸分子杂交技术检测宫颈鳞状上皮病变HPV感染

目的:观察宫颈鳞状上皮病变过程中HPV6/11、HPV16/18的表达,探讨其测定的临床意义。方法:选择病理诊断为宫颈慢性炎症50例、鳞状上皮乳头状瘤样增生30例、尖锐湿疣30例、上皮内瘤变89例、鳞癌50例共249例石蜡包埋标本,应用原位核酸分子杂交技术对其进行HPV6/11,HPV16/18检测。结果:慢性炎症组HPV6/11阳性表达4%,HPV16/18阳性表达0%;乳头状瘤样增生组HPV6/11阳性表达10%,HPV16/18阳性表达3.3%;尖锐湿疣组HPV6/11阳性表达93.3%,HPV16/18阳性表达23.3%;CIN组中Ⅰ级HPV6/11阳性表达48.9%,HPV16/18阳性表达42.2%;Ⅱ级HPV6/11阳性表达39.1%,HPV16/18阳性表达69.6%;Ⅲ级HPV6/11阳性表达9.5%,HPV16/18阳性表达66.7%;鳞癌组HPV6/11阳性表达6%,HPV16/18阳性表达82%。结论:应用原位核酸分子杂交技术检测宫颈鳞状上皮病变细胞的HPV6/11、HPV16/18,为临床早期诊断、鉴别诊断及评估预后提供可靠的理论依据。

用核酸原位杂交技术观察细粒棘球绦虫66kDa抗原mRNA在虫体上的细胞定位

目的 :用核酸原位杂交技术观察细粒棘球绦虫 6 6kDa抗原mRNA在虫体上的细胞定位以及在虫体发育的不同时期mRNA含量的变化。方法 :以 6 6kDa抗原的cDNA克隆EgA31为模板制备RNA探针 ,与细粒棘球绦虫原头蚴、育囊和成虫虫体进行原位杂交实验。结果 :原位杂交实验显示EgA31mRNA主要位于原头蚴和成虫的皮层下某种细胞中 ,并在棘球蚴育囊的生发层中也存在这种细胞。在原头蚴向成虫的发育过程中虫体吸盘处细胞内EgA31mRNA含量显著增加。结论 :含EgA31mRNA的细胞很可能是皮层细胞 ;EgA31蛋白可能参与吸盘上肌纤维的收缩作用并与虫体的免疫逃避功能有关。

揭秘基因密码—荧光原位杂交分子病理报告解读

生命是一部由基因编写的复杂交响曲,而荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)是揭示这部交响曲内在奥秘的重要工具之一。FISH是一种生物分子分析技术,用于研究细胞和组织中的染色体结构、基因定位和基因表达。该技术通过使用荧光标记的DNA或RNA探针与目标DNA或RNA序列杂交,然后通过荧光显微镜观察杂交信号的位置和数量。FISH技术让人们能够在细胞和组织层面上观察基因、染色体的情况,了解患者病变部位的分子生物学特征,从而为个体化医疗提供支持。但对于许多患者而言,他们并不了解FISH,甚至对为何进行FISH检测存在疑惑。本文将从科普角度解读FISH分子病理报告,以及FISH走入临床工作的意义。

原位杂交分子组织化学技术及其在电镜技术中的应用

研究细胞或组织内特殊基因表达的调控机理，分析单细胞内蛋白质和mRNA的特殊基因表现很有必要。原位杂交对于发现mRNA是必不可缺少的方法，它不但可以分析特殊mRNA的表达，而且可以证实特殊蛋白质的合成部位。原位杂交取决于细胞或组织内靶核酸与核酸探针的碱基配对，且条件尽可能优化。作为核酸探针，人工合成的01igo-DNA颇受青睐，且在诸多方面优于克隆双链CDNA。应用01igo-DNA探针可在组织切片上清楚地将28srRNA定位于细胞核或细胞质部位。原位杂交28srRNA对于评价切片中可杂交的rRNA水平十分方便。随着计算机图象分析广泛应用和酶免疫组织化学技术半抗原探针的问世，非放射性比色测定染色法也在所进步，借助显微照相与图象分析仪可以定量检测各种染色密度，或借助于扫描电镜技术背散电子探针以显示特殊的mRNA的位置。原位杂交非放射法最佳优点是它的高分辨率。这使人们可以在细胞和亚细胞水平分析mRNA的分布。事实上，应用此法研究mR－NA不规则分布方面已有明显进步。如将actinmRNA定位于细胞质；乙酸胆碱脂酶的mRNA仅限于核周区，而此种酶被输送到特定的细胞膜部位；胃泌素mRNA仅限于人胃泌素细胞的核上区，而翻译了的胃泌素蛋白质则被输送到细胞的基底部；

肽核酸荧光原位杂交技术快速检测食品中的李斯特菌属及单增李斯特菌

目的建立利用肽核酸荧光原位杂交技术(PNA-FISH)快速检测食品中李斯特菌属及单增李斯特菌的方法。方法针对李斯特菌属、单增李斯特菌分别设计合成2份PNA探针lis-16S-1、lm-16S-2,并建立荧光原位杂交技术,优化杂交条件,对选取的13株李斯特菌和其他9株非李斯特菌进行检测,验证探针的特异性和灵敏度,并对118份食品样品用LB肉汤2次增菌培养后进行PNA-FISH检测。结果探针灵敏度和特异性均为100%,从118份食品中检出14株李斯特菌和8株单增李斯特菌,结果与API方法和VITEK方法鉴定结果一致。结论 PNA-FISH方法可靠易行,对从食品中检测致病性单增李斯特菌有较高的实用性。

核酸原位杂交技术在细胞病理学的应用

杂交的技术原理是核酸碱基互补,指DNA互补链,DNA与RNA或RNA互补链间发生杂交。原位杂交是互补碱基序列形成氢键的过程。构成稳定的复合体或杂交体。主要工具是标记的特定序列探针。目前应用的探针标记物多是非放射性核位素。探针种类主要有四类：双链DNA,单链DNA,反义RNA和自动化合成的寡核苷酸探针。它们各有其本身特点。

荧光原位杂交技术在植物学中的应用

荧光原位杂交技术 (fluorescenceinsituhybridization ,FISH)是 80年代末才发展起来的一种非放射性原位杂交技术。作为一种新型的细胞分子遗传学技术 ,目前已广泛应用于细胞遗传学、分子生物学等领域。本文简要综述了该技术的基本原理与特点及其在植物学中的应用 ,包括在异源染色质的鉴定、染色体物理图谱的构建和染色体RNA及植物基因组进化中的应用。

第二军医大学长海医院病理科开展分子靶点荧光原位杂交(FISH)检测技术,为肿瘤靶向治疗提供依据

随着肿瘤细胞信号传导途径研究的不断深入,目前,肿瘤靶向治疗已成为肿瘤治疗中最有前景的方案。临床医师在选择靶向药物治疗肿瘤之前,必须了解病人的肿瘤中是否存在相应的靶点,

多探针荧光原位杂交技术在膀胱尿路上皮癌诊断中的意义

目的探讨多探针荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)在膀胱尿路上皮癌诊断的可行性,并探讨其与肿瘤临床分期和病理分级的关系。方法收集经膀胱镜检查诊断为膀胱移行细胞癌35例患者,及10例非肿瘤病人,10例正常人群的新鲜尿液标本,应用FISH检测膀胱尿路上皮癌患者尿液脱落细胞中的3、7、17、9号染色体异常,并进行尿细胞学检测(Urinary cytological examination,UCE)。统计学分析FISH和UCE诊断膀胱癌的灵敏性和特异性,并分析FISH检测染色体突变与膀胱肿瘤分期及分级的相关性。结果多探针联合FISH技术与UCE诊断膀胱癌的灵敏度分别为82.86%和37.14%(P<0.05),特异度分别为95.0%和100%(P>0.05)。3、7及17号染色体着丝粒特异性探针及9号染色体长臂2区1带(9p21)的p16位点特异性探针联合应用诊断膀胱癌的灵敏度为82.86%,而单一探针诊断膀胱癌的灵敏度最高仅为65.71%。膀胱癌患者中发生3、7、17号染色体畸变及9号染色体p16基因畸变均与不同病理分级(G1-G3)有关(P<0.05);3、7号染色体畸变与临床分期(T0-T4)有相关性(P<0.05),而17号染色体及9号染色体p16基因畸变与临床分期无相关性(P>0.05)。结论多荧光探针FISH诊断膀胱尿路上皮癌敏感性高、特异性强、无创,且与肿瘤分期和分级有一定相关性,临床应用价值高。

麦类作物基因组原位杂交技术要点分析

基因组原位杂交是在分子水平上检测外源染色质的一种有效方法 ,其探针是总基因组DNA .该技术广泛应用于植物进化和亲缘关系的鉴定上 .

荧光原位杂交技术在多发性骨髓瘤染色体异常检测中的应用

分子细胞遗传学技术,尤其是荧光原位杂交技术的应用．克服了传统细胞遗传学方法的缺陷,大大推动了多发性骨髓瘤的细胞遗传学研究,提高了多发性骨髓瘤染色体异常的检出率。各种荧光原位杂交技术互相补充可以提高染色体异常的检出率,这有利于促进分子生物学研究的进展,从而进一步了解该疾病的发病机制,最终开发新疗法,提高治愈率。