原位核酸分子杂交技术检测宫颈鳞状上皮病变HPV感染

目的:观察宫颈鳞状上皮病变过程中HPV6/11、HPV16/18的表达,探讨其测定的临床意义。方法:选择病理诊断为宫颈慢性炎症50例、鳞状上皮乳头状瘤样增生30例、尖锐湿疣30例、上皮内瘤变89例、鳞癌50例共249例石蜡包埋标本,应用原位核酸分子杂交技术对其进行HPV6/11,HPV16/18检测。结果:慢性炎症组HPV6/11阳性表达4%,HPV16/18阳性表达0%;乳头状瘤样增生组HPV6/11阳性表达10%,HPV16/18阳性表达3.3%;尖锐湿疣组HPV6/11阳性表达93.3%,HPV16/18阳性表达23.3%;CIN组中Ⅰ级HPV6/11阳性表达48.9%,HPV16/18阳性表达42.2%;Ⅱ级HPV6/11阳性表达39.1%,HPV16/18阳性表达69.6%;Ⅲ级HPV6/11阳性表达9.5%,HPV16/18阳性表达66.7%;鳞癌组HPV6/11阳性表达6%,HPV16/18阳性表达82%。结论:应用原位核酸分子杂交技术检测宫颈鳞状上皮病变细胞的HPV6/11、HPV16/18,为临床早期诊断、鉴别诊断及评估预后提供可靠的理论依据。

滋养细胞肿瘤N-ras基因原位分子杂交研究

目的 :为探讨滋养细胞肿瘤发病原因。方法 :采用核酸原位分子杂交技术 ,用地高辛标记的N ras基因探针与 40例滋养细胞肿瘤患者的刮宫标本及子宫切除标本进行原位杂交。用图像分析仪分别测各组阳性信号的灰度值作定量分析。结果 :随着恶性程度的增加 ,N ras基因阳性信号的表达呈增高趋势 ,恶性葡萄胎和绒毛膜癌明显高于良性葡萄胎和正常绒毛 ,有极显著性差异 (P <0 .0 1 )。结论 :N ras基因与滋养细胞的增殖、分化、恶变有关 ,由于N ras基因的过度表达而致恶变。

尖锐湿疣HPV及其复发病因的分子生物学研究

本系列研究采用核酸的斑点杂交技术、Southern印迹杂交、聚合酶链反应(PCR)及组织切片原位杂交对尖锐湿疣(CA)中HPV型别进行检测。①从重庆地区CA组织中克隆出的人乳头瘤病(HPV)DNA拟称为HPV-CA。在严格杂交条件下,以HPV-CA为探针与14例CA DNA杂交,全部呈阳性,大部份含HPV-CA DNA序列。

前列腺上皮源性Ets转录因子在前列腺癌中的表达及意义

目的:探讨前列腺癌(PCa)中前列腺上皮源性Ets转录因子(prostate epithelium-specific Ets transcription factor,PDEF)mRNA的表达及临床意义。方法:应用核酸原位分子杂交技术(ISH)半定量法观察23例前列腺增生(BPH)、41例前列腺癌组织中PDEF mRNA的表达,并对检测结果进行分析。结果:BPH组织PDEF mRNA中等阳性及强阳性表达率为34.8%(8/23),明显低于PCa组织(73.2%,30/41,P<0.01)。A+B期PCa组织中PDEF mRNA中等阳性及强阳性表达率为57.1%(12/21),明显低于C+D期(90%,18/20,P<0.05);高分化PCa组织PDEF mRNA强阳性表达率(8.3%,1/12),明显低于中等分化(64.3%,9/14)及低分化组织(73.3%,11/15,P<0.05),中等分化与低分化组织无显著差异。PDEF mRNA的表达与PSA表达存在相关性(P<0.05)。结论:PDEF基因可能参与了PCa的发生、发展和演变过程。

CD44smRNA在胃癌和肠癌中的表达及意义

目的探讨标准型CD44smRNA在胃癌和肠癌中的表达情况及其与癌转移的相关性。方法采用核酸原位杂交技术(ISH)对36例胃癌和35例肠癌组织进行检测。结果CD44smRNA在胃癌、肠癌的阳性率分别为58.33%(21/36)、62.86%(22/35)。CD44smRNA表达与癌的分化程度、病理类型及淋巴结转移个数无相关性;与胃癌和肠癌的淋巴结转移有明显相关性(P<0.05),并且当癌侵及肌层、浆膜时,其阳性率明显升高。结论CD44smRNA在胃癌和肠癌中有较高表达,其表达与癌组织有无淋巴结转移和浸润深度有关,检测CD44smRNA对胃肠癌患者淋巴结转移潜能及判断预后有提示作用。

斯氏按蚊丝氨酸蛋白酶基因克隆及其与约氏疟原虫卵囊黑化关系的研究

目的克隆斯氏按蚊丝氨酸蛋白酶基因,分析该分子与约氏疟原虫卵囊黑化关系。方法根据其它昆虫丝氨酸蛋白酶的保守氨基酸序列设计简并引物,以斯氏按蚊全蚊cDNA为模板,进行RT-PCR扩增,PCR产物纯化,克隆入pUCm(T载体,测定插入片段序列,对序列进行BLAST检索和鉴定,根据序列设计相应基因的特异引物,然后分别从血淋巴细胞或中肠扩增目的基因,并进行不同食源条件下丝氨酸蛋白酶基因的半定量、原位核酸分子杂交定位与约氏疟原虫卵囊黑化关系的分析。结果获得了2种斯氏按蚊血细胞丝氨酸蛋白酶cDNA部分序列,即AsSP1(448bp)和AsSP2(472bp),分别与冈比亚按蚊SP2A和大劣按蚊SP2基因很相似,其编码的氨基酸序列均包含保守的丝氨酸蛋白酶催化功能域。在中肠和血淋巴内也获得相同的目的基因片段,半定量分析显示约氏疟原虫感染或诱导卵囊黑化呈现之前的表达明显增强,原位核酸分子杂交技术也进一步证实血细胞有AsSP1和AsSP2 mRNA表达。结论AsSP1和AsSP2很可能与疟原虫感染或约氏疟原虫卵囊黑化相关,推测可能是斯氏按蚊的前酚氧化酶的活化酶。

前列腺干细胞抗原在前列腺组织的表达及意义

目的演探讨前列腺干细胞抗原(prostatestemcellantigen,PSCA)在前列腺组织中的表达及其意义。眼方法演应用核酸分子原位杂交穴ISH雪技术,对PSCAmRNA在26例前列腺癌、20例良性前列腺增生(BPH)和9例正常前列腺(NP)标本中的表达水平进行检测及定位。眼结果演PSCAmRNA在NP、BPH及前列腺癌组织表达阳性率分别为66.7%、70.0%及84.6%,强阳性率分别为0、10.0%及57.7%。NP与BPH组织表达水平无显著差异(P>0.05),其表达定位于前列腺上皮的基底细胞层;PSCAmRNA在前列腺癌组织主要表达于癌细胞,细胞间质和肌肉组织均无表达。前列腺癌与NP、BPH组织表达水平均有显著差异(P<0.01)。PSCAmRNA表达水平与前列腺癌临床分期、病理分级均无相关性(P>0.05)。眼结论演PSCA高表达是前列腺癌的共同特征;PSCA在前列腺癌早期诊断与免疫靶向治疗方面有良好的开发应用前景。

组织病理技术研究进展

病理技术是病理诊断的基础,也是病理研究中的方法学,在生物医疗活动中占有重要作用。组织病理技术作为基础医学和临床医学的桥梁,在多个领域得到了广泛的应用,并在各项研究中不断进行着新的探索,发展和形成了免疫组织化学、原位核酸分子杂交、激光共聚扫描显微等多种现代病理技术,具有较好的应用价值和广阔的应用前景。论文就近年来组织病理技术的研究进展及部分应用成果进行了简要综述,以期为病理学研究方法、试剂及仪器的选择提供新的线索和基础。

膀胱移行细胞癌中端粒酶逆转录酶的表达及意义

目的 研究端粒酶逆转录酶 (hTRT)在膀胱移行细胞癌BTCC中的表达及其与肿瘤分级、分期、复发之间的关系。方法 采用原位核酸分子杂交法 ,对 5 2例BTCC和 10例正常膀胱中hTRT的表达情况进行检测 ,分析其在膀胱癌和非癌膀胱组织中的表达以及与肿瘤病理学分级、分期和患者复发情况的关系。结果 5 2例BTCC中hTRT表达均较正常膀胱黏膜增高 ,阳性率为 90 4 % (P <0 0 0 1) ;hTRT的表达随BTCC的病理分级、分期的增高而相应增高 ,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中表达率分别为 80 0 %、95 8%、10 0 % ,浅表性 (Tis T1 )、浸润性 (T2 T4 )中表达率分别为 87 0 %、93 1% ,初发BTCC、复发BTCC表达率为 87 5 %、95 0 % (P<0 0 5 ) ;结论 人端粒酶逆转录酶 (hTRT)在BTCC中表达上调 ,提示hTRT可能通过激活端粒酶 ,使细胞无限增殖 ,对BTCC的发生发展起重要作用 ;hTRT随BTCC病理分级、分期增高而表达增高 ,并与肿瘤复发有关 ,hTRT有可能作为判断分级、分期 ,监测复发的指标 ;hTRT可能为膀胱癌基因治疗提供新的合理靶点。

TLR_4和HBD-2在鼻黏膜组织中的表达及意义

目的:探讨Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)mRNA及人β防御素2(human beta-defensin-2,HBD-2)在鼻黏膜组织中的表达及意义。方法:采用核酸分子原位杂交技术和免疫组织化学技术分别检测慢性鼻、鼻窦炎患者鼻黏膜组织中TLR4 mRNA和HBD-2的表达。结果:TLR4 mRNA在病变组鼻黏膜组织中的表达明显强于对照组(P<0.05)。但在病变组中13例Ⅰ型和17例Ⅱ型慢性鼻、鼻窦炎患者的病变鼻黏膜组织中的表达差异无显著性;HBD-2在对照组未见表达,而在病变组均出现不同程度的表达,两组间的表达差异具有显著性(P<0.01),而且在Ⅱ型病变鼻黏膜组织中的表达明显强于Ⅰ型(P<0.05)。结论:TLR4可能参与了鼻黏膜天然免疫,HBD-2可能是炎症反应的重要产物之一。致炎因子通过TLR4对病原微生物进行识别,激活鼻黏膜上皮细胞,最终导致炎性细胞产生大量的HBD-2,这可能在鼻黏膜启动有效的炎性免疫反应过程中具有一定的作用。

斯氏按蚊PPO1基因克隆及其与约氏疟原虫卵囊黑化关系的研究

目的克隆和分析斯氏按蚊前酚氧化酶基因与约氏疟原虫卵囊黑化关系。方法根据其他昆虫前酚氧化酶基因的保守氨基酸序列设计简并引物,以斯氏按蚊全蚊RNA为模板,进行RT-PCR扩增,PCR产物纯化,克隆入pUCm-T载体,测定插入片段序列,对序列进行BLAST检索和鉴定。根据序列设计相应基因的特异引物,然后分别从血淋巴细胞或中肠扩增目的基因,并进行不同食源条件下前酚氧化酶基因的半定量、原位核酸分子杂交定位及与约氏疟原虫卵囊黑化关系的分析。结果获得了1种斯氏按蚊血淋巴前酚氧化酶基因cDNA部分序列,即AsPPO1(600bp),分别与冈比亚按蚊PPO1和大劣按蚊PPO2基因很相似,其编码的氨基酸序列均包含PO保守的铜结合位点CuA(HHWHWHLVYP)序列。在中肠和血淋巴内也获得相同的目的基因片段,半定量分析显示约氏疟原虫感染或诱导卵囊黑化呈现之前的表达明显增强,原位核酸分子杂交技术也进一步证实血淋巴有AsPPO1mRNA表达。结论As-PPO1很可能与疟原虫感染或约氏疟原虫卵囊黑化相关。

免疫源性的ACTH受体及5-HT1A受体表达研究

目的:通过检测ACTHR、5HT1AR蛋白及其mRNA在人淋巴组织中的表达情况,寻求神经免疫内分泌网络之间功能双向调节的形态学依据。方法:应用免疫组织化学及核酸分子原位杂交方法检测ACTHR、5HT1AR蛋白及其mRNA在人100例淋巴结、脾脏及肠道淋巴组织中的表达。结果:免疫组织化学显示ACTHR、5HT1AR在各种淋巴组织中表达的阳性率为82.5%和86.3%,与原位杂交(阳性率为70%和75%)之间无统计学差异(χ2=1.907、0.570,均P>0.05)。结论:人的免疫活性细胞不但可以表达ACTHR、5HT1AR蛋白,还可以合成其mRNA,ACTH、5HT都可以通过免疫细胞膜上的ACTHR、5HT1AR发挥对免疫系统的调节作用。

C-myc基因过度表达与妊娠滋养细胞疾病预后关系的探讨

采用核酸分子杂交技术，以地高辛dig－11－dUTP标记的C－myc基因探针与54例妊娠滋养细胞疾病（GTD）石蜡包埋组织（其中葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒癌各18例）进行原位杂交，定性、半定量地测定了C－myc基因在GTD组织中的表达，结果提示：C－myc基因随着GTD病变的发展，其表达呈逐渐增高的趋势：C－myc基因与恶性滋养细胞肿瘤的临床分期及预后有关，即临床分期越晚，C－myc阳性表达率越高；年龄≥40岁、病程＞1年、前次妊娠为非葡萄胎、恶性程度高及有转移组的患者，其C－myc阳性表达率增高。

IGF-1R基因在膀胱移行细胞癌中的表达

目的研究胰岛素样生长因子受体-1(insulin-like growth factor 1-receptor,IGF-1R)mRNA在膀胱移行细胞癌(BTCC)中的表达及意义。方法用原位杂交方法检测40例BTCC组织和15例正常膀胱黏膜组织中IGF-1RmRNA的表达;分析IGF-1R mRNA表达与BTCC临床病理特征间的关系。结果 1)IGF-1R mRNA在BTCC中表达阳性率为77.5%,在正常膀胱黏膜组织中不表达;2)IGF-1R mRNA在BTCC中表达随临床分期及病理分级的升高而增加;肿瘤转移组高于无转移组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IGF-1R mRNA在BTCC中高表达,且与BTCC的发生、发展相关,是膀胱肿瘤的一种重要标记物。

IGF-1R基因在膀胱移行细胞癌中的表达

目的研究胰岛素样生长因子受体-1(insulin-like growth factor 1-receptor,IGF-1R) mRNA在膀胱移行细胞癌(BTCC)中的表达及意义。方法用原位杂交方法检测40例BTCC组织和15例正常膀胱粘膜组织中IGF-1R mRNA的表达;分析IGF-1R mRNA表达与BTCC临床病理特征间的关系。结果 IGF-1R mRNA在BTCC中表达阳性率为77.5%,在正常膀胱黏膜组织中不表达;IGF-1R mRNA在BTCC中表达随临床分期及病理分级的升高而增加,肿瘤转移组高于无转移组。结论 IGF-1R mRNA在BTCC中高表达,且与BTCC的发生、发展相关,是膀胱肿瘤的一种重要标记物。

环氧化酶-2在膀胱移行细胞癌中表达的临床意义

目的:研究膀胱移行细胞癌(BTCC)中环氧化酶-2(COX-2)的表达及其与肿瘤分级、分期和复发的关系。方法:采用原位核酸分子杂交技术,对48例BTCC和10例正常膀胱黏膜中COX-2表达进行检测,结合临床资料分析COX-2在BTCC发生发展中的作用。结果:BTCC中COX-2mRNA表达高于正常组(P<0.001),并随肿瘤分级、分期增高而增高,低分化、浸润性的复发组COX-2mRNA表达高于高分化、浅表性的未复发组(P<0.05)。结论:COX-2mRNA的表达水平随BTCC分级分期增高上调,并与肿瘤复发有关,可作为判断BTCC生物学行为的有用指标,有助于我们更准确地判断膀胱癌的进展和预后。

COX-2在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的研究膀胱移行细胞癌中COX-2表达及其与肿瘤临床分期、病理分级、复发和转移的关系。方法采用免疫组化技术检测40例膀胱移行细胞癌组织和12例正常膀胱黏膜组织中COX-2蛋白表达,并分析其与膀胱癌临床分期、病理分级、复发和转移的关系。结果膀胱移行细胞癌组织中COX-2蛋白表达增高,阳性率为77.5%;并随肿瘤分期、分级增高而增高,复发组高于无复发组,转移组高于未转移组。结论膀胱移行细胞癌组织中COX-2蛋白高表达,并与肿瘤临床分期、病理分级、复发和转移有关,对膀胱癌的诊断和判断预后有一定的意义。

乳腺癌中MTA1，ER的表达及其相关性研究

目的观察MTA1,ER在乳腺癌中的表达,探讨两者与乳腺癌侵袭能力的相关性。方法应用原位核酸分子杂交和免疫组织化学分别检测正常乳腺组织、癌前病变组织及乳腺癌组织中MTA1,ER的表达;并以Spearman等级相关分析它们的相关性。结果在正常乳腺组织、癌前病变组织、乳腺癌组织中,原位杂交对MTA1,ER的阳性检出率高于免疫组化,原位杂交检测中MTA1 mRNA的表达率分别为12.2%,33.3%,81.1%;免疫组化检测中MTA1的表达率分别为11.1%,31.1%,72.2%;原位杂交检测中ER mRNA的表达率分别为83.3%,61.1%,37.8%,免疫组化检测中ER的表达率分别为70.9%,56.7%和35.6%。MTA1在ER阴性组中的阳性表达率为86.2%,高于阳性组中的46.9%。结论原位杂交和免疫组化联合检测增加MTA1,ER基因的检出率;随疾病的进展和肿瘤分化程度的降低,MTA1表达逐渐增强,ER表达逐渐减弱,甚至丧失。MTA1与ER表达呈负相关(r=-0.466,P<0.01)。提示MTA1,ER可作为乳腺癌预后及治疗重要的分子标记物。