核酸可视化检测技术研究进展

传统核酸检测技术依赖于以热循环为基础的聚合酶链式反应和昂贵的检测仪器,不适合现场快速检测。快速检测的发展趋势应是低成本和便携式仪器,结合了等温扩增技术和可视化检测技术的核酸可视化检测在现场快速检测领域有着巨大的发展潜力和应用前景。本文综述了等温扩增技术和可视化检测技术的种类及特点,并对核酸可视化检测技术在现场快速检测中的应用进行了展望。

检测寨卡病毒核酸的RT-LAMP可视化方法的建立

为建立简单、便捷、灵敏、特异的寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)快速检测方法,本研究通过对不同时间、不同地区分离的ZIKV全基因组序列进行分析,筛选ZIKV NS5基因保守区为靶标,同时设计特异性引物及探针,结合RT-LAMP恒温扩增技术和免疫层析技术,成功构建ZIKV反转录环介导等温扩增核酸可视化(RT-LAMP-VF)检测方法。结果显示,该方法具有良好的特异性和敏感性,当内、外、环引物比为FIP∶LF∶F3=4∶2∶1时,在61℃条件下恒温扩增45 min,可特异性检测到10^(2)copies/μL的RNA标准品以及2.15 pfu的ZIKV,且与其他黄病毒(日本乙型脑炎病毒、猪瘟病毒)等无交叉反应。血液组织中的其他RNA不影响RT-LAMP-VF的敏感性和特异性,表明该方法可用于临床样本ZIKV的检测。本研究建立的ZIKV RT-LAMP-VF检测方法操作简单、不需要特殊仪器设备,尤其适用于基层单位ZIKV的现场快速检测,为ZIKV病的现场快速检测和预警预报体系的建立提供技术支持与物质保障。

饲料中肠炎沙门氏菌CPA-LFD检测方法的建立

为建立饲料中肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis,SE)的快速检测方法,针对sdfⅠ基因设计交叉引物,优化反应条件,建立饲料中肠炎沙门氏菌的交叉引物等温扩增联合横向流动试纸条可视化检测法(CPALFD)。检测条件:反应时间60 min、反应温度63℃、甜菜碱浓度1.2 mmol/L、Mg^(2+)浓度5.0 mmol/L、BST DNA聚合酶8 U、dNTPs浓度0.3 mmol/L。结果显示:检测限为1.0×10^(1)ng/L,与鼠伤寒沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、德尔卑沙门氏菌、单增李斯特菌、志贺氏菌等常见菌无交叉反应;对56份疑似污染样品检测结果显示,CPA-LFD法与国标法和PCR法检测结果一致。研究表明,初步建立饲料中肠炎沙门氏菌的CPA-LFD检测方法。