人乳头状瘤病毒核酸定量检测与宫颈细胞学病理特征的相关研究

目的探讨人乳头状瘤病毒(HPV)核酸定量检测与宫颈细胞学病理特征的相关性。方法选取2018年5月至2021年4月本院收治的82例宫颈病变患者作为研究对象。所有患者均接受HPV核酸定量检测并分析单位细胞内HPV病毒载量,分析不同宫颈病变患者病理特征与HPV阳性的关系,比较不同病理分型患者HPV病毒载量,分析HPV病毒载量与宫颈上皮内瘤变(CIN)分级的相关性。结果HPV核酸定量检测结果显示,82例宫颈病变患者中,HPV阳性人数61例,其中低级别鳞状上皮内病变(LSIL)、高级别鳞状上皮内病变(HSIL)、宫颈癌患者中HPV阳性人数分别为19、18、24例。不同病理分型、宫旁侵润患者HPV阳性占比比较差异有统计学意义(P<0.05);不同年龄、肿瘤最大径、淋巴结转移患者HPV阳性占比比较差异无统计学意义。随着患者宫颈病变程度提高HPV病毒载量呈升高趋势,差异有统计学意义(P<0.05);且HSIL、宫颈癌患者HPV病毒载量均高于LSIL患者,宫颈癌患者高于HSIL患者,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,HPV病毒载量与CIN分级呈正相关(r=0.767,P<0.05)。结论HPV核酸定量检测技术可对宫颈病变患者HPV感染情况及病毒载量进行准确分析,有助于临床对检查者宫颈病变程度及癌变风险做出准确诊断。

脱氧核糖核酸定量的潜在基准方法研究进展

脱氧核糖核酸定量分析是食品安全检验、医疗诊断、转基因检测与病原微生物鉴定等相关领域的基础。常见的定量方法种类繁多,如紫外分光光度法、荧光染料法和实时荧光定量PCR法等等,各有所长,但测量结果缺乏可靠性、可比性和一致性。随着研究的深入与应用要求的提高,基准方法成为了核酸分析以及核酸测量能力评估的关键。本文综述了近年来三种成为潜在脱氧核糖核酸定量基准方法的研究发展,评述了各种方法的技术优势、不足与应用潜力,以期为其相关研究和利用提供参考。

丙型肝炎病毒核酸定量和抗-HCV血清学分析的诊断价值

目的探讨PCR-荧光探针法与抗-HCV检测在丙型肝炎(丙肝)诊断中的应用价值。方法回顾性分析265例疑似丙肝病毒感染者行HCV-RNA、抗-HCV及ALT检测的资料,统计不同年龄、性别分布情况,进行HCV-RNA与抗-HCV、ALT的相关性分析。结果 (1)男性抗-HCV与HCV-RNA的阳性率均高于女性,但差异无统计学意义(P>0.05);年龄>40岁的患者抗-HCV与HCV-RNA的阳性率明显高于年龄≤40岁的患者,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)ALT异常率随HCV-RNA阳性率的增高而增加,并与HCV-RNA含量成正相关(r=0.999,P<0.05)。但ALT的水平与HCV-RNA含量无相关性(r=0.800,P>0.05)。(3)HCV-RNA阳性多伴有抗-HCV阳性(r=0.320),二者有很好的相关性。结论 ELISA法检测抗-HCV在丙型肝炎诊断中仍旧为首选检测方法。联合应用HCV-RNA和抗-HCV及ALT检测,是诊断丙型肝炎最为可靠的方法。

丙型肝炎病毒核酸定量检测的临床意义

目的 研究丙型肝炎患者血清中的丙型肝炎病毒核糖核酸 (HCVRNA)载量与抗丙型肝炎病毒抗体 (抗 HCV)之间的相关性。方法 用荧光定量 (FQ PCR)法检测 2 0 8例疑诊丙型肝炎患者血清中的HCVRNA ,酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗 HCV。结果 2 0 8例血清样本中HCVRNA阳性率为 81.3 %。HCVRNA平均载量为 4.63× 10 5Copies/ml。结论 FQ PCR法检测HCVRNA是判定HCV感染的直接证据 ,是反映病毒复制与传染性的直接指标 ,有确诊价值与抗病毒治疗疗效评估价值。HCVRNA与抗 HCV具有高度正相关。HCVRNA较抗

核酸定量检测试验应用于HIV-1感染实验室诊断的探讨

目的:探讨核酸定量检测在HIV-1感染实验室诊断中的应用。方法:选取145例第四代抗原/抗体联合诊断筛查试验为阳性反应的血浆样本,分别用Western印迹和HIV-1核酸定量方法进行检测,综合对比分析2种方法检测结果。结果:Western印迹检出阳性样本120例,不确定样本17例,阴性样本8例;HIV-1核酸定量试验检出结果大于检测限样本131例,其中包括12例Western印迹不确定样本、2例Western印迹阴性样本;有3例Western印迹阳性样本用HIV-1核酸定量检测试验未能检出。结论:核酸定量检测试验对于HIV-1感染阳性样本是一种有效的实验室诊断方法;对HIV-1核酸定量检测结果为"TND"的样本,建议加做Western印迹或结合其他补充试验结果进行综合诊断。

乙型肝炎血清学少见模式与核酸定量分析

目的通过乙型肝炎(乙肝)血清学少见模式与核酸定量对比分析,了解少见模式中核酸复制情况,为临床判断少见模式的传染性及采取有效的治疗方案提供科学依据。方法分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量进行血清学检测和乙肝核酸定量检测。结果模式"1、3"所占比例最高,达70.19%,核酸载量对数值7.81±1.22,传染性较强;HBsAg、抗HBs同时阳性者占少见模式的18.5%;HBeAg、抗-HBe同时阳性占4.65%,核酸载量对数值8.34±0.44,是病毒复制最高的一组。结论临床实验室检测到乙肝少见模式应引起重视,及时与临床沟通,并结合HBV DNA检测及临床资料,综合分析HBV复制、感染状况及产生少见模式的真正原因,为临床的诊断和治疗提供可靠的依据。

慢性无症状乙型肝炎病毒感染者检测病毒核酸定量的临床意义

目的 :探讨乙型肝炎病毒核酸 (HBV DNA)定量检测对慢性无症状乙型肝炎病毒感染者 (ASI)的临床价值。方法 :对 51例ASI行血清学丙氨酸转氨酶 (ALT)、乙型肝炎病毒标志 (HBVM)、HBV DNA定量检测 ,2例血清HB VeAg(- )者行肝活检 ,免疫组化染色。结果 :血清 1 0 5～、1 0 6～copies ml病毒含量 :血清HBeAg(+)为 1 9 2 5例 (76 % ) ,HBeAg(- )为 1 4 2 6例 (53 9% )。 2例血清HBeAg(- )肝活检者肝细胞均有HBsAg及HBcAg表达。结论 :即或血清HBeAg(- ) ,病毒复制未必完全停止 ,开展血清HBVDNA定量检测对病情观察、预后判断、传染源管理有重要临床意义。

磁珠法在120例丙型肝炎病毒核酸定量检测中的应用效果观察

[目的]观察磁珠法在丙型肝炎病毒核酸定量检测中的应用效果.[方法]选择自2018年1月至2020年1月间采集的120例丙型肝炎患者的丙型肝炎病毒(HCV)血清标本,其中低病毒载量22例,中病毒载量64例,高病毒载量34例,采用提取柱法与磁珠法核酸定量检测,根据浓度1×10^(8)样本梯度稀释结果比较2种核酸定量检测方法的灵敏度和线性范围.[结果]磁珠法HCV核酸定量检测阳性率为70.0%,与提取柱法的66.7%比较差异无统计学意义(P>0.05);22例低病毒载量的HCV血清标本磁珠法检测阳性率为40.9%,明显高于提取柱法的9.1%(χ^(2)=5.9394,P=0.0148);磁珠法灵敏度和线性范围分别为39 U/mL和3.9×(10^(1)~10^(8)),与提取柱法比较差异有统计学意义(P<0.05).[结论]磁珠法与提取柱法在中、高病毒载量的检测中一致性较好,在低病毒载量的检测中磁珠法较提取柱法核酸定量检测的灵敏度更高,线性范围更广.

核酸定量和免疫标志物检测在乙型病毒性肝炎诊断中的评价

目的 探讨血清中乙型肝炎病毒核酸(HBV -DNA)含量和其免疫标志物的关系 ,其在乙型病毒性肝炎(乙肝)临床诊治和预后中的应用评价。方法 用荧光实时定量聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验对318例诊断或怀疑为乙肝患者的血清标本分别进行HBV -DNA、乙肝免疫标志物(HBsAg、抗 -HBs、HBeAg、抗 -HBe和抗 -HBc)的检测 ,结果HBV的s抗原、e抗原、c抗体(HBsAg、HBeAg、抗 -HBc)都阳性的标本 ,其血清HBV -DNA阳性率为96.95 % (127/131) ,平均含量为106.36±1.46拷贝/ml;HBsAg、抗 -HBe、抗 -HBc都阳性的标本 ,其血清HBV -DNA阳性率为43.86 %(25/57) ,平均含量为104.08±0.92 拷贝/ml;12.12%(4/33)乙肝免疫标志检测阴性标本仍可检出HBV -DNA。结论 血清乙肝病毒核酸的定量与乙肝免疫标志检测相比 ,有较高的敏感度 ,但难以检出非病毒复制状态的感染 ,尚不能替代血清标志物的检测 ,在乙肝患者诊治过程中 ,应联合乙肝免疫标志、HBV -DNA的检测 ,以助于疾病的诊断、疗效观察以及预后判断。

不同稀释液对标准品核酸定量结果的影响研究

对HBV 4th WHO IS 10/266(NIBSC)国际标准品稀释液进行选择和评估,筛选出稳定的对定值结果影响最小的稀释液,为PCR实验室标准品常规稀释提供理论基础和实验依据。通过选用不同浓度的稀释液,将国际标准品稀释成梯度,应用乙型肝炎病毒核酸检测试剂盒进行准确度和最低检测限验证。准确度验证每个稀释度重复检测6次;最低检测限验证每个稀释度重复检测20次;根据准确度和最低检测限的对比测试结果筛选出最优的稀释液,同时用筛选出的稀释液分别将企业参考品Q2稀释至线性范围内各浓度,每个浓度重复检测2次,以理论值为Y值检测值为X分别进行线性拟合(Y=aX+b)。结果:第一,10%小牛血清①和小牛血清②以及50%阴性血浆②和100%阴性血浆①稀释后检测结果与理论值最接近,△Log均小于0.1;第二,10%稀释度的小牛血清和阴性血浆稀释后的检测下限全部检出,50%稀释度的阴性血浆①和阴性血浆②符合95%的检出限,而原倍的只有阴性血浆①和1x TE全部检出。第三,对筛选后的稀释液稀释的企业参考品各浓度样本进行核酸定量检测,以理论值为Y值检测值为X分别进行线性拟合(Y=aX+b),结果显示a值均介于1.00±0.05之间,R2都大于0.98,线性关系良好,没有显著差异。通过实验数据的对比分析,10%小牛血清作为稀释液,对国际标准品定值影响最小稳定性最好,可作为实验室WHO标准品稀释液。

临床核酸定量方法简介

随着临床医学和临床分子生物学检验的发展,核酸定量检测作为一项重要指标显得越来越重要,试验结果可靠与否,直接影响临床的治疗,因此,了解各个方法的原理、优缺点是非常必要的.下面介绍一下关于核酸定量检测的几种方法:

数字PCR和荧光定量PCR技术在EB病毒核酸定量检测中的应用比较

目的 以微滴式数字PCR技术(ddPCR)为标准,考察实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测EBV DNA的临床检测性能,并评估ddPCR技术临床有效性和实用性。方法 收集229例疑似EBV感染相关疾病患者血浆标本,采用ddPCR和qPCR两种方法测定同一份血浆标本的EBV DNA载量。结果 疑似EBV感染人群中,采用ddPCR方法检测的阳性率为50.22%,采用qPCR方法检测的阳性率为20.96%,阳性率差异有统计学意义(P <0.05),其中两种方法结果不一致的样本98.51%(66/67)经一代测序证实为特异的EBV DNA信号。以ddPCR为标准,qPCR检测EBV DNA的灵敏度为41.74%,当qPCR的阈值从1 000 IU/ml提升到11 IU/ml时,灵敏度可提高到87.83%。结论 采用ddPCR检测EBV DNA灵敏度更高,有利于临床EBV病毒感染的早期诊断。

建立一种高灵敏的HBV核酸定量检测方法

目的 建立一种高灵敏度的TaqMan实时荧光PCR法用于HBV核酸定量检测,并评估其临床性能。方法 针对HBV保守序列设计引物探针,收集来自国内3家医院共计631例样本,利用本文建立的方法进行HBV核酸定量检测,评估其灵敏度、特异性和重复性,并与普遍采用的对照试剂盒进行比较,评价该方法的临床性能。结果 本文建立的HBV核酸定量检测方法对5 IU/mL的HBV血清和血浆样本的检出率均为100%,且对HBV强阳性、弱阳性和临界阳性样本的阳性检出率均为100%;该方法对于可能存在交叉的15种病原体、内源干扰物及外源干扰物均无交叉反应;与对照试剂的检测结果比较基本相同,对于不一致的样本,经过复检均和本文建立的检测方法结果一致。结论 该方法具有较高的灵敏度,稳定性和重复性好,特异性强,具有较高的临床应用价值。

结核杆菌核酸定量检测与T-SPOT.TB检测在肺外结核病诊断中的应用分析

目的探究结核杆菌核酸定量检测与结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT. TB)在肺外结核病诊断中的应用。方法该研究涉及对象为肺外感染患者200例,研究时间为2018年2月-2019年2月,均行T-SPOT. TB、结核杆菌涂片、结核杆菌核酸定量检测,对比检测结果,进行统计学分析。结果 T-SPOT. TB检测阳性率(90.50%)明显高于结核杆菌涂片阳性率(21.00%),组间差异有统计学意义(χ~2=195.799,P<0.05)。结核杆菌核酸定量检测阳性率(94.00%)明显高于结核杆菌涂片阳性率(21.00%),组间差异有统计学意义(χ~2=221.409,P<0.05)。T-SPOT. TB检出阳性率(90.50%)与结核杆菌核酸定量检测(94.00%)相比,组间差异无统计学意义(χ~2=2.306,P>0.05)。结论结核杆菌核酸定量检测与T-SPOT. TB均可用于肺外结核病的诊断中,具有较高的检出率,有利于肺外结核疾病患者的治疗,值得临床上推广及使用。

两种不同乙肝病毒核酸定量试剂测定结果比较

目的:了解两种不同乙肝病毒核酸定量试剂测定结果的差异。方法:同时用两种不同乙肝定量试剂来检测乙肝患者病毒的含量,应用统计学方法对测定结果进行比较。结果:两种试剂的测定结果差异无统计学意义。结论:在日常工作中应选择曲线比较光滑、结果比较好判断的乙肝病毒核酸定量试剂。

茂名市4454例巨细胞病毒核酸定量测定结果分析

目的：通过对茂名市2014年～2017年4454例巨细胞病毒核酸定量测定结果进行分析,了解茂名市巨细胞病毒感染的高危人群,积极开展有效的预防措施.方法：对2014年～2017年期间来我院进行巨细胞病毒检测的4454例病例进行核酸定量检测,并对其结果进行统计学分析.结果：共检测4454例,阳性1463例,阳性率为32.85％,其中婴儿2871例,阳性病例844,阳性率为29.39％,儿童319例,阳性病例55例,阳性率为17.24％;孕妇1264例,阳性病例565例,阳性率为44.69％.对243对母婴检测结果进行分析,母亲阳性检出率与婴儿阳性检出率存在一定差异,具有统计学意义P〈0.01.结论：茂名市孕产妇及儿童的巨细胞病毒感染率仍处于一个较高的水平,有必要开展孕产妇的筛查工作,加强对孕产妇及儿童的干预力度.

乙肝血清学两种常见模式与相应乙肝核酸定量及两种模式的危险性分析

目的探讨乙肝血清学两种常见模式与相应乙肝核酸定量及两种模式的危险性。方法分别采用酶联免疫吸附法(ELISA法)与实时荧光定量PCR法对60例乙肝患者的血清标志物与相应乙肝核酸定量检测,分别记为模式1与模式2。结果①两种模式阳性率与相应乙肝核酸阳性率差异均具有统计学意义(P<0.05),且模式1乙肝核酸阳性率与乙肝核酸载量对数值均明显大于模式2(P<0.01),但二者阳性检测率无统计学差异(P>0.05);②两种模式下HBsAg、HBeAg、HBcAb组合与HBsAb、HBeAb、HBcAb组合阳性检测率无统计学差异(P>0.05),但两种模式下HBsAg、HBeAb、HBcAb组合阳性检测率具有统计学差异(P<0.05);③模式1HBsAg、HBcAb组合与HBeAb阳性检测率均明显大于模式2(P<0.05),但两种模式下全阴性检测结果无统计学差异(P>0.05);④两种模式下HBsAg、HBeAb、HBcAb组合及HBsAb、HBeAb、HBcAb组合HBV DNA阳性率、HBV DNA含量与HBsAg、HBeAg、HBcAb组合相比,差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论实时荧光定量PCR法具有高敏感度与高特异度等特点,在乙肝早期诊断、传染性水平及病毒复制水平等方面具有十分重要的价值;HBV M阳性率与HBV DNA含量具有较好的相关性。

HIV抗原抗体筛查结合核酸定量补充检测的应用

目的探讨艾滋病病毒(HIV)抗原抗体筛查结合核酸定量补充检测的应用效果。方法2016年6月-2018年3月HIV抗原抗体试剂筛查具有反应患者189例作为研究对象,所有患者给予3代试剂复检并采用蛋白印迹法(WB)抗体验证。结果189例患者经4代试剂HIV筛查有反应者中,反应类型排在前两位的分别为:Ag-/Ab+、Ag+/Ab-,分别占85.71%和12.17%;23例Ag+/Ab-患者均完成WB抗体确诊及核苷酸定量检测,结合患者流行病学特征、临床表现,均确诊为HIV感染。结论HIV抗原抗体筛查结合核酸定量补充检测中能提高HIV感染患者早期检出率,能评估患者预后。

丙型肝炎病毒-核糖核酸定量检测系统的性能验证及评价

目的对基于Smart 32核酸提取仪和Roche Cobas z480实时荧光PCR仪的丙型肝炎病毒(HCV)-核糖核酸(RNA)定量检测系统进行性能验证。方法依据中国合格评定国家认可委员会(CNAS)-GL039《分子诊断检验程序性能验证指南》的方案,采用标准物质及临床样本,对检测系统的正确度、精密度、线性范围、抗干扰能力、检出限、最低定量限进行验证,同时计算各性能参数与制造商声明比较。结果精密度验证结果显示,高、低浓度水平样本的重复性精密度变异系数(CV)值分别为1.54%、3.61%,中间精密度CV值分别为2.16%、4.42%,均小于厂家声明的5%。正确度:低、中值两个浓度水平标准物质的均值与靶值的误差分别为0.06和0.08,均<±0.4。线性范围:经拟合分析,证实在50~1.2×107 IU/mL呈良好线性(R2=0.9955>0.97)。抗干扰能力验证:结果显示,含30 mg/dL胆红素、3.2 g/dL甘油三酯、30 g/dL血红蛋白、6 g/dL白蛋白的干扰物质对样本检测结果无影响,且对甘油三酯和血红蛋白的抗干扰能力略高于厂家声明。检出限20 IU/mL,最低定量限50 IU/mL也与制造商声明一致。结论HCV-RNA定量检测系统正确度、精密度、线性范围、抗干扰能力、检出限、最低定量限各项性能指标与制造商声明一致,满足国际标准化组织(ISO)15189要求,可用于临床检测。