人乳头状瘤病毒核酸定量检测与宫颈细胞学病理特征的相关研究

目的探讨人乳头状瘤病毒(HPV)核酸定量检测与宫颈细胞学病理特征的相关性。方法选取2018年5月至2021年4月本院收治的82例宫颈病变患者作为研究对象。所有患者均接受HPV核酸定量检测并分析单位细胞内HPV病毒载量,分析不同宫颈病变患者病理特征与HPV阳性的关系,比较不同病理分型患者HPV病毒载量,分析HPV病毒载量与宫颈上皮内瘤变(CIN)分级的相关性。结果HPV核酸定量检测结果显示,82例宫颈病变患者中,HPV阳性人数61例,其中低级别鳞状上皮内病变(LSIL)、高级别鳞状上皮内病变(HSIL)、宫颈癌患者中HPV阳性人数分别为19、18、24例。不同病理分型、宫旁侵润患者HPV阳性占比比较差异有统计学意义(P<0.05);不同年龄、肿瘤最大径、淋巴结转移患者HPV阳性占比比较差异无统计学意义。随着患者宫颈病变程度提高HPV病毒载量呈升高趋势,差异有统计学意义(P<0.05);且HSIL、宫颈癌患者HPV病毒载量均高于LSIL患者,宫颈癌患者高于HSIL患者,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,HPV病毒载量与CIN分级呈正相关(r=0.767,P<0.05)。结论HPV核酸定量检测技术可对宫颈病变患者HPV感染情况及病毒载量进行准确分析,有助于临床对检查者宫颈病变程度及癌变风险做出准确诊断。

核酸定量检测试验应用于HIV-1感染实验室诊断的探讨

目的:探讨核酸定量检测在HIV-1感染实验室诊断中的应用。方法:选取145例第四代抗原/抗体联合诊断筛查试验为阳性反应的血浆样本,分别用Western印迹和HIV-1核酸定量方法进行检测,综合对比分析2种方法检测结果。结果:Western印迹检出阳性样本120例,不确定样本17例,阴性样本8例;HIV-1核酸定量试验检出结果大于检测限样本131例,其中包括12例Western印迹不确定样本、2例Western印迹阴性样本;有3例Western印迹阳性样本用HIV-1核酸定量检测试验未能检出。结论:核酸定量检测试验对于HIV-1感染阳性样本是一种有效的实验室诊断方法;对HIV-1核酸定量检测结果为"TND"的样本,建议加做Western印迹或结合其他补充试验结果进行综合诊断。

磁珠法在120例丙型肝炎病毒核酸定量检测中的应用效果观察

[目的]观察磁珠法在丙型肝炎病毒核酸定量检测中的应用效果.[方法]选择自2018年1月至2020年1月间采集的120例丙型肝炎患者的丙型肝炎病毒(HCV)血清标本,其中低病毒载量22例,中病毒载量64例,高病毒载量34例,采用提取柱法与磁珠法核酸定量检测,根据浓度1×10^(8)样本梯度稀释结果比较2种核酸定量检测方法的灵敏度和线性范围.[结果]磁珠法HCV核酸定量检测阳性率为70.0%,与提取柱法的66.7%比较差异无统计学意义(P>0.05);22例低病毒载量的HCV血清标本磁珠法检测阳性率为40.9%,明显高于提取柱法的9.1%(χ^(2)=5.9394,P=0.0148);磁珠法灵敏度和线性范围分别为39 U/mL和3.9×(10^(1)~10^(8)),与提取柱法比较差异有统计学意义(P<0.05).[结论]磁珠法与提取柱法在中、高病毒载量的检测中一致性较好,在低病毒载量的检测中磁珠法较提取柱法核酸定量检测的灵敏度更高,线性范围更广.

建立一种高灵敏的HBV核酸定量检测方法

目的 建立一种高灵敏度的TaqMan实时荧光PCR法用于HBV核酸定量检测,并评估其临床性能。方法 针对HBV保守序列设计引物探针,收集来自国内3家医院共计631例样本,利用本文建立的方法进行HBV核酸定量检测,评估其灵敏度、特异性和重复性,并与普遍采用的对照试剂盒进行比较,评价该方法的临床性能。结果 本文建立的HBV核酸定量检测方法对5 IU/mL的HBV血清和血浆样本的检出率均为100%,且对HBV强阳性、弱阳性和临界阳性样本的阳性检出率均为100%;该方法对于可能存在交叉的15种病原体、内源干扰物及外源干扰物均无交叉反应;与对照试剂的检测结果比较基本相同,对于不一致的样本,经过复检均和本文建立的检测方法结果一致。结论 该方法具有较高的灵敏度,稳定性和重复性好,特异性强,具有较高的临床应用价值。

结核杆菌核酸定量检测与T-SPOT.TB检测在肺外结核病诊断中的应用分析

目的探究结核杆菌核酸定量检测与结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT. TB)在肺外结核病诊断中的应用。方法该研究涉及对象为肺外感染患者200例,研究时间为2018年2月-2019年2月,均行T-SPOT. TB、结核杆菌涂片、结核杆菌核酸定量检测,对比检测结果,进行统计学分析。结果 T-SPOT. TB检测阳性率(90.50%)明显高于结核杆菌涂片阳性率(21.00%),组间差异有统计学意义(χ~2=195.799,P<0.05)。结核杆菌核酸定量检测阳性率(94.00%)明显高于结核杆菌涂片阳性率(21.00%),组间差异有统计学意义(χ~2=221.409,P<0.05)。T-SPOT. TB检出阳性率(90.50%)与结核杆菌核酸定量检测(94.00%)相比,组间差异无统计学意义(χ~2=2.306,P>0.05)。结论结核杆菌核酸定量检测与T-SPOT. TB均可用于肺外结核病的诊断中,具有较高的检出率,有利于肺外结核疾病患者的治疗,值得临床上推广及使用。

HBeAg阳性或抗-HBe阳性慢活肝患者病毒核酸定量检测与临床关系

0 引言 乙型肝炎为我国常见病、多发病,且易转为慢性,甚至发展为肝硬化及肝癌,尤其是-HBe阳性慢活肝发生肝硬化、肝癌的机会更大。病毒量在病程中的变化规律一直为人们所关注。近年建立的定量PCR方法是定量观测病毒的一个灵敏指标。采用这一方法,笔者观察了HBeAg阳性或抗-HBe阳性慢活肝住院患者各60例的血清HBVDNA拷贝数与肝功能的关系。现将结果报告如下。1

HIV核酸定量检测在“艾滋病一站式诊疗服务”模式中的应用和效果

目的 探讨HIV核酸定量检测在“艾滋病一站式诊疗服务”模式中的应用效果和可行性,为HIV/AIDS患者早期诊断、早期治疗和科学管理提供参考依据。方法 在普定县人民医院开展“艾滋病一站式诊疗服务”模式探索,对HIV初筛有反应血液进行院内核酸定量试验,并将HIV初筛有反应血液送至贵州省疾病预防控制中心进行抗体确证试验,将院内检测结果与复核结果进行比较,以验证核酸定量检测的可行性;同时对“艾滋病一站式诊疗服务”开展前后抗体初筛有反应到抗体确证或核酸定量试验结果的时间间隔、抗体初筛有反应到接受cART时间间隔、30天内接受cART比例进行对比分析。结果 对新检测发现的HIV抗体初筛有反应就诊者血液进行核酸定量检测,结果>5 000拷贝/mL占比为94.97%(189/199),≤5 000拷贝/mL占比为4.02%(8/199),≤5 000拷贝/mL后期经随访均为阳性,未检出占比为1.01%(2/199);将HIV初筛有反应血液送至贵州省疾病预防控制中心进行复核,结果阳性197份,阴性2份;院内检测结果与复核结果的一致性较好(Kappa=1,P<0.001),总符合率为100.00%(199/199);核酸定量检测的灵敏度较好,为95.94%(189/197),特异度为100.00%(2/2);“艾滋病一站式诊疗服务”开展前后新报告病例抗体初筛有反应到抗体确证或核酸定量试验结果中位时间由8天缩短至1天、抗体初筛有反应到接受cART中位时间由16天缩短至1天,差异有统计学意义(P <0.001);开展前后新报告病例30天内接受cART比例由68.00%提升至99.49%(196/197),差异有统计学意义(P<0.001)。结论 通过HIV核酸定量检测在“艾滋病一站式诊疗服务”模式中的应用,HIV核酸定量检测用于HIV感染诊断的可行性得到了有效验证,可以显著缩短HIV/AIDS患者从检测到治疗的时间,及时接受抗病毒治疗。

乙型肝炎病毒核酸定量检测的临床应用(荧光定量PCR法)

采用相应措施对乙型肝炎患者进行临床检查,观察并分析乙型肝炎血清学相应检查指标与乙型肝炎患者病毒核酸浓度之间的存在联系。方法:从2019年1月-2019年12月这一时段中,于我院接收的乙型肝炎病人合理选择200例作为本次实验研究组,选择同期健康人群20例组成本次研究对照组,220例研究对象均实行荧光定量PCR法进行血清HBV-DNA PCR定量检测,对比两组乙肝病毒核酸检测结果,并分析荧光定量PCR法的检验效果。结果:研究结果显示:HBeAg、 HBsAg、抗-HBc均显示为阳性的病患,其HBV-DNA水平与其他患者相比更高,数据差距明显具有统计学意义(P<0.05)。结论:采用荧光定量PCR法对于检测乙型肝炎患病情况具有良好的检测效果,能够为乙型肝炎病毒感染者的早期诊断以及后续临床治疗方案的选择和实行提供可靠的参考依据,可将其广泛普及和运用于临床检验。

结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测对菌阴空洞肺结核的诊断效能分析

目的探讨结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增(Xpert)检测对菌阴空洞肺结核的诊断效能。方法选取河北省胸科医院2021年4月至2022年10月期间行手术治疗的124例肺部空洞疾病患者相关病历资料,其中菌阴空洞肺结核86例(观察组),非结核肺部空洞疾病38例(对照组)。收集患者手术标本Xpert检测和外周血结核感染T细胞斑点(T-SPOT)试验结果,分析二者对菌阴空洞肺结核的诊断效能。结果Xpert检测和T-SPOT试验诊断菌阴空洞肺结核的敏感度为68.6%、75.6%,特异度为97.4%、68.4%。Xpert检测的敏感度低于T-SPOT试验(χ^(2)=5.832,P<0.001),特异度高于T-SPOT试验(χ^(2)=21.469,P<0.001)。2种方法在观察组中的阳性检出率均高于对照组[Xpert检测:68.6%(59/86)比2.6%(1/38);T-SPOT试验:75.6%(65/86)比31.6%(12/38)](均P<0.001)。受试者工作特征曲线分析结果显示,Xpert检测诊断菌阴空洞肺结核的曲线下面积为0.830,T-SPOT试验的曲线下面积为0.729,Xpert检测的准确度高于T-SPOT试验(P<0.001)。结论Xpert检测对菌阴空洞肺结核有比较可靠的诊断效能。

荧光定量核酸扩增检测技术与环介导等温扩增技术在呼吸道感染病原体检测中的对比研究

目的对比荧光定量核酸扩增检测技术与环介导等温扩增技术在呼吸道感染病原体检测中的应用价值。方法随机在2020年1月~2023年1月天津市河东区疾病预防控制中心接收的呼吸道感染的患者中选取120例作为研究对象,分别采用荧光定量核酸扩增(PCR)检测技术与环介导等温扩增技术(LAMP)检测呼吸道病原体,并对检测结果进行比较分析。结果120例患者中使用LAMP检出细菌感染85例(阳性率为70.83%)。荧光定量PCR检出细菌感染72例(阳性率60.00%),差异无统计学意义(P>0.05);其中LAMP法对耐甲氧西林葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌的检出率高于荧光定量PCR法,差异有统计学意义(P<0.05);采用荧光定量PCR与LAMP法对呼吸道感染10种病原体进行检测,结果表明,除LAMP法对耐甲氧西林葡萄球菌、流感嗜血杆菌的检测一致性极好,荧光定量PCR对耐甲氧西林葡萄球菌的检测一致性极好(Kappa≥0.75),其余病原体采用荧光定量PCR与LAMP法检测一致性均中等(0.4≤Kappa<0.75)。结论荧光定量PCR与LAMP两种检测方法对呼吸道感染病原体检出率均较高,其中LAMP法对耐甲氧西林葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌的检出率高于荧光定量PCR法。

结核/非结核分枝杆菌核酸检测对结核性脑膜炎的诊断价值

目的探讨脑脊液中结核/非结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis/nontuberculous mycobacteria,MTB/NTM)核酸检测诊断结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的临床价值。方法收集120例TBM患者的临床资料,采用随机数字表法将患者分为TBM A组(n=67,进行脑脊液常规、生化、罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测)和TBM B组(n=53,进行脑脊液常规、生化、罗氏培养、涂片查抗酸菌、GeneXpert MTB/RIF检测),另收集其他中枢神经系统感染患者脑脊液18例为对照组(C组,进行脑脊液常规、生化、罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测、GeneXpert MTB/RIF检测)。结果TBM A组脑脊液罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测阳性率分别为13.43%(9/67)、10.45%(7/67)、46.27%(31/67);TBM B组脑脊液罗氏培养、涂片查抗酸菌、GeneXpert MTB/RIF检测阳性率分别为15.09%(8/53)、11.32%(6/53)、47.17%(25/53),GeneXpert MTB/RIF检测阳性病例中利福平耐药基因检测阳性2例。C组脑脊液罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测和GeneXpert MTB/RIF检测均为阴性。结论MTB/NTM核酸检测与GeneXpert MTB/RIF检测均可辅助早期诊断TBM,相较于后者更经济,并能鉴别非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria,NTM)感染,及时减少NTM病误诊、误治,值得临床推广。

核酸定量检测应用于HIV-1感染诊断的研究

目的探讨核酸定量检测在1型艾滋病病毒(HIV-1)感染诊断中的应用。方法选取云南省德宏州216例样本,包括136例HIV-1阳性母亲所生活产婴儿和80例HIV-1阳性成人,分别用HIV-1核酸定性和定量方法进行检测,综合对比分析2种方法的检测结果。结果 216例样本的核酸定性和定量检测试验一致性极好,53例样本(50例成人样本和3例婴儿样本)核酸阳性,血浆病毒载量>5 000拷贝/mL。随访50例成人样本的蛋白印迹试验(WB),均为确证HIV-1抗体阳性。163例阴性样本(30例成人样本和133例婴儿样本)核酸阴性,血浆病毒载量低于检测下限。结论当血浆病毒载量>5 000拷贝/mL,核酸定量检测试验对于HIV-1感染阳性样本是一种有效的实验室诊断方法。

美国CDC推荐HIV核酸检测策略与核酸定量检测替代策略

美国疾病控制和预防中心(CDC)2014年发布艾滋病病毒(HIV)核酸检测策略以来,已经在实验室应用,该策略简化了检测流程,使检测结果更加准确。但同时也存在诸多不便于临床推广普及的影响因素。随着核酸检测技术的应用与普及,在2019年艾滋病诊断大会上,美国CDC专家发表了HIV-1核酸定量检测替代策略的研究报告,临床验证了核酸定量检测替代策略的准确性、可行性与快速便利性,提高了HIV核酸定量检测结果在临床工作中的使用价值。

利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术对涂阴肺结核诊断价值的评价

观察利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)在涂阴肺结核诊断中的使用价值。方法 采纳门诊2021.03-2022.03的22例涂阴肺结核病例(涂阴肺结核组)、肺结核确诊病例13例(肺结核确诊者) 、其他肺结核病例15例划分到其他肺病组,依据检测手段不足分组。对患者开展痰液涂片金胺O荧光染色、Xpert MTB/RIF检测、痰固体培养以及结核菌素皮肤试验,观察Xpert MTB/RIF检测结果,观察其在涂阴肺结核诊断中的效果。结果 涂阴肺结核组XpertMTB/RIF检测阳性情况比其他肺病组高,且其TST检测阳性情况比Xpert MTB/RIF检测阳性低。涂阴肺结核组Xpert MTB/RIF检测阳性例数比痰培养检测高。Xpert MTB/RIF检测在肺结核组中检出阳性例数比其他肺病组高,组间对比存在差异(P<0.05)。结论 Xpert MTB/RIF检测阳性率较高,将其用于涂阴肺结核早期诊断中可发挥重要作用。

两种HIV-1核酸定量检测系统临床对比研究

目的对某国产HIV-1核酸定量检测系统与罗氏检测系统临床对比研究。方法对于临床收集的188例HIV-1抗体阳性临床血浆样本,平行使用某国产HIV-1核酸定量检测系统和罗氏COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 Test Version 2.0进行HIV-1病毒载量检测相关性能对比评估,并采用Analyse-it 5.92分析软件进行定性、相关性和Bland-Altman等统计学方法分析。结果罗氏检测系统的检测阳性率为94.68%(178/188),国产检测系统的检测阳性率为92.55%(174/188)。以罗氏测量系统为参考,国产检测系统的阳性符合率为94.94%(95%CI:90.70%~97.30%)。定量分析两个检测系统均在线性范围内的126例样本,相关性分析结果显示,线性相关系数r=0.981,同时进行Bland-Altman分析结果显示,两个检测系统差值的平均偏差(Mean)为0.002 log(IU/mL),95%CI:-0.06~0.07,有94.44%的样本在95%一致性区间内(95%LoA:-0.72~0.72)。结论该国产检测系统与罗氏检测系统相比,定性结果符合率、定量分析结果相关性和一致性均较高,符合HIV病毒载量检测实验室的应用需求。

新型EB病毒全自动核酸定量检测系统在儿童传染性单核细胞增多症快速诊断中的价值

目的对新型EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)全自动核酸定量检测系统进行性能验证,并探讨该系统在儿童传染性单核细胞增多症(IM)快速诊断中的价值。方法EBV全自动核酸定量检测系统包括核酸提取和实时荧光PCR(FQ-PCR)定量检测,分别采用PANA9600S全自动旋转式核酸工作站进行全血标本的核酸提取,ABI7500荧光PCR仪进行FQ-PCR扩增。然后验证EBV全自动核酸检测系统的性能指标,包括准确性、精密度、线性范围、检测限、防污染能力、交叉反应和抗干扰能力等。最后将EBV全自动核酸检测系统用于50例2018年11月—2019年6月温州医科大学附属第二医院的门诊及住院疑似IM患儿的核酸定量检测,并将EBV核酸检测结果与其他指标进行比较。结果EBV全自动核酸定量检测系统的准确性好,高、中、低水平的定量标准品均在定值范围内。检测精密度高,批内及批间精密度的CV值均<5%。该检测系统在1.0×10^(3)~1.00×10^(8)copies/mL线性范围内,线性相关系数≥0.980,检测限为5.0×10^(2)copies/mL。另外,该检测系统的防污染能力良好,无交叉反应,抗干扰能力强。对50例儿童疑似EBV感染者的外周血进行核酸检测,阳性检出率为80.0%,EBV定量值在5.45×10^(2)~1.46×10^(8)copies/mL,明显高于血清EBV IgM抗体检测(P=0.031)和血常规异型淋巴细胞检测(P<0.001)。结论EBV全自动核酸定量检测系统的各项性能指标良好,可满足临床检测要求,可较好地用于疑似儿童IM的快速诊断,值得临床应用推广。

一种用于核酸绝对定量检测的高鲁棒性液滴式数字PCR芯片

为满足液滴式数字聚合酶链式反应(PCR)技术对扩增反应过程中稳定保存液滴以及反应后高效检测的核心需求,构建了一种具有过滤气泡和增强荧光信号功能的液滴式数字聚合酶链式反应芯片.该芯片可在10 min内产生20多万个半径约为21μm的液滴.利用"玻璃天花板"的方式构建了独立于芯片主体材料的液滴收集腔,为液滴提供稳定的保存与反应环境;还构建了过滤结构,可有效过滤混入液相中的空气,提高芯片鲁棒性.同时,在液滴收集腔中引入反射层,增强荧光信号,使单个视野荧光成像时间缩短约40%,提高了检测效率.利用该芯片定量检测EGFR基因第21号外显子,检测信号与DNA浓度在10~1~10~5copies/μL范围内呈现良好的线性关系(R^2=0.998).该方案在载玻片大小的芯片上实现了液滴产生、PCR扩增和荧光信号读取,并具有较高的鲁棒性与检测效率,在核酸检测等方面具有应用潜力.

利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术在骨关节结核的诊断价值

目的探讨利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF,简称Xpert)在骨关节结核诊断中的临床应用价值。方法选取139例可疑诊断骨关节结核患者的脓液,以改良罗氏培养或病理结果为金标准,评估比较抗酸染色、结核分枝杆菌BACTEC MGIT 960培养(简称MGIT 960)、改良罗氏培养(简称罗培)和Xpert检测结核分枝杆菌的效能。结果抗酸染色法、MGIT 960法、罗培法和xpert在骨关节结核组的阳性率分别为20.18%(22/109),37.50%(36/96),25.23(28/111),76.93%(100/130)。Xpert的阳性率均高于抗酸染色法、MGIT 960法及罗培法。结论 Xpert MTB/RIF可用于骨关节结核的快速检测具有良好的应用前景。

利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术与γ-干扰素释放试验在关节结核辅助诊断中的价值

目的探讨和评价利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术（Xpert mycobacterium tuberculosis/rifampicin,Xpert MTB/RIF;简称Xpert检测）与γ-干扰素释放试验在关节结核辅助诊断中的价值。方法选取2015年1~9月首都医科大学附属北京胸科医院住院经手术治疗,病理确诊为关节结核的患者50例,同时行脓液Xpert检测和血酶联免疫斑点技术法（T-SPOT.TB检测）检测结核分枝杆菌感染T细胞。结果 T-SPOT.TB检测在诊断关节结核中的敏感度为88%（44/50）;Xpert检测的敏感度为66%（33/50）;两种方法联合检测的敏感度为66%（33/50）。T-SPOT.TB检测的敏感度高于Xpert检测及两种方法联合检测（χ~2=6.832,P=0.009）。结论 Xpert检测和γ-干扰素释放试验采用T-SPOT.TB检测试剂盒在关节结核快速诊断方面均具有重要的价值,两者结合可提高关节结核诊断的准确度。