两种HIV-1核酸定量检测系统临床对比研究

目的对某国产HIV-1核酸定量检测系统与罗氏检测系统临床对比研究。方法对于临床收集的188例HIV-1抗体阳性临床血浆样本,平行使用某国产HIV-1核酸定量检测系统和罗氏COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 Test Version 2.0进行HIV-1病毒载量检测相关性能对比评估,并采用Analyse-it 5.92分析软件进行定性、相关性和Bland-Altman等统计学方法分析。结果罗氏检测系统的检测阳性率为94.68%(178/188),国产检测系统的检测阳性率为92.55%(174/188)。以罗氏测量系统为参考,国产检测系统的阳性符合率为94.94%(95%CI:90.70%~97.30%)。定量分析两个检测系统均在线性范围内的126例样本,相关性分析结果显示,线性相关系数r=0.981,同时进行Bland-Altman分析结果显示,两个检测系统差值的平均偏差(Mean)为0.002 log(IU/mL),95%CI:-0.06~0.07,有94.44%的样本在95%一致性区间内(95%LoA:-0.72~0.72)。结论该国产检测系统与罗氏检测系统相比,定性结果符合率、定量分析结果相关性和一致性均较高,符合HIV病毒载量检测实验室的应用需求。

新型EB病毒全自动核酸定量检测系统在儿童传染性单核细胞增多症快速诊断中的价值

目的对新型EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)全自动核酸定量检测系统进行性能验证,并探讨该系统在儿童传染性单核细胞增多症(IM)快速诊断中的价值。方法EBV全自动核酸定量检测系统包括核酸提取和实时荧光PCR(FQ-PCR)定量检测,分别采用PANA9600S全自动旋转式核酸工作站进行全血标本的核酸提取,ABI7500荧光PCR仪进行FQ-PCR扩增。然后验证EBV全自动核酸检测系统的性能指标,包括准确性、精密度、线性范围、检测限、防污染能力、交叉反应和抗干扰能力等。最后将EBV全自动核酸检测系统用于50例2018年11月—2019年6月温州医科大学附属第二医院的门诊及住院疑似IM患儿的核酸定量检测,并将EBV核酸检测结果与其他指标进行比较。结果EBV全自动核酸定量检测系统的准确性好,高、中、低水平的定量标准品均在定值范围内。检测精密度高,批内及批间精密度的CV值均<5%。该检测系统在1.0×10^(3)~1.00×10^(8)copies/mL线性范围内,线性相关系数≥0.980,检测限为5.0×10^(2)copies/mL。另外,该检测系统的防污染能力良好,无交叉反应,抗干扰能力强。对50例儿童疑似EBV感染者的外周血进行核酸检测,阳性检出率为80.0%,EBV定量值在5.45×10^(2)~1.46×10^(8)copies/mL,明显高于血清EBV IgM抗体检测(P=0.031)和血常规异型淋巴细胞检测(P<0.001)。结论EBV全自动核酸定量检测系统的各项性能指标良好,可满足临床检测要求,可较好地用于疑似儿童IM的快速诊断,值得临床应用推广。

新疆阿克苏地区猪圆环病毒3型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

本研究在猪圆环病毒3型(PCV3)Cap基因保守区设计一对特异性引物和荧光探针,以PCV3 Cap基因阳性质粒为模板,建立PCV3的TaqMan荧光定量PCR检测方法。TaqMan荧光定量PCR检测标准曲线在3.72×10^(8)~3.72×10^(1)拷贝/μL之间有较好的结果。重复性试验结果中,组内变异系数在0.165%~0.588%之间,组间变异系数在0.013%~0.097%之间,变异系数均小于1%,表明本试验离散程度较小。在PCV3 TaqMan荧光定量PCR灵敏性试验中,灵敏性为3.72×10^(3)拷贝/μL,相较于传统PCR方法灵敏性增加10倍,本试验建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法为快速精准检测PCV3奠定了基础。

酸浆乙酸乙酯活性部位抗胃溃疡的机制研究

为了研究幽门结扎和乙醇诱导两种胃溃疡模型对酸浆乙酸乙酯活性部位抗胃溃疡的作用机理,采用幽门结扎胃溃疡模型测定胃液量、游离酸、总酸量及蛋白酶活性,采用乙醇诱导胃溃疡模型检测血浆中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和组织匀浆液中表皮生长因子(EGF)的表达;通过蛋白质印迹法(Western blot)和实时荧光定量核酸扩增检测系统(QPCR)分析胃粘膜中环氧化酶1和2(COX-1/2)的蛋白表达和mRNA表达。结果显示:EAF以100、250和500 mg/kg 3个剂量灌胃时,均能显著降低胃液量、游离酸、总酸和胃蛋白酶活性(P<0.05)。EAF中、高剂量组能显著增加血浆中NO含量和SOD活性(P<0.05),降低MDA水平(P<0.01),上调胃组织匀浆液中EGF表达(P<0.05)。关于EAF对COX蛋白和mRNA表达的影响,COX-1的表达水平无显著差别(P>0.05),EAF各剂量组与模型组和对照组相一致。但相对于模型组,EAF各剂量组明显抑制COX-2蛋白和mRNA表达的上调(P<0.05)。EAF可能通过对大鼠胃液量、游离酸度、总酸度和胃蛋白酶活性的抑制,促进氧自由基清除剂SOD、保护因子NO和EGF的合成,降低MDA的损害和抑制COX-2信号通路,从而提高溃疡愈合质量。

SD-PMA-qPCR快速检测冷冻肉制品中活性沙门氏菌的研究

为实现冷冻肉制品中活性沙门氏菌的快速检测与控制,本文利用PMA(叠氮溴化丙锭)和SD(脱氧胆酸钠)消除死菌和损伤菌的影响,建立了运用SD-PMA-qPCR法检测活性沙门氏菌的反应体系和反应条件,并进行人工染菌样品检测试验。SD的最佳浓度确定为0.1%,最佳孵育时间为20 min。对-20℃低温冷冻处理3~4 d的沙门氏菌处理液,使用平板计数法、qPCR、PMA-qPCR和SD-PMA-qPCR进行计数,结果发现qPCR与PMA-qPCR二者检测值接近且明显高于平板计数值,而SD-PMA-qPCR检测值与平板计数值相近,这表明SD和PMA的联合使用能有效的消除死菌和损伤菌的影响。人工染菌样品试验表明,沙门氏菌检出限在10~2CFU/g,同时10~6 CFU/g大肠杆菌O157:H7的存在不会影响检测结果。本研究所建立的SD-PMA-qPCR检测方法特异性好、灵敏度高,有望成为快速检测冷冻肉制品中活性沙门氏菌的新方法,具有很好的研究价值和应用前景。