猴空泡病毒40核酸序列检测法的优化研究

目的对通常使用的猴空泡病毒40（Simian vacuolating virus40，SV40）核酸序列检测法进行优化，寻找敏感性高、特异性强、适用面广的SV40核酸序列检测引物。方法以21个SV40毒株完全基因组为基础数据，用Primer Premier5．00软件重新设计两对SV40 DNA检测引物，用Oligo 6．71软件和DNAMAN 6．0．40软件对引物参数进行分析，将分析结果与通常使用的检测引物进行比较。用不同稀释度SV40核酸序列作模板，比较4对引物检测的敏感性。分别用无菌水、Vero细胞DNA、SV40DNA作模板检测4对引物的特异性。结果对于21个SV40病毒株，优化引物对VP1和T的序列是保守的；对于接受号为J02400、NC_001669、AF316139和AF316141的4个病毒株，通常使用的引物对GCVP1和GCT的序列是保守的；用同一稀释度的SV40DNA作模板，引物对VP1和T的扩增效率明显高于引物对GCVP1和GCT；在特异性检测比较中，引物对VP1和T没有出现非特异性扩增条带，引物对GCVP1和GCT在100bp处出现非特异性扩增条带。结论优化的SV40核酸序列检测法具有敏感性高、特异性强、检测面广、引物及其PCR产物序列保守等特点。