应用PCR等核酸技术检测动物饲料中牛羊组织成分

为准确鉴别不同品种动物源性饲料 ,防范疯牛病及羊痒病的传播 ,建立了检测牛、绵羊和山羊组织种间特异的聚合酶链反应 (PCR) ;用MboI、VspI、RsaI分别对从动物饲料中检测得到的牛、绵羊和山羊组织的PCR产物进行酶切分析 ,酶切图谱与序列结构相符 ;核酸测序结果表明 ,3种动物组织的PCR产物序列与基因库中检索到的相应序列相吻合。用 3种检测方法检测牛、绵羊和山羊组织无交叉反应 ,检测猪、鸡、兔和鱼等动物组织均呈阴性。PCR检测的敏感性可达0 .2 5 % (质量分数 ) ,PCR检测全过程包括样品处理 ,可在

RNA实时荧光核酸恒温扩增检测技术在儿童支原体肺炎早期诊断及疗效判断中的价值

目的 考察实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)在儿童肺炎支原体肺炎(MPP)早期临床诊断中的价值及其在评价MPP转归以及判断药物疗效中的作用。方法 选取社区获得性肺炎(CAP)住院患儿451例,所有患儿在入院24 h内采集血清标本,采用被动凝集试验检测肺炎支原体(MP)特异性抗体[MP抗体检测(MP-Ab)],并采集咽拭子标本提取MP-RNA(MP-SAT法)。对MPP患儿在完成大环内酯类药物治疗第1疗程、完成大环内酯类药物治疗第3疗程时复查MP-Ab和MP-RNA。根据MPP诊断标准将其分为MPP组(n=183)和非MPP组(n=268)。比较MP-SAT和MP-Ab诊断MPP的准确性(敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值)。对病程<7 d入院前未使用大环内酯类药物的MPP患儿进行动态观察,考察在大环内酯类药物(阿奇霉素)治疗MP不同时间点(入院时、完成第1疗程和完成第3疗程时)MP-SAT和MP-Ab的阳性率以及患儿临床和影像学表现(咳嗽、发热、肺部体征和CT表现)变化情况。结果 MP-SAT和MP-Ab诊断MPP的准确性比较差异无统计学意义(P>0.05);病程<7 d患儿组中MP-SAT诊断MPP的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均优于MP-Ab(P<0.001或P<0.05或P<0.01)。病程<7 d入院前未使用大环内酯类药物治疗的MPP患儿共42例,该组患儿在入院时、完成阿奇霉素治疗第1疗程和完成阿奇霉素治疗第3疗程时,MP-SAT检测阳性率分别为88.09%(37/42)、88.09%(37/42)和9.52%(4/42);MP-Ab检测阳性率分别为26.19%(11/42)、100.00%(42/42)和100.00%(42/42),在不同时间点MP-SAT和MP-Ab阳性率比较差异有统计学意义(P<0.001,P<0.05,P<0.001)。该组患儿完成第3疗程时MP-SAT阳性率较入院时明显下降(P<0.001),临床症状(咳嗽、发热)、肺部体征及肺部CT表现较入院时明显好转(均P<0.001),MP-SAT结果与临床症状、肺部体征及肺部影像学表现变化趋势相一致。结论 SAT检测MP-RNA可作为儿童MPP的早期诊断依据,同时也可作为评价MPP转归及判断临床治疗效果的指标。

荧光定量核酸扩增检测技术与环介导等温扩增技术在呼吸道感染病原体检测中的对比研究

目的对比荧光定量核酸扩增检测技术与环介导等温扩增技术在呼吸道感染病原体检测中的应用价值。方法随机在2020年1月~2023年1月天津市河东区疾病预防控制中心接收的呼吸道感染的患者中选取120例作为研究对象,分别采用荧光定量核酸扩增(PCR)检测技术与环介导等温扩增技术(LAMP)检测呼吸道病原体,并对检测结果进行比较分析。结果120例患者中使用LAMP检出细菌感染85例(阳性率为70.83%)。荧光定量PCR检出细菌感染72例(阳性率60.00%),差异无统计学意义(P>0.05);其中LAMP法对耐甲氧西林葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌的检出率高于荧光定量PCR法,差异有统计学意义(P<0.05);采用荧光定量PCR与LAMP法对呼吸道感染10种病原体进行检测,结果表明,除LAMP法对耐甲氧西林葡萄球菌、流感嗜血杆菌的检测一致性极好,荧光定量PCR对耐甲氧西林葡萄球菌的检测一致性极好(Kappa≥0.75),其余病原体采用荧光定量PCR与LAMP法检测一致性均中等(0.4≤Kappa<0.75)。结论荧光定量PCR与LAMP两种检测方法对呼吸道感染病原体检出率均较高,其中LAMP法对耐甲氧西林葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌的检出率高于荧光定量PCR法。

食源性病原微生物核酸检测技术在铁路食品安全保障中的应用研究

食源性病原微生物已经成为全球性人类疾病和死亡的严重威胁之一,其检测对食品安全至关重要。传统方法由于耗时费力,需要研究应用更为快速、高效、灵敏、经济的检测新技术。在梳理以核酸和各种聚合酶链式反应为基础的食源性病原微生物最新检测技术的基础上,分析各项技术的原理、优点、局限性,探讨在铁路食品安全保障中的应用前景。

核酸条形码技术:扩展蛋白质-蛋白质相互作用检测通量的新方法

蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)几乎参与了机体内所有重要的生物学过程,在细胞的基本生命过程中扮演了至关重要的角色,开发高通量的PPI检测新方法具有重要的生物学意义。目前,下一代测序技术(next-generation sequencing,NGS)发展快速,能在几天内测定超过10亿个模板的DNA序列。由于并行DNA测序技术所特有的敏感性、特异性、高通量和多路复用优势,其已被用作广谱分子计数器,应用于基因组测序和转录物组测序等领域。核酸条形码技术通过将寡核苷酸标签与目标蛋白质连接起来,从而标记编码蛋白质。之后,利用高通量的测序方法检测相互作用的蛋白质,实现了PPI的高通量检测。这一技术推动了PPI检测方法的飞速发展,提升了单次实验检测的通量,为构建PPI网络提供了强有力的技术支持。本文详细阐述了核酸条形码在PPI检测方法中的设计、生成和读取;通过分析核酸条形码技术在PPI研究中的应用范例,探讨了各自的优势和不足,并评估了数据的可靠性,讨论了基于核酸条形码技术的PPI检测方法未来的发展趋势。

核酸检测技术在无偿献血者乙型肝炎病毒筛查中的应用

研究核酸检测技术的实施价值,分析该措施在无偿献血者乙型肝炎病毒筛查中的效果,进而为后续筛查工作提供科学依据。方法 本次研究样本选取为梧州市中心血站检验科无偿献血者乙型肝炎病毒筛查者,样本数量为15300例,选取时间为2023年01月-2023年03月,分别进行核酸检测(NAT)、酶联免疫吸附试验(ELISA),数据均纳入SPSS26.0系统,分析上述措施在疾病筛查中的价值。结果 15300例无偿献血者乙型肝炎病毒筛查者中,NAT阳性16例,ELISA阳性为2例;结果显示NAT阳性检出率高于ELISA(P<0.05)。结论 NAT的阳性检出率较高,可以实现疾病的早期诊断及治疗,对保障输血安全、预防控制输血传染病的传播起到非常重要的作用。

核酸分子检测技术在食品药品检测中的应用

核酸分子检测技术在食品药品检测领域发挥着至关重要的作用。本文综述了聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术、实时荧光定量PCR技术以及DNA芯片技术等核酸分子检测技术在食品药品检测中的应用,探讨了核酸分子检测技术的发展前景。

常见食源性病原菌的快速检测技术研究进展

食源性病原菌广泛存在于自然环境中,可通过肉类、海产品、奶制品等多种媒介传播,引起食源性疾病的发生。目前检测食源性病原菌的方法主要以平板培养辅以生化鉴定和血清型鉴定为主,检测的周期较长,效率较低,因此建立快速、精准的食源性病原菌检测方法对常见病原菌的现场检测及疾病的快速诊断尤为重要。本文对近年来常见食源性病原菌的快速检测方法进行了概述,主要包括免疫学检测手段、分子生物学检测方法和生物传感器检测技术,比较其优缺点,着重介绍了可以实现现场检测与实时检测的新兴技术:核酸-微流控检测技术,以期为常见食源性病原菌的预防与检测提供相关理论参考。

结核/非结核分枝杆菌核酸检测对结核性脑膜炎的诊断价值

目的探讨脑脊液中结核/非结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis/nontuberculous mycobacteria,MTB/NTM)核酸检测诊断结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的临床价值。方法收集120例TBM患者的临床资料,采用随机数字表法将患者分为TBM A组(n=67,进行脑脊液常规、生化、罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测)和TBM B组(n=53,进行脑脊液常规、生化、罗氏培养、涂片查抗酸菌、GeneXpert MTB/RIF检测),另收集其他中枢神经系统感染患者脑脊液18例为对照组(C组,进行脑脊液常规、生化、罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测、GeneXpert MTB/RIF检测)。结果TBM A组脑脊液罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测阳性率分别为13.43%(9/67)、10.45%(7/67)、46.27%(31/67);TBM B组脑脊液罗氏培养、涂片查抗酸菌、GeneXpert MTB/RIF检测阳性率分别为15.09%(8/53)、11.32%(6/53)、47.17%(25/53),GeneXpert MTB/RIF检测阳性病例中利福平耐药基因检测阳性2例。C组脑脊液罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测和GeneXpert MTB/RIF检测均为阴性。结论MTB/NTM核酸检测与GeneXpert MTB/RIF检测均可辅助早期诊断TBM,相较于后者更经济,并能鉴别非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria,NTM)感染,及时减少NTM病误诊、误治,值得临床推广。

我校新型核酸检测技术LMTIA应用研究新进展

梯型熔解温度核酸等温扩增检测技术(LMTIA)是许昌学院王德国教授课题组研发的新型核酸等温检测技术,通过在反应体系中引入Proofman探针,王德国教授课题组在LMTIA技术的应用研究中取得重要进展。王德国教授课题组建立了食用油中大豆源成分的LMTIA检测方法,开启了食用油以次充好的LMTIA检测研究,成果发表在国际期刊Analytical Methods上;并建立了乳制品中大豆源成分的LMTIA检测方法,成果发表在国际期刊Molecules上。

利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术对涂阴肺结核诊断价值的评价

观察利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)在涂阴肺结核诊断中的使用价值。方法 采纳门诊2021.03-2022.03的22例涂阴肺结核病例(涂阴肺结核组)、肺结核确诊病例13例(肺结核确诊者) 、其他肺结核病例15例划分到其他肺病组,依据检测手段不足分组。对患者开展痰液涂片金胺O荧光染色、Xpert MTB/RIF检测、痰固体培养以及结核菌素皮肤试验,观察Xpert MTB/RIF检测结果,观察其在涂阴肺结核诊断中的效果。结果 涂阴肺结核组XpertMTB/RIF检测阳性情况比其他肺病组高,且其TST检测阳性情况比Xpert MTB/RIF检测阳性低。涂阴肺结核组Xpert MTB/RIF检测阳性例数比痰培养检测高。Xpert MTB/RIF检测在肺结核组中检出阳性例数比其他肺病组高,组间对比存在差异(P<0.05)。结论 Xpert MTB/RIF检测阳性率较高,将其用于涂阴肺结核早期诊断中可发挥重要作用。

转基因番茄及其核酸检测技术研究进展

番茄作为重要的GMCs/GMF(genetically modified crops/food,转基因作物/食品)之一,在我国已被列入第一批实施标识管理的农业GMOs(genetically modified organisms,转基因生物)目录。通过对全球转基因番茄及其核酸检测技术研究现状的分析,阐述了转基因番茄的主要研究方向是研发具有延熟、抗虫等优良性能的番茄新品系,应用于疫苗以及其他药用性蛋白的生物反应器研究;总结了全球已获准上市和在研的重要转基因番茄品系的基因表达盒信息及其核酸检测研究数据;剖析了在转基因番茄核酸检测技术研究中尚存在的如关键性技术标准化以及标准物质缺乏等问题,并提出研究展望。希望为建立与国际接轨的转基因番茄量值溯源传递关键技术体系提供参考。

核酸检测技术在献血人员血液筛查中的应用

目的采取核酸检测(NAT)技术进行血液筛查,减少由献血者感染"窗口期"及隐匿感染献血引起的疾病传播。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)对54 358份献血者标本进行乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、人类免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)、丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)检测,同时用转录介导扩增技术(TMA)进行HBV-DNA、HCV-RNA检测,人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)RNA核酸检测。结果 NAT检测阳性ELISA检测阴性标本共51份。51份标本有鉴别试验结果的33份,其中32份HBV-DNA阳性,1份HIV-1RNA阳性,HIV-1RNA阳性的献血者经南京市疾病预防控制中心免疫印迹法确认为HIV-1疑似阳性(gp160和p24±)。半年后再次回访该献血者,抽取血样送南京市疾控中心经免疫印迹法确认为HIV-1阳性(gp160、gp120、p66、p51、gp41、p31、p24、p17+)。结论 NAT技术可以减少由献血者感染"窗口期"及隐匿感染献血引起的疾病传播,从而减少输血风险。

结合核酸检测技术探讨ALT在献血者筛查中的意义

目的结合核酸检测技术探讨ALT在献血者筛查中的意义。方法分析本站2015年1~6月共82 378份血液标本ALT、HBs Ag、抗-HCV检测结果;对908份ALT单项不合格标本进行NAT检测,并对此类献血者再次献血的血液筛查结果进行追踪分析。结果 82 378份血液标本中ALT异常925份,其中合并HBs Ag或抗-HCV阳性占1.19%（11/925）;肝炎标志物阳性组与阴性组的ALT异常率差异无统计学意义（P〉0.05）;908例ALT单项不合格献血者的NAT检测发现HBV阳性1例;重复献血者53例,HBs Ag、抗-HCV ELISA及NAT法检测均为阴性。结论虽然ALT在预防输血传播乙肝和丙肝中的作用已极其有限,但其对于排除HBV、HCV窗口期尚具有一定补充作用,同时可能预防隐匿性丙肝及其他已知或未知肝炎病毒的血液传播,目前尚不宜取消ALT检测。

实时荧光核酸恒温扩增技术检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染

目的评价实时荧光核酸恒温扩增技术(simultaneous amplification and testing,SAT)检测沙眼衣原体(CT)核酸试剂盒(RNA恒温扩增)的敏感性和特异性。方法对229例临床疑似患者的尿样及拭子标本同时进行SAT检测和"金标准"沙眼衣原体细胞培养检测,检测结果有差异的标本采用PCR方法对拭子标本进行复测,根据实验结果评估SAT技术在尿样及拭子标本检测中的敏感性和特异性。结果结合细胞培养和PCR的实验结果作为"扩大金标准",得出SAT技术对临床拭子标本的检测敏感性为97.1%,特异性为100%;对尿样标本检测的敏感性为89.4%,特异性为99.2%。拭子和尿样标本检测结果的符合率为95.2%,经卡方检验,差异无显著性(χ2=3.27,P>0.05)。结论 SAT技术检测CT试剂盒对拭子及尿样标本敏感性及特异性均较好,适用于临床实验室对CT的检测。

呼吸道病毒感染核酸检测技术及其应用进展

急性呼吸道感染是全球范围内人类疾病和死亡的主要原因之一,其绝大部分是由呼吸道病毒所引起的。建立切实有效的实验室诊断技术,对于呼吸道病毒的防御和控制至关重要。以核酸为检测目的的分子诊断法,因其快速、简便、高通量、高灵敏度及高特异性,成为新一代呼吸道病毒检测的金标准。简要综述了呼吸道病毒感染核酸检测技术及其应用进展。

核酸扩增检测技术用于血液和原料血浆筛查的进展

核酸扩增检测技术是迄今为止检测病毒的最灵敏的方法,它可以明显缩短病毒抗体检测的“窗口期”,降低血源性病毒的传播危险,随着NAT技术在临床检测中应用的不断完善和成熟,其灵敏度和特异性已经能够满足血液筛查的目的。此项技术已经在欧美等国家的血液中心和血液制品行业得到应用和推广。本文就有关近几年NAT技术的应用情况作一综述。

利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术在骨关节结核的诊断价值

目的探讨利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF,简称Xpert)在骨关节结核诊断中的临床应用价值。方法选取139例可疑诊断骨关节结核患者的脓液,以改良罗氏培养或病理结果为金标准,评估比较抗酸染色、结核分枝杆菌BACTEC MGIT 960培养(简称MGIT 960)、改良罗氏培养(简称罗培)和Xpert检测结核分枝杆菌的效能。结果抗酸染色法、MGIT 960法、罗培法和xpert在骨关节结核组的阳性率分别为20.18%(22/109),37.50%(36/96),25.23(28/111),76.93%(100/130)。Xpert的阳性率均高于抗酸染色法、MGIT 960法及罗培法。结论 Xpert MTB/RIF可用于骨关节结核的快速检测具有良好的应用前景。