不同核酸抽提方法对HCV-RNA检测效果的影响

采用TEK（0．2mol／LTris－HCLpH7．6．250mmol／LEDTA，200mg／L蛋白酶K）作为裂解剂处理样本，再用无水乙醇沉淀HCVRNA作为模板，用于多聚酶链反应检测HCVRNA，该法与AGPC法及TENS法比较，由于不使用SDS，避免TaqDNA多聚酶的强抑制原，省略了酚-氯抽提这一步骤，而又达到分高纯化RNA模板的目的。经对215例抗HCV阳性血清用上述三种方法进行比较分析，结果用三种方法制备的RNA模板进行多聚酶链反应，其HCVRNA阳性率无显著性差异．但TEK法较AGPC法及TENS法操作简单、稳定、不易污染，特异性好等优点，经用加挂生物素的合成寡核苷酸探针对HCVRNA逆转录PCR扩增产物作斑点杂交，显示有很好的特异性，具有明显的实用价值，批量测定在一个工作日可完成，此法的建立为制备RNA模板提供了方法及经验，适合标本量较大的临床单位使用，值得推广应用。

鼻咽癌病人外周血EBV DNA最低检出限与不同核酸抽提试剂关系的分析

目的 探讨两种核酸提取方法与鼻咽癌患者外周血EBV DNA最低检出限的关系。 方法 收集40例EB病毒感染鼻咽癌患者全血,分别采用核酸释放剂法与柱提法抽提DNA,检测EBV DNA载量,比较两种核酸提取方法检测的检出率,并确认其对应最低检出限。 结果 40例携带EBV鼻咽癌患者全血,使用核酸释放剂法检测EBV DNA其检出率为90.0%明显高于柱提法的检出率62.6%,差异有统计学意义（χ^2=8.352,P=0.008）。按国家行业标准验证的核酸释放剂法检测最低检出限为400 copies/ml;采用柱提法最低检出限为900 copies/ml。 结论 选用核酸抽提试剂检测鼻咽癌病人外周血EBV DNA时,所选择试剂应该满足或优于EBV DNA试剂盒最低检测限的性能要求。选用合适的核酸抽提试剂与EBV DNA检测试剂能够客观的反映鼻咽癌患者体内EB病毒的变化,为临床的诊断及治疗提供准确可靠的数据。

不同抽提方式在流行性感冒病毒检测中的抽提效率研究

目的比较普通抽提法和快速抽提法对实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测流行性感冒(流感)病毒结果的影响。方法采用同一品牌快速核酸抽提试剂和普通核酸抽提试剂抽提经稀释不同倍数的流感病毒毒株,采用实时荧光定量PCR测定抽提核酸的Ct值,比较两种方法的抽提效率和重复性。结果普通抽提法在不同稀释倍数下Ct值均值均小于快速抽提法;普通抽提法在原液至107稀释倍数下Ct值变异系数(CV)均小于快速抽提法;原液至106稀释倍数,普通抽提法和快速抽提法检出率均为100%;107稀释倍数下,普通抽提法和快速抽提法检出率分别为100%、50%;108稀释倍数下,普通抽提法和快速抽提法检出率分别为75%、0;稀释至109稀释倍数后,两者检出率均为0。结论普通抽提法较快速抽提法抽提效率高、重复性好、检出率高,在抽提高病毒含量标本时两种方法均可使用,抽提低病毒含量标本或复杂标本中推荐使用普通抽提法。

高致病力禽流感病毒(H5亚型)RT-PCR诊断技术

华南农业大学兽医学院禽病研究室是国内最早由农业部批准可以开展禽流感研究的单位之一 ,于1995年获广东省科技厅立项资助启动禽流感的研究。现研究开发的高致病性禽流感病毒(H 5亚型)RT-PCR诊断技术,可用于活禽咽拭子、肛拭子、粪便及病死禽组织病料的检测。该诊断技术经广东省动物防疫监督总所等单位复核试验表明,具有快速、敏感、特异的特点,并被全 国防治高致病性禽流感指挥部推荐作为禽流感防制21项关键技术之一。