不同核酸提取方法和新型冠状病毒核酸检测试剂室间质评结果分析

目的分析2种不同核酸提取方法和2种新型冠状病毒核酸检测试剂检测室间质评样本的结果,进行性能比较。方法收集2020年江苏省临床检验中心和国家卫生健康委临床检验中心发放的新型冠状病毒核酸检测室间质量评价样本共15份,用2种常用核酸提取方法(磁珠法、核酸释放剂法)、2个厂家实时荧光定量PCR核酸扩增检测试剂检测,进行质评物核酸提取和扩增,根据不同试剂组合检测结果比较相关试剂性能。结果根据国家卫生健康委员会临床检验中心和江苏省临床检验中心结果反馈,15份质评样本中,包括10份新型冠状病毒核酸阳性样本,5份阴性样本。核酸磁珠提取法+A厂家核酸检测试剂阳性质评样本ORF1ab和N基因检出率均为100.00%,双基因同时检出率均为100.00%,有效检出率为100.00%;核酸释放剂法+B厂家核酸检测试剂阳性质评样本ORF1ab检出率为70.00%,N基因检出率为90.00%,双基因同时检出率为70.00%,有效检出率为90.00%;核酸磁珠提取法+B厂家核酸检测试剂阳性质评样本ORF1ab和N基因检出率均为100.00%,双基因同时检出率均为100.00%,有效检出率为100.00%。3种试剂组合对阴性质评样本均为未检出,阴性结果符合率均为100%。结论不同核酸提取方法及核酸检测试剂对质评样本检测结果不同,核酸释放剂法的核酸提取性能有待提高。

实时荧光定量PCR模板核酸提取方法的比较

对病料核酸提取前处理方法进行优化,选择酚/氯仿法、试剂盒提取法和DNA/RNA同提取法,比较提取效果,为实验室核酸提取提供参考。配制模拟样品,通过实时荧光定量PCR比较3种方法提取效果。结果表明,提取纯度为试剂盒提取法>酚/氯仿法>DNA/RNA同提取法。提取效率为酚/氯仿法>DNA/RNA同提取法>试剂盒提取法。表明各提取方法效果差异显著(P<0.01),为实验室核酸提取提供了参考。

3种核酸提取方法在病媒生物携带肠道致病菌检测中的应用比较

为比较并筛选出简便、经济、高效的提取病媒生物携带肠道致病菌核酸的方法,采用3种代表性核酸提取方法一一柱式提取法、磁珠吸附法、盐析法,从模拟感染沙门菌、志贺菌及大肠杆菌的苍蝇和样品中提取核酸,并系统比较核酸质量浓度、荧光定量PCR(qPCR)检测Ct值和细菌回收率,来全面评估各种方法的提取效率。结果显示:3种核酸提取方法中柱式提取法及盐析法均能成功从模拟感染样品中提取核酸,磁珠吸附法未能全部成功提取;通过比较核酸质量浓度、qPCR检测Ct值及回收率,柱式核酸提取法的提取效率最高。结果表明,在检测病毒载量较低的样品,如病媒生物样品时,可选择性价比高、操作简便且结果准确的核酸提取方法(如柱式提取法),以提升检测结果的准确性。

以硅类作为吸附材料的两种不同核酸提取方法在HCV-RNA定量检测中的应用比较

目的比较及评价以硅类作为吸附材料的两种不同核酸的提取方法在丙型病毒性肝炎定量检测中的效果。方法选取124份抗-HCV阳性血清,分别采用核酸纯化柱提取法和二氧化硅吸附法提取HCV-RNA,用实时荧光定量PCR对其提取效果进行比较分析。结果 (1)124份抗-HCV阳性血清中以柱提法提取核酸后进行HCV-RNA定量检测的阳性率为70.97%(88/124)。二氧化硅吸附法提取核酸后进行HCV-RNA定量检测的阳性率为58.06%(72/124)。(2)两种方法提取核酸浓度分组比较结果,病毒载量拷贝数为1.0×10^(6)和1.0×10^(7)时,两种方法检出份数相同,而拷贝数为1.0×10^(3)、1.0×10^(4)和1.0×10^(5)时,检出份数均不一致。结论采用核酸提取柱提取血清标本优越于二氧化硅吸附法,其中两种方法检出份数差异集中在病毒载量低浓度区间,RNA病毒低复制时,柱提法检出份数高于二氧化硅吸附法。

非洲猪瘟两种核酸提取方法的对比报告

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。目前,非洲猪瘟没有有效的疫苗。建立快速准确的诊断方法对于控制本病的传播至关重要。荧光PCR核酸检测是目前灵敏度最高的检测方法。而荧光PCR检测结果准确与否与非洲猪瘟核酸提取的质量有很大关系。笔者在检测工作中对农业部公布的常用快速检测试剂盒裂解液提取核酸与商品化试剂盒全自动核酸提取仪提取核酸,用同一检测反应液进行扩增,并从检测结果的准确性、操作简便程度、样品的使用范围、成本控制等方面进行比较,从而筛选出最佳的核酸提取方法,以期为非洲猪瘟疫情防控提供技术支撑。