基于双拖尾重组聚合酶恒温扩增技术的核酸杂交试纸条快速检测驴肉中的马源性成分

目的建立快速、操作简单、价格相对低廉的重组聚合酶恒温扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术结合核酸杂交试纸条快速检测驴肉中马源性成分的可视化检测技术。方法将双拖尾重组聚合酶恒温扩增技术与核酸杂交试纸条相结合。针对马线粒体细胞色素b(cytb)基因设计拖尾RPA引物,这对特殊引物使RPA扩增子带有两个单链拖尾序列,这两个单链拖尾序列可以特异性地被金纳米探针和试纸条上的检测探针识别并捕获,形成一条肉眼可见的红色条带,从而对马源性成分进行检测。结果该方法整个扩增(15 min)和检测(5 min)过程在20 min即可完成,对马肉的检出限达到0.010%,且仅对马肉核酸有特异性扩增,与其他8个物种的核酸均无交叉反应。20份市售驴肉样品中有2份存在马源性成分,且该方法与PCR结合凝胶电泳的检测结果具有很好的一致性。结论该方法特异性强、灵敏度高,可实现驴肉中马源性成分的可视化快速检测。