核酸染色方法的改进

目的采用GV核酸染料取代溴化乙锭(EB)进行核酸染色,观察DNA染色结果,证实采用改进的核酸染色方法可替代EB进行常规核酸染色。方法提取小鼠肝组织DNA,采用GV与EB分别进行染色和电泳,在紫外凝胶成像仪下观察和记录结果。结果在紫外凝胶成像仪下,可观察到经两种方法染色的DNA条带清晰,亮度相当。结论GV是一种安全灵敏的核酸染料,可替代EB进行常规核酸染色。

核酸染色剂SYBR-Gold染色特性分析

目的检测SYBR-Gold前染色与后染色的优缺点。方法采用前染色、后染色的方法使用SYBR-Gold对双链DNA进行染色检测,EB染色作为参照,琼脂糖凝胶电泳为检测手段,凝胶成像系统拍照观察。结果SYBRGold其前染色与后染色对于双链DNA检测能力均强于EB染色,但是SYBR-Gold预混凝胶前染色其分辨效果及DNA迁移速度受到DNA浓度的影响;SYBR-Gold预混样品的前染色方式对于目的基因的判读误差较大。结论 SYBR-Gold不适合预混样品前染色,DNA样品浓度过大(大于250ng)不适合预混凝胶前染色,SYBR-Gold后染色是理想的染色方式。

核酸荧光染料在琼脂糖凝胶电泳中的染色特性

目的建立比溴化乙锭(EB)更为安全的核酸染色方法。方法对SYBR Gold,SYBR GreenⅠ,Gold-View和EB等4种核酸荧光染料在琼脂糖凝胶中的染色特性进行比较分析。结果SYBR Gold和SYBR GreenⅠ可改变核酸的电泳迁移率及相应的DNA大小判断,但二者是比EB更为完全和经济的核酸荧光染料;对于小片段DNA,SYBR Gold的灵敏度高于SYBR GreenⅠ。结论SYBR Gold和SYBR GreenⅠ是比EB更为完全和经济的核酸荧光染料,适合于分子生物学实验室的常规应用。

四种核酸荧光染料在琼脂糖凝胶中染色特性的比较分析

目的比较几种核酸染料(Genefinder、Geneview、SYBER greenI)对于琼脂糖凝胶中DNA/RNA的染色效果并分析其取代溴化乙锭(EB)用于常规电泳后凝胶中核酸染色的可能性。方法分别使用四种核酸染料对凝胶中的RNA/DNA进行染色并对结果进行比较分析。结果四种染料对RNA/DNA染色结果无明显差异(P>0.05)。结论新型核酸染料Genefinder、Geneview和SYBER greenI能够代替EB,用于常规凝胶中的DNA/RNA染色。

两种核酸染料染色效果的比较研究

用前染和后染两种不同的染色方法,研究比较SYBRGreenI和溴化乙锭(EB)两种核酸染料对凝胶中DNA的染色效果和灵敏度,及SYBRGreenI取代EB用于常规凝胶中核酸染色的可能性。结果表明,用前染法染色SYBRGreenI对琼脂糖凝胶中的核酸染色效果与EB相当;用后染法染色前者要优于后者,可显示5ng以下的DNA条带,在完全相同的操作条件下,其染色DNA条带背景清晰,灵敏度较高。因此,无致突变性新型染料SYBRGreenI可替代强致突变性染料EB用于检测凝胶中DNA片段大小、含量等,从而减少由于使用EB带来的环境污染和人体健康危害。

双重核酸染色法测定皮肤活力的研究

目的 建立一种简便、快速和灵敏的皮肤组织原位活力检测方法。 方法 采用活细胞核酸染色剂 (SYTO 13 )和溴化乙啶 (EB) 2种核酸染色剂对皮肤组织进行双重染色 ,荧光显微镜下通过颜色不同判断细胞的活力状态并计算出活力百分比。采用一种快速、灵敏的间接活力测定的四氮唑盐法同时对 4℃保存不同时间的皮肤进行活力的检测 ,并将结果进行比较。 结果 2种方法测定的结果均显示皮肤在一定的保存液中 4℃保存后 2周时活力为新鲜皮肤的 3 0 %左右 ,2个结果在各时相点均未有明显差异。 结论 SYTO/EB测定皮肤的活力快速、灵敏且简便 ,并可原位观察皮肤内各种细胞的活力 ,不失为一种可取的皮肤活力检测方法。

两种核酸染料的应用比较研究

目的 研究GoldView核酸染料对于凝胶中DNA/RNA的染色效果及其取代EtBr用于常规电泳后凝胶中核酸染色的可能性。 方法 将电泳后的SSCP凝胶和琼脂糖凝胶放入两种核酸染液中轻摇浸染 3 0～ 45min ,并注意避光 ,3 0 0nm紫外灯下观察并照相记录。 结果 GoldView染色后 ,dsDNA呈绿色荧光 ,ssDNA呈红色荧光 ,可检测到少至 5ng的dsDNA ,灵敏度与EtBr大致相当。 结论 GoldView是一种安全、灵敏的EtBr替代品 ,可用于常规核酸染色。

超声快速组织处理技术在鼻咽癌病理诊断中的应用

目的探讨超声快速组织处理技术应用于鼻咽癌诊断中的可行性。方法收集2020年1月至2021年5月湖北省中西医结合医院病理科接收的鼻咽肿物标本39例。每例标本取材2块,同时进行超声快速石蜡处理(超声处理组)和常规石蜡处理(常规处理组)。分别对石蜡切片进行HE染色、免疫组织化学染色和显色原位杂交EB病毒编码核糖核酸染色。在显微镜下观察2组切片,比较2种不同组织脱水处理方式对诊断结果的影响。结果39例鼻咽肿物标本同时进行超声快速组织处理和常规组织处理,其中诊断为鼻咽癌的均为9例、良性均为30例。显色原位杂交EB病毒编码核糖核酸染色阳性者均为7例,且均出现在鼻咽癌患者中。超声处理组HE染色效果优于常规处理组,镜下可见切片透明度好,背景干净,核质对比清晰,色彩明艳,且细胞形态更加饱满,结构完整,无收缩。超声处理组和常规处理组免疫组织化学染色结果相似,镜下均可见阳性细胞强度好,定位准确,无非特异性着色,背景干净。超声处理组和常规处理组显色原位杂交EB病毒编码核糖核酸染色结果相似,镜下均可见细胞核呈棕褐色,结果定位准确。结论对鼻咽肿物标本进行超声快速组织处理不会影响染色结果,且能有效缩短出片时间,提高病理诊断效率,可以应用于鼻咽癌的病理诊断。

红细胞MCV和RDW对不同方法计数低值血小板的影响

目的探讨红细胞平均体积(MCV)和红细胞分布宽度(RDW)对XN-3000血液分析仪电阻抗法(PLT-I)和核酸染色法(PLT-F)低值血小板计数的影响。方法采用Sysmex-XN3000血液分析仪对68例低值血小板患者(分四组:红细胞MCV≥70 f L、MCV<60 f L、60 f LMCV<70 f L而RDW<0.2、60 f LMCV<70 f L而RDW>0.2)EDTA抗凝血分别用PLT-I法和PLT-F法进行血小板计数,同时用Beckman Coulter FC500流式细胞仪(免疫法)计数,以免疫法为参考方法进行比较分析。结果 PLT-F法、PLT-I法与免疫法的相关系数r分别为0.931、0.808,PLT-F法的相关性明显优于PLT-I法;当红细胞MCV≥70 f L、60 f L≤MCV<70 f L而RDW<0.2时,PLT-I法与免疫法比较血小板计数,差异无统计学意义(P>0.05);当红细胞MCV<60 f L、60 f L≤MCV<70 f L而RDW>0.2时,PLT-I法与免疫法比较血小板计数,差异有统计学意义(P<0.05);不同组在PLT-F法与免疫法比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 PLT-F法与免疫法有良好的相关性,PLT-I法对低值血小板计数的准确性有较大影响,当MCV<60 f L或者60 f L≤MCV<70 f L而RDW>0.2时,血小板应该采用流式细胞仪或PLT-F法检测以获得更为准确的数据。

PLT-F计数低值血小板的准确性评价

目的探讨Sysmex XN-9000全自动血细胞分析仪PLT-F通道在低值血小板测定中的临床意义。方法采用Sysmex XN-9000全自动血细胞分析仪的3种方法电阻抗法(PLT-I)、光学法(PLT-O)、荧光核酸染色法(PLT-F)进行血小板计数,从精密度、低值血小板及红细胞碎片干扰评价,并与使用抗CD61抗体的流式细胞术检测结果进行比较。结果与电阻抗法(PLT-I)、光学法(PLT-O)相比,荧光核酸染色法(PLT-F)的重复性最好,精确度较高;在红细胞碎片干扰实验中,PLT-F具有较强的抗干扰能力(高、低浓度组P>0.05),PLT-O次之(高浓度组P<0.01,低浓度组P>0.05);低值血小板相关分析结果显示3种方法都得到良好的相关性,PLT-F法的准确性较高,尤其在低值血小板计数中。结论临床常规标本可以使用Sysmex XN-9000全自动血液分析仪的PLT-I法检测,当标本血小板数目异常或溶血时,建议使用PLT-O法或PLT-F法复查,必要时采用镜检法或流式细胞术。

复方壳多糖组织工程皮肤活力测定的研究

目的介绍一种快捷、简便、灵敏和准确的测定组织工程皮肤活力的方法。方法采用SYTO 13和溴化乙锭(ethid-ium bromide,EB)2种荧光核酸染色剂对冻存后组织工程皮肤进行染色,通过流式细胞计数仪及荧光显微镜下观察等方法计算活细胞。结果4℃条件下,组织工程皮肤冻存7d后表皮活力值为未冻存时的62.46%;冻存7d后真皮活力值为未冻存时的54.21%。结论SYTO/EB双重核酸染色法是测定组织工程皮肤活力的既简便又准确的方法。

利用实验促进中学生对细胞知识内容的学习

列举几个促进细胞知识学习的实验,介绍实验的原理、部分实验步骤方法的改进以及实验结果的分析,结合生物教学阐述实验对中学生学习细胞学知识的重要性,旨在为中学一线教师和学生提供学习生物学一些思考方向,诸如实验是为细胞知识体系这个有机整体服务的。

贫血患者网织红细胞及其荧光强度检测的临床意义

目的探讨流式细胞术加核酸荧光染色技术在网织红细胞(Ret)及其荧光强度分析中的临床应用价值。方法用SysmexXT-2000i全自动血液分析仪分析不同类型贫血患者的网织红细胞(Ret)和荧光强度的变化。结果285例贫血患者与102例正常人群比较,其Ret绝对值及其Ret百分比有不同程度的升高、轻度降低或显著降低;荧光强度的变化差异较大,表现为低荧光强度网织红细胞比率(LFR)降低,幼稚网织红细胞比率(IRF)、中荧光强度网织红细胞比率(MFR)和高荧光强度网织红细胞比率(HFR)升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论全自动血液分析仪对网织红细胞的自动化分析测量细胞多,避免了主观因素导致的误差,操作简便、快速、灵敏、重复性好、误差小、结果准确,方法易于标准化。网织红细胞及其荧光强度分析可作为某些贫血鉴别诊断的初筛指标及骨髓造血系统抑制和恢复较敏感的指标,对判断和监测骨髓的损伤程度和预后具有重要的临床意义。

Sysmex XT-1800i血球分析仪器维修3例

血液分析是指测定血液中白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板等各项参数。检查血液中各种细胞成分的量和质的变化,即可协助判断肌体各种组织器官的病变情况。日本Sysmex XT-1800i型全自动血液分析仪运用sysmex专长的核酸荧光染色技术,配合激光流式分析系统,保证精确的白细胞五分类结果。2种方法学检测血小板。其操作简单、测定速度快、结果准确、故障率低,我院使用该型机器多年,状况一直良好。现将日常使用中出现的一些故障及检修方法介绍给大家,供参考。

冰冻切片在临床病理诊断与研究中的应用

本实验详细介绍冷冻切片的方法、影响因素、标准化与质量控制及其在临床快速病理诊断的HE、免疫组织化学和核酸原位杂交染色方法。制备的冷冻切片组织结构完整,细胞染色清晰、境界清楚、核质分明、对比度好,无刀痕、皱折、重叠、冰晶、切片平整、厚薄均匀一致等;可用于临床快速病理诊断的HE染色、脂肪黏液染色、酶组织化学、免疫组织化学、免疫荧光、核酸原位杂交以及原位PCR等病理诊断与研究。

XE-5000血细胞分析仪检测血小板假性增多2例分析

目的分析血细胞分析仪检测血常规,导致血小板(PLT)假性增多的原因,并寻找解决方法。方法对2例血细胞分析仪检测血小板异常增多的样本,首先血涂片染色镜检,观察破碎红细胞、血小板形态及分布情况,再分别用网织红细胞检测通道采用核酸荧光染色法(PLT-O)和显微镜手工镜检两种方法复检血小板。结果 2例皆为假性血小板增多,PLT-O法与手工镜检法计数结果基本相同。结论在保证血细胞分析仪正常运行的同时,如果检测中发现血红蛋白(HGB)偏低、红细胞平均体积(MCV)偏低(<70 fL)、PLT异常增多的结果,在仪器提示有异常直方图时,应及时分析可能的影响因素,建议应用XE-5000的PLT-O法进行复检,必要时配合显微镜手工镜检,从而使血小板计数结果更准确、可靠。