血液筛查中隐匿性乙型肝炎病毒的核酸检测初步研究

目的通过对无偿献血者血液标本进行核酸检测,再对核酸检测阳性标本进行HBV DNA定量和"两对半"检测,提高隐匿性乙型肝炎病毒的检出率,缩短窗口期,保障血液检测质量。方法采用ELISA检测无偿献血者血液标本,并使用核酸检测ROCHE COBAS S201血液核酸筛查系统,对核酸检测阳性标本进行HBV DNA定量检测,同时进行乙型肝炎"两对半"检测。结果无偿献血者血液标本22467份,经两遍ELISA检测HBsAg阳性标本94人份,再对于22 273份ELISA阴性标本再进行核酸检测,结果有39人份检出为HBV DNA。结论核酸检测阳性39人份中HBsAg阳性标本8人份,其中有两例拷贝数较高,并且为HbsAg、HBeAb、HBcAb阳性。核酸检测在采供血机构血液筛查中起到了重要作用。

隐匿性乙型肝炎病毒感染的输血传播风险及防范

乙型肝炎病毒(HBV)感染是我国重大的公共卫生问题,也是输血安全领域的焦点之一。隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)是HBV感染的一种特殊的临床类型,其特征是在血清或肝脏中检测到HBV DNA,但乙型肝炎表面抗原(HBsAg)呈阴性。对献血者进行HBsAg检测尤其是核酸检测(NAT)能有效地控制大多数HBV传播,但是残余传染风险依然存在。OBI献血者是潜在的HBV传染源,含有极低病毒载量的HBV DNA,即使是高度敏感的单人份核酸检测(ID-NAT)也可能是间歇性检测到或无法检测到。目前对于OBI检测缺乏一种标准化的、经过验证的有效方法。为了提高OBI检测的准确度,需要开发更灵敏、标准化和有效的HBsAg、HBV DNA的检测方法;同时还要深入地了解OBI发展机制,准确诊断OBI以提高输血安全性。

隐匿性乙型肝炎病毒感染和血站开展核酸检测的重要性

隐匿性HBV感染(OBI)是一个具有挑战性的临床课题。OBI具有2个主要特征:HBsAg检测阴性和低病毒复制。对OBI及其临床意义的研究在过去20年里取得了显著进展。敏感的HBV DNA扩增试验是OBI诊断的基础,病毒和宿主因素与OBI的发病机制相关。本综述旨在阐述OBI的发生机制和相关的病毒学诊断及血站系统开展病毒核酸检测的重要性。

隐匿性乙型肝炎病毒感染的机制及其对血液安全的影响

血清HBsAg阴性者肝组织或血清中仍可检出HBV DNA,此现象称为隐匿性HBV感染(occult hepatitis B virus infection,OBI)。OBI对保障输血安全、临床诊断和HBV流行病学监控带来很大困难,进一步阐明其机制有利于OBI的预防和治疗。本文综述了近年来对OBI发生机制的研究进展、OBI对血液安全的影响以及核酸检测工作对血液安全的促进作用。

核酸检测法应用于血液标本内乙型肝炎病毒检测的结果

目的:分析核酸检测法应用于血液标本内乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)检测的结果。方法:研究时段自2016年10月至2018年10月,选定本院检验科收集的血液标本200例,分别采用HBV-DNA(核酸检测法)、ELISA(酶联免疫吸附法)检测HBV病毒,对比两种方法的检测情况。结果:HBV-DNA法特异性(99.82%)、敏感性(98.25%)显著高于ELISA法(91.05%、92.11%),P<0.05(具统计学差异);HBV-DNA法窗口期显著低于ELISA法,P<0.05(具统计学差异)。结论:HBV-DNA检测法在乙型肝炎HBV检测中的特异性、敏感性较高,明显减少了窗口期,临床价值较高,值得借鉴。

核酸检测与ELISA检测在无偿献血血液标本乙型肝炎病毒(HBV)筛查中的应用效果比较

目的探究核酸检测(NAT)和ELISA检测对无偿献血血液标本中乙型肝炎病毒(HBV)的筛查作用。方法选取本中心2017年1月至2019年12月无偿献血者150名作为研究对象,其血液样本均行NAT和ELISA检测,以电化学发光免疫分析(ECLIA)作为金标准,比较两种检测方法HBV检出率、准确率、灵敏度、特异性。结果ECLIA检测中,血液样本HBV阳性37份,阴性113份,阳性率为24.67%。NAT检测准确度为97.30%(36/37),灵敏度为100.00%(10/10),特异度为96.30%(26/27);ELISA法准确度为75.68%(28/37),灵敏度为60.00%(6/10),特异度为77.78%(21/27);两种检测方法准确度、灵敏度、特异度比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论无偿献血血液标本HBV筛查中,NAT检测价值高于ELISA,可提高HBV检出率,且特异性强、灵敏度高,值得临床推广应用。

广东省中山市核酸检测与酶联免疫吸附试验检测在无偿献血血液标本乙型肝炎病毒筛查中的应用比较

目的比较无偿献血血液标本乙型肝炎病毒(HBV)筛查中核酸检测与酶联免疫吸附试验(ELISA)检测的应用价值。方法选择2016年1月至12月我单位采集的,符合GB18467《献血者健康检查要求》的标准无偿献血者血液标本,其中,核酸检测46 224人次,ELISA检测47 485人次。记录核酸检测与ELISA检测的窗口期与检测结果。结果核酸检测窗口期为(25±5)d短于ELISA检测的(37±6)d,差异有统计学意义(P<0.05);46 224份标本中,经核酸检测HBV DNA阳性占0.13%;47 485份标本中,经ELISA检测阳性占0.72%;经ELISA检测为阴性的47145份标本中,核酸检测HBV DNA为阳性者11份。结论在开展无偿献血血液标本HBV筛查过程中,ELISA检测仍存在漏检情况,联合核酸检测利于缩短窗口期,降低输血HBV感染率,提高输血安全性。

献血者血液乙型肝炎病毒核酸及血清学筛查策略的探讨

目的探讨1种ELISA试剂检测HBsAg 1种试剂检测HBV核酸策略的可行性。方法留取新创和BI-OMERIEUX ELISA双试剂检测判为不合格的血液标本418份,应用诺华或罗氏核酸检测试剂进行核酸检测,AB-BOTT化学发光试剂进行补充血清学乙肝两对半检测,对ELISA单试剂阳性NAT阴性的标本用ABBOTT HBsAg中和试剂进行HBsAg确证试验,并对HBsAg确证阳性标本进行追踪并进行相关检测进一步加以确证。结果 616份标本中ELISA双试剂阳性为49.0%(302/616),BIOMERIEUX单试剂阳性为5.7%(220/616),新创单试剂阳性为15.3%(94/616);BIOMERIEUX单试剂阳性标本中,31份标本核酸检测为阴性、ABBOTT HBsAg确证为阳性,也即在616份不合格血液中,有5.0%(31/616)的HBsAg确证阳性的标本被新创HBV ELISA试剂漏检且不能被NAT检出;新创单试剂阳性标本中,2份标本核酸检测为阴性、ABBOTT HBsAg确证为阳性,也即在616份不合格血液中,有0.5%(3/616)的HBsAg确证阳性的标本被BIOMERIEUX HBV ELISA试剂漏检也不能被NAT检出;对34份HBsAg确证试验阳性的血液进行乙肝两对半分析,其中除4份标本未做检测外,其余21份为抗-HBc和抗-HBe阳性,3份为抗-HBc和抗-HBe阳性,1份为抗-HBc阳性,1份为抗-HBs阳性,1份为抗-HBe和HBeAg阳性,1份为抗-HBs和抗-HBc阳性,2份为抗-HBs、抗-HBc、抗-HBe、及HBeAg均阴性,即共有26份抗-HBc为阳性。34份HBsAg确证试验阳性的血液中共追踪成功12名,其乙肝两对半检测结果与原始标本的乙肝两对半检测结果不矛盾。结论实施核酸检测后,去掉2种ELISA试剂中的任何一种均存在一定的漏检。是否去掉一种ELISA试剂以及去掉哪种ELISA试剂,需要各血站进行适当的风险效益分析评估。

献血人群隐匿性乙型肝炎的血清学分布特征分析

目的分析邯郸地区无偿献血者隐匿性乙肝(OBI)的血清学分布特征。方法选取邯郸市中心血站2017年3月1日~12月31日、采用两种ELISA试剂进行HBsAg检测的无偿献血者血液标本75984例,用常规HBsAg单试剂阳性标本和阴性标本进行核酸(定性)检测,将得到的核酸检测为HBVDNA反应性标本,采用化学发光“两对半”和核酸定量检测,结合检测结果和献血者统计资料进行关联分析。结果得到HBsAg–/HBVDNA+/HBcAb+的样本26例,可能为OBI标本,其中HBsAg–/HBsAb+/HBcAb+及HBsAg–/HBsAb–/HBcAb+为OBI的主要血清型模式,这两种血清型各占总数的30.8%和50.0%。HBsAb>100IU/L标本占总例数的11.5%(3/26),HBsAb为(20~160)IU/L的例数为6例,占总例数的23.1%(6/26)。梯度稀释HBVDNA标准品的浓度(3.15IU/mL、4.2IU/mL、6.3IU/mL、8.4IU/mL)的核酸检测对应CT值依次为41.14、37.45、36.23、35.04。OBI感染率在男性和女性性别上的差异无统计学意义,在年龄分布上,随着岁数增大而呈现升高趋势。结论增加核酸检测会降低单纯采用两遍ELISA法检测HBsAg造成的输血感染风险,特别是对于OBI的检出,提高输血安全。鼓励抗-HBs滴度较低的健康献血人群适时注射乙肝疫苗,降低乙型肝炎的输血传染风险。

重庆地区无偿献血人群隐匿性乙型肝炎病毒感染的特征

目的了解重庆地区无偿献血人群中隐匿性乙型肝炎病毒感染(occult hepatitis B virus infection,OBI)情况,分析其血清学和病毒学特征。方法应用酶联免疫法(筛查HBs Ag、抗-HCV、抗-HIV)及核酸检测(nucleic acid testing,NAT)法(筛查HBV、HCV、HIV)筛查重庆地区93 625份初筛合格的无偿献血者血液标本。对其中HBs Ag(-)但HBV DNA(﹢)的标本进行抗-HBs、抗-HBc、HBe Ag、抗-HBe 4项血清学标志物测定,进一步对抗-HBc(﹢)标本做病毒载量测定以及基因分型。结果 93 625份标本中HBs Ag(-)但HBV DNA(﹢)的检出率为0.097%(91/93 625)。91份阳性标本中79份为抗-HBc(﹢),检出率为0.084%(79/93 625)。该部分标本阳性者被视为OBI献血者。OBI献血者的血清学特征可以分为4种模式:单抗-HBc(﹢)、抗-HBc(﹢)/抗-HBs(﹢)、抗-HBc(﹢)/抗-HBe(﹢)以及抗-HBc(﹢)/抗-HBs(﹢)/抗-HBe(﹢)。病毒载量为0~1056.8IU/ml(中位数为108.6 IU/ml),基因型以B型为主。结论重庆地区无偿献血者中OBI检出率较高,其血清学和病毒学特征具有地区性。NAT能提高OBI检出的灵敏度,但也存在一定的假阳性,对血液安全具有重要影响。

隐匿性乙型肝炎病毒感染者长期随访与预后转归

目的 对隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)献血者进行长期随访追踪,探索隐匿性乙型肝炎病毒感染者的长期感染预后转归情况。方法 2010年1月1日~2020年12月31日本中心采用血清学与病毒核酸检测的方法对献血者进行血液筛查,并采用手工巢式PCR扩增方法进行HBV DNA确认,共收集到306名HBsAg阴性/HBV DNA阳性献血者。后期对该306名献血者进行长期随访跟踪并复查HBsAg与HBV DNA,以确认是否为OBI感染者,并通过随访复查判定OBI感染者在长期免疫下的临床预后转归情况。结果 对306名HBsAg阴性/HBV DNA阳性献血者进行长期随访,共获得40名献血者(13.07%,40/306)的多次召回复查结果。40名OBI献血者血清学乙肝五项标志物中,有90%(36/40)为抗-HBc阳性、有57.5%(23/40)为抗-HBs阳性、有40%(16/40)为抗-HBe阳性;抗-HBc+/抗-HBs+组合占50%(20/40)、抗-HBc+/抗-HBs-组合占40%(16/40)、抗-HBc-/抗-HBs+组合占7.5%(3/40)、抗-HBc-/抗-HBs-占2.5%(1/40)。40名献血者的随访复查次数与时长达到1~13次、8~108个月(0.6~9年),随访时间小于1年的有1人(2.5%),随访时间>1年且≤3年有11人(27.5%),随访时间>3年且≤5年有23人(57.5%),随访时间>5年有5人(12.5%)。经过40名献血者长期及多次召回复查并判定预后,有50%OBI献血者的HBV DNA转阴(HBsAg阴性/HBV DNA阴性),有42.5%(17/40)OBI献血者仍保持OBI感染状态(HBsAg阴性/HBV DNA阳性),有7.5%(3/40)OBI献血者的预后判定为可疑状态(多次复查,结果呈多次阴阳结果交替转换,未能明确)。结论 经过长期多次随访复查,OBI感染者的预后未发现转向急性或慢性HBV感染,更大比例仍为保持OBI感染,而OBI感染献血者长期处于极低载量HBV病毒感染状态,以至于病毒核酸检测出现漏检,这对输血安全带来极大的挑战。

无偿献血人群隐匿性乙型肝炎病毒感染调查

目的调查无偿献血人群隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)情况。方法2021年1月~2021年12月我站无偿献血者血液样本107397份,采用两种ELISA法检测试剂盒进行HBsAg的初次筛查,采用核酸检测(NAT)法对两次HBsAg结果均为阴性的样本进行HBV DNA检测。对血清HBsAg阴性而HBV DNA阳性样本进行HBV血清学标志物检测,并采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测核酸和病毒基因分型。结果在筛查的107397例无偿献血人群血样本中,经血清标志物检测后确认为OBI者29例(0.27‰);血清抗-HBc阳性者12例(35.3%),抗-HBe/抗-HBc阳性者8例(23.5%),抗-HBs/抗-HBc阳性者6例(17.7%),抗-HBs/抗-HBe/抗-HBc阳性者3例(8.8%);19~29岁年龄段献血人群OBI感染率为0.09‰,30~39岁人群为0.32‰,40~49岁人群为0.39‰,50~55岁年龄段献血人群OBI感染率为0.41‰,且该年龄段重复献血者OBI感染率为0.31‰;血清抗-HBs/抗-HBc阳性和抗-HBs/抗-HBe/抗-HBc OBI献血者血清病毒载量>1000 IU/mL的占比分别为33.3%和66.7%,显著高于血清仅抗-HBc阳性者(0.0%,P<0.05)或血清抗-HBe/抗-HBc阳性者(0.0%,P<0.05);在29例OBI献血者中,C基因型占比为62.1%,B基因型感染占比为27.6%。结论在初筛血清HBsAg阴性的献血人群中,可能还存在很低比率的OBI人群,对用血安全提出了挑战。全面进行病毒核酸检测的花费-效益关系需要认真研究,提高常规ELISA检测方法的灵敏度也是关键。

隐匿性乙型肝炎病毒感染与输血传播风险

尽管乙型肝炎疫苗普遍免疫接种且抗病毒治疗技术不断提高,但乙型肝炎病毒(HBV)的持续感染仍是全球面临的主要公共卫生问题。据报道,全球共有20多亿人口曾经感染过HBV,并且有2亿多人呈慢性感染状态[1]。HBV慢性感染可通过血液中检测到的HBV表面抗原(HBsAg)浓度进行判断,但随着分子生物学诊断技术的发展,发现了HBsAg阴性的HBV长期携带者,被确定为隐匿性HBV感染(OBI)。

核酸技术控制隐匿性乙型肝炎病毒感染的输血传播

进一步认识和验证核酸检测技术在控制隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)输血传播的意义。方法:调查统计2015年1月1日至2019年12月31日上海市崇明地区(崇明、长兴、横沙三岛)无偿献血者血液标本HBsAg(ELISA)及HBV-DNA检测结果。结果:54627份无偿献血者血液标本,HBsAg(ELISA)有反应性281份(0.514%)。HBsAg(ELISA)检测阴性标本54364份,全部进行HBV-DNA核酸检测(依据核酸集中化检测策略),其中,HBV-DNA有反应性标本33份(0.061%)。结论:核酸检测技术有效提高无偿献血人群中低浓度乙型肝炎病毒携带者检出率,有效控制隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)通过输血传播,确保临床输血安全。

献血人群隐匿性乙型肝炎病毒感染的血清学特征分析

旨在研究献血人群隐匿性乙型肝炎病毒感染(occult hepatitis B virus infection,OBI)的血清学特征。收集上海市血液中心2013-2018年经核酸检测合格血液样本523例,不合格样本395例,分别采用荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantify polymerase chain reaction,FQ-PCR)和转录介导的扩增(transcription mediated amplification,TMA)技术对阳性样本进行HBV DNA鉴定;化学发光法对所有样本HBV表面抗体(抗-HBs)进行定量检测,对HBV e抗原(HBeAg)、HBV e抗体(抗-HBe)和HBV核心抗体(抗-HBc)进行定性检测。结果发现197例HBsAg阴性样本的HBV DNA呈阳性,为OBI。其抗-HBc阳性率为85.79%,抗-HBs阳性、抗-HBc阳性及抗-HBc单独阳性为OBI的主要血清学模式。核酸检测阴性的合格献血者组以乙型肝炎两对半阴性及抗-HBs阳性为主。OBI组抗-HBs水平分布以<100 mIU/mL水平为主,明显低于合格献血者组。合格献血者组>1000 mIU/mL的比例高于OBI组。以上结果表明上海地区献血人群中OBI者血清学分布特征与合格献血者组之间存在差异,为进一步研究OBI提供了数据参考。

四川地区供血浆人群隐匿性乙型肝炎病毒感染的研究

目的了解四川地区供血浆人群隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)情况,分析现行标准下原料血浆的HBV残余风险。方法采用实时荧光PCR和ELISA法,对四川地区10个单采血浆站2007年7月～2009年7月筛查合格的56 620名次供浆者的135 542份原料血浆标本作HBV NAT和HBsAg同步筛查,对筛查阳性的标本以进口试剂复核、作中和试验及HBV DNA定量测定,并对阳性血浆的供血浆者追踪分析,确认OBI标本。结果共检出HBV DNA阳性12份(9人),四川地区原料血浆HBV DNA检出率为0.008 9%(12/135 542);HBV DNA载量均<1 000 IU/ml;采用国产ELISA试剂检测该12份标本HBsAg均为阴性,而用进口试剂检测并经中和试验确认了其中5份(3人)为HBsAg阳性,其余7份(6人)为OBI血浆,血清学模式均为HBsAg-/HBeAg-/HBcAb+;对供血浆者2～9个月的追踪分析显示ELISA和NAT检测结果无变化,与筛查结果一致。结论 HBsAg阴性供血浆人群中存在OBI感染者,四川供浆人群中OBI感染率为0.010 6%(6/56 620),低于现有报道的我国无偿献血者的OBI感染率;按照现行要求采用ELISA法检测原料血浆,灵敏度较低的国产试剂检测HBsAg的残余风险(0.0089%)高于进口试剂(0.005 2%)。增加HBV NAT能有效降低原料血浆OBI的漏检风险。

不同核酸检测方法对献血者隐匿性乙肝病毒感染的研究

目的了解无偿献血者中隐匿性乙肝病毒感染情况,并比较不同核酸检测方法对隐匿性乙肝病毒感染检测能力的差异。方法分别采用nested-PCR和Procleix Ultrio全自动核酸检测系统对无偿献血者血浆标本进行HBV核酸检测,对核酸阳性标本进行HBV DNA序列分析。结果在总计9 209例次标本的检测中,共有9 159例为HBsAg(-);HBsAg(-)标本中nested-PCR方法检出18例HBV DNA阳性(0.19%,18/9 159),而Procleix Ultrio检出7例(0.076%,7/9 159),两者间差异有统计学意义(P<0.05);测序结果显示隐匿性HBV感染者中C基因型所占的比例(64.7%,11/17)明显高于HBsAg阳性的HBV感染者(23.1%,6/23,P<0.01)。结论闽南地区无偿献血者中存在较高比例的隐匿性乙肝病毒感染;不同核酸检测方法对献血者隐匿性乙肝病毒感染的检测能力存在差异。

31例乙型肝炎病毒核酸检测阳性献血者跟踪调查

目的了解扬州地区无偿献血者乙型肝炎病毒核酸检测阳性献血者的跟踪调查情况。方法对22518例献血者先经E LISA法两次检测及NAT一次检测;对本血站HBsAg E LISA法双试剂阴性或单试剂阳性而NAT检测为阳性的标本,再送江苏省血液中心进行罗氏核酸检测和乙肝"两对半"跟踪检测。对E LISA法HBsAg双试剂阴性核酸检测阳性献血者6个月后再进行跟踪检测。结果 ELISA法双试剂阴性标本中上海科华NAT检测为阳性26例,占0.12%;OBI感染22例,HBV窗口感染期4例。OBI献血者的血液学特征以HBcAb为主,占100.0%,其次为HBeAb,占63.6%。31例送检标本乙肝"两对半"均出现HBsAg、HBsAb、HBeAb、HbcAb单项或合并阳性。结论核酸检测能够在一定程度上弥补ELISA方法学的局限性,有效缩短窗口期,减少漏检的发生,降低经输血途径传播疾病的风险,从而确保血液质量和输血安全。

核酸检测在筛查献血者乙型肝炎病毒中的应用

目的通过血清学检测和核酸检测并行的检测模式,合理评估核酸检测技术(NAT)应用于毕节市无偿献血血液筛查中的必要性。方法采用2种酶联免疫吸附(ELISA)试剂对2016年1月—2017年12月在毕节市采集的无偿献血者标本进行HBs Ag检测,对酶免检测无反应性和单试剂有反应性标本做核酸检测。部分核酸有反应性样本送国家卫生健康委确认。结果2016—2017年共采集血液标本56798份,酶免双试剂有反应性标本557份。HBs Ag酶免检测有反应性标本347份,其中单试剂有反应性标本86份,双试剂有反应性标本261份。核酸检测标本56241份,经核酸检测混检有反应性pool数为54,拆分有反应性数为27份,均为HBV DNA有反应性。核酸有反应性检出率为0.48‰。酶免单试剂检测有反应性且核酸检测有反应性样本为2份。6份核酸检测有反应性标本经卫生部临检中心确认,3份标本为HBV DNA确认有反应性,6份标本均为HBc Ab有反应性。结论核酸检测能够检出HBs Ag阴性的乙肝感染者,减少乙肝经输血传播的风险。