乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品的研制

目的建立乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品,确定其质量标准。方法通过对24份病原体培养物的复核、确证,全基因组测序及基因分型,组成乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品,经多家实验室的协助标定,确定参考品的质量标准,并对参考品进行均匀性及稳定性评估。结果乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品由10份阴性、14份阳性、1份最低检出限和1份精密度样品组成。质量标准为10份阴性参考品应均检出阴性;14份阳性参考品应至少检出13份阳性;精密度考品重复检测10次,要求均为乙型脑炎病毒阳性,且其检测值的CV应不大于5.0%;最低检出限参考品要求1∶102倍稀释及以上浓度时应为乙型脑炎病毒阳性。参考品的均匀性及稳定性均符合要求。结论该参考品可用作乙型脑炎病毒核酸检测试剂的质量控制及评价。

白喉棒杆菌核酸检测试剂用国家参考品的研制

目的:研制白喉棒杆菌核酸检测试剂用国家参考品。方法:将6株白喉棒杆菌和10株非白喉棒杆菌代表性菌株在各自适宜的环境下培养,经菌株鉴定后,制备灭活菌液,对候选参考品进行均匀性和稳定性的评估以及准确性、特异性、重复性和最低检出限的验证研究,并组织3家实验室进行协作标定。结果:研制出白喉棒杆菌核酸检测试剂用候选参考品,由6个阳性参考品、10个阴性参考品、最低检出限参考品和重复性参考品组成。证实该候选参考品均匀性及稳定性良好,准确性、特异性及重复性好,最低检出限可达1.0×10~3~1.0×10~4个菌·m L^(-1)。协作标定结果也进一步表明阳性、阴性、重复性和最低检出限候选参考品均符合国家参考品的各项要求。结论:研制出的白喉棒杆菌核酸检测试剂参考品,可用于相关试剂盒的质量控制和评价。

伦理关怀视角下的核酸检测试剂盒改良设计

目的在疫情常态化背景下,为避免核酸检测试剂盒在使用与回收周期中,对传染源处理不当造成二次污染,因此进行试剂盒改良设计,以构建良好的伦理关怀关系。方法首先分析了当下核酸检测产品所存在的弊端,获取功能需求,确定了所属设计类型,运用AD理论对功能需求进行分解,然后对初步设计方案进行耦合判断,运用TRIZ进行解耦,最终得到设计方案。结果采用集成AD和TRIZ的设计方法,从伦理关怀的视角下,对核酸检测试剂盒的安全消毒模块进行设计,将核酸检测试剂盒改良为一体化结构,并增添消毒灭菌模块,最终设计方案可有效解决二次污染问题并实现伦理关怀。结论方案通过集成AD和TRIZ的设计方法,从功能结构上对核酸检测试剂盒进行改良设计,解决了现有产品存在的诸多问题。在设计中注重产品使用感受,帮助人们在使用产品时舒缓紧张感并构建信任,同时为产品新功能模块的创新设计提供思路和参考。

人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒国家监督抽检质量分析

目的:评价国内不同使用环节的人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)的质量现状。方法:依据企业产品技术要求,对准确性、特异性、检测限、精密度4个项目进行检验。同时,以国家参考品和细胞质控品为样品,进行探索性研究。结果:本次国家监督抽检共抽检15批次产品,其中13批次的准确性、特异性、检测限和精密度检测结果均符合要求,2批次结果因质量控制不符合要求判定为不合格,抽检合格率为87%。探索性研究结果显示,以国家参考品为样品进行评价,6批次试剂盒未能满足检测限要求;以9种不同型别的高、低浓度细胞质控品为样品进行评价,各试剂检测高浓度样品符合率较高,检测低浓度样品符合率较低。结论:企业需进一步规范和完善产品技术要求,改进和完善企业参考品和产品的设计,建议采用国家参考品优化检测限标准。

核酸检测试剂盒塑料激光焊接结构及工艺研究

为解决核酸检测试剂盒激光焊接漏液问题,该研究通过激光焊接轨迹、焊接次序、焊接功率、焊接速度及工件定位方式调整及上层核酸检测试剂盒盖焊接槽结构、下层核酸检测试剂盒焊接筋结构的设计和改进,采取梯形焊接筋配合焊接槽结构组合,使用单圈多轨迹激光路径、调整不同内外圈焊接次序、焊接功率和焊接速度控制焊接温度,增大激光覆盖面积,克服装配系统性误差,在不改变激光器对焦焦距的前提下降低激光器使用功率增加激光器寿命。通过试验得出,当色母添加比例为1%,激光焊接功率为50 W,激光焊接速度为1000 mm/s,焊接圈数为3,激光光斑直径为0.8 mm时,漏液比例达到最低的0,焊缝剪切强度最高,为37 MPa,且焊缝清洁无烟尘,焊缝内部无气孔的存在,此时焊缝剪切强度最高,焊接漏液率小于万分之一。

6种新型冠状病毒核酸检测试剂的检测性能对比观察

目的比较6种新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂对新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疑似患者咽拭子标本中2019-nCoV的检出率及CT值,以评估不同核酸检测试剂的检测性能。方法采用6种2019-nCoV核酸检测试剂[试剂A(上海辉睿生物科技有限公司)、试剂B(上海捷诺生物科技有限公司)、试剂C(上海伯杰医疗科技公司)、试剂D(上海之江生物科技股份有限公司)、试剂E(圣湘生物科技股份有限公司)、试剂F(中山大学达安基因股份有限公司)]、实时荧光RT-PCR法检测47例COVID-19疑似患者咽拭子标本中的2019-nCoV核酸(ORF1ab、N基因),对其中CT值较小的5份咽拭子标本进行10倍、100倍的稀释后,再次检测2019-nCoV核酸的ORF1ab和N基因。结果试剂A、B、C、E、F对2019-nCoV ORF1ab、N基因阳性检出率及CT值比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。除了试剂D,试剂A、B、C、E、F均能同时检测出不同稀释浓度2019-nCoV核酸阳性咽拭子标本中ORF1ab和N基因。试剂A、B、C、E、F检测3种浓度2019-nCoV核酸的CT值比较,P均>0.05。结论6种2019-nCoV核酸检测试剂中,试剂A、B、C、E、F对COVID-19疑似患者咽拭子2019-nCoV核酸的检出率差异不大,稳定性均较好;试剂D需进一步优化。

水产病原肝肠孢虫核酸检测试剂盒效果测评

该研究选取汇科因、市场品牌A、市场品牌B 3种核酸提取试剂盒及其对应的PCR检测试剂盒,检测近几年盛行肆虐的水产病害——肝肠孢虫(EHP),综合评估核酸提取试剂盒提取的核酸浓度、纯度、CV值,RT-PCR检测试剂盒的Ct值、波动范围等结果。结果显示,提取南美白对虾的肝胰腺和肌肉组织,不同核酸提取试剂盒提取的核酸浓度高低:汇科因>B>A;不同提取试剂盒获取的核酸样品经不同qPCR检测得到的EHP病原浓度高低:汇科因≥A>B;汇科因核酸提取试剂盒和qPCR检测试剂盒相对于A、B试剂盒的效果和稳定性均较佳。

细菌感染多重核酸检测试剂参考品的建立

目的建立细菌感染多重核酸检测试剂参考品并制定其质量标准,为相关产品的质量评价提供依据。方法选择34种可导致中枢神经系统、血液、呼吸道、肠道以及生殖道感染的致病性细菌或真菌,培养富集后应用全自动细菌鉴定及药物敏感分析系统VITEK2进行鉴定。鉴定正确的菌株,应用梯度稀释法测定浓度后进行分组混合成高浓度样本。应用全基因组第二代测序技术验证混合样本的组成情况和特异性。选择基于不同原理的多重核酸检测试剂进行协作标定,根据标定结果确定参考品的质量标准,并对参考品的稳定性进行考察。结果本参考品由28种细菌和6种真菌混合成7支混合参考品,编号为M1~M7,其中细菌的终浓度约为1×10~8~1×10~9 CFU/ml,真菌的终浓度约为1×10~6~1×10~7 CFU/ml。经全基因组第二代测序技术验证,参考品的组成正确且无交叉污染情况。分别应用基于PCR-熔解曲线、等温扩增以及靶向扩增第二代测序技术的多重核酸检测试剂对参考品进行检测,结果显示本参考品经过适当稀释后能够对试剂的准确性、特异性、重复性以及最低检出限等性能指标进行评价,且参考品各混合菌株间无交叉反应。稳定性研究结果表明反复冻融3次不影响本参考品的稳定性。结论本研究建立了细菌感染多重核酸检测试剂参考品并制定其质量标准,能够应用于相关参考品的质量评价。

3种新型冠状病毒核酸检测试剂对120份样本检测结果的比较与分析

目的对市售的3种国产新型冠状病毒核酸检测试剂(实时荧光RT-PCR法)的检测结果进行比较和分析,以供检测机构参考。方法采用3种核酸检测试剂(实时荧光RT-PCR法)对120份新冠肺炎病人和密切接触者的咽拭子、尿液、唾液和粪便样本进行平行检测,运用SPSS20软件采用卡方检验对检测结果进行分析。结果120份样本中,3种试剂阳性率分别为42.50%(51/120)、39.17%(47/120)和41.67%(50/120),阳性检出率无统计学差异(χ2=0.298,P>0.05),对4种样本检测阳性检出率,差异无统计学意义(P>0.05)。3种试剂检测结果一致的有89份。检测结果一致性从高到低为:A试剂和C试剂>B试剂和C试剂>A试剂和B试剂。结论由于不同厂家试剂灵敏度和准确性不同导致检测结果和检测一致性存在差异,提示试剂厂家需进一步优化性能,提高检测灵敏度和准确性,同时各检测机构应采取多种质控方法以确保新冠病毒核酸检测准确性,以便更好地为疫情防控、病人救治提供科学依据。

沙门氏菌核酸检测试剂盒的评价

采用室内技术参数验证和协同实验的方式对商品化沙门氏菌核酸检测试剂盒在食品中沙门氏菌核酸检测上的包容性、排他性、灵敏度、特异性、准确度、检测限、耐变性、批间变异进行评价。评价结果表明,试剂盒检测结果与国家标准方法检测结果总体上无显著差异,能满足食品样品的检测要求;但对蔬菜制品的灵敏度较其他食品低,与国家标准方法有显著差异,因此该商品化试剂盒不适用于蔬菜制品中沙门氏菌核酸的检测。

4种SARS-CoV-2核酸检测试剂一致性评价

目的评估4种严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核酸检测试剂盒在新型冠状病毒肺炎(COVID-19)诊断中的一致性。方法收集2020年2月18—24日武汉亚心总医院204例COVID-19住院患者临床资料,利用检测剩余标本,对4家通过应急注册审批的SARS-CoV-2核酸检测试剂盒进行一致性评价。在临床诊断为COVID-19的基础上,以任一试剂检出阳性为参考,分别比较4种试剂盒检测SARS-CoV-2ORF1ab基因、N基因的敏感性和特异性。采用Kappa一致性分析和χ^2检验对检测结果的一致性进行统计学分析。结果 4种试剂对SARS-CoV-2的整体检出率分别为72.4%、78.0%、59.3%和72.4%,差异有统计学意义(P=0.011)。A、B、C、D试剂对SARS-CoV-2 ORF1ab基因的检出率分别是47.7%、31.8%、68.2%和83.2%(P<0.000 1);A、B、C试剂对SARS-CoV-2 N基因的检出率分别是79.0%、90.5%和16.2%(P<0.000 1)。结论SARS-CoV-2核酸检测试剂盒存在一定比例的假阴性结果,不同品牌SARS-CoV-2核酸检测试剂检测性能差异有统计学意义,多试剂联合检测有利于提高病毒检出率。

两种检测模式对核酸检测试剂有效利用率的影响

目的比较两种血液检测模式下核酸检测试剂有效利用率。方法统计本实验室2013年度执行与血液批放行设置对应的检测批于48 h内完成检测(模式1)和2015年度执行血液隔离放行"循环满架"72 h内完成检测(模式2)两个阶段的核酸试剂使用情况,比较两种模式下核酸试剂有效利用率。结果模式2试剂总有效利用率为87.70%,显著高于模式1的81.72%(χ~2=34.734,P<0.05);模式2的混检阳性拆分单检试剂有效利用率为78.06%,高于模式1的70.86%(χ2=66.635,P<0.05)。结论模式2的核酸试剂有效利用率较高,混检后阳性拆分是影响试剂有效利用率的主要原因,模式2适用于本站血液检测批放行。

罗氏核酸检测试剂在无锡血站的应用分析

目的评估罗氏核酸检测试剂在无锡地区献血者筛查中应用价值。方法采用美国罗氏诊断公司核酸联合检测试剂盒,对本血站ELISA检测合格的献血者129299人份血液标本进行HBV DNA、HCV RNA和HIV RNA1+2联合检测,先对6人份混样标本进行检测,如为非反应性,则该合并检测池中的标本均为非反应性,如合并检测呈反应性,再进行拆分检测。结果对酶免检测为阴性的129299人份血液标本进行核酸扩增检测,共检测出HBV DNA阳性129例,HCV RNA阳性1例,HCV RNA阳性血液病毒定量为4.27×10~6IU/ml,HIV RNA阳性1例。核酸总和阳性率为1.01‰。结论美国罗氏诊断公司核酸联合检测试剂盒应用于献血者血液筛查后,能在酶免检测阴性的血液标本中进一步筛查出乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒(1型+2型)核酸阳性的献血者标本,避免了临床患者因输血而感染乙型肝炎、丙型肝炎、人类免疫缺陷疾病的不良事件。

肉及肉制品牛源性成分核酸检测试剂盒评价技术的研究

目的探索适合评价核酸检测试剂盒的评价方法。方法本研究采用室内技术参数验证的方法对某公司的肉及肉制品牛源性成分核酸检测试剂盒(实时荧光PCR法)进行评价。对检测的灵敏度特异性、假阳性/假阴性、检测限、耐受性及与标准方法的一致性共6个方面的参数分析评价。结果评价结果表明,对生鲜肉、酱卤肉、熏烤肉、速冻调理肉制品4类共40种肉制品,试剂盒检测结果与标准检测方法检测结果无显著差异,即试剂盒可以满足肉及肉制品牛源性成分核酸检测的需求。结论本文为检测机构筛选合适的牛源性成分检测试剂盒有一定的借鉴意义,并对建立核酸检测试剂盒的评价方法提供一定的技术帮助。

汉坦病毒核酸检测试剂参考品的研制

目的 研制汉坦病毒核酸检测试剂参考品并制定其质量评价标准。方法 收集汉坦病毒阳性和阴性临床分离株样本,制备汉坦病毒RNA噬菌体模拟样本,使用宏基因组测序方法和实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法进行核酸序列鉴定。选择合适样本组成参考品并使用不同试剂对参考品进行协作标定。根据标定结果确定汉坦病毒核酸检测试剂参考品的质量标准,并评估其稳定性。结果 汉坦病毒核酸检测试剂参考品由20份样本组成,包括阳性参考品5份(PC01~PC05)、阴性参考品11份(NC01~NC11)、精密性参考品2份(R01、R02)以及检出限参考品2份(S01、S05)。其中,检出限参考品1:10梯度稀释后,要求S02、S03为汉坦病毒汉滩型阳性,S06、S07为汉坦病毒汉城型阳性,其余样本不做要求。稳定性评价结果表明,汉坦病毒核酸检测试剂参考品经25℃室温放置24 h或反复冻融3次均不影响参考品性能。结论 本研究研制了汉坦病毒核酸检测试剂参考品,并制定了其质量标准,可应用于相关定性检测试剂的质量评价。

肺炎链球菌核酸检测试剂国家参考品的研制及验证

目的研制肺炎链球菌核酸检测试剂国家参考品,并进行适用性验证。方法选择10株肺炎链球菌和10株非肺炎链球菌细菌制备成阳性参考品、阴性参考品、重复性参考品和最低检出限参考品。对参考品的分装均匀性和稳定性进行评估。采用4家企业生产的肺炎链球菌核酸检测试剂盒对制备的肺炎链球菌国家参考品进行准确性、特异性、重复性和最低检出限验证。结果参考品的分装均匀度良好,循环阈值的变异系数均在5.00%以内。2~8℃、室温(25℃)和37℃放置3、7 d及反复冻融3、5次都不影响参考品的稳定性。4家企业的试剂盒的准确性、特异性及重复性检测结果均符合要求。1家企业的试剂盒的最低检出限为1.0×104个/mL,其他3家企业的试剂盒的最低检出限为1.0×103个/mL。结论研制完成一套肺炎链球菌核酸检测试剂国家参考品,能够用于肺炎链球菌核酸检测试剂盒的质量控制和评价。

不同血液检测模式下核酸检测试剂有效利用率结果分析

目的:分析不同血液检测模式下核酸检测试剂的有效利用率。方法:收集某市中心血站共检测129955例无偿献血者血液标本,进行丙型肝炎病毒(HCV)、乙型肝炎病毒(HBV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)的核酸检测,出现阳性后进行拆分检测,比较核酸检测试剂的有效利用率。结果:共完成核酸检测(NAT)129955例,阳性率为0.15%,其中HBV DNA混检阳性率为0.04%,HCV RNA混检2例,HIV RNA 3例,拆分单检总阳性为0.06%,拆分阳性反应率为27.64%;试剂总的损耗率为0.22%,利用率为99.77%;而ELISA检测阳性率为0.14%,其中HBV DNA混检阳性率为0.03%,HCV RNA 3例,HIV RNA 7例,拆分阳性反应率为27.78%,试剂总的损耗率为0.22%,利用率为99.77%。结论:不同血液检测模式下核酸检测试剂有效利用率无明显差异,应用NAT可降低输血风险,尤其对HBV感染的阳性检出率较高。

新标准下17种新型冠状病毒核酸检测试剂性能比对研究

目的参照新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第九版)中解除集中隔离和出院核酸检测标准比较17种新型冠状病毒核酸检测试剂的检测性能,为实验室核酸检测选择试剂提供参考。方法选取2021-08/2022-03新型冠状病毒肺炎疑似病例呼吸道样本50份,经数字聚合酶链式反应(dPCR)检测确定样本阴阳性并对病毒核酸载量定量,再分别对17种检测试剂(编号为A~Q)进行评价。以Ct值35为限值判定检出数和检出率,利用各试剂的检测值做试剂间两两比对分析,对各试剂检检测值和dPCR检测值比对分析Ct值与核酸量的关系,以P<0.05为差异有统计学意义。结果17种核酸检测试剂中15种试剂检测正常,阴性样本检出率在0%~35%之间,阳性样本检出率在39%~96%之间,各试剂间检出率和检测值均有一定差异且与检测靶标数、试剂检测最低限以及检测模板加入量没有相关性;核酸量在57360 copies/ml以上各试剂均能检出,且检出能力随核酸量减少出现差异。结论若检测结果不按照试剂盒说明书中Cut-off值而是按照Ct值35为限值判定,则15种试剂对较高病毒载量的样本均能有效检出,但各试剂的检测性能有一定差异,因此在核酸检测工作中应配备多种品牌检测试剂以相互验证提高检测准确率。

柯萨奇病毒A16型核酸检测试剂国家参考品的建立

目的 建立柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus A16,CA16)核酸检测试剂国家参考品,并制定其质量标准。方法收集并筛选CA16核酸阳性和阴性样本,分装、冻干后,建立CA16核酸检测试剂国家参考品。采用不同企业的试剂对参考品进行协作标定,根据协作标定结果确定参考品的质量标准,并考察其均匀性和稳定性。结果 CA16核酸检测试剂国家参考品由9份阳性参考品,8份阴性参考品,1份检测限参考品和1份精密度参考品组成。其质量标准为:阳性参考品符合率≥8/9;阴性参考品符合率为8/8;最低检测限为稀释度不低于1∶103;精密度参考品稀释100倍后重复检测10次,结果均为阳性,且Ct值的CV≤5%。该参考品均匀性符合要求,室温(25℃)放置1 d、反复冻融3次均未影响参考品的稳定性。结论 建立了首批CA16核酸检测试剂国家参考品,并制定了质量标准,为相关试剂的质量控制和评价提供了依据。