盐酸黄连素作为脱氧核糖核酸荧光染料染色效果的研究

考察了盐酸黄连素(berberine hydrochloride)的荧光强度与双链DNA的相关性;优选盐酸黄连素在琼脂糖凝胶电泳中的最佳条件;将其染色效果与溴化乙锭(EB)进行比较;并从相对迁移率角度研究盐酸黄连素对DNA凝胶电泳的影响。结果显示,双链DNA对盐酸黄连素有明显的荧光增强作用,荧光强度与dsDNA的浓度正相关;凝胶中10 mg/L的盐酸黄连素可分辨出10 ng的100 bp DNA条带,在完全相同的操作条件下,对于小片段dsDNA,其灵敏度略低于EB。因盐酸黄连素在碱性溶液中带正电荷,使DNA相对迁移率减小,但较染料EB的影响小。该研究为盐酸黄连素在日常分子生物学研究中的应用提供了理论依据。盐酸黄连素可以作为琼脂糖凝胶电泳中DNA的荧光染料,其荧光强度能够满足常规应用,可以替代强致癌性染料EB。

核酸荧光染料在单细胞凝胶电泳中的染色比较

目的探讨4种核酸染料(EB、SYBR GreenⅠ、Gold View和AO)在单细胞凝胶电泳(SCGE)中的染色特性,以分析用新型核酸荧光染料代替EB染料的可能性。方法分离提取健康人外周血淋巴细胞,分别用0、20、40、60、80μg/m L的H2O2进行处理,中性SCGE检测淋巴细胞DNA损伤情况;分别用EB、SYBR GreenⅠ、Gold View和AO进行染色,荧光显微镜下观察并比较染色结果。分析尾部DNA百分含量(%Tail DNA)以比较组间差异。结果 SCGE结果表明,SYBR GreenⅠ、Gold View和AO均能很好的反应实验结果,不同浓度中,1×~5×SYBR GreenⅠ、2×~5×Gold View、2~5μg/m L AO为最佳染色浓度范围。EB、SYBR GreenⅠ、Gold View和AO的回归系数分别为2.71、2.81、2.73、2.75,其染色效果较为一致,稳定性分析结果表明,3组细胞在48 h以内结果稳定,%Tail DNA差异无统计学意义(P均>0.05);SYBR GreenⅠ、Gold View和AO实验室内精密度分别为6.92%、7.10%、8.25%,优于EB染色(8.35%);SYBR GreenⅠ和Gold View重复性分别为3.07%、2.74%,优于EB染色(3.59%)。结论SYBR GreenⅠ、Gold View和AO均可用于本实验染色,Gold View是更适合用于SCGE中替代EB的核酸荧光染料。

微量淋巴细胞毒技术与核酸扩增荧光技术检测HLA-B27的对比

目的通过比较核酸扩增荧光技术(PCR-染料法)和微量淋巴细胞毒技术在检测HLA-B27中的符合率,分析两种方法的优势与不足,探讨核酸扩增荧光技术(PCR-染料法)在HLA-B27检测中的临床应用价值。方法随机选取197例来我科就诊的疑似强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者的样本,分别使用微量淋巴细胞毒法和PCR-染料法检测。并对两种方法检测结果不符的样本进行测序复核。结果 197例样本中,微量淋巴细胞毒法检出HLA-B27阳性150例,阴性47例;PCR-染料法检出阳性135例,阴性62例;两种方法检测结果有统计学差异(P<0.01)。15例差异样本,两种方法与测序法相比较的符合率,微量淋巴细胞毒法为13.3%,PCR-染料法为86.7%。结论核酸扩增荧光技术(PCR-染料法)和微量淋巴细胞毒法比较,前者具有更高的临床准确性。在样本处理上PCR-染料法也更具优势,操作简单方便,有很强的临床应用价值。

TRAP-SybrGreen I法检测结直肠癌端粒酶活性

目的 应用新型核酸荧光染料Sybr-GreenI检测端粒酶活性,并探讨该酶活性在结直肠癌临床诊断中的意义。方法 用端粒重复扩增 (TRAP)结合Sybr GreenI技术检测 4 6例结直肠癌及 1 9例癌旁组织中端粒酶的活性。结果 Sybr-GreenI能清晰显示端粒酶扩增后的条带。端粒酶活性在结直肠癌中阳性率为 8 9. 1 3% ,在癌旁组织中未发现端粒酶活性。端粒酶活性与细胞分化程度、Dukes分期、有无淋巴结转移均无关。结论 用Sybr-GreenI检测端粒酶活性对于诊断结直肠癌具有重要的临床辅助价值。