基于核酸适配体-质粒DNA复合物信号放大的荧光免疫传感技术

提出了一种简便、高灵敏的荧光免疫传感新技术,通过抗体/抗原/核酸适配体-质粒DNA复合物的特异性识别与双链质粒DNA与荧光染料SYBR GreenⅠ的嵌合作用,实现对血小板衍生增长因子BB(PDGF-BB)的检测。生物识别反应在微孔板中进行,PDGF-BB抗原与微孔板底部预包被的PDGF-BB抗体免疫反应后,加入核酸适配体-质粒DNA复合物与抗原形成夹心复合物。加入DNA双链嵌合染料SYBR GreenⅠ与夹心复合物的双链DNA部分结合可产生强荧光,其荧光强度可用于定量测定PDGF-BB浓度。实验考察了离子浓度、核酸适配体的延伸引物片段与质粒PUC19的反应比例、染料SYBR GreenⅠ浓度等分析条件对荧光信号的影响。在优化反应条件下,PDGF-BB检测的线性范围为0.2～200μg/L,检出限为0.1μg/L,并且实现了对人血清中PDGF-BB的定量检测。

核酸适配体在病毒性疾病治疗中的研究进展

核酸适配体是一类通过指数级富集的配体进化技术(SELEX)获得的能以较高的亲和力与各类靶标特异性结合的小分子单链DNA或RNA。与抗体相比,核酸适配体具有合成简单、免疫原性低、体外容易修饰、价格低廉等优势,已在生物医学方面发挥了重要作用。病毒性疾病严重威胁人类健康,然而目前尚未有非常有效且毒副作用小的抗病毒药物。近年来核酸适配体在病毒性疾病治疗中的应用引起人们关注,已有越来越多的研究围绕核酸适配体作为抗病毒药物的应用而展开。核酸适配体可与病毒蛋白或核酸以高特异性及高亲和力结合,一些特异的核酸适配体可通过阻止病毒感染细胞的任一阶段如吸附、复制等达到抑制抗病毒作用,显示了较强大的抗病毒应用潜能。我们简要综述核酸适配体在病毒性疾病治疗方面的研究进展。

核酸适配体传感器的构建及对食品中组胺的检测

目的:构建了一种核酸适配体传感器,用于食品中组胺的快速检测。方法:通过G-四链体和适配体5’端修饰的巯基和纳米金共价结合制备成DNA-金纳米颗粒(Gold nanoparticles,AuNPs)复合物。将组胺静电吸附在电极的表面,孵育纳米复合物,复合物中的适配体与组胺进行特异性结合。纳米复合物上的G-四链体序列与底物中的hemin结合形成G-四链体结构,能够催化底物中的氢醌转变为苯醌,在一定的电压下,苯醌被重新还原,产生可以被检测的电化学信号,实现组胺的定量检测。结果:对新构建的组胺传感器性能研究发现,在组胺浓度为1×10^(–6)~1×10^(–4)μg/mL时,线性相关系数为0.9922,检测限为0.5μg/mL。对该传感器特异性分析发现,干扰物(酪胺、L-半胱氨酸及组氨酸等)的响应信号远低于组胺的响应信号。稳定性分析显示,传感器在储存30 d后,依旧保持其不低于初始响应信号的95.1%左右。实际样品检测中,样品回收率为91.26%~107.6%,与高效液相色谱检测相比,结果无差异性。结论:新构建的核酸适配体传感器是一种无酶电化学传感器,可以选择性地捕获和识别组胺,具有良好的特异性和稳定性,可以有效地降低实验成本和操作难度。